低强度脉冲超声波经整合素-FAK-p38 MAPK通路对脂肪因子作用下软骨细胞的影响

作     者：瞿燕萍 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李雪萍

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100215[医学-康复医学与理疗学] 10[医学] 

主      题：低强度脉冲超声 软骨细胞 脂肪垫 脂肪因子 整合素β1 

摘      要：目的:观察低强度脉冲超声波(Low Intensity Pulsed Ultrasound,LIPUS)通过整合素-黏着斑激酶(Focal Adhesion Kinase,FAK)-p38丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase 38,p38 MAPK)通路对脂肪因子作用下软骨细胞的影响。方法:取24例女性膝关节急性外伤手术患者的髌下脂肪垫及膝关节软骨(骨科手术室提供),切取髌下脂肪垫制作脂肪垫培养液(Fat Conditioned Medium,FCM):于完好软骨表面提取正常软骨细胞进行体外培养,按随机数字表法分成正常组(正常软骨细胞)、实验组(正常软骨细胞+FCM)、干预组(正常软骨细胞+FCM+LIPUS干预)和抑制剂组(正常软骨细胞+FCM+LIPUS干预+整合素抑制剂GRGDSP)。采用Ⅱ型胶原、蛋白多糖免疫组化染色比较并鉴定正常组与实验组软骨细胞。干预组和抑制剂组予LIPUS照射,强度为40 mW/cm2,20分钟/天,6天/周,正常组和实验组予LIPUS假照射;照射6天后收集各组细胞,应用免疫印迹(Western blot)技术检测软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖、基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinase,MMP)-13、整合素β1、磷酸化黏着斑激酶(Phosphorylated Focal Adhesion Kinase,p-FAK)以及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶 38(Phosphorylated Mitogen Activated Protein Kinase 38,p-p38 MAPK)蛋白表达;应用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELIS A)测定各组细胞培养上清液中脂肪因子瘦素和白介素(Interleukin,IL)-6的含量。结果:①Ⅱ型胶原、蛋白多糖免疫组化染色:与正常组相比,实验组Ⅱ型胶原、蛋白多糖免疫阳性表达显著减少。②Ⅱ型胶原、蛋白多糖、MMP-13:与正常组相比,实验组Ⅱ型胶原、蛋白多糖蛋白含量降低,而MMP-13蛋白含量增高,组间差异具有统计学意义(P0.05);与治疗组相比,抑制剂组Ⅱ型胶原、蛋白多糖蛋白含量降低,而MMP-13蛋白含量增高,组间差异具有统计学意义(P0.05);与干预组相比,抑制剂组整合素β1、p-FAK蛋白含量降低,p-p38蛋白含量增高,组间差异具有统计学意义(P0.05);与治疗组相比,抑制剂组IL-6、瘦素含量均无明显差别,组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:LIPUS可通过整合素β1-FAK-p38 MAPK通路抑制脂肪因子诱导的软骨细胞MMP-13增高,减少Ⅱ型胶原、蛋白多糖降解,从而对脂肪因子作用下的软骨细胞起一定的保护作用。