一种高效基因枪转化小麦叶片单细胞瞬间表达的方法及其应用

专利申请号：CN201210507031.7

公 开 号：CN102978230A

发 明 人：邢莉萍 曹爱忠 钱晨 王秀娥 陈佩度 

代 理 人：徐冬涛;傅婷婷

代理机构：32218 南京天华专利代理有限责任公司

专利类型：发明申请

申 请 日：20130320

公 开 日：20121203

专利主分类号：C12N15/63(20060101)

关 键 词：小麦叶片 基因 基因枪转化 白粉病菌 高效基因 裂膜 转化 细胞 报告基因 小麦品种 叶片表皮 培养基 质粒DNA 白粉菌 抗性 感病 氦压 毛麦 钨粉 叶片 保鲜 小麦 固定 

摘      要：本发明公开一种高效基因枪转化小麦叶片单细胞瞬间表达的方法及其应用。高效基因枪转化小麦叶片单细胞的方法，使用GFP基因作为报告基因，以小麦第一叶的离体叶片为转化受体进行基因枪转化，小麦叶片采用固体保鲜培养基固定，基因枪转化采用直径为1μm的钨粉，用量为300ug/枪，质粒DNA用量为750ng/枪，轰击距离采用可裂膜氦压为1350psi，可裂膜与受体膜距离为6mm，受体与阻挡网距离为6cm。利用该方法在感病小麦品种扬麦158的离体叶片表皮细胞中过量表达簇毛麦SGT1基因，结果表明该基因瞬间表达可降低互作细胞中白粉菌吸器指数，表明该基因对白粉病菌侵入和吸器形成有抑制作用，可增强对白粉病菌的抗性。