淫羊藿次苷Ⅱ对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的干预作用及机制研究

作     者：吴雨婷 

作者单位：遵义医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：杨丹莉

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：自发性高血压大鼠 淫羊藿次苷Ⅱ 心肌细胞凋亡 氧化应激 线粒体凋亡信号通路 内质网应激 

摘      要：目的:以自发性高血压大鼠（Spontaneous Hypertensive Rats,SHR）为研究对象,观察淫羊藿次苷II（IcarisideII,ICSII）对心肌细胞凋亡的作用,并探讨其对氧化应激、线粒体凋亡及内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress,ERS）通路中凋亡信号分子的影响。方法:将13周龄SHR随机分为模型组（SHR组）、ICSII低剂量组（4 mg/kg,ICSII-L）、ICSII中剂量组（8 mg/kg,ICSII-M）和ICSII高剂量组（16 mg/kg,ICSII-H）(n=7);魏-凯二氏大鼠（WKY）作为对照组（WKY组）(n=7)。适应性饲养1周后,ICSII低、中、高剂量组分别给以ICSII 4、8、16 mg/kg至26周龄,WKY和SHR组给予等体积双蒸水（i.g.,qd）。每周检测大鼠鼠尾血压;给药结束后检测大鼠左心功能;处死大鼠、分离左心室并计算左心质量指数;H&E染色观察大鼠心脏左心室的病理学改变;TUNEL染色检测左心室中心肌细胞凋亡的情况;ELISA法检测血清中H2O2、·OH、MDA含量以及SOD活性;RT-PCR法检测大鼠左心室组织中ASK1、JNK、p38、p53、Bcl-2、Bax、GRP78、CHOP、PERK、ATF-4、ATF-6的mRNA水平;蛋白质印迹法（Western Blot）检测左心室组织中p-ASK1、p-JNK、p-p38、p53、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3、GRP78、CHOP、p-PERK、ATF-4、ATF-6、cleaved-caspase12、cleaved-caspase9蛋白水平。结果:与WKY组相比,SHR组血压明显升高;26周时,收缩压和舒张压分别是WKY的1.8倍和1.5倍;SHR左室内径（LVID）增宽、左室前壁厚度（LVAW）和后壁厚度（LVPW）增加、射血分数（EF）和短轴缩短率（FS）降低（P0.05）;左心室质量指数增加（P0.05）;H&E染色观察发现SHR组的心肌细胞肥大、排列紊乱且细胞间隙增宽,伴有肌丝部分断裂;TUNEL染色发现SHR组左心室心肌细胞凋亡数明显增加（P0.05）;SHR组血清中H2O2、·OH、MDA含量增加（P0.05）并且SOD活性降低（P0.05）;左心室组织中ASK1、p38、Bax、GRP78、CHOP、PERK、ATF-4、ATF-6的mRNA水平明显升高（P0.05）,Bcl-2 m RNA水平降低（P0.05）,JNK和p53 mRNA水平无明显变化;左心室中ASK1、JNK、p38和PERK蛋白磷酸化的水平明显增加（P0.05）,caspase12、caspase9和caspase3的活化水平增加（P0.05）,p53、Bax、GRP78、CHOP、ATF-4、ATF-6蛋白表达上调（P0.05）,Bcl-2蛋白表达下调（P0.05）,Bax/Bcl-2比值增加（P0.05）。而给予ICSII治疗之后,与SHR组相比,动脉血压不同程度下降,并以中、高剂量组效果显著;左室内径（LVID）缩窄、左室前壁厚度（LVAW）和后壁厚度（LVPW）降低、射血分数（EF）和短轴缩短率（FS）升高（P0.05）;左心质量指数降低（P0.05）;H&E染色观察发现心肌细胞肥大得以改善,细胞排列趋于整齐且细胞间隙缩窄,未见肌丝断裂,且以中、高剂量组效果显著;TUNEL染色观察发现予以ICSII治疗后凋亡的心肌细胞数减少,ICSII-M和ICSII-H组心肌细胞凋亡百分比分别降低了9%和30%（P0.05）;血清中H2O2、·OH、MDA含量减少（P0.05）并且SOD活性增加（P0.05）;左心室组织中ASK1、Bax、GRP78、CHOP、PERK、ATF-4 mRNA水平明显降低（P0.05）,Bcl-2 mRNA水平升高（P0.05）,JNK、p38、p53和ATF-6 mRNA水平无明显变化;左心室中ASK1、JNK、p38和PERK蛋白磷酸化的水平明显降低（P0.05）,caspase12、caspase9和caspase3的活化水平降低（P0.05）,p53、Bax、GRP78、CHOP、ATF-4、ATF-6蛋白表达下调（P0.05）,Bcl-2蛋白表达上调（P0.05）,Bax/Bcl-2比值降低（P0.05）。结论:SHR在26周时已出现动脉高压并伴有左心室重构和心功能减退,并且左心室心肌细胞凋亡增多;ICSII可以降低SHR血压、改善左心室重构并减少心肌细胞凋亡,其机制可能与其降低血压、抑制氧化应激、线粒体凋亡信号通路和内质网应激有关。