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12 篇 中国医学科学院北...
12 篇 中国医科大学附属...
10 篇 中国医学科学院中...
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9 篇 中国医学科学院北...
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5 篇 中南大学湘雅医院
5 篇 中国医学科学院
5 篇 中国疾病预防控制...
5 篇 河南省人民医院
5 篇 四川大学华西医院
5 篇 重庆医科大学附属...
5 篇 卫生部北京医院

作者

32 篇 李永哲
23 篇 尚红
22 篇 胡朝军
19 篇 佟大伟
19 篇 张蜀澜
13 篇 包书萌
12 篇 张洋
12 篇 韩晓旭
11 篇 冯雪
11 篇 徐俊杰
10 篇 姜拥军
9 篇 齐军
8 篇 张子宁
8 篇 楚振兴
8 篇 刘静
7 篇 倪安平
6 篇 崔巍
5 篇 程歆琦
5 篇 代敏
5 篇 丁海波

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快速C反应蛋白(Q—CRP)的检测在配合血常规检查及血象细胞学分析在儿科疾病中的应用

快速C反应蛋白(Q—CRP)的检测在配合血常规检查及血象细胞学分析...

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：倪志琨天津市儿童医院检验科

目的通过对100例发热伴咳嗽、喉痛的患儿作血常规检查、白细胞人工镜检分类及快速C反应蛋白(Q—CRP)的检测证实O—CRP的检测在配合血常规检查及白细胞人工镜检分类在儿科疾病中的应用。方法:采用NycoCard READERⅡ金标定量仪和MEK—6318... 详细信息

目的通过对100例发热伴咳嗽、喉痛的患儿作血常规检查、白细胞人工镜检分类及快速C反应蛋白(Q—CRP)的检测证实O—CRP的检测在配合血常规检查及白细胞人工镜检分类在儿科疾病中的应用。方法:采用NycoCard READERⅡ金标定量仪和MEK—6318k血细胞计数仪检测同一份标本的O—CRP、血常规并同时进行白细胞的人工镜检分类。结果:发现白细胞显著升高而O—CRP并不一定升高,而白细胞正常的O—CRP并不以定正常比较上述标本我们发现白细胞升高而O—CRP正常血标本的血象细胞学分析中白细胞镜检分类结果淋巴细胞升高或显著升高并伴有异淋的升高。而部分白细胞正常但O—CRP升高或显著升高,对这种标本进行白细胞分类中性粒细胞的比例上高或显著升高。讨论:O—CRP是急性相反应物质,在儿科应用比较广泛。长期以来对感染性疾病的早期诊断、抗生素疗效的观察及感染的诊断及鉴别诊断同时了解患者病情有较大价值。CRP的对急性感染的诊断比白细胞灵敏度高,在急性感染时它的升高在于白细胞的升高。因此正确区分感染类型只从血常规检查是远远不够的.尤其是对一些白细胞计数较低的儿童轻度的升高比未超过白细胞的正常上限.此时的CRP的检测结果就更与有价值。另外对一些病毒感染引起白细胞升高或显著升高的患儿(如传染性单核细胞增多症)来说同样具有很大的价值。因为传单在儿童病中经常见到.某些临床症状和体征与肺炎相似且都伴有白细胞的升高或显著升高.而传单的患儿的CRP结果正常,并伴有淋巴细胞的升高同时可以见到异常淋巴细胞。综上所述,正确区分感染的类型在作血常规检查的同时还需要配合CRP和人工镜检白细胞分类.对鉴别感染的类型对患者的救治具有重要意义。

关键词： C反应蛋白白细胞分类

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HPV在鼻喉几种常见病中表达的研究

HPV在鼻喉几种常见病中表达的研究

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：芦红霞山东大学齐鲁医院检验科

目的人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是一种亲上皮的DNA病毒,感染后可促使上皮增生,最终可导致肿瘤形成,HPV感染与宫颈癌的关系的报道较多,与鼻喉疾病关系的报道较少。本实验是评价鼻喉几种常见病(鳞状上皮及腺上皮发生的癌... 详细信息

目的人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是一种亲上皮的DNA病毒,感染后可促使上皮增生,最终可导致肿瘤形成,HPV感染与宫颈癌的关系的报道较多,与鼻喉疾病关系的报道较少。本实验是评价鼻喉几种常见病(鳞状上皮及腺上皮发生的癌、乳头状瘤、息肉,炎性病变)中与人乳头状瘤病毒感染关系。方法:本实验应用免疫组化法,采用HPV6,11,16,18,31,33,42,51,52,56,58混合抗体,对鼻喉几种常见疾病同时进行测定。以检测这组抗体在这些组织中的表达。这11种HPV混合抗体,基本包含了鼻喉黏膜易感的HPV类,故可减少多次检测及遗漏。目前,检测HPV的方法有免疫组化、原位杂交、PCR、原位PCR等方法。免疫组化具有其独特的优点,如直观性,能确定病毒在组织中的分布及感染强度和病变之间的关系等,且操作简单。结果:HPV表达率鳞癌41.38%,腺癌20.00%,鳞状上皮乳头状瘤47.62%,腺上皮乳头状瘤20.00%,鳞状上皮息肉7.14%,腺上皮息肉3.57%,过敏性鼻炎和鼻窦炎中无表达。相关分析显示:鳞癌和腺癌、鳞状上皮乳头状瘤和腺上皮乳头状瘤、鳞状上皮息肉和腺上皮息肉之间HPV感染率无显著差别(P>0.05)。鳞状上皮癌+鳞状上皮乳头状瘤之和与腺上皮癌+腺上皮乳头状瘤之和比较,鳞癌+腺癌+鳞状上皮乳头状瘤+腺上皮乳头状瘤之和与鳞状上皮息肉+腺上皮息肉之和比较,2组HPV感染率都有显著差别(P<0.05)。在瘤性病变中,鳞状上皮HPV感染率明显高于腺上皮(P<0.05),瘤性病变的总感染率明显高于非瘤性病变(P<0.05)。检测结果中,所有瘤性病变与炎性病变比较,有显著差别。说明HPV感染与人喉鼻瘤性病变的发生、发展有密切的关系。由于采用的方法、感染部位、取材等原因,有关HPV感染率的报道也有差异。本检测中息肉的感染率比有关报道底,可能由于我们的息肉标本绝大多数是未增生的正常上皮包被的炎性水肿组织,上皮增生的及少,上皮增生多发生在乳头状瘤或癌变组织中。结论:鼻喉的肿瘤性病变的发生发展与HPV感染有密切的关系,HPV感染鳞状上皮的几率可能高于腺上皮。

关键词：鳞癌腺癌乳头状瘤息肉 HPV 免疫组化

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联合检测抗酿酒酵母细胞抗体和抗中性粒细胞抗体在炎症性肠病中的临床意义

联合检测抗酿酒酵母细胞抗体和抗中性粒细胞抗体在炎症性肠病中的...

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：张蜀澜李永哲佟大伟胡朝军何纯李冀李磊中国医学科学院北京协和医院检验科中国医学科学院北京协和医院消化内科北京卫生学校检验学科

目的联合检测炎症性肠病(IBD)患者血清中抗酿酒酵母细胞抗体(ASCA)和抗中性粒细胞胞浆抗体(pANCA)的水平,探讨它们在IBD诊断和鉴别诊断中的应用价值。方法采用酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法分别测定159例炎症性肠病(IBD,UC 97例,CD 62... 详细信息

目的联合检测炎症性肠病(IBD)患者血清中抗酿酒酵母细胞抗体(ASCA)和抗中性粒细胞胞浆抗体(pANCA)的水平,探讨它们在IBD诊断和鉴别诊断中的应用价值。方法采用酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法分别测定159例炎症性肠病(IBD,UC 97例,CD 62例1患者,167例主诉为腹痛、腹泻并除外IBD的患者及25名健康对照者血清中ASCA-IgG、ASCA-IgA和pANCA水平。结果ASCA-IgA/IgG在CD组、UC组、疾病对照组和正常对照组中的阳性率分别为43.5%、14.4%、29.3%和0,在CD组中的阳性率显著高于UC组、疾病对照组和正常对照组(p<0.001,p= 0.042,p<0.001);pANCA在以上各组中的阳性率分别为8.1%、56.7%、4.8%和0,且阳性率在UC组与CD组、疾病对照组和正常对照组中存在显著差异(p<0.001,p<0.001,p<0.001);ASCA+/ pANCA-组合诊断CD的敏感性、特异性、阳性预测值分别是40.3%.93.8%和80.6%;而ANCA+/ASCA-组合诊断UC的敏感性、特异性和阳性预测值分别是48.5%,98.4%和97.9%;ASCA阳性在CD病人中与发病年龄.受累部位以及是否合并狭窄与穿孔未发现相关性,但与是否采取手术治疗呈显著相关(p=0.03)。而pANCA阳性在UC病人中与病变范围及是否采取手术治疗均未发现关联。结论单独检测ASCA或ANCA不能有效的筛选IBD患者。但两个指标的联合应用有助于对UC和CD的鉴别诊断。同时检测IgA型和IgG型的ASCA可更有效的筛选CD病人。中国人群中ASCA阳性可能与手术治疗相关,但还未发现与发病年龄、病变累及的部位以及是否合狭窄和穿孔的相关性,而pANCA阳性对UC病人的病变范围及是否采取手术治疗均未发现相关性。

关键词：炎症性肠病抗酿酒酵母细胞抗体抗中性粒细胞胞浆抗体

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NK细胞增殖能力和杀伤功能实验的临床应用

NK细胞增殖能力和杀伤功能实验的临床应用

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：张展贾莉婷常彩虹郑州大学第三附属医院检验科

目的测定先兆子病孕妇外周血和脐血NK细胞增殖能力和杀伤功能,以探讨先兆子痫的发病机制。方法:①外周血及脐血NK细胞分离和计数:无菌采集受试者空腹外周静脉血2ml,并于分娩时采集新生儿脐静脉血2ml,均肝素抗凝,用淋巴细胞分层液(中国... 详细信息

目的测定先兆子病孕妇外周血和脐血NK细胞增殖能力和杀伤功能,以探讨先兆子痫的发病机制。方法:①外周血及脐血NK细胞分离和计数:无菌采集受试者空腹外周静脉血2ml,并于分娩时采集新生儿脐静脉血2ml,均肝素抗凝,用淋巴细胞分层液(中国医学科学院)分离单个核细胞,加至Percoll不连续密度梯度分层液(Pharmacia公司)表面,离心后收集42.5%和45%Percoll液层,再行离心、洗涤并计数。②NK细胞增殖活性测定(MTT法):将所获取的外周血NK细胞和对数期生长的NK-92细胞按1×104/孔接种于96孔板,在rhIL-2为100U/ml条件下培养,每一组设3个复孔,37℃5%CO2孵育22h,加入5mg/ml MTF (Sigma公司)10μl/每孔,继续培养4h,吸弃上清100μl/孔,再加入二甲基亚砜(天津化学试剂二厂)100μl/孔,10min后光镜下观察,待结晶状甲月替完全溶解后测OD570-630nm值。③NK细胞杀伤功能测定(51Cr释放法):收集处于对数生长期的K562细胞,调整浓度为2.0×106/ml(活细胞数>95%),1.0×106个细胞加Na251CrO4(Amersham公司)100μCi,置37℃水浴,标记90min,每15min摇动一次;继而洗涤3次,调整细胞浓度为1.0×105/ml,取100μ/孔加入96孔板中作为靶细胞。效应细胞为所制备的NK细胞和对数期生长的NK-92细胞,按不同效/靶比(5:1、2.5:1及1:1)加入含已标记51Cr的K562(100μl/孔),置37℃5%CO2孵育4 h,收集上清100μl/孔,用r-计数仪检测51Cr释放的cpm值,杀伤率计算公式为:特异性杀伤率(%)=×100%。结果:①先兆子痫患者母血及脐血NK细胞数均显著高于正常孕妇(P<0.05);②先兆子痫患者母血及脐血NK细胞增殖能力高于正常孕妇(P<0.05);③先兆子痫患者母血及脐血NK细胞杀伤功能高于正常孕妇(P<0.05)。结论:NK细胞的数量及功能变化在先兆子病的发病中起重要作用。

关键词：先兆子痫 NK细胞增殖能力杀伤功能

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血清脂肪酶水平与慢性肾病临床分型和CKD分级相关性研究

血清脂肪酶水平与慢性肾病临床分型和CKD分级相关性研究

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：高静田亚平王玲解放军总医院生化科

目的探讨脂肪酶(Lipa)在慢性肾脏疾病患者血清中表达的变化和临床意义。方法建立患者人选标准(1.原发性慢性肾脏病;2.排除肿瘤、病毒性肝炎、系统性红斑狼疮、急/慢性胰腺炎;3.年龄小于70;4.治疗前),收集符合入选标准的血清样本139例,... 详细信息

目的探讨脂肪酶(Lipa)在慢性肾脏疾病患者血清中表达的变化和临床意义。方法建立患者人选标准(1.原发性慢性肾脏病;2.排除肿瘤、病毒性肝炎、系统性红斑狼疮、急/慢性胰腺炎;3.年龄小于70;4.治疗前),收集符合入选标准的血清样本139例,同时收集健康人当天血清样本共60例,用罗氏COBAS全自动分析仪测定所有标本的血清Lipa水平,并计算肾小球滤过率(GFR)。根据临床诊断分为肾病综合征组(NS)、慢性肾炎综合征组(CNS);根据慢性肾脏病(CKD)分级分为CKD1组、CKD2-3组、CKD4-5组及透析组。均以60例健康人结果作为健康对照组,统计所获得的资料。结果***组、CNS组和健康组的血清Lioa水平分别为156.32U/L、162.83U/L、78.55U/L,统计结果表明NS组和健康组之间,CNS组和健康组之间有显著差异,但NS组与CNS组之间无统计学差异。2.健康组、CKD1组、CKD2-3组、CKD4-5组、透析组的血清Lipa水平分别78.54 U/L、138.55 U/L、160.31 U/L、350.09 U/L、325.78 U/L,统计结果为CKD1与健康组、CKD2-3组无统计学差异,与其它CKD组均有统计学差异;CKD2-3与健康组、CKD4-5、透析组均有统计学差异;CKD5组与透析组没有统计学差异。3.统计Lioa与GFR的相关性,相关系数r=-0.247,P<0.05,两者具有相关性。结论当慢性肾脏病患者有明显的临床表现时(肾病综合征或慢性肾炎综合征),疾病本身可引起血清脂肪酶水平升高;同时血清脂肪酶水平与慢性肾病患者的肾小球滤过率成负相关,提示肾脏损伤导致机体代谢废物的蓄积和前炎性反应可能是导致脂肪酶升高的主要因素之一。

关键词： CKD 临床分型慢性肾病相关性研究

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DNA提取后存放24小时对荧光定量PCR检测HBV-DNA的影响

DNA提取后存放24小时对荧光定量PCR检测HBV-DNA的影响

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：王红梅郑州大学第一附属医院检验科

目的HBV-DNA的定量检测对临床诊断乙型肝炎,评价抗病毒药物疗效,研究乙型肝炎自然病史具有重要意义。目前国内较多的医院采用荧光定量的方法对血清中的HBV-DNA进行定量检测。而在HBV-DNA检测过程中因多种因素的影响.如:工作过程中可能... 详细信息

目的HBV-DNA的定量检测对临床诊断乙型肝炎,评价抗病毒药物疗效,研究乙型肝炎自然病史具有重要意义。目前国内较多的医院采用荧光定量的方法对血清中的HBV-DNA进行定量检测。而在HBV-DNA检测过程中因多种因素的影响.如:工作过程中可能偶有突然停电等意外因素或因标本量较少需定期成批检测HBV-DNA.需要HBV-DNA提取后存放一定时间再进行检测。本文旨在评价标本DNA提取后存放24小时对荧光定量PCR检测HBV-DNA的影响。方法:收集我院首诊和慢性肝炎血清标本15例。将此15例标本各取部分血清进行DNA提取后4℃保存24小时为实验组:此15例标本剩余血清4℃保存于次日实验当天进行DNA提取为对照组.采用实时荧光定量PCR技术同时上机进行HBV-DNA的检测。结果:对对照组与实验组检测结果进行配对t检验.DNA当天提取组结果为4.07±1.68。DNA提取后存放24小时组结果为4.13±1.75。t= 0.692,P=0.263。两组定量检测HBV DNA结果无显著性差别。结论:由于国内较多的医院采用荧光定量的方法定量检测血清中的HBV-DNA。而在实际工作中.也有一些客观存在的因素可能影响荧光定量PCR检测血清中HBV-DNA含量.本文在评价标本DNA提取后存放24小时对荧光定量PCR检测HBV- DNA的影响过程中发现标本DNA提取后存放24小时对荧光定量PCR检测HBV-DNA的定量结果无影响。在我们的实际工作中.若偶有突然停电等意外因素或因标本量较少需定期成批检测HBV-DNA时.可将HBV-DNA提取后存放24小时再进行检测,而定量结果不受影响。这样在应用荧光定量PCR这一先进的检测方法检测HBV-DNA时。可尽量避免某些人为因素及客观因素的影响,使得此技术能够更完善的发挥其各项优势.为患者提供更准确、可靠的诊疗依据。

关键词： HBV-DNA 定量检测 PCR DNA

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检测HBV多聚酶YMDD基因变异的结果浅析

检测HBV多聚酶YMDD基因变异的结果浅析

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：雷敏岳美华赵明哈尔滨市第五医院检验科哈尔滨医科大学附属第一医院

乙型肝炎病毒(HBV)是一种DNA病毒,近几年应用拉米夫定针对HBV进行抗病毒治疗,其作用对HBV抑制效果显著。但在治疗过程中随服药时间的延长,易出现HBV基因组P区中高度保守的YMDD功能区发生变异,而产生对拉米夫定的耐药作用。收集106例慢... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)是一种DNA病毒,近几年应用拉米夫定针对HBV进行抗病毒治疗,其作用对HBV抑制效果显著。但在治疗过程中随服药时间的延长,易出现HBV基因组P区中高度保守的YMDD功能区发生变异,而产生对拉米夫定的耐药作用。收集106例慢性乙肝患者标本,进行临床检测报告如下:材料与方法材料:一、1.研究对象:106例临床住院患者,源于2006年1月～2007年1月。2.试剂:乙型肝炎病毒YMDD突变性核酸扩增荧光检测试剂由深圳市匹基生物工程股份有限公司提供。3.仪器:Roche Light Cycler荧光PCR扩增仪。二、方法:以Roche Light Cycler Tm杂交双探针技术为基础的核酸扩增(PCR)荧光检测。循环条件:37℃3min;92℃1min预变性;93℃2 sec,42℃20sec,72℃20sec,40Cycles;93℃0 sec,37℃3min,70℃0sec退火;40℃0sec延伸。结果:106例慢性乙型肝炎患者YMDD变异检测结果中,YMDD65例占61.3%,其中男性47例,占44.3%,女性18例占17%;发生变异的41例,占38.7%,男性37例占34.9%,女性4例,占3.8%。YIDD25例占23.6%,男性21占19.8%。女性4例占3.8%;YVDD11例占10.4%.男性;YMDD+YVDD 4例占3.8%,男性;YMDD+ YIDD1例,占0.9%男性。讨论:1.本研究使用的是体外核酸扩增(PCR)方法结合杂交探针荧光检测技术,确定其基因型为野生型(YMDD)或突变型(YVDD\YIDD)。野生型YMDD的Tm值为50.0+ /-1.5℃:突变型YIDD的Tm值为42.5+/-1.5℃:突变型YVDD的Tm值为59.0+/-1.5℃。当同时存在两个检测峰值时为混合型,或存在一个峰值,但该峰值在两个标准温度之间亦为混合型。本试验的核酸提取方法操作简便,实验所需时间短,试验结果与临床表现及其他实验室相关指标相吻合,易于临床作为常规检测项目开展。2.多篇报道认为,YMDD变异的发生与基线高HBV病毒血症,HBeAg阳性、男性和高体重指数等有关。所以YMDD可为应用拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中病毒发生变异及耐药性的产生提供分子生物学依据以及指导临床科学用药。

关键词： YMDD基因变异核酸检测乙型肝炎病毒

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原发性胆汁性肝硬化患者共刺激分子B7-H4的检测及临床意义分析

原发性胆汁性肝硬化患者共刺激分子B7-H4的检测及临床意义分析

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：赵臣李永哲夏薇胡朝军刘定华佟大伟张蜀澜中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(primary billiarv ***)患者共刺激因子BT-H4的表达及其与疾病发病机制的关系。方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、荧光实时定量PCR法(real-time PCR)及流式细胞术(FACs)检测65名PBC患者外周血单个核细胞B7-... 详细信息

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(primary billiarv ***)患者共刺激因子BT-H4的表达及其与疾病发病机制的关系。方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、荧光实时定量PCR法(real-time PCR)及流式细胞术(FACs)检测65名PBC患者外周血单个核细胞B7-H4 mRNA表达水平、血清IL-2水平、CD4+、CD8+T细胞亚群及T细胞表面B7-H4表达百分率.同时监测抗线粒体抗体(AMA)及临床各项生化指标的关系。结果:1、PBC患者外周血单个核细胞BT-H4 mRNA水平及T细胞表面B7- H4表达百分率显著低于其它肝硬化组及健康对照组(P<0.01):2、活化72h后各实验组及对照组IL-2含量及CD4+、CD8+、CD4+ CD8+T淋巴细胞表达水平均低于活化前,以其他肝硬化组与健康对照组降低显著,(P<0.05);PBC组IL-2含量及CD4+、CD4+CD8+ T淋巴细胞表达水平高于其他肝硬化组与健康对照组。(P<0.01);3、AMA-M2阳性患者血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)及γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平升高,其中ALP及GGT升高显著,(P<0.05):AMA-M2阳性患者与阴性患者T细胞表面BT-H4表达百分率无显著差异P>0.05)。结论:本研究表明PBC患者体内B7-H4表达水平降低:体外培养发现PBC患者CD4+、CD4+CD8+T淋巴细胞表达水平、IL-2分泌量高于对照组.说明共刺激因子B7-H4对PBC患者体内T细胞活化增殖及细胞因子分泌的抑制作用减弱,此结果为研究PBC的发生发展和阐明PBC的发病机制提供了重要的理论和实验基础。此外,B7- H4只是PBC疾病的诊断指标,不反应病情轻重及进展程度。

关键词：原发性胆汁性肝硬化外周血单个核细胞共刺激因子 B7-H4 抗线粒体抗体 CD4+T淋巴细胞 CD8+T淋巴细胞

来源：评论

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病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片的研制与临床应用性研究

病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片的研制与临床应用性研究

引用

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：孙朝晖王蜀燕王从容石玉玲李林海马文丽广州军区广州总医院检验科广州市南方医院检验科南方医科大学基因工程研究所

目的制备病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片,并进行系列优化及临床应用性研究。方法对于基因组较小的HBV、HDV,利用普通PCR技术制备探针,采用Primer Premier 5.0软件分别针对HBV、HDV保守区域设计特异引物,得到各10条、4条探针;利用限制性显示... 详细信息

目的制备病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片,并进行系列优化及临床应用性研究。方法对于基因组较小的HBV、HDV,利用普通PCR技术制备探针,采用Primer Premier 5.0软件分别针对HBV、HDV保守区域设计特异引物,得到各10条、4条探针;利用限制性显示-PCR(Restriction Display,RD-PCR)技术制备基因组较大且复杂的HCV芯片探针。为了便于摸索实验条件和更好进行探针优化,我们先后制备了3种芯片,包括HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片及HBV、HDV、HCV联合诊断芯片。结果杂交结果显示HBV、HDV诊断芯片、HCV优化诊断芯片效果较为满意。从以上芯片中选取探针制备了HBV、HDV、HCV联合诊断芯片,对芯片的检测质量进行了初步的评估:线性在104～1011copies/mL之间,芯片检测法显示了较好的线性(r分别为0.9902、0.9921、0.9819,P<0.01);特异性:所制备的芯片检测YFV、JEV、DV等其他病毒样品结果均显示为阴性,显示有着较好的特异性;重复性:HBV、HDV、HCV的检测重复性分别为:批内精密度CV值为7.1%、7.2%、6.6%,批间精密度CV值为7.9%、8.2%、7.6%;准确性:将共计HBV、HDV 14条PCR片段,HCV 24条限制性片段,部分临床阳性血清(PCR产物)全部进行序列测定,与GenBank进行BLAST比较,结果表明克隆基因均属于相应基因,与理论一致。为了适应临床诊断的要求,对实验条件进行了一些优化,包括减少杂交时间从常规的过夜杂交(16h)到2h,取消预杂交步骤,标记的样品不经过纯化,利用商用试剂盒对血清核酸进行快速高效提取,将杂交时间从42℃提高到52℃等措施。通过这些改进,可以使病毒检测在送检标本当天出报告,敏感性也大大提高。在实验室对芯片进行初步评估后,对临床血清标本进行了小规模批量检测实验,用芯片法和实时定量(Real time)PCR法分别对98例、42例和5例HBV、HCV、HDV阳性血清、130例阴性血清进行方法学对比检测,临床血清样品芯片法检测与参考方法有良好的相关性(HDV由于例数太少,未列入进行统计),r分别为0.9854和0.9582,检测HBV、HCV、HDV的敏感性、特异性分别为85.7%、76.2%、80.0%和96.7%、95.0%、100%。结论我们研制的联合诊断芯片敏感性.特异性均较佳.具有较大的应用前景。

关键词：肝炎病毒/乙型/丙型/丁型 cDNA 探针,基因芯片杂交

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HIV-1包膜糖蛋白gp120 C3～C4区中和抗体保守表位氨基酸变异研究

HIV-1包膜糖蛋白gp120 C3～C4区中和抗体保守表位氨基酸变异研究

引用

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：王倩尚红韩晓旭代娣姜拥军王亚男张岩中国医科大学附属第一医院卫生部艾滋病免疫学重点实验室

目的研究HIV-1包膜糖蛋白gp120 C3～C4区中和抗体保守表位氨基酸变异特征,探讨中和抗体表位变异与疾病进展关系,为开展中和抗体免疫治疗及疫苗设计奠定理论基础。方法:RT-PCR及nest-PCR扩增无症状HIV感染者、AIDS患者及疾病长期不进展者... 详细信息

目的研究HIV-1包膜糖蛋白gp120 C3～C4区中和抗体保守表位氨基酸变异特征,探讨中和抗体表位变异与疾病进展关系,为开展中和抗体免疫治疗及疫苗设计奠定理论基础。方法:RT-PCR及nest-PCR扩增无症状HIV感染者、AIDS患者及疾病长期不进展者HIV-1 gp 120 env C3～C4区基因,双脱氧终止法进行核酸序列测定,翻译为氨基酸序列,与HIV-1 Sequence Database参考毒株比对识别中和抗体保守表位氨基酸的变异。结果:HIV gp120 C3～C4区,无症状HIV感染者/AIDS患者CD4结合位点(CD4BS)、CD4诱导(CD4i)、2G12中和抗体保守表位氨基酸均存在变异,长期不进展者2G12中和抗体表位氨基酸存在变异,三组病例表位突变率差异未达显著性(P>0.05);CD4BS、CD4i、2G12变异表位构成比分别为15.8%、31.6%、52.6%,2G12表位变异高于CD4BS和CD4i表位,差异具有显著性(P<0.05);CD4BS表位变异见于K421R,CD4i表位变异见于R419S/K,K421R,均为单位点氨基酸变异,2G12表位变异见于S334N,N332E/O,N386D,N392S/T,N448K/I,单、双位点氨基酸变异各半。结论:HIV-1包膜糖蛋白gp120 C3～C4区,无症状HIV感染者/AIDS患者CD4BS、CD4i、2G12中和抗体保守表位氨基酸均存在变异,长期不进展者表位氨基酸相对稳定,目前发现2G12表位存在变异。中和抗体表位中,2G12表位变异较CD4BS和CD4i表位多见不同类型中和抗体保守表位氨基酸位点变异程度存在差异。

关键词： HIV 中和抗体表位突变

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