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下调mortalin表达逆转卵巢癌的顺铂耐药性

下调mortalin表达逆转卵巢癌的顺铂耐药性

引用

中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：李洪岩杨玲刘雯左伋复旦大学上海医学院上海 200032

目的凋亡逃逸在肿瘤及其耐药性的发生、发展中具有很重要的作用.mortalin作为分子伴侣HSP70家族的一员,在多种肿瘤中呈高表达现象.本研究探讨下调mortalin表达逆转卵巢癌的顺铂耐药性.方法以卵巢癌组织芯片为基础,发现mortalin在卵巢... 详细信息

目的凋亡逃逸在肿瘤及其耐药性的发生、发展中具有很重要的作用.mortalin作为分子伴侣HSP70家族的一员,在多种肿瘤中呈高表达现象.本研究探讨下调mortalin表达逆转卵巢癌的顺铂耐药性.方法以卵巢癌组织芯片为基础,发现mortalin在卵巢癌中高表达,且随着卵巢癌分级及转移程度的增加而增加.mortalin和卵巢癌转移相关,这或许说明了其与卵巢癌耐药相关.以实时定量PCR及免疫印迹方法在卵巢癌顺铂敏感型细胞(A2780)和顺铂耐药型细胞(A2780/cis)中进一步验证mortalin的表达.结果A2780/cis细胞mortalin在mRNA和蛋白水平的表达都高于A2780细胞.干扰A2780/cis细胞中mortalin的表达,发现下调mortalin的表达明显抑制了耐药细胞的增殖,同时增加了其对顺铂的敏感性.克隆形成实验及侵袭实验显示下调mortalin的表达降低了A2780/cis细胞的增殖和侵袭能力;免疫荧光及免疫印迹结果显示下调mortalin的表达增加了P53的核易位.同时,发现干扰mortalin的表达增加细胞凋亡,涉及到促存活和凋亡信号通路,即减弱了Akt和Erk1/2的磷酸化,增加了P38的磷酸化.结论我们认为mortalin高表达与卵巢癌的耐药性相关,mortalin可以作为治疗卵巢癌耐药性的一个靶点.

关键词： mortalin 卵巢癌顺铂耐药性凋亡

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谷氨酸递质及其受体在吗啡精神依赖大鼠纹状体中的变化

谷氨酸递质及其受体在吗啡精神依赖大鼠纹状体中的变化

引用

中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：杨明理钱刚罗素元郭萍杨培润遵义医学院细胞生物学与遗传学教研室江西遵义 563003

目的观察吗啡精神依赖大鼠纹状体中谷氨酸递质和NR2B亚基表达的变化,从受体前和受体层面探讨通过谷氨酸能系统的阿片类精神依赖机制,为阿片类精神依赖治疗寻找新的作用靶点.方法取筛选合格的SD大鼠32只,随机等分为生理盐水对照组和吗... 详细信息

目的观察吗啡精神依赖大鼠纹状体中谷氨酸递质和NR2B亚基表达的变化,从受体前和受体层面探讨通过谷氨酸能系统的阿片类精神依赖机制,为阿片类精神依赖治疗寻找新的作用靶点.方法取筛选合格的SD大鼠32只,随机等分为生理盐水对照组和吗啡精神依赖模型组,模型组以剂量递增法连续皮下注射吗啡10d,建立大鼠吗啡条件性位置偏爱(CPP)模型.在确认CPP模型建立成功后,两组分别取10只大鼠,参照脑立体定位图谱取纹状体,用比色法检测其谷氨酸递质的含量;其余6只经4％多聚甲醛灌注固定后,用免疫组化检测纹状体中NR2B亚基的表达,采用Leica Qwin细胞图像分析系统观察纹状体中NR2B免疫反应产物并拍照,经Image-Pro Plus软件计算其平均光密度值.实验数据采用配对t检验进行统计学处理(P＜ 0.05表示差异有统计学意义).结果与生理盐水对照组比较,模型组大鼠纹状体中谷氨酸递质含量显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01);NR2B亚基平均光密度值亦显著增加,差异有统计学意义(P＜0.01).结论纹状体中谷氨酸递质含量及其受体NR2B表达水平上调可能是吗啡精神依赖的神经细胞生物学机制之一.

关键词：吗啡纹状体谷氨酸 NR2B

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50.N-乙酰-半胱氨酸通过调节mGluR Ⅰ活性保护细胞抵抗细胞的毒性

50.N-乙酰-半胱氨酸通过调节mGluR Ⅰ活性保护细胞抵抗细胞的毒性

引用

中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：孙丽丽袁记方杨荟敏谷利张红首都医科大学细胞生物学系肝脏保护与再生调节北京市重点实验室北京 100069

研究抗氧化物质N-乙酰-半胱氨酸(NAC)在C6大鼠胶质瘤细胞,HEK293细胞,MN9D多巴胺细胞以及大鼠帕金森模型中对第一组代谢性谷氨酸受体(mGluR Ⅰ)的活性的调节作用。实验结果显示,在C6大鼠胶质瘤细胞中,NAC增强了DHPG激活mGluR Ⅰ引起的ER... 详细信息

研究抗氧化物质N-乙酰-半胱氨酸(NAC)在C6大鼠胶质瘤细胞,HEK293细胞,MN9D多巴胺细胞以及大鼠帕金森模型中对第一组代谢性谷氨酸受体(mGluR Ⅰ)的活性的调节作用。实验结果显示,在C6大鼠胶质瘤细胞中,NAC增强了DHPG激活mGluR Ⅰ引起的ERK,AKT通路的磷酸化和抑制mGluR Ⅰ活化引起的细胞表面mGluR1/5的内吞作用。实验还发现,NAC能够增强mGluR Ⅰ活化对细胞的保护作用,能够通过调节Bcl-2,BAX,PARP信号通路和抑制细胞色素C的释放来保护细胞抵抗星形孢菌素。在mGluR1过表达的HEK293细胞中,NAC抑制mGluR1活化引起的ERK通路的磷酸化,细胞表面mGluR1的内吞作用和Bcl-2/BAX比例的下调。我们还发现,NAC通过清除ROS能够保护细胞抵抗mGluR1过表达对细胞的毒性。在MN9D多巴胺细胞和鱼藤酮处理的大鼠帕金森模型中,mGluR Ⅰ活化进一步恶化鱼藤酮对多巴胺细胞的损伤,NAC预处理细胞能够抑制mGluR Ⅰ活化对细胞的毒性,使大鼠黑质中酪氨酸羟化酶阳性的神经元增加。以上的实验结果显示,在不同的细胞和组织中,NAC通过影响不同的信号通路来调节mGluR Ⅰ的活性,这为治疗帕金森病提供重要的信息。

关键词： N-乙酰-半胱氨酸代谢型谷氨酸受体1a(mGluR1a) 氧化应激凋亡帕金森病

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非酒精性脂肪肝病大鼠肝刺激因子的下调与凋亡的研究

非酒精性脂肪肝病大鼠肝刺激因子的下调与凋亡的研究

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：江瑛赵妙云安威首都医科大学细胞生物学系北京 100069

目的研究肝刺激因子(HSS)在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠肝脏的表达及其与肝细胞凋亡的关系。方法采用高脂饮食饲喂大鼠8周、12周和16周,以诱导NAFLD模型,平行设置对照组。于造模结束时,利用HE染色观察肝脏病理改变,利用TUNEL方法检... 详细信息

目的研究肝刺激因子(HSS)在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠肝脏的表达及其与肝细胞凋亡的关系。方法采用高脂饮食饲喂大鼠8周、12周和16周,以诱导NAFLD模型,平行设置对照组。于造模结束时,利用HE染色观察肝脏病理改变,利用TUNEL方法检测细胞凋亡,利用Western blot方法检测Caspase3和细胞色素C的表达水平。同步检测肝脏HSS蛋白和mRNA水平。采用软脂酸(400 mol/L)分别刺激HSS过表达和HSS siRNA处理的BEL-7402细胞,通过Nile Red染色观察脂滴,通过流式细胞术和Western blot方法检测细胞凋亡和细胞色素C水平,利用酶联免疫方法检测Caspase 3活性。结果 NAFLD大鼠随着造模时间延长,肝脏脂变加重,并可见炎性渗出和点状坏死灶;肝脏TUNEL阳性细胞数增多,Caspase 3蛋白表达增加,线粒体内细胞色素C漏出增多;同时HSS mRNA和蛋白质表达水平下降。体外实验结果表明,软脂酸引起BEL-7402细胞凋亡及胞质中脂滴明显增加,过表达HSS的BEL-7402细胞凋亡数明显减少,Caspase3的活性下降及线粒体细胞色素C漏出减轻;采用HSS siRNA干扰发现,BEL-7402细胞凋亡又明显增加,Caspase 3活性增加及线粒体细胞色素C漏出增加,提示HSS对脂肪酸诱导肝细胞凋亡具有保护作用。结论大鼠NAFLD过程中肝脏细胞凋亡加重可能与HSS的表达下调有关,HSS对脂肪酸诱导的肝细胞凋亡具有保护作用。

关键词：肝刺激因子非酒精性脂肪性肝病凋亡

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腺病毒载体介导的重组蛋白sTNFRII-gAD快速表达和制备

腺病毒载体介导的重组蛋白sTNFRII-gAD快速表达和制备

引用

中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：陆月刘丹刘雪荣沈炜郑刚柳云帆董小岩吴小兵高基民温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州 325035 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京 100052 北京五加和分子医学研究有限公司北京 100176 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京 100052 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京 100052 北京五加和分子医学研究有限公司北京 100176 温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州 325035

sTNFRII-gAD融合蛋白是一种双功能蛋白质分子,sTNFRII可以与TNFα结合,减轻炎症的发生,达到治疗类风湿性关节炎等疾病的目的.已经上市的TNFα拮抗药物sTNFRII-Fc是二聚体形式的sTNFRII.但TNFα天然状态下是三聚体形式,重组蛋白sTNFRII-... 详细信息

sTNFRII-gAD融合蛋白是一种双功能蛋白质分子,sTNFRII可以与TNFα结合,减轻炎症的发生,达到治疗类风湿性关节炎等疾病的目的.已经上市的TNFα拮抗药物sTNFRII-Fc是二聚体形式的sTNFRII.但TNFα天然状态下是三聚体形式,重组蛋白sTNFRII-gAD是利用了脂联素球部自动形成三聚体的特性而设计的.本研究尝试用重组腺病毒载体/BHK21细胞表达系统来制备三聚体化的sTNFRII-gAD融合蛋白.该表达系统的特点是生产规模易于放大,适应无血清培养,可以反复多次收获目标蛋白.

关键词：腺病毒重组蛋白 BHK21细胞哺乳动物细胞 sTNFRII-gAD

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青藤碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及其分子机制的研究

青藤碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及其分子机制的研究

引用

中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：陈丹娜李宇晟吴丽萍朱力宇刘艳平中南大学生物科学与技术学院细胞生物学系长沙 410013 中南大学湘雅医院长沙 410008

目的探讨青藤碱(SN)体外抑制人肝癌细胞HepG2生长及诱导其凋亡的作用机制.方法 (1)采用形态学观察青藤碱处理前后细胞的形态学变化;(2)MTT和SRB法检测青藤碱对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;(3)流式细胞术分析了细胞周期分布;(4)Hoec... 详细信息

目的探讨青藤碱(SN)体外抑制人肝癌细胞HepG2生长及诱导其凋亡的作用机制.方法 (1)采用形态学观察青藤碱处理前后细胞的形态学变化;(2)MTT和SRB法检测青藤碱对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;(3)流式细胞术分析了细胞周期分布;(4)Hoechst染色和流式细胞术分析青藤碱对细胞的凋亡作用;(5) RT-PCR方法检测survivin在mRNA水平的表达;(6)Western blot检测药物处理前后细胞中survivin蛋白的表达情况.结果青藤碱能显著抑制人肝癌细胞HepG2生长,并具有时间浓度依赖性.青藤碱作用24 h、48 h、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(1.44±1.53)、(1.21±1.91)、(0.39±2.16)mmol/L.1.6 mmol/L青藤碱作用48 h后,Hoechst荧光核染,人肝癌细胞HepG2核出现聚缩、片段化和周边化,呈现典型的凋亡特征.FCM显示细胞被阻滞于G2/M期,随药物浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加.相对定量RT-PCR结果显示青藤碱能下调HepG2细胞survivin mRNA的表达.Western blot检测结果显示青藤碱可以抑制HepG2细胞survivin的表达,并随作用浓度的加大,survivin的表达量减低;并发现survivin在青藤碱作用24 h出现高表达.结论青藤碱对人肝癌细胞HepG2有较强的抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与抑制survivin的表达有关.

关键词：青藤碱 HepG2 细胞凋亡 sunvivin

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外源性IbeB蛋白在小鼠ES细胞中互作蛋白Cathepsin A的鉴定

外源性IbeB蛋白在小鼠ES细胞中互作蛋白Cathepsin A的鉴定

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：尚德淑姜静宜方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳 110001

大肠杆菌ibcB基因是其侵袭人脑微血管内皮细胞的相关基因,在细菌侵袭真核细胞过程中进入真核细胞发挥作用.前期研究发现,ibeB基因稳定转染的鼠ES细胞AB2.1特异性表达神经前体细胞标志分子——nestin,细胞有较长突起,呈类似神经生长端样... 详细信息

大肠杆菌ibcB基因是其侵袭人脑微血管内皮细胞的相关基因,在细菌侵袭真核细胞过程中进入真核细胞发挥作用.前期研究发现,ibeB基因稳定转染的鼠ES细胞AB2.1特异性表达神经前体细胞标志分子——nestin,细胞有较长突起,呈类似神经生长端样结构.为研究ibeB基因诱导AB2.1向神经前体样细胞分化的机制,利用酵母双杂交筛选AB2.1中IbeB靶蛋白.获得的80个阳性克隆中有5个为组织蛋白酶A(CathepsinA)基因,同源性达98％.为此,进一步鉴定IbeB蛋白与Cathepsin A的相互作用,酵母体内小量杂交结果表明,Cathepsin A和IbeB蛋白具有阳性相互作用;TNT(R)快速转录/翻译耦联系统对ibeB进行表达,同时构建GST-Cathepsin A表达载体,并用IPTG在大肠杆菌BL21中诱导表达,GST-pull down法验证两者可以结合,反之,用体外转录翻译体系表达小鼠Cathepsin A蛋白,用IPTG在BL21中诱导表达GST-IbeB,GSTpull down法同样表明两者可以结合;免疫荧光显示共转染ibeB和CathepsinA的HEK293细胞中两者存在共定位,免疫共沉淀结果表明两者在真核细胞中具有相互作用.Cathepsin A是一种溶酶体蛋白水解酶,主要在细胞内环境稳定方面发挥作用.我们的结果提示,IbeB可能与Cathepsin A结合诱导AB2.1向神经前体细胞分化,其机制还需进一步探讨.本研究结果可望为加深了解神经细胞分化调控机制及通过人工干预手段得到定向分化的神经前体细胞积累资料.

关键词： ibeB ES细胞神经分化 Cathepsin A

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高原缺氧对大鼠心肺组织超微结构的影响

高原缺氧对大鼠心肺组织超微结构的影响

引用

中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：李文华西藏民族学院医学院陕西咸阳 712082

目的研究表明，快速进入高原地区时机体不可避免地会受到不同程度的损伤，以心肺损伤较显著，而有关在较高海拔地区低氧适应早期心肺结构改变的研究至今少有报道.本研究对由近海平面地区短时间内携往较高海拔地区大鼠的心肺组织进行光... 详细信息

目的研究表明，快速进入高原地区时机体不可避免地会受到不同程度的损伤，以心肺损伤较显著，而有关在较高海拔地区低氧适应早期心肺结构改变的研究至今少有报道.本研究对由近海平面地区短时间内携往较高海拔地区大鼠的心肺组织进行光镜、电镜观察.观察低氧习服对高原低氧大鼠心肺组织的超微结构影响.方法将SD大鼠随机分为4组：高原1d(A组)、3d(B组)、30 d(C组)和对照组(D组，西安地区，海拔5m).3个实验组动物由西安耗时1d带到青海格尔木(海拔2700m)、3d带到西藏那曲(海拔4500 m)及30 d那曲(海拔4500 m)，在不同时间点处死取材，光镜和电镜下观察心肺标本.结果急性低氧A、B组肺组织显微和超微结构出现明显的间质性肺水肿和肺泡性肺水肿，而经过低氧习服后C组间质性肺水肿则明显减轻;急性低氧A、B组心脏组织光镜下大鼠各室壁心肌细胞均可见不同程度的浊肿、空泡变性、溶解坏死及间质水肿等，电镜下可见心肌细胞线粒体肿胀，肌浆网扩张，肌原纤维溶解，细胞内外水肿等，急性低氧B组上述改变右室壁较左室壁明显，而经过低氧习服后C组间质性水肿则明显减轻.结论高原急性缺氧造成SD大鼠间质性肺水肿和肺泡型肺水肿，引起SD大鼠以右心室为主的全心性损伤，经过高原低氧习服后心肺组织病变明显减轻.

关键词：大鼠低氧习服电镜超微结构

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脊柱外科手术的一些并发症及其防治

脊柱外科手术的一些并发症及其防治

引用

中华医学会第十届骨科学术会议暨第三届国际COA学术大会

作者：李淳德北京大学第一医院骨科

一、概述1.脊柱外科高速发展,得益于:基础学科发展:生物力学,细胞生物学新型材料研究和应用:内固定材料,器械微创技术发展:先进计算机技术,可视化技术这些方面的高速发展导致:手术数量增加;手术范围扩大;脊柱疾病的特殊改变;学习曲线的... 详细信息

一、概述1.脊柱外科高速发展,得益于:基础学科发展:生物力学,细胞生物学新型材料研究和应用:内固定材料,器械微创技术发展:先进计算机技术,可视化技术这些方面的高速发展导致:手术数量增加;手术范围扩大;脊柱疾病的特殊改变;学习曲线的变化→导致了风险增加

关键词：椎弓根螺钉植骨块人工颈椎间盘颈椎手术颈长肌前路手术假关节经口咽神经根外科手术颈脊髓麻醉插管

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人类急性B淋巴细胞白血病-新生儿期NOD/SCID/IL2r γnull小鼠异种移植模型的建立

人类急性B淋巴细胞白血病-新生儿期NOD/SCID/IL2r γnull小鼠异种...

引用

中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：孔圆刘艳荣刘开彦黄晓军石川文彦原田实根北京大学人民医院北京大学血液病研究所北京 100044 日本九州大学大学院医学研究院福冈 8130000 北京大学人民医院北京大学血液病研究所北京 100044 日本九州大学大学院医学研究院福冈 8130000

目的利用新生儿期NOD/SCID/IL2rγnull免疫缺陷小鼠建立人类急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的体内研究模型。方法新生儿期(出生48h之内)NOD/SCID/IL2rγnull小鼠经亚致死剂量137Cs全身照射后,经面静脉输注免疫磁珠法纯化的B-ALL患者骨髓C... 详细信息

目的利用新生儿期NOD/SCID/IL2rγnull免疫缺陷小鼠建立人类急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的体内研究模型。方法新生儿期(出生48h之内)NOD/SCID/IL2rγnull小鼠经亚致死剂量137Cs全身照射后,经面静脉输注免疫磁珠法纯化的B-ALL患者骨髓CD34+细胞,移植后6～8周通过流式细胞术检测受鼠外周血、骨髓和脾脏中人源细胞的含量及免疫表型,并进行免疫病理分析。结果在接受CD34+细胞移植的受鼠外周血、骨髓和脾脏细胞中,我们不仅检测到了不同程度的人B-ALL细胞(hCD45+CD19+)的植入,而且植入细胞具有与B-ALL患者相似的免疫表型特征。此外,hCD45+CD 19+细胞广泛迁移浸润到肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑等组织器官中。结论新生儿期NOD/SCID/IL2rγnull免疫缺陷小鼠模型能够有效支持B～ALL细胞的长期植入,是对人类B-ALL进行体内功能性研究的新型异种移植模型。

关键词： NOD/SCID/IL2rγnull.免疫缺陷小鼠新生儿期异种移植急性淋巴细胞白血病 B细胞

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