幼畜卵母细胞体外两次受精方法

专利申请号：CN200910113465.7

公 开 号：CN101843530A

发 明 人：郭志勤 汪立芹 杨梅 吴伟伟 陈童 

代 理 人：欧咏

代理机构：乌鲁木齐新科联专利代理事务所(有限公司)

专利类型：发明专利

申 请 日：20100929

公 开 日：20090925

专利主分类号：A61D19/02(20060101)

关 键 词：受精液 幼畜 卵母细胞 受精 培养板 精子 简单易行 透明质酸酶 排卵 解冻精子 卵丘细胞 体外成熟 体外受精 卵裂率 囊胚率 受精率 细胞体 精液 平衡 超数 次体 二次 卵母 清液 水浴 解冻 洗涤 沉淀 培养 

摘      要：本发明提供的幼畜卵母细胞体外两次受精方法，受体均为45-100日龄母幼畜，经FSH超数排卵处理，取卵母细胞100枚/只以上待用；将体外成熟25-26小时的卵母细胞与精子混合，完成一次体外受精；5-6小时进行二次体外受精，过13-14小时，移于培养板培养，48小时后统计卵裂率即可。成熟的卵母细胞需用0.1％的透明质酸酶处理30-60s，经吹吸脱去部分卵丘细胞，加入2-5小时平衡好的50-70μl/滴的受精液内孵育；水浴解冻精液，放入CO2箱，20-25分钟，取上清液离心2-5分钟，沉淀的精子按2-4×106个/ml的密度加入受精液孵育；将受精5-6小时的卵取出，放入受精液中；用同前的方法解冻精子，加入受精液，经13-14小时，洗涤，移入平衡好的500μl/孔的四孔培养板内培养。该方法简单易行，能使牛、羊的幼畜受精率达到80-92％，囊胚率达到40-50％。