人脐带间充质干细胞对小鼠急性高眼压视网膜神经节细胞损伤的保护作用

作     者：刘睿 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：钟敬祥

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主      题：视网膜神经节细胞损伤 人脐带间充质干细胞 玻璃体腔注射 调控机制 

摘      要：目的：研究人脐带间充质干细胞对小鼠急性高眼压导致的视网膜神经节细胞损伤的保护作用。 方法：①用CM-Dil染料标记第3代人脐带间充质干细胞并培养，显微镜下观察荧光标记情况。②用前房灌注的方式建立小鼠左眼急性高眼压模型。③本实验分为四组，即A正常组、B高眼压组、C玻璃体腔注射人间充质干细胞组（干细胞组）、D玻璃体腔注射生理盐水组（生理盐水组）。④高眼压组为造模组，干细胞组为在建模后的第二天向玻璃体腔注射1μL浓度为1*105/1ul已用CM-Dil标记的人脐带间充质干细胞悬液，生理盐水组为在建模后的第二日向玻璃体腔注射1ul的生理盐水，正常组不做任何处理。⑤于高眼压术后7天取材观察，HE染色比较内层视网膜厚度，Brn-3a免疫荧光染色统计视网膜神经节细胞数量及丢失率。 结果：①CM-Dil能够标记人脐带间充质干细胞的细胞膜，不标记细胞核，并且荧光标记效率高达90%;②CM-Dil标记人脐带间充质干细胞的红色荧光存在于玻璃体腔内，未进入视网膜内;③小鼠急性高眼压建模后的第7天，HE染色显示：各组的视网膜内层（从内界膜到内核层）的平均厚度分别为：正常组高84.77±4.10um，高眼压组43.06±2.49um，生理盐水组42.95±2.75um，干细胞组54.58±3.41um。高眼压组的内层视网膜厚度明显低于正常组（P0.05），干细胞组的内层视网膜厚度高于高眼压组（P0.05），生理盐水组与高眼压组的视网膜厚度无明显差别（P0.05）;④Brn-3a显示：各组的RGCs的数量统计如下：正常组是3109.28±285.65/mm2，高眼压组是638.43±105.29/mm2，生理盐水组是628.86±107.79/mm2，干细胞组是996.01±133.93/mm2;各组RGCs的丢失率分别为：高眼压组是79.47±0.63%，生理盐水组是79.76±0.62%，干细胞组是67.97±0.53%。高眼压组的视网膜神经节细胞数量明显低于正常组（P0.05），视网膜神经节细胞的丢失率高于正常组（P0.05），干细胞组的视网膜神经节细胞数量多于高眼压组（P0.05），视网膜神经节细胞的丢失率低于高眼压组（P0.05），生理盐水组与高眼压组的视网膜神经节细胞数量及丢失率无明显差别（P0.05）。 结论：①使用CM-Dil标记人脐带间充质干细胞能够显示较好示踪效果。②玻璃体腔注射人脐带间充质干细胞短期内不能直接进入视网膜。③玻璃体腔注射人脐带间充质干细胞对由急性高眼压导致的视网膜神经节细胞损伤有保护作用，其机制可能是通过干细胞旁分泌功能。