健脾消癌方诱导人结肠癌HCT116细胞焦亡的作用机制研究

作     者：卢林竹 

作者单位：湖南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：蒋益兰

授予年度：2022年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：健脾消癌方 结肠癌 细胞焦亡 GSDMD GSDME Caspase-3 

摘      要：目的:研究健脾消癌方含药血清对人结肠癌HCT116细胞焦亡的诱导作用,并探讨可能的作用机制。方法:1.10%、15%、20%空白鼠血清及10%、15%、20%含药鼠血清处理HCT116细胞,进行细胞毒性实验(CCK-8)观察健脾消癌方含药血清对HCT116细胞的抑制作用;2.透射电镜下观察细胞焦亡的形态变化;3.乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞上清LDH含量;4.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中白介素1β(IL-1β)、白介素18(IL-18)释放量;5.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GSDMD、GSDM E、Caspase-3、Caspase-3剪切体、GSDME-N蛋白表达量。结果:1.健脾消癌方含药血清能够抑制HCT116细胞体外增殖;2.与空白鼠血清组及正常血清组比较,在透射电镜下可观察到含药血清组出现明显的细胞焦亡现象;3.与空白鼠血清组及正常血清组比较,含药血清干预HCT116细胞后细胞上清中的LDH均有不同程度的上升(P0.05);4.与空白鼠血清组及正常血清组比较,含药血清干预HCT116细胞后细胞上清中的IL-1β、IL-18均有不同程度的上升(P0.05);5.10%、15%、20%含药血清组的GSDME蛋白表达下调(P0.05),其中20%浓度较为明显;10%、20%含药血清组的GSDMD蛋白表达下调(P0.05);10%、15%、20%含药血清组的Caspase-3全长的蛋白表达下调(P0.05);20%含药血清组检测到了Caspase-3的剪切体的表达(Cleaved CASP-3)(P0.05);并且在15%、20%浓度组检测到了被剪切了的GSDME的N端蛋白片段(P0.05)。结论:健脾消癌方含药血清可诱导结肠癌HCT116细胞发生焦亡,其机制可能与GSDMD、GSDME蛋白的剪切有关,并主要以Caspase-3/GSDME通路为主。