表达量提高的突变葡萄糖氧化酶及其编码基因和应用

专利申请号：CN201510226869.2

公 开 号：CN105002147A

发 明 人：聂金梅 李阳源 周银华 陈丽芝 刘金山 李天碧 

代 理 人：高宇

代理机构：11318 北京法思腾知识产权代理有限公司

专利类型：发明申请

申 请 日：20151028

公 开 日：20150505

专利主分类号：C12N9/04(20060101)

关 键 词：葡萄糖氧化酶 氨基酸序列 表达量提高 定点突变 突变 毕赤酵母表达载体 葡萄糖氧化酶基因 毕赤酵母菌株 毕赤酵母 编码基因 出发菌株 基因工程 酶学性质 突变基因 突变菌株 突变位点 黑曲霉 酶活性 表达 测定 克隆 涉及 遗传 筛选 基因 连接 转化 应用 表明 稳定 进行 

摘      要：本发明涉及基因工程领域，具体涉及表达量提高的突变葡萄糖氧化酶及其编码基因和应用，其氨基酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。本发明采用定点突变技术将黑曲霉Aspergillus？niger？GIM？3.452(CICC？2377)的葡萄糖氧化酶(GOD)基因(Genebank:FJ979866.1)进行定点突变，使其氨基酸序列突变位点为Y76C和Q279K；将突变基因克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA，转化Pichia？pastoris？X33，筛选得到表达量提高的葡萄糖氧化酶毕赤酵母菌株***？X33-pPICZαA-GODmut；酶学性质测定表明，突变的葡萄糖氧化酶基因能在毕赤酵母中稳定、高效的表达及遗传，突变菌株所表达的葡萄糖氧化酶的酶活性以及稳定性显著高于出发菌株。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。