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4 篇 西安交通大学
4 篇 山东大学
4 篇 遵义医学院
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3 篇 重庆大学
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3 篇 大连医科大学
3 篇 中南大学
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2 篇 复旦大学
2 篇 中南大学湘雅医院
2 篇 重庆医科大学
2 篇 第四军医大学唐都...
2 篇 中华医学会医学工...

作者

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5 篇 连小华
5 篇 李建秀
5 篇 刘艳荣
5 篇 訾晓渊
5 篇 杨恬
5 篇 李丰
5 篇 谢东甫
5 篇 张红霞
4 篇 何志颖
4 篇 安威
4 篇 郝乐
4 篇 王亚哲
4 篇 常艳
4 篇 方文刚
4 篇 朱海英
4 篇 赵翔宇
3 篇 孔庆友

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骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化的研究

骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化的研究

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中华医学会第九次全国老年医学学术会议暨第三届全国老年动脉硬化与周围血管疾病专题研讨会

作者：晋金兰庄汉屏姚佳梅中南大学湘雅医院老年医学科

目的:分析体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的生物学特性;体外定向诱导MSCs向内皮细胞分化,并研究其向内皮细胞分化的能力。方法:采用密度梯度离心法体外分离培养大鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测细胞表面... 详细信息

目的:分析体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的生物学特性;体外定向诱导MSCs向内皮细胞分化,并研究其向内皮细胞分化的能力。方法:采用密度梯度离心法体外分离培养大鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志;用含有VEGF165 50 nng/ml、b-FGF5 ng/ml的培养液培养第二代MSCs 2周,诱导其向内皮细胞分化;诱导2周后采用免疫荧光技术检测内皮细胞表面特异性标志物Flk1和CD31的表达,同时将细胞接种在半固体培养基上分析其毛细血管形成能力。结果:体外分离培养的MSCs为贴壁细胞,形态为纺锤形和长梭形,细胞表面抗原CD29、CD44表达为阳性,CD34、CD45表达为阴性;经VEGF、b-FGF诱导后细胞形态主要为椭圆形和圆形,细胞表面表达Flk1和CD31,同时其可在半固体培养基中形成毛细血管样结构。结论:MSCs是存在于骨髓中的多能干细胞,体外经VEGF、b-FGF诱导可分化为内皮细胞。

关键词： MSCs VEGF b-FGF 内皮细胞

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BALB/c裸鼠脾内移植人源性肝细胞HepLL的生物学特性

BALB/c裸鼠脾内移植人源性肝细胞HepLL的生物学特性

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第三届国际暨全国肝衰竭与人工肝学术会议

作者：李兰娟章益民李君盛国平俞海英浙江大学医学院附属第一医院浙江大学医学院附属第一医院浙江大学医学院附属第一医院浙江大学医学院附属第一医院浙江大学医学院附属第一医院

目的研究人源性肝细胞HepLL脾内途径移植后在体内的生物学特性。方法将人源性肝细胞HepLL移植入切除肝左叶和未切除肝左叶BALB/c裸鼠脾内,通过病理和免疫组化检测其生物学特性。结果新建的人源性肝细胞移植入BALB/c裸鼠脾脏后可以长期... 详细信息

目的研究人源性肝细胞HepLL脾内途径移植后在体内的生物学特性。方法将人源性肝细胞HepLL移植入切除肝左叶和未切除肝左叶BALB/c裸鼠脾内,通过病理和免疫组化检测其生物学特性。结果新建的人源性肝细胞移植入BALB/c裸鼠脾脏后可以长期成团存活、增殖并表达肝细胞特异性标记HEP,有糖原的堆积,始终未检测到AFP的表达。至移植后30天,脾脏内移植的HepLL 细胞切除左肝组比未切左肝组增生活跃。移植入脾脏的人源性肝细胞可向宿主肝脏移行并进入肝实质,同时可长时间在宿主肝脏内增殖。结论移植入脾脏的人源性肝细胞HepLL能保持其原有的生物学特性并能移行、整合入肝脏。肝左叶切除造成的肝细胞再生微环境有利于移植的人源性肝细胞HepLL增殖。

关键词：裸鼠人源性肝细胞移植

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内毒素血症防治近况

内毒素血症防治近况

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第三届国际暨全国肝衰竭与人工肝学术会议

作者：甘建和苏州大学附一院

内毒素(LPS)存在于革兰阴性(G-)细菌细胞壁外层,在细胞死亡细胞壁崩解时释放或由活菌以发泡形式将其释出。其化学成分为脂多糖(LPS),由三层组成,外层为O-特异多糖,代表细菌特异抗原:中层为R-核心多糖,为细菌类属的共同抗原:内层为类脂A... 详细信息

内毒素(LPS)存在于革兰阴性(G-)细菌细胞壁外层,在细胞死亡细胞壁崩解时释放或由活菌以发泡形式将其释出。其化学成分为脂多糖(LPS),由三层组成,外层为O-特异多糖,代表细菌特异抗原:中层为R-核心多糖,为细菌类属的共同抗原:内层为类脂A,有较恒定的分子结构,为其毒性部分,介导多种生物学效应。内毒素的一般特征为:1、毒性小且具有耐热性,一般需煮沸至较高温度才能被破坏。2、作用无特异性。内毒素致病症状和病理变化大致相同,如发热、白细胞增高等。3、免疫动物时形成的抗体的量很小,所产生的抗体是IgM。

关键词：内毒素血症细菌感染内毒素结合蛋白库弗细胞单核巨噬细胞多粘菌素

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SV40介导的永生化人源性肝细胞表型鉴定

SV40介导的永生化人源性肝细胞表型鉴定

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第三届国际暨全国肝衰竭与人工肝学术会议

作者：李兰娟盛国平李君章益民俞海英曹红翠徐威盛吉芳浙江大学医学院附属第一医院

目的对本实验室已经建立的SV40介导的永生化人源性肝细胞系HepLL进行生物学特性及表型鉴定. 方法以正常肝脏组织、肝癌组织作为对照,用免疫组织化学、过碘酸-Schiff糖原染色、逆转录PCR、蛋白质印迹等方法对永生化HepLL细胞进行生物学... 详细信息

目的对本实验室已经建立的SV40介导的永生化人源性肝细胞系HepLL进行生物学特性及表型鉴定. 方法以正常肝脏组织、肝癌组织作为对照,用免疫组织化学、过碘酸-Schiff糖原染色、逆转录PCR、蛋白质印迹等方法对永生化HepLL细胞进行生物学特征观察. 结果永生化HepLL细胞和正常肝脏组织均表达肝细胞特异性抗原,部分表达增生标记K167抗原,甲胎蛋白表达阴性,糖原PAS染色正常肝脏组织和永生化肝细胞均阳性,经逆转录PCR和蛋白质印迹检测,HepLL细胞的白蛋白mRNA和细胞色素P450 2E1阳性.结论本实验室建立的以SV40介导的永生化人源性肝细胞系HepLL具有正常肝细胞所特有的类似生物学特性,可作为生物型人工肝支持系统和肝细胞研究的理想细胞源.

关键词：永生化肝细胞免疫组化逆转录PCR 蛋白质印迹

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白血病细胞中融合蛋白AML1-ETO对Bcl-2、C/EBP α和p14ARF表达的影响及其表观遗传学机制

白血病细胞中融合蛋白AML1-ETO对Bcl-2、C/EBP α和p14ARF表达的...

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：庄文越陈子兴苏州大学医学部江苏苏州 215000 苏州大学附属第一医院江苏省血液学研究所江苏苏州 215006 北华大学医学检验学院吉林吉林 132013 苏州大学医学部江苏苏州 215000 苏州大学附属第一医院江苏省血液学研究所江苏苏州 215006

目的 AML1-ETO是具有t(8;21)的AML-M2白血病细胞中最常见的融合基因,为研究AML1-ETO在白血病发生中的致病机理,构建pcDNA3.1-AML1-ETO真核表达载体,观察融合蛋白在U937细胞内表达并检测其对细胞增殖与分化的影响.研究AML1-ETO对抗凋亡基... 详细信息

目的 AML1-ETO是具有t(8;21)的AML-M2白血病细胞中最常见的融合基因,为研究AML1-ETO在白血病发生中的致病机理,构建pcDNA3.1-AML1-ETO真核表达载体,观察融合蛋白在U937细胞内表达并检测其对细胞增殖与分化的影响.研究AML1-ETO对抗凋亡基因Bcl-2、髓系分化相关基因C/EBPα和抑癌基因p14ARF表达的影响及其表观遗传学调控机制.方法以原核表达载体pCMV5-AML1-ETO为模板扩增AML1-ETO目的片段,将该基因重组于pcDNA3.1/V5-His-TOPO真核表达载体上,用脂质体转染技术将其导人到U937白血病细胞,经G418筛选获得稳定转染的克隆,PCR检测AML1-ETO基因的整合,RT-PCR及Western blot检测AML1-ETO基因mRNA和蛋白的表达,应用锥虫蓝拒染人工计数法观察AML1-ETO对细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测髓系分化抗原表达的变化,瑞特染色法观察细胞形态学改变.荧光实时定量PCR检测细胞系及t(8;21) AML患者Bcl-2、C/EBPα和p14 mRNA的表达水平.染色质免疫沉淀技术(ChIP)观察转染细胞中AML1-ETO与Bcl-2、C/EBPα和p14ARF基因启动子之间直接的相互作用情况以及AML1-ETO对Bcl-2、C/EBPα和p14ARF基因所处染色质组蛋白乙酰化、甲基化水平的影响.结果 pcDNA3.1-AML1-ETO经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,筛选出AML1-ETO基因高表达的亚克隆,证实AML1-ETO基因稳定转染到U937细胞中并得到表达;转染细胞生长受抑(P＜0.05),髓系分化抗原CD11b表达阳性率[(4.17±0.31)％]低于对照组[(11.40±0.17)％、(11.03±0.15)％](P＜0.001),CD14表达阳性率[(3.03±0.15)％]低于对照组[(5.90±0.20)％、(5.80±0.20)％](P＜0.01),形态呈低分化表现.与对照组相比,在转染了AML1-ETO的U937细胞系和t(8;21) AML患者中,Bcl-2,C/EBPα和p14ARF的mRNA表达均下调(P＜0.001).染色质免疫沉淀实验证明转染细胞沉淀富集的DNA中含有Bcl-2、C/EBPα和p14ARF基因的启动子序列.转染细胞Bcl-2、C/EBPα和p14ARF启动子组蛋白H3、H4乙酰化水平明显降低(P＜0.01),组蛋白H3K9、H3K27三甲基化水平显著升高(P＜0.01),同时伴有甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)的富集(P＜0.01).结论成功构建pcDNA3.1-AML1-ETO表达载体,并在真核细胞中得到了正确表达;AML1-ETO基因能抑制U937细胞的增殖与分化;AML1-ETO能下调Bcl-2、C/EBPα和p14ARF的表达;Bcl-2、CEBPα和p14ARF是AML1-ETO的直接靶基因,AML1-ETO导致的Bcl-2、C/EBPα和p14ARF基因的表观遗传学沉默可能是AMLM2b型白血病的发病机制之一.

关键词： AML1-ETO 白血病染色质组蛋白修饰表观遗传学调控

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白藜芦醇抗皮肤癌的作用机制初探

白藜芦醇抗皮肤癌的作用机制初探

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：王茜刘之力刘佳吴茉莉孔庆友陈晓燕孙媛张开立李宏大连医科大学细胞生物学教研室大连 116044 大连市皮肤病医院大连 116021

目的皮肤癌为表皮角质形成细胞的恶性增生,皮肤恶性肿瘤的发病率逐年递增,因此研究皮肤癌发生发展的分子生物学机制对于预防及选择合理的治疗策略具有重要意义.方法 91例皮肤癌及癌前病变组织,皮肤鳞癌细胞系colo16.采用石蜡组织微阵... 详细信息

目的皮肤癌为表皮角质形成细胞的恶性增生,皮肤恶性肿瘤的发病率逐年递增,因此研究皮肤癌发生发展的分子生物学机制对于预防及选择合理的治疗策略具有重要意义.方法 91例皮肤癌及癌前病变组织,皮肤鳞癌细胞系colo16.采用石蜡组织微阵列技术,运用免疫组织化学染色,RT-PCR,Western-blot和FCM等方法检测91例皮肤癌及癌前病变组织中Wnt、Notch、NF-kB和Stat3等信号通路的活化状态及白藜芦醇对皮肤鳞癌细胞系colo16的作用.结果 (1) Wnt和Stat3信号通路在皮肤癌组织中呈高表达状态,NF-kB和Notch信号通路在皮肤癌组织和正常组织中的表达状态差异无统计学意义;(2) Wnt及相关靶基因在皮肤癌组织中异常活化;(3)白藜芦醇处理后,colo16的细胞生长受到抑制;(4)白藜芦醇可诱导colo16细胞周期阻滞于S期;(5)白藜芦醇可抑制colo16细胞中Wnt信号通路的活化.

关键词：皮肤癌信号转导 colo16 白藜芦醇

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重组人肝再生增强因子的克隆、表达及纯化

重组人肝再生增强因子的克隆、表达及纯化

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第三届国际暨全国肝衰竭与人工肝学术会议

作者：盛吉芳俞海英李君周林福浙江大学医学院附属第一医院浙江大学医学院附属第一医院浙江大学医学院附属第一医院浙江大学医学院附属第一医院

目的获得纯净的人肝再生增强因子(ALR)蛋白多肽,进行结构和功能的研究,以用于各种急慢性肝损伤及肝衰竭的治疗方法利用分子生物学方法,从人肝细胞提取总RNA,经一步法RT-PCR获得全长hALR CDNA,构建重组克隆PET28(+)/ALR,原核诱导表达获... 详细信息

目的获得纯净的人肝再生增强因子(ALR)蛋白多肽,进行结构和功能的研究,以用于各种急慢性肝损伤及肝衰竭的治疗方法利用分子生物学方法,从人肝细胞提取总RNA,经一步法RT-PCR获得全长hALR CDNA,构建重组克隆PET28(+)/ALR,原核诱导表达获得融合蛋白,以组氨酸为标签进行蛋白纯化,获得纯化的蛋白,用于质谱分析和进一步的动物实验及功能研究结果内切酶消化和DNA测序证实hALR CDNA全长序列正确插入表达载体PET28a(+),并在BL21(DE3)中成功表达约23KD的融合蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot检验,结果与预期相符结论成功表达hALR融合蛋白,纯化和酶切后获ALR天然纯净蛋白,可直接用于进一步功能研究

关键词：人肝再生增强因子基因表达蛋白纯化

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细胞治疗与肝脏疾病

细胞治疗与肝脏疾病

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第三届国际暨全国肝衰竭与人工肝学术会议

作者：贾战生白雪帆第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心

细胞治疗是一个快速发展的领域,是生命科学的前沿学科,它是细胞生物学和临床治疗学交叉结合的产物。近年来,随着基础医学研究的发展,尤其干细胞研究技术的成熟及胚胎干细胞和移植核胚胎干细胞的研究开发,使临床应用干细胞来治疗疾病的... 详细信息

细胞治疗是一个快速发展的领域,是生命科学的前沿学科,它是细胞生物学和临床治疗学交叉结合的产物。近年来,随着基础医学研究的发展,尤其干细胞研究技术的成熟及胚胎干细胞和移植核胚胎干细胞的研究开发,使临床应用干细胞来治疗疾病的愿望得以实现,也使“细胞治疗学”(cell therapy)作为一门独立的学科应运而生。本文对细胞治疗的概念从广义和狭义两个方面给予初步界定,回顾了细胞治疗的发展历程,人为将细胞治疗分为启蒙、临床前探索、临床应用三个阶段。根据细胞治疗机理将肝病的细胞治疗分为:以肝细胞功能替代为主要目的的肝细胞输入治疗、抗病毒抗肿瘤的过继免疫细胞治疗、对遗传性肝病进行的以细胞作为载体的基因治疗、以及以肝细胞作为生物支持材料的生物人工肝支持治疗。肝脏疾病的细胞治疗始于20世纪70年代,是细胞治疗领域发展较为缓慢的临床学科,其当前应用于临床的最大障碍就是细胞的来源和细胞在体内遭遇的免疫排斥。为此,本文介绍了肝病细胞治疗的几个研究热点,如胚胎干细胞(ES)、成体干细胞的体外诱导分化、核移植胚胎干细胞(ntES)的研究概况,以及关于人胚胎干细胞研究的相关法律和伦理学问题。旨在吸引较多的学者投身于肝病细胞治疗的研究,推动我国肝病细胞治疗领域的基础和临床研究向前发展,使数以万计可用细胞治疗的肝病病人受益。

关键词：细胞治疗肝脏疾病

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猪肝细胞与聚砜膜生物界面构建的初步研究

猪肝细胞与聚砜膜生物界面构建的初步研究

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第三届国际暨全国肝衰竭与人工肝学术会议

目的建立与中国实验乳猪肝细胞相容的聚砜膜界面,为用聚砜膜中空纤维管构建生物人工肝反应器奠定基础。方法通过形态学观察及生物学功能测定等方法,比较乳猪肝细胞在聚砜膜及聚乙烯两种生物界面上的分泌、合成及转化功能,评价聚砜膜作... 详细信息

目的建立与中国实验乳猪肝细胞相容的聚砜膜界面,为用聚砜膜中空纤维管构建生物人工肝反应器奠定基础。方法通过形态学观察及生物学功能测定等方法,比较乳猪肝细胞在聚砜膜及聚乙烯两种生物界面上的分泌、合成及转化功能,评价聚砜膜作为生物人工肝膜材料的优越性。结果乳猪肝细胞在聚砜膜界面培养呈球型黏附、铺展,多个细胞聚集形成接触较松散的多细胞球形体。与聚乙烯组相比较,聚砜膜组的尿素合成和蛋白分泌能力更强,但氨转化功能随培养时间的延长显著降低,LDH和AST的漏出量无显著变化。结论在聚砜膜表面可初步建立乳猪肝细胞与聚砜膜生物界面,能够构建聚砜膜中空纤维管生物人工肝反应器。

关键词：猪肝细胞聚砜膜生物界面初步研究

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MMP-2和MMP-9介导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白的下调在CNSL发病机制中的作用

MMP-2和MMP-9介导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白的下调在CNSL发...

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：冯洒然陈子兴岑建农沈宏杰姚利王元元苏州大学附属一院、江苏省血液研究所江苏苏州 215006

目的探讨白血病细胞分泌的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9对脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白的破坏在中枢神经系统白血病(CNSL)发病机制中的作用.方法 (1)体外实时定量PCR检测SHI-1、HL-60和U937白血病细胞MMP-2、MMP-9基因的转录水平;明... 详细信息

目的探讨白血病细胞分泌的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9对脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白的破坏在中枢神经系统白血病(CNSL)发病机制中的作用.方法 (1)体外实时定量PCR检测SHI-1、HL-60和U937白血病细胞MMP-2、MMP-9基因的转录水平;明胶酶谱法检测白血病细胞培养上清中MMP2和MMP-9蛋白酶的活性;体外穿膜实验观察各白血病细胞株的侵袭能力.(2)以原代人脑微血管内皮细胞(BMVECs)建立体外的血脑屏障(BBB)模型,将蛋白酶抑制剂GM6001处理或RNA干扰MMP-2/MMP-9基因沉默的白血病细胞细胞接种于BBB模型的Transwell小室上层,倒置相差显微镜观察BMVECs的形态变化;激光共聚焦显微镜观察紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5和occludin的表达;以白血病细胞的穿膜率或侵袭率反映白血病细胞侵袭能力的变化及对BBB通透性的影响.(3)对44只BALB/c裸鼠进行切脾,环磷酰胺腹腔注射及全身亚致死剂量辐照等预处理后,随机分为空白对照组(经尾静脉注射PBS),SHI-1组(尾静脉接种1.2×107个SHI-1细胞)和GM600组(尾静脉接种1.2×107个SHI-1细胞后从1d开始予5 mg/kg/d GM6001腹腔注射,直至SHI-1组小鼠检测到融合基因MLL/AF6).观察裸鼠的饮食、活动性、体质量等一般状态,观察能检测到MLL/AF6基因表达的最早时间.以RT-PCR检测裸鼠脑组织、骨髓及其他各脏器中人MLL/AF6基因的转录、骨髓涂片、组织病理切片检测裸鼠脑组织、骨髓及其他各脏器中SHI-1细胞浸润生长情况.应用RT-PCR检测脑组织中MMP-2和MMP-9基因的转录;原位明胶酶谱法检测脑组织中MMP-2和MMP-9的表达;组织免疫荧光法及Western Blot检测脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5和occludin的表达,组织免疫荧光法同时检测血脑屏障的破坏情况.结果 (1)在白血病细胞SHI-1、U937和HL60中,SHI-1表达较高转录水平的MMP-2和MMP-9及酶活性,且侵袭能力强于其他细胞系(P＜0.01).(2)与白血病细胞共培养后,融合致密的BMVECs之间出现间隙,细胞呈单个生长;紧密连接蛋白ZO-1、claudin5和occludin的表达明显下调;各白血病细胞均不同程度的穿过体外BBB屏障,其中SHI-1细胞使BMVECs的形态改变及3种紧密连接蛋白的下调最为明显,对BBB的破坏最强(P＜0.01).GM6001明显抑制了各白血病细胞分泌的MMP-2和MMP-9,使BMVECs的形态有所恢复;同时上调ZO-1、claudin-5和occludin的表达,降低了BBB的通透性.(3)用siRNA分别沉默MMP-2和MMP-9基因后,MMP-2和MMP-9的分泌被抑制,SHI-1细胞对BBB的通透性降低,ZO-1、claudin-5和occludin的表达上调.(4)存活的(除每周处死的)的空白对照组小鼠长期存活,未见发病情况.而存活的20只SHI-1组小鼠中有11只出现中枢神经系统白血病浸润(CNSL)症状和多器官的浸润肿块.各浸润脏器检测到MLL/AF6融合基因的转录,骨髓细胞学涂片可见原始细胞.病理学检查可见脑组织有白血病细胞浸润.而GM6001组小鼠未出现CNSL症状,骨髓细胞学及病理学检未见脑组织及骨髓白血病细胞浸润,脏器浸润的程度明显减轻.瘫痪裸鼠的脑组织均检测到人MMP-2和MMP-9基因的转录,其表达和活性较对照组及未出现CNSL鼠明显增高,同时脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白claudin-5、occludin和ZO-1的表达减少,BBB呈不同程度的破坏.而GM6001组脑组织中未检测到MMP-2和MMP-9基因的表达,claudin-5、occludin和ZO-1的表达无明显变化.结论白血病细胞分泌的MMP-2和MM-9可通过下调脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白claudin-5、occludin和ZO-1的表达而增加CNSL裸鼠BBB的通透性,在CNSL的发病机制中起重要作用.

关键词：基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9 紧密连接蛋白血脑屏障中枢神经系统白血病

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