利用CRISPR-CAS9技术敲除HEK293T细胞KDM2A基因的方法

专利申请号：CN201810325470.3

公 开 号：CN108504657A

发 明 人：彭勇波 许文豪 梁大焱 

代 理 人：刘天钰

代理机构：42214 武汉华旭知识产权事务所

专利类型：发明申请

申 请 日：20180907

公 开 日：20180412

专利主分类号：C12N15/113(20100101)

关 键 词：验证 基因水平 蛋白质免疫印迹 细胞增殖和凋亡 基因缺陷型 突变细胞株 细胞基因组 蛋白水平 基因敲除 甲基化酶 细胞模型 细胞转染 信号通路 敲除 制备 基因 应用 研究 

摘      要：本发明提供了一种CRISPR‑CAS9技术敲除HEK293T细胞KDM2A基因的方法，步骤如下：(1)、细胞转染；(2)、细胞基因组提取；(3)、PCR鉴定；(4)、基因水平验证；(5)、蛋白水平验证：在基因水平验证突变细胞株后，用蛋白质免疫印迹(Western blotting)进一步验证K3、K7‑1和K7‑2是KDM2A基因缺陷型。本发明还同时提供了利用上述方法制备的KDM2A基因敲除的HEK293T细胞系及以其作为细胞模型在研究KDM2A甲基化酶所涉及的细胞增殖和凋亡信号通路中的应用。