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Xbar图在精液参数月均值监控中的应用

Xbar图在精液参数月均值监控中的应用

引用

中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者：李劲李佳祥甘贤优舒金辉冯贵雪张波周红广西壮族自治区妇幼保健院生殖中心

目的:本研究旨在探讨应用Xb图监控精液各主要参数月均值变化的价值,以期达到保障本实验室的稳定性、准确性。方法:应用excel表格图表工具,以本实验室内2010年6至2010年12月（共6个月）所有被检患者的精子浓度、前向运动精子百分率、不... 详细信息

目的:本研究旨在探讨应用Xb图监控精液各主要参数月均值变化的价值,以期达到保障本实验室的稳定性、准确性。方法:应用excel表格图表工具,以本实验室内2010年6至2010年12月（共6个月）所有被检患者的精子浓度、前向运动精子百分率、不动百分率、正常形态率的均值、均值±2×标准差、均值±3×标准差分别设置为控制限、警戒限、控制限制作成X图。按照质控图的基本控制规则来对各指标随后的月均值进行监测。控制限的设置随着观测值的不断增加,定期进行必要的修改。结果:（1）精子浓度:2010年10月至2011年6月连续9个月均值均在控制限上侧,违背了控制规则,提示可能系统误差;分析原因后相应地修改控制限,其余各月份均在警戒限内,控制良好。（2）前向运动精子百分率:从2010年6月至201 1年6月均值监控良好,而2011年6月至2011年12月活力连续偏低,分析可能与新进技术人员检测标准不统一有关。（3）不动精子百分率:不动精子百分率从2010年6月至2012年7月均在警戒限范围内,控制最为稳定。（4）正常形态率:2010年6月至2011年12月正常形态率均值均在10%左右,控制良好。2012年连续7个月均值均在控制限以下,提示需警惕系统误差,8月份加强了形态学的内部技术员间及自身的质量控制,发现失控记录及时组织学习、讨论。结论:应用X图监控精液参数月均值变化是一个简单实用、比较敏感直观的质量保证方法。

关键词：精液 Xbar图质量控制月均值

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少弱精子症及不同精子质量与精浆生化相关性研究

少弱精子症及不同精子质量与精浆生化相关性研究

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中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者：毛金观嘉兴市妇幼保健院嘉兴市市立三一医院

目的分析少弱精子症及不同精子质量与精浆生化检测结果的差异情况,探讨精浆生化与精子质量间的相关性。方法按《WHO人类精液及精子一宫颈粘液相互作用实验检验手册》进行精液分析,同时检测精浆中性a-葡糖苷酶、果糖及弹性硬蛋白酶,对相... 详细信息

目的分析少弱精子症及不同精子质量与精浆生化检测结果的差异情况,探讨精浆生化与精子质量间的相关性。方法按《WHO人类精液及精子一宫颈粘液相互作用实验检验手册》进行精液分析,同时检测精浆中性a-葡糖苷酶、果糖及弹性硬蛋白酶,对相关资料进行回顾性分析。结果①根据精液分析结果分组,不同组别检测精浆中性a-葡糖苷酶异常发生率不同,差异有统计学意义(p<0.01)。梗阻性无精子症、少精子症、少弱精子症、严重少精子症、非梗阻性无精子症与正常精子组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。②不同组别检测精浆果糖异常发生率不同,差异有统计学意义(p<0.01)。梗阻性无精子症、严重少精子症、弱精子症与正常精子组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。③不同组别检测精浆弹性硬蛋白酶异常发生率比较,差异无统计学意义(p>0.05),确诊感染者也无统计学意义(p>0.05)。④精浆弹性硬蛋白酶定量检测结果正常者、隐行感染者、确证感染者,三组检测精浆中性a-葡糖苷酶异常发生率比较,差异有统计学意义(p<0.05);其中隐行感染者与确证感染者比较,差异有统计学意义(p<0.05);三组检测精浆果糖异常发生率比较,差异无统计学意义(p>0.05)。结论不同精子质量检测精浆中性a-葡萄糖苷酶及果糖异常发生率不同,确证感染者精浆中性a-葡萄糖苷酶异常发生率显著增高。梗阻性无精子症、严重少精子症等精子质量差,精浆中性a-葡萄糖苷酶及果糖异常发生率增高。我们推测,生殖道感染引起的梗阻性无精子症、严重少精子症、少弱精子症、少精子症及弱精子症可能与不育患者附睾等生殖腺病变的病情严重程度、病程进展所处不同阶段有关。精浆生化异常是导致男性不育的重要病因之一,精浆生化应作为男性不育常规检查项目。

关键词：精子质量精浆生化少弱精子症相关性研究

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精索静脉曲张不育患者精液参数与8-羟基脱氧鸟苷水平的相关性分析

精索静脉曲张不育患者精液参数与8-羟基脱氧鸟苷水平的相关性分析

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中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者：江芳郑厚斌王奇玲唐运革邓顺美刘晃张志兴钟安汤乐唐立新广东省计划生育科学技术研究所

目的分析精索静脉曲张不育患者外周血及精浆中的8-羟基脱氧鸟苷(8-OhdG)的水平与精子浓度、活动率及正常形态参数的相关性,探讨二者对男性生育力的影响及在不育症检查和治疗中的作用。方法对41例精索静脉曲张不育患者、33例正常生育组... 详细信息

目的分析精索静脉曲张不育患者外周血及精浆中的8-羟基脱氧鸟苷(8-OhdG)的水平与精子浓度、活动率及正常形态参数的相关性,探讨二者对男性生育力的影响及在不育症检查和治疗中的作用。方法对41例精索静脉曲张不育患者、33例正常生育组进行精液分析(浓度、活动率、存活率、正常形态率),用8-OHdG的酶联免疫试剂盒检测各组人群中血清及精浆的8-OHdG水平,采用Wilcoxon两样本比较法对数据进行统计分析。结果正常生育组的精子浓度、前向活动率、存活率、正常形态率均高于精索静脉曲张不育组,差异具有统计学意义(P<0.05);正常生育组和精索静脉曲张不育组的血清8-OHdG水平分别为44.03+29.23 ng/ml,62.12±35.52 ng/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);正常生育组和精索静脉曲张不育组的8-OHdG水平分别为18.68±3.36 ng/ml,21.20±3.99 ng/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);血清的8-OHdG水平高于精浆。相关性分析结果显示:血清8-OHdG与存活率、前向活动率呈现负相关关系(r=-0.293,P<0.05;r=-0.243,P<0.05);精浆8-OHdG与存活率、前向活动率呈现负相关关系(r=-0.327,P<0.05;r=-0.275 P<0.05);血清及精浆8-OHdG与精子浓度、正常形态率呈现不相关。结论 8-OHdG与存活率、前向活动率呈现负相关关系,精索静脉曲张患者与8-OHdG之间存在相关性,8-OHdG可作为一项过氧化检测指标,为临床男性不育诊疗提供有效的参考依据。

关键词： 8-羟基脱氧鸟苷精液参数精索静脉曲张

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按新版手册标准探讨精子形态对体外受精-胚胎移植助孕结局及新生儿健康状况的预测价值

按新版手册标准探讨精子形态对体外受精-胚胎移植助孕结局及新生...

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中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会暨全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者： Shu Jin-hui 舒金辉 Feng Gui-xue 冯贵雪 Zhang Bo 张波 Li-Jin 李劲 Li Jia-xiang 李佳祥 Gan Xian-you 甘贤优 Reproductive Medicine center Maternal and Child Health Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region 广西壮族自治区妇幼保健院生殖中心南宁530003

目的：按WHO第五版精液分析手册标准探讨正常形态精子率对常规体外受精结局及新生儿健康状况的预测价值.方法：采用第五版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》严格标准把研究对象(789例)分为畸形精子症组(精子正常形态率＜4％... 详细信息

目的：按WHO第五版精液分析手册标准探讨正常形态精子率对常规体外受精结局及新生儿健康状况的预测价值.方法：采用第五版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》严格标准把研究对象(789例)分为畸形精子症组(精子正常形态率＜4％,35例)和正常组(精子正常形态率≥4％,754例),比较两组间正常受精率,卵裂率、优胚率、种植率、临床妊娠率、流产率及新生儿情况;结果：(1)两组间患者年龄(男、女方)、获卵数、女方平均身高及平均体重指数差异不显著(P＞0.05);畸形精子症组的正常受精率、卵裂率、优胚率、周期冷冻率、种植率及移植周期妊娠率略低于正常组,而其流产率略高于正常组,但两组间各指标异均无统计学意义(P＞0.05);(2)除外继续妊娠(畸形精子症组1例,正常组140例),随访789个移植周期己分娩228个婴儿,畸形精子症组15个(9单胎+3双胎),正常组213个(141单胎+36双胎),出生婴儿无先天性缺陷,两组间孕周、早产率、体重发生率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论：按新版手册标准仅通过精子形态预测体外受精-胚胎移植的助孕结局及新生儿情况具有一定局限性.

关键词：新生儿患者精子形态体外受精胚胎移植临床价值

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两步法复苏对冻融精子活力的影响

两步法复苏对冻融精子活力的影响

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中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者：施文博朱勇孙璨王如瑶李铮上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科上海市男科学研究所精子发育与遗传学实验室上海市人类精子库

目的复苏温度和时间是影响精子库长期冷冻保存精液质量的的重要因素之一。本研究针对不同复苏温度,探讨其对精子的复苏之后的活动力,以及不同温度对精子形态和DNA的完整性等参数的影响。材料与方法此研究按照上海交通大学医学院和仁济... 详细信息

目的复苏温度和时间是影响精子库长期冷冻保存精液质量的的重要因素之一。本研究针对不同复苏温度,探讨其对精子的复苏之后的活动力,以及不同温度对精子形态和DNA的完整性等参数的影响。材料与方法此研究按照上海交通大学医学院和仁济医院伦理委员会的要求,并且要求捐献者填写书面知情同意书。自2012年1月到5月,共采集54位志愿者的精液标本,捐献者年龄在22～45岁之间。禁欲3-5天后,志愿者通过手淫采集精液;室温下60 min内完全液化后,进行后续实验研究。精液涂片后,将剩余标本分成两等份,分别加入等量GEYC型冷冻保护剂,充分混匀再至于1.5ml到冷冻管中,分别编为A,B两组。采用气相快速冷冻方法储存5小时以上,进行快速复温。其中A组直接至于37℃水浴锅中5分钟,而B组采用两步法:先投入40℃水浴2分30秒,再放入37℃水浴2分30秒。采用西班牙SCA精液分析仪精确测量复苏后精液基本参数（包括前向运动精子比率和非前向运动比率）。正常形态和DNA完整性检测按照WHO推荐的Diff-Quick和SCD方法。所有数据经SPSS软件进行统计学分析和处理。结果精液复苏后,A组（直接37℃复温）前向运动精子比率为（22.0±12.1）%,B组（两步法复温）前向运动率为（28.2±14.5）%,两组之间进行student-T检验,P<0.05,差异具有统计学意义。而冷冻前后的DNA完整率和畸形精子发生率没有显著性差异,p>0.05。讨论与结论复苏温度和时间是精子库长期冷冻保存精液的重要因素。按照WHO的操作手册,精液经快速冷冻后,37℃复温3-5分钟,可以得到较高的精子活动力。然而,也有一部分研究支持提高复苏的温度。本研究通过上海市人类精子库部分捐精志愿者精子的小样本研究,初步提出两步法序贯复苏对提高精子活动力具有一定作用,是值得今后研究的策略。然而,何种复苏温度和时间对精子细胞损伤的最小,目前仍是缺乏详细的研究报道,对精子在复苏的低温生物学机理也十分匮乏,未来需要更深入的研究和分析。本研究采用的两步法复苏是一种有效的复苏方法 ,同直接37℃复温相比,提高了快速冷冻后精子复苏的前向运动比率。除此之外,两步法对精子的DNA和形态是没有影响。初步提示两步法可以作为精子复苏的优化方法。

关键词：人类精子库精液复苏温度

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不育夫妇中的男性精子DNA碎片指数的变异

不育夫妇中的男性精子DNA碎片指数的变异

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中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会暨全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者： FEI Qian-jin 费前进 JIN Jian-yuan 金建远 NI Wu-hua 倪吴花 HUANG Xue-feng 黄学锋 Department of Reproductive Medicine First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical CollegeWenzhouZhe 温州医学院附属第一医院生殖中心

目的：探讨不育夫妇中的男性精子DNA碎片指数(DFI)的变异程度.方法：2009年4月至2012年4月,共539对不育夫妇中的男性纳入本研究.根据WHO标准(1999)和采用精子染色质扩散(SCD)试验对每例男性行至少1次的重复常规精液分析和DFI检测,计算DF... 详细信息

目的：探讨不育夫妇中的男性精子DNA碎片指数(DFI)的变异程度.方法：2009年4月至2012年4月,共539对不育夫妇中的男性纳入本研究.根据WHO标准(1999)和采用精子染色质扩散(SCD)试验对每例男性行至少1次的重复常规精液分析和DFI检测,计算DFI的变异系数(CV),对DFI的变异程度及其影响因素进行统计分析.结果 539例男性年龄22～54岁,中位数32.0(29.0～36.0)岁,其中有473例、59例、6例和1例分别行1次、2次、3次和4次共计613次重复常规精液分析和DFI检测,重复检测与首次检测的间隔时间为0.5～34m,中位数3.0(1.0～11.0)m.539份首次检测标本、613份重复检测标本和1152份总的检测标本的标本间的DFI变异系数(CVB)分别为71.2％、66.7％和69.3％.与首次检测相隔0.5～3m、3～12m和12～34m的DFI与首次DFI的差异均有统计学意义(均P＜0.01).以18％为男性生育力的DFI阈值,539例男性中有142例(26.3％,95％CI：22.6～30.0％)的首次和重复检测DFI值分别位于阈值两侧.539例男性自身的DFI的变异系数(CVw)为0.0～110.5％,中位数为26.0(12.6～42.8)％,精子总数、精子密度、精子活动力和精子形态的CVW的中位数分别为41.9 (21.8～72.6)％、31.9(15.1～62.5)％、29.4(13.2～55.4)％和46.0(22.4～87.1)％,各常规精液参数的CVW分别与DFI的CVW相比,差异均有统计学意义(均P＜0.01).DFI的CVW与精子总数、精子密度和DFI重复检测的间隔时间密切相关(均P＜0.05).结论：不育夫妇中的男性精子DFI是一个变异较大的参数,应对每例男性的DFI进行重复检测才能反映其精子DNA损伤的水平.

关键词：男性不育症精子DNA碎片指数基因变异检测技术

来源：评论

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黄精赞育胶囊对弱精症患者精子活动率、精浆果糖、精浆α-糖苷酶的影响

黄精赞育胶囊对弱精症患者精子活动率、精浆果糖、精浆α-糖苷酶...

引用

中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者：余宏亮薄立伟曹恒海杨永俊河南省人口和计划生育科学技术研究院

目的:弱精症是男性不育的最常见原因之一,既往研究表明,精子质量差患者精浆果糖及α-糖苷酶含量偏低,我科以五子衍宗胶囊为对照,观察黄精赞育胶囊在肾精亏虚引起的男性弱精症方面的临床疗效及对患者精浆果糖、精浆α-糖苷酶的影响。方法... 详细信息

目的:弱精症是男性不育的最常见原因之一,既往研究表明,精子质量差患者精浆果糖及α-糖苷酶含量偏低,我科以五子衍宗胶囊为对照,观察黄精赞育胶囊在肾精亏虚引起的男性弱精症方面的临床疗效及对患者精浆果糖、精浆α-糖苷酶的影响。方法:治疗组采用黄精赞育胶囊口服（上海新亚药业邗江有限公司生产,0.31g/粒,4粒/次,3次/日）,对照组采用五子衍宗胶囊口服（辽宁鞍山德善药业生产,0.5/片,1.5g/次,3次/天）)治疗。两组均治疗3月为1疗程。观察两组患者治疗前后精子活动率、前向运动率及患者的精浆生化中果糖、α-糖苷酶含量。治疗有效为精液常规检查,精子数量和活动力有群级间改善。无效,治疗前后无变化。应用SPSS11软件包进行数据处理,检测数据用x±s表示,治疗前与治疗后采用配对t检验,两组有效率比较用卡方检验（χ）,检验水准α=0.05。结果两组病人顺利完成疗程,未见不适反应。3月后查精液常规显示两组精子活动率（或）和前运动率较治疗前都有所上升,治疗组比对照组上升比较明显（P<0.05）。治疗组上升的26人,约为86.67%,无上升的4人,约为13.33%;对照组精子活动率（或）和前运动率较治疗前上升的11人,约为36.67%,活动率和（或）前运动率无上升的19人,约为63.33%。两组比较有显著差异（P<0.05）;两组患者精浆果糖和α-糖苷酶含量较治疗前均有所上升,但治疗组比对照组上升明显（P<0.05）。治疗组上升的27人,为90%,无上升的3人,为10%;对照组精子活动率（或）和前运动率较治疗前上升的13人,约为43.33%,活动率和（或）前运动率无上升的19人,约为56.67%。结论:黄精赞育胶囊可以改善弱精症患者的精子活动能力;黄精赞育胶囊能改善弱精症患者精子活动能力与其能改善患者精浆生化中的果糖和糖苷酶含量有关。

关键词：黄精赞育胶囊肾精虚亏弱精症果糖 α-糖苷酶

来源：评论

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生精散对精子活力及电压依赖性Ca2+通道的影响

生精散对精子活力及电压依赖性Ca2+通道的影响

引用

中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者：孙伟杨伟娜张斌山东中医药大学第二附属医院

目的:通过观察弱精症者的精子与生精片血清共培养前后其精子膜电压依赖性钙离子（VDCCa1mRNA）表达量的变化以及电压依赖性阴离子通道（VDAC）跨膜电压的变化,探讨生精片具体的作用机制。方法:取100例弱精子症患者的精液（a级精子≦25%... 详细信息

目的:通过观察弱精症者的精子与生精片血清共培养前后其精子膜电压依赖性钙离子（VDCCa1mRNA）表达量的变化以及电压依赖性阴离子通道（VDAC）跨膜电压的变化,探讨生精片具体的作用机制。方法:取100例弱精子症患者的精液（a级精子≦25%、a+b≦50%、精子密度>20×106/ml、正常形态精子>30%、白细胞<1×106/ml）,等分为五组。运用中药血清药理学实验方法制备含生精片血清,主要有三项试验,每项试验均分为五组即对照组、空白血清组、低剂量血清组、中剂量血清组、高剂量血清组。实验一:分别取液化好的精子液100μl于五个试管中,在分别加入50μl的已经制备好的四个血清（空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组）,对照组加入50μl的HTF培养液,置于37°C、5%CO2培养箱中孵育30min后采用伟力图像分析系统进行精子运动分析,测试温度为37°C,将五组精液分别涂于计数板上进行分析,于2min内完成测试。主要测试指标有精子运动平均路径速度（VAP）、精子曲线速度（VSL）、精子直线运动速度（VSL）、精子头部侧摆幅度（ALH）、和鞭毛摆动频率（BCF）。实验二:将五组己加入血清并孵育过的精液经percoll非连续梯度离心法分离后,吸取底部沉淀精子,用Earle液（Sigma公司）冲洗富裕后于（400）g离心5min,吸取沉淀精子,置于另一含Earle液（RT·PCT）技术分别检测精子中各类型电压依赖性钙通道的almRNA相对表达量。实验三:将五组己加入血清孵育过的精液置于含有40%Percoll的离心管,400×g离心10min,离心后的精子沉淀用PH7.0磷酸缓冲液洗涤3次,处理后,分别抽取少许中间脂质层样本加入还原性样本缓冲液煮浮3min,经10%SDS-PAGE凝胶电泳。将分离纯化的VDAC重新组装到人工双层脂质膜中,运用膜片钳进行研究。观察血清加入前后跨膜电压的变化。结论:含生精片血清与精子共培养前后VDCCalmRNA表达量有明显的改变,且VDAC开闭与精子运动能力有直接相关性,为中药进入体外受精提供支持。

关键词：精子活力共培养电压依赖性生精片 Ca2 生精散

来源：评论

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生育力男性精液质量调查

生育力男性精液质量调查

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中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会暨全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者： Tang Lixin 唐立新 Wang Qiling 王奇玲 Tang Yunge 唐运革 Jiang Fang 江芳 Wang lulu 王璐璐 Huang jiangtao 黄江涛 Family Planning Institute of Guangdong Province Guangzhou 510600China 广东省计划生育科学技术研究所广州510600

目的：研究正常生育力(无避孕同居生活12个月内使配偶获得妊娠)男性精液质量水平,并分析到达妊娠时间(time to pregnant,TTP)与精液参数相关性.方法：招募年龄在20-50岁之间,妊娠到达时间12个月内的男性,填写问卷、体检和精液分析,计算... 详细信息

目的：研究正常生育力(无避孕同居生活12个月内使配偶获得妊娠)男性精液质量水平,并分析到达妊娠时间(time to pregnant,TTP)与精液参数相关性.方法：招募年龄在20-50岁之间,妊娠到达时间12个月内的男性,填写问卷、体检和精液分析,计算精液参数正常参考值范围,探讨TTP和其他生物学特征对精液质量的影响.结果：1152位年龄范围18-48岁的男性接受精液检查,精液体积(ml)、精子浓度(106/ml)、总精子数(106)、活动率PR+NP(％)、前向运动精子PR(％)、正常形态精子百分数(％)、精子存活率(％)、前向运动精子总数(106)第5个百分位数值分别为1.5、17、39、41、33、5、53和17.年龄≥35岁组对象前向运动精子总数较少(p＜0.01);高体质量指数(BMI＞25.0)组对象正常形态精子百分率较低(p＜0.01),低体质量指数(BMI＜18.5)组精子浓度、总精子数、正常形态精子百分率和前向运动精子总数较低(p＜0.05);吸烟降低精液体积(p＜0.01);饮酒超过10g/周减少精液体积、总精子数、正常形态精子百分率和前向运动精子总数(p＜0.05);TTP与对象精子浓度、总精子数和前向运动精子总数呈负相关(p＜0.01);对象禁欲时间5-7天组的精子浓度、总精子数和前向运动精子总数高于其他组(p＜0.01).结论：正常生育力男性精液参数第5个百分位数值与世界卫生组织的正常参考值范围基本相同;TTP数值与精液质量呈负相关.年龄、体质量指数和生活方式会对部分精液参数产生影响.

关键词：正常生育力男性精液检测质量标准妊娠时间生物学特征

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精子差异蛋白质谱分析父源性受精关键蛋白的研究

精子差异蛋白质谱分析父源性受精关键蛋白的研究

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中华医学会生殖医学分会人类精子库管理学组第三届年会全国男性生殖医学和精子库管理新进展第四次研讨会

作者：朱勇吴亦波刘锋郭雪江郭曰帅闫锋刘勇曹小蓉胡洪亮沙家豪南京医科大学国家生殖医学重点实验室周作民李铮南京医科大学国家生殖医学重点实验室上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科上海市男科学研究所精子发育与遗传学实验室上海市人类精子库

目的:通常采用两种方法来筛选功能相关的分子,即高通量的mRNA差异表达芯片和蛋白质谱分析技术。前者通过对mRNA转录水平的分析,可以来研究与生育力密切相关的转录水平上调或下调。而蛋白质谱技术,是鉴定蛋白或肽段分子入手,选择与生育... 详细信息

目的:通常采用两种方法来筛选功能相关的分子,即高通量的mRNA差异表达芯片和蛋白质谱分析技术。前者通过对mRNA转录水平的分析,可以来研究与生育力密切相关的转录水平上调或下调。而蛋白质谱技术,是鉴定蛋白或肽段分子入手,选择与生育力相关的精子蛋白,进行定性或定量的分析,最后筛选潜在的蛋白分子标志物。本研究利用液相色谱结合定量质谱技术,鉴定高生育力和低生育力者精子的差异蛋白谱,寻找临床预测男性生育力的关键蛋白分子。资料与方法:分别选取供精IVF和AID供精反馈后,高生育力(辅助生殖周期<8个,临床妊娠=5)和低生育力(辅助生殖周期>10个,无临床妊娠)捐精者各3例。捐精者均来自上海交通大学医学院附属仁济医院、上海市人类精子库。精液参数与冷冻复苏率完全符合中华人民共和国卫生部人类精子库基本标准和技术规范,冷冻前精液浓度>10×10～6,存活率大于60%,前向运动比率大于60%,冷冻复苏率大于60%。用同量异位素分别标记后,采用液相色谱分离蛋白质,结合质谱进行肽段鉴定,并经Western Blot验证,统计分析关键差异蛋白以及生物信息学分析。结果:6个质谱分析的样本(3:3=高生育力:低生育力)分别鉴定的蛋白总数为:2,057、2,067、2,063、2,061、2,062、2,060,去除冗余蛋白后,共鉴定出2,045种蛋白质。其中两组差异显著性蛋白21个(倍数变化>1.2倍,t检验的p-value<0.05),其中低生育力者高表达蛋白有4个(B2M、PPP5C、GSN、PFKM),其它皆为高生育力者高表达蛋白。共鉴定差异蛋白21个,4个蛋白在低生育力者高表达,其它皆在高生育力者高表达。这些差异蛋白主要参与细胞的有丝分裂、凋亡、精子发生以及受精和胚胎发育等重要细胞活动。结论:同位素标记的相对定量质谱技术是近年来新的技术革新,它通过用质量较小的同位素(113-121)作为报告离子,从而使蛋白样品中的小分子和低丰度蛋白更好的分辨和鉴定。本研究采用的差异蛋白组研究方法 ,比较生育力高低的精子蛋白组,发现父源性关键受精蛋白,为研究受精和胚胎发育机制以及临床开发预测男性生育力的蛋白标志物提供理论基础。

关键词：定量质谱技术蛋白组受精胚胎发育

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