永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用

专利申请号：CN202211247024.8

公 开 号：CN115521901B

发 明 人：代解杰 霍姝汭 邱敏 陆彩霞 王文广 李娜 孙晓梅 罕园园 仝品芬 

代 理 人：昆明正原专利商标代理有限公司于洪;陈左

代理机构：昆明正原专利商标代理有限公司

专利类型：发明专利

申 请 日：20230905

公 开 日：20221012

专利主分类号：C12N5/071

关 键 词：视网膜微血管内皮细胞 传代 永生化 脱氧核糖核酸酶I 视网膜微血管 消化 内皮细胞系 视网膜血管 视网膜组织 生长状态 胰酶消化 原代细胞 增殖能力 分散酶 混合酶 胶原酶 慢病毒 差速 构建 省时 转染 省力 眼科 细胞 携带 研究 便利 疾病 应用 

摘      要：本发明涉一种永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞株及其构建方法与应用。该方法是使用混合酶消化法，采用Ⅱ型胶原酶、分散酶和脱氧核糖核酸酶I从树鼩视网膜组织中分离并通过差速消化法纯化获得原代树鼩视网膜微血管内皮细胞，然后利用携带SV40T的慢病毒转染原代细胞，胰酶消化后挑选单克隆并经过50代以上的传代，获得永生化树鼩视网膜微血管内皮细胞；本发明方法获得的细胞能够稳定传代至50代以上，有效维持了树鼩视网膜微血管内皮细胞稳定的生长状态和增殖能力，改善了目前视网膜血管研究只能现用现取的烦琐程序，为眼科相关疾病的研究提供了稳定的视网膜微血管内皮细胞系，真正做到省时、省力、高效、便利。