一种改进的腺病毒载体系统及其病毒颗粒的制备和应用

专利申请号：CN201310058765.6

公 开 号：CN103290052A

发 明 人：陈海旭 叶军 

代 理 人：胡美强;沈利

代理机构：31002 上海智信专利代理有限公司

专利类型：发明专利

申 请 日：20130911

公 开 日：20130225

专利主分类号：C12N15/861(20060101)

关 键 词：氯仿 酶切 简单易行 病毒载体系统 病毒系统 病毒载体 病毒制备 材料成本 初始载体 试剂成本 系统结合 制备效率 重组反应 纯化法 克隆 有毒 细胞 回收 连接 

摘      要：本发明公开了一种改进的腺病毒载体系统和病毒制备方法，它是以pDONR221载体为初始载体进行改进，插入了多克隆位点和IRES-GFP片段。该系统结合了酶切连接和重组反应技术，既能高效构建载体，又降低了试剂成本。本发明还公开了后续病毒载体酶切后，纯化的改进方法，该方法摒弃了传统的酚：氯仿：异戊醇纯化法，而使用常规的DNA回收柱或直接加热灭活法，简单易行，缩短了操作时间，降低了材料成本，并且无需使用有毒的酚、氯仿试剂，利用这两个方面结合起来的腺病毒系统，制备效率提高，成本降低，在侵染细胞中仍然保持高效。