表达DNase I、AIF或整合有该毒素的重组单链抗体的载体菌株及该菌株的应用

专利申请号：CN201611112222.8

公 开 号：CN106591208A

发 明 人：陈廷涛 辛洪波 王鑫 

代 理 人：刘华

代理机构：36115 南昌新天下专利商标代理有限公司

专利类型：发明申请

申 请 日：20170426

公 开 日：20161207

专利主分类号：C12N1/21(20060101)

关 键 词：减毒鼠伤寒沙门氏菌 重组质粒 毒素 侵袭 蛋白 肿瘤 鼠伤寒沙门氏菌 重组单链抗体 宿主 特异性杀伤 血清培养基 单链抗体 电击转化 目的蛋白 细胞破碎 载体菌株 真核细胞 种特异性 链霉素 青霉素 上清液 构建 菌株 扩增 人源 整合 杀死 释放 细胞 携带 应用 

摘      要：本发明提供了一种表达DNase I、AIF或整合有该毒素的重组单链抗体的载体菌株及该菌株的应用。该技术方案依托于一种特异性识别TEM1蛋白的单链抗体，结合减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009的肿瘤内特异性聚集及胞内侵袭的特性，携带人源毒素DNase I和Aif达到特异性杀伤肿瘤的效果。具体来看，本发明首先构建了Abvec‑Igk‑DNase I、Abvec‑Igk‑T18‑DNase I、Abvec‑Igk‑Aif、Abvec‑Igk‑T18‑Aif重组质粒，经扩增后通过电击转化的方式导入鼠伤寒沙门氏菌VNP20009株，利用减毒鼠伤寒沙门氏菌胞内侵袭的特性，以HEK293‑T细胞为宿主实现蛋白的表达，最后利用含青霉素、链霉素的血清培养基杀死细胞内外的减毒鼠伤寒沙门氏菌，使重组质粒释放至真核细胞中，经细胞破碎后即得到含有目的蛋白的上清液。