基于TGF-β1/Smad信号通路探讨益肺通络方调控IPF的机制研究

作     者：李泽峰 

作者单位：山东中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：贾新华

授予年度：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：益肺通络方 特发性肺纤维化 TGF-β1/Smad信号通路 EMT 

摘      要：研究目的:本研究通过构建肺纤维化大鼠模型,围绕TGF-β1/Smad信号通路,深入探讨益肺通络方干预肺纤维化大鼠的作用机制,为益肺通络方在临床治疗肺纤维化提供理论基础与实验依据。 研究方法:第一章:大鼠肺纤维化模型造模方法的确立将45只SPF级SD大鼠随机均分为空白对照组、有创暴露气管组和气管插管组,共3组,每组15只,空白对照组不予处理,有创暴露气管组和气管插管组分别应用相应方法进行一次性造模,造模结束后比较各组大鼠一般状态、体质量、肺系数、存活率、肺组织病理情况等,以确立最优造模方法。第二章:益肺通络方对IPF大鼠作用机制的研究健康雄性SD大鼠共56只,随机选取10只作为空白对照组(Control组),其余46只均按照实验一确立的造模方法(气管插管法)构建肺纤维化大鼠模型,造模一周后,将剩余40只造模组大鼠随机分为模型对照组(Model组)、醋酸泼尼松组(PRED组)、益肺通络方低(YFTL-L组)、高剂量组(YFTL-H组),每组10只。造模7天后给予相应药物给药,给药21天后处死全部大鼠。第一部分:益肺通络方对肺纤维化大鼠肺组织形态学和病理学的影响观察大鼠一般状态及肺组织外观,计算肺系数;通过苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观测益肺通络方对肺纤维化大鼠肺泡结构和胶原沉积的影响。第二部分:益肺通络方对TGF-β1/Smad信号通路及EMT的影响Elisa法检测血清中HYP、TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;Western-Blot法检测益肺通络方对肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1、P-Smad3、P-Smad2、Smad7蛋白表达量的影响;RT-PCR法检测肺组织中TGF-β1、Smad3、Smad2、Smad7m RNA的表达量;免疫荧光法检测肺组织中TGF-β1、Col-I、E-cad蛋白表达量;免疫组化法检测肺组织中α-SAM、Vimentin蛋白表达量。 研究结果:第一章:确立气管插管法为最终造模方法造模后,暴露气管组和暴露气管组大鼠状态较差,体重急剧下降,21天后气管插管组大鼠存活率明显高于暴露气管组;两造模组大鼠肺系数均明显高于空白组(P0.