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5 篇 中国疾病预防控制...
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作者

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慢性前列腺炎患者前列腺液细菌16S rRNA基因的检测

慢性前列腺炎患者前列腺液细菌16S rRNA基因的检测

引用

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：王敏姜叶灵李先平中南大学湘雅二医院检验科

细菌感染是引起慢性前列腺炎的重要因素之一.但是从传统的尿四杯培养法的结果来看.其阳性率不高.仅5%- 10%。有关文献报道.到目前为止.能够获得纯培养的微生物比例只有1%,许多细菌还不能被常规的技术所检测。近年来随着基因诊断技术的发... 详细信息

细菌感染是引起慢性前列腺炎的重要因素之一.但是从传统的尿四杯培养法的结果来看.其阳性率不高.仅5%- 10%。有关文献报道.到目前为止.能够获得纯培养的微生物比例只有1%,许多细菌还不能被常规的技术所检测。近年来随着基因诊断技术的发展.其在临床上应用日趋广泛.聚合酶链反应（PCR）技术诊断慢性前列腺炎已成为研究热点。由于16S rRNA基因只在细菌中存在高度保守性,而在病毒、真菌、支原体、衣原体以及人体细胞中都不存在高度保守的16S rDNA序列。因此.PCR法检测细菌16S rRNA基因具有特异性强的特点.而且与传统的培养法比较最大的优势是检测结果不受标本中存在的各种抗菌药物的干扰。可动态观察患者体内或病灶内是否存在病菌。本研究中我们收集102份慢性前列腺病人的前列腺液标本.对其进行细菌培养同时用PCR法检测其16S rRNA基因.将PCR法与细菌培养法结果进行比较.以探讨PCR方法诊断慢性前列腺炎细菌学病因的价值。结果发现102份前列腺液标本中.细菌培养法18例阳性。84例阴性。阳性率为17.65%;PCR法71例阳性,31例阴性。阳性率为69.6%。本次研究还将细菌培养结果与PCR法所检测的结果进行x检验.显示两者间的差异具有统计学意义。表明PCR法检测阳性率高于细菌培养法。细菌培养法与PCR法检测结果比较.其差异有显著性（p<0.05）。测序结果显示DNA序列与GenBank公布的16S rRNA基因序列具有很高的同源性。综上.我们认为PCR法检测前列腺液中细菌16S rRNA基因对慢性前列腺炎的临床诊断具有重要意义.它不但可以提高诊断速度。而且还可以提高诊断的准确性,能更好地为临床医生提供诊断信息.降低漏诊率。PCR法与细菌培养法阳性率间的差异具有统计学意义.进一步说明细菌培养法检测慢性前列腺炎具有一定局限性.将PCR技术用于临床能有助于患者得到及时、有效地治疗。

关键词：慢性前列腺炎前列腺液

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慢性肾脏病患者血清CA12-5和CA19-9升高的相关因素分析

慢性肾脏病患者血清CA12-5和CA19-9升高的相关因素分析

引用

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：高静田亚平董振南解放军总医院生化科

目的探讨CA12-5和CA19-9在慢性肾脏疾病患者血清中表达的变化和临床意义。方法回顾性总结我院2007年1月至2008年2月住院肾脏病患者的649例患者临床资料,建立入选标准(排除肿瘤和病毒性肝炎,采用电化学发光法检测患者血清CA12-5和CA19-9... 详细信息

目的探讨CA12-5和CA19-9在慢性肾脏疾病患者血清中表达的变化和临床意义。方法回顾性总结我院2007年1月至2008年2月住院肾脏病患者的649例患者临床资料,建立入选标准(排除肿瘤和病毒性肝炎,采用电化学发光法检测患者血清CA12-5和CA19-9水平)后入选348例。按照血清CA12-5或CA19-9水平分为阳性组和阴性组,采用单因素分析两组患者的临床差异,寻找与血清CA12-5和CA19-9水平相关的因素。采用多变量统计分析与CA12-5或CA19-9升高的独立因素。结果1.单因素分析表明血清CA12-5、CA19-9阴性组和阳性组的肾病综合征(NS)、肾炎综合征(CNS)、膜性肾病(MN)、IgA肾病(IAgN)、性别、是否合并浆膜腔积液的发生率具有显著的统计学差异;***回归分析CA12-5/CA19-9阳性率与NS、MN、女性及合并浆膜腔积液呈独立正相关,与CNS、IgAN、男性、无浆膜腔积液呈独立负相关。3.根据有无合并浆膜腔积液分组,CA12-5的检出率分别为65.52%和9.70%;平均值分别为210.33±296.2和18.23±17.56;CA19-9的检出率为21.42%和4.47%,平均值分别为22.68±22.31和15.61±14.86,卡方检验表明两组CA12-5和CA19-9的阳性检出率有显著差异(P<0.01)。在合并胸腹水的患者中,抗炎治疗后和肾功能缓解后,CA12-5和CA19-9水平下降。结论糖链蛋白CA12-5和CA19-9在肾病患者中升高的意义与肿瘤相关性小,而和合并浆膜腔积液以及易产生浆膜腔积液的因素(NS,MN)相关性大,同时也与女性有一定的相关。CA12-5和CA19-9在肾病患者中升高很有可能预示患者合并肺部感染或其它部位感染,因此在治疗时应先以抗炎为主,并且监测CA12-5和CA19-9趋势可以用来观察抗炎效果。

关键词：肾脏病患者肾病患者 CA19-9 CA12-5 浆膜腔积液相关因素分析

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电化学发光法检测血清糖类抗原Ca19-9对肝病的诊断价值

电化学发光法检测血清糖类抗原Ca19-9对肝病的诊断价值

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：张绍武宁洁中国医科大学附属第四医院检验科

目的观察肝病患者血清糖类抗原Ca19-9含量变化并探讨电化学发光法检测血清糖类抗原Ca19-9的临床价值。方法:50例正常人和87例肝病患者(其中15例肝癌,76例肝硬化。24例慢性肝炎,12例急性肝炎)用电化学发光法检测检测其血清糖类抗原Ca19-... 详细信息

目的观察肝病患者血清糖类抗原Ca19-9含量变化并探讨电化学发光法检测血清糖类抗原Ca19-9的临床价值。方法:50例正常人和87例肝病患者(其中15例肝癌,76例肝硬化。24例慢性肝炎,12例急性肝炎)用电化学发光法检测检测其血清糖类抗原Ca19-9含量,将所得值进行t检验。结果:正常人血清Ca19-9值为(20.4±7.5U/ml),急性肝炎组为(22.4±9.1)U/ml,慢性肝炎为(42.1±16.4)U/ml,肝硬化组为(90.7±32.1)U/ml,肝癌组为(162.9±92.2)U/ml。肝癌组血清Ca19-9值极显著高于肝硬化组、慢性肝炎组、急性肝炎组及健康对照组(P<0.001),肝硬化组血清Ca19-9值显著高于慢性肝炎组、急性肝炎组及健康对照组(P<0.01).慢性肝炎组轻度高于急性肝炎组及健康对照组(P<0.05),急性肝炎组与健康对照组无明显差异(P>0.05)。肝病患者血清中Ca19-9含量升高的机制,可能是由于患者肝细胞变性坏死、肝组织细胞破坏.使有核细胞内的肿瘤标记物释放人血,或因肝细胞基因突变。使抗原表达异常有关。电化学发光分析是20世纪90年代初发展起来的一种高灵敏度检测方法,它将电化学方法和化学发光法巧妙结合。具有灵敏、快速、准确、操作简单和分析适应性广等特点.是目前最先进的标记免疫测定技术。结论:应用ELC法测定慢性肝炎、肝硬化及肝癌患者血清Ca19-9含量逐步升高.对肝硬化患者应动态观察Ca19-9。警惕肝癌的发生。同时配合CT、MRI、AFP等检查对肝癌早期诊断.因此ECL法测定Ca19-9对临床鉴别、诊断肝硬化、肝癌和早期治疗有重要意义。

关键词：肝癌肝硬化慢性肝炎急性肝炎糖类抗原Cal9-9 电化学发光法

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蛋白指纹图谱技术在临床疾病研究中的应用

蛋白指纹图谱技术在临床疾病研究中的应用

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：胡朝军李永哲中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科

人类基因组测序的完成为通过分析检测蛋白来诊断疾病提供了前所未有的机会。作为研究蛋白质全貌的蛋白质组学技术也因此得到了空前的发展。人们对采用蛋白质组学技术寻找新的生物标志物并用于临床标本的检测寄予了很高的期望。然而,发... 详细信息

人类基因组测序的完成为通过分析检测蛋白来诊断疾病提供了前所未有的机会。作为研究蛋白质全貌的蛋白质组学技术也因此得到了空前的发展。人们对采用蛋白质组学技术寻找新的生物标志物并用于临床标本的检测寄予了很高的期望。然而,发现、鉴定和确认一个与特定疾病状态相关的生物标志物是费时、费力和费钱的艰难过程。既往,蛋白生物标志物的发现主要是通过采用双向凝胶电泳比较差异蛋白来获得,虽然该技术对蛋白分离有很好的作用,但是由于其操作过程繁琐,而且敏感性并不十分理想,特别是在分析小分子量蛋白时更是显得力不从心,这些缺陷极大的限制了该技术用于临床标本的大规模筛查分析。因此,长久以来,基于双向凝胶电泳的蛋白质组学技术一直局限于基础研究,很难跨人临床研究及其应用。蛋白指纹图谱技术是随着蛋白质组学的发展而出现的一种崭新的研究蛋白质全貌的高通量技术平台,该技术是2002年诺贝尔化学奖在临床医学中的应用。蛋白指纹图谱技术的出现将蛋白质组学技术从基础研究领域迅速扩展到了临床应用。蛋白指纹图谱技术不同于传统的实验检测技术,该技术能很好地同时对标本中成千上万个蛋白进行全景检测分析,绘制成蛋白指纹图谱,并显示标本中各种蛋白的分子量,相对丰度。通过把疾病患者图谱与正常人图谱分析比较,就可能最终发现新的疾病相关特异性蛋白。蛋白指纹图谱技术能对临床常见的体液标本(血清、尿液、脑脊液、胸腹水、唾液、泪液、羊水以及关节液等)进行检测分析,而且具有快速、简便、准确和超敏感等特点,同时该技术的出现也提出了一种全新的多标志物谱或者个性化标志物的诊断模式。因此,经过短短几年的发展,蛋白指纹图谱技术已经成为检测分析疾病早期蛋白的变化,寻找疾病生物标志物的全新方法,在临床疾病的研究中得到了广泛的应用并展示出了极好的应用前景。本文将近年来蛋白指纹图谱技术在临床医学疾病研究中的应用及其存在的问题进行了综述。

关键词：指纹图谱技术临床标本检测分析临床疾病

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直接原位聚合酶链法检测胎盘组织中HBVcccDNA

直接原位聚合酶链法检测胎盘组织中HBVcccDNA

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：刘霞张乐海张乐玲陈京龙王世富魏红山山东大学齐鲁儿童医院儿科医学研究所北京地坛医院

目的建立HBV cccDNA在胎盘组织中定性及定位检测方法,了解慢性HBV感染者胎盘组织中HBV cccDNA的分布,进一步探讨乙型肝炎病毒母婴传播机制提供分子研究基础。方法根据HBV-cccDNA和松弛环状DNA(rcDNA)分子结构特点,以我国流行的HBV B亚型... 详细信息

目的建立HBV cccDNA在胎盘组织中定性及定位检测方法,了解慢性HBV感染者胎盘组织中HBV cccDNA的分布,进一步探讨乙型肝炎病毒母婴传播机制提供分子研究基础。方法根据HBV-cccDNA和松弛环状DNA(rcDNA)分子结构特点,以我国流行的HBV B亚型和C亚型相对保守区为模板,跨两个缺口区设计引物,特异扩增HBV cccDNA。采用直接原位聚合酶链反应(insitu PCR,isPCR)对50例福尔马林固定石蜡包埋的活动性乙型肝炎患者胎盘组织切片中检测HBV-cccDNA,设置活动性乙肝患者肝组织做阳性对照:健康产妇孕晚期胎盘组织和无引物、无TaqDNA聚合酶者。分别做阴性对照和背景对照。同时,以原位杂交法检测行方法学评价。标本处理:石蜡切片标本行二甲苯常规脱蜡至水,经0.2%HCL、1%Triton X-100、50μg/ml蛋白酶K透膜处理,梯度酒精脱水,加入PCR反应液进行原位PCR扩增,反应体系中用地高辛标记dNTP,增加检测灵敏度。而后切片经碱性磷酸酶-NBT/BCIP显色系统观察原位扩增信号。结果IsPCR提高HBV患者胎盘组织石蜡切片中HBV cccDNA阳性信号检测的敏感度,检出率为76%(38/50);而原位杂交法为28% (17/50)。原位扩增后经免疫组织化学显色发现38例HBV cccDNA阳性标本中均可见cccDNA阳性表达,该阳性信号在胎盘绒毛合体滋养层细胞、毛细血管内皮细胞、中轴组织、毛细血管内PBMC、羊膜上皮细胞的细胞核均有分布。HBV cccDNA在活动性乙肝患者胎盘中总阳性表达率为10%-15%,阳性细胞呈紫蓝色颗粒,以核型及核膜周围型为主,占总阳性者70%(27/38);胞浆中颗粒略细小,部分呈散沙状,占29%(11/38),胞核中明显高于胞浆(P<0.05)。与同一病例相同部位切片的HE染色和免疫组化比较,证实部分血管内皮细胞、PBMC中HBV cccDNA阳性表达。阳性对照的活动性乙肝患者肝组织标本中。HBV cccDNA阳性信号分布于肝细胞核中,呈圆形,数量多且信号强。阴性及背景对照组均为阴性。结论原位PCR法能够提高胎盘中HBV cccDNA感染的检出率。证实了活动性乙肝患者胎盘组织多部位存在HBV cccDNA,为深入研究HBV母婴传播提供重要的分子生物学研究手段。

关键词：肝炎病毒乙型肝炎乙型慢性共价闭合环状DNA 母婴传播原位聚合酶链反应

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三种常用HBV免疫学标志物检测结果差异比较与分析

三种常用HBV免疫学标志物检测结果差异比较与分析

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：赵秀英辛永梅陈俊梅孙桂珍首都医科大学附属北京佑安医院临床检验中心

目前临床用于乙肝病毒免疫学标志物(HBV-M)检测的方法、试剂均很多。多数临床医生只关注直观结果,对不同检测方法、不同试剂之间由于敏感性、特异性不同产生的差别不太了解。本研究选取部分在我中心进行HBV-M检测的血清标本进行了三种... 详细信息

目前临床用于乙肝病毒免疫学标志物(HBV-M)检测的方法、试剂均很多。多数临床医生只关注直观结果,对不同检测方法、不同试剂之间由于敏感性、特异性不同产生的差别不太了解。本研究选取部分在我中心进行HBV-M检测的血清标本进行了三种试剂、方法的比对。分析不同检验方法及试剂带来HBV-M结果的差异,旨在为临床工作提供一定的参考。我院门诊及住院患者48人,经雅培12000配套试剂检测为HBsAg阳性,HBeAg测定值COI<50,患者符合慢性乙型肝炎的诊断标准。依据雅培12000 HBsAg定量,将患者分为:A组,HBsAg≥250 IU/L,共26人:B组,HBsAg介于20-250 IU/L,共10人;C组,HBsAg≤20 IU/ L,共12人。HBV-M检测分别采用三种方法(1)ARCHITECT I2000型全自动免疫分析仪及配套试剂;(2)ROCHE E170型全自动免疫分析仪及配套试剂;(3)酶联免疫分析(ELISA)试剂(北京万泰)。结果显示:1.检测HBsAg与HBsAb,三种方法对A组26份标本和B组10份标本,符合率100%;对C组12份标本,两种进口发光方法结果全部吻合,但ELISA检测有4份标本为阴性。2.检测HBeAg与HBeAb,三种方法差异明显。国产ELISA试剂对HBeAg与HBeAb的检出率远远低于发光法,对A组26份标本全部漏检。两种发光法检测HBeAb也有差别,其中E170较I2000表现更敏感。3.三种方法检测HBcAb.48份血样HBcAb的符合率100%。4.三种方法检测HBV五项组合,仅3例完全一致,其中ELISA试剂表现为1,5阳或5阳者多,该试剂检测1,5的特异性与敏感性较好,如用于HBV感染初筛或流行病学调查,成本低,不失为一种方案。研究提示,在HBV-M的5个指标中如有低值情况,在使用不同的试剂,不同医院之间出现不同模式的机会升高。建议进行抗病毒药物治疗的患者尽量选择在同一家医院并使用同一种试剂作长期观察。如使用发光免疫分析技术,还可以提供血清学指标的定量或半定量,有助于拓宽临床用药价值的观察。

关键词： HBV HBeAg 三种方法 HBsAg HBeAb ELISA 标志物检测免疫学比较与分析

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应用多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术研究胃癌基因组DNA拷贝数的改变

应用多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术研究胃癌基因组DNA拷贝数的...

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：张岱吕丹王振宁罗阳徐岩张勇刘彦山孙森张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系中国医科大学医学基因组学研究室

目的多重连接依赖探针扩增(Multiplex Lization- Dependent Probe Amplification.简称MLPA)是一种高通量检测基因拷贝数量改变的新技术.可以在单一反应中检测45个核苷酸序列;和其他技术(如Array-CGH和FISH)相比.MLPA反应具有快速.经济.... 详细信息

目的多重连接依赖探针扩增(Multiplex Lization- Dependent Probe Amplification.简称MLPA)是一种高通量检测基因拷贝数量改变的新技术.可以在单一反应中检测45个核苷酸序列;和其他技术(如Array-CGH和FISH)相比.MLPA反应具有快速.经济.易于操作等优点.使其在临床检验中具有良好的应用前景。本研究旨在通过MLPA技术对中国胃癌病人样本进行全基因组范围的DNA拷贝数改变的分析.以进一步探明胃癌的分子遗传学机理和发现与病人临床表现高度相关的基因标记物.为胃癌的早期诊断和分子分型提供实用的临床检验技术基础。方法:将经显微切割获得的50例胃癌患者肿瘤样本(肿瘤细胞>90%)和4例正常胃组织通过TaKaRa基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。通过MLPA的预制探针和样本基因组DNA进行杂交.经过对相邻位点片断的连接后进行多重PCR反应.对扩增产物进行毛细管电泳.使用GeneMarker软件对经ABI 3730毛细管电泳仪所获得的荧光电泳图谱进行定量分析.获得样本的基因组DNA拷贝数相对值,并利用HCluster软件对结果进行聚类分析。使用SPSS软件对基因位点的拷贝数与胃癌组织的临床病理参数进行统计学分析。结果:HCluster聚类分析显示:50例胃癌组织和4例正常胃组织被成功的分成两大类.其中50例胃组织根据其基因组DNA拷贝数的改变幅度而分成高、中、低、极低四组。对GeneMarker所计算的DNA拷贝数相对值进行定义:小于0.75为拷贝数缺失.大于1.3为拷贝数扩增.介于0.75和1.3之间为拷贝数正常。根据以上定义.在全部检测的112个基因位点中.拷贝数扩增的频率大于30%的基因位点有28个.占全部位点的25%.拷贝数缺失的频率大于30%的基因位点有26个,占全部位点的23.2%。拷贝数扩增频率最高的基因位点的前3位分别为:PTK2(8q24.3),72%;MYC(8q24.21),70%;EHF(11p13),66%。拷贝数缺失频率最高的基因位点的前3位分别为:CDKN2A(9p21.3),90%;MIF(22q11.23),86%;THBD (20p11.21).78%。在淋巴结转移阴性和阳性的两组病例之间.Mann- Whitney U test结果表明VEGF(p=0.044)和MYC(p=0.018)的拷贝数相对值具有显著性差别。结论:本研究结果证明通过MLPA技术对胃癌标本进行基因拷贝数的检测切实可行.同时具有高通量、低成本、操作简单等优点,因此可以在临床检验中推广使用;同时我们的实验结果为胃癌的基因诊断分型提供了有力的科学依据。

关键词：胃癌组织基因位点多重连接依赖探针扩增拷贝数 DNA 基因组

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CK19-2G2与Cyfra21-1在肺癌中的异常表达及其相关性分析

CK19-2G2与Cyfra21-1在肺癌中的异常表达及其相关性分析

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：高佳齐军中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所检验科

目的探索新型细胞角蛋白19降解片段CK19-2G2在肺癌诊断中的临床意义,检测其与CK19另一降解片段Cyfra21-1的相关性。方法采用CK19-2G2及Cyfr21-1的检测试剂盒。分别检测84例肺癌患者、19例肺部炎症患者和59例健康体检者的血清标本,使用RO... 详细信息

目的探索新型细胞角蛋白19降解片段CK19-2G2在肺癌诊断中的临床意义,检测其与CK19另一降解片段Cyfra21-1的相关性。方法采用CK19-2G2及Cyfr21-1的检测试剂盒。分别检测84例肺癌患者、19例肺部炎症患者和59例健康体检者的血清标本,使用ROC曲线分析两种标志物的检测效能并确定CK19-2G2的临界值(即cutoff值),对两种标志物进行相关性分析。并做箱式图比较二者在不同类型肺癌中的表达情况。结果肺癌组血清中两种标志物的水平均明显高于肺部炎症组和对照组,有显著性差异(P<0.05)。以CK19-2G2和Cyfra21-1的血清浓度做ROC曲线,线下面积依次为0.826和0.764.当CK19- 2G2以0.9mU/mL为cutoff值时,检测肺癌的灵敏度和特异性可达到70.2%和91.0%。CK19-2G2和Cyfra21-1同样是CK19的降解片段,理论上二者的血清浓度应高度相关,但对二者进行非参数相关性分析发现二者仅为中度相关,相关系数为0.522。本文进一步比较CK19-2G2和Cyfra21-1在不同病理类型肺癌血清中的浓度发现,肺鳞癌组CK19-2G2和Cyfra21-1的血清浓度均明显高于其他各组,有显著性差异(P<0.05)。CK19-2G2和Cyfra21-1在肺鳞癌组和肺腺癌组的浓度比分别为5.2和1.5倍,显示出CK19-2G2在肺癌尤其是肺鳞癌中优于Cyfra21-1的诊断价值。结论CK19-2G2和Cyfra21-1均是良好的辅助诊断肺癌的肿瘤标志物;同为CK19的降解片段,二者的血清浓度呈中度正相关,原因有待进一步研究,可能与CK19的降解途径比较复杂有关。CK19-2G2在肺鳞癌中的检测性能优于Cyfra21-1,但由于目前病例有限,CK19-2G2在肺癌乃至其他上皮性来源肿瘤中的临床意义,尚需要进一步证实。

关键词： CK19-2G2 Cyfra21-1 肺癌

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伴有糖尿病和血脂异常脂肪肝患者的药物干预及疗效观察

伴有糖尿病和血脂异常脂肪肝患者的药物干预及疗效观察

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：李敏霞陶玲玲河南职工医学院安阳市人民医院

目的观察伴有2型糖尿病(T2DM)和血脂异常的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者服用解毒降脂片后血脂、肝功能、过氧化指标及肝脏B型超声等指标的变化,评价其调节血脂和保护肝功能的疗效。方法选取50位安阳市人民医院2004-2007年间门诊及住院... 详细信息

目的观察伴有2型糖尿病(T2DM)和血脂异常的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者服用解毒降脂片后血脂、肝功能、过氧化指标及肝脏B型超声等指标的变化,评价其调节血脂和保护肝功能的疗效。方法选取50位安阳市人民医院2004-2007年间门诊及住院患者诊断为2型糖尿病、血脂异常、非酒精性脂肪性肝炎者,符合下列标准者纳入研究范围。(1)符合1999年WHO T2DM诊断标准;(2)存在甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)中任何一项异常者。(3)谷丙转氨酶(ALT)高于正常值上限2倍,和/或伴谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)升高者。除外病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝损伤。(4)B超表现符合脂肪肝诊断标准。将入选者随机分配为解毒降脂片治疗组和饮食运动对照组。对照组在胰岛素强化治疗的基础上仅配合饮食及运动治疗;解毒降脂片治疗组在胰岛素强化治疗和饮食运动治疗基础上加用解毒降脂片治疗,4周后,检测两组血脂、肝功能、过氧化指标及肝脏B超变化。结果1.与治疗前相比,饮食、运动对照组治疗后TG、ALT显著下降(P<0.05);而TC、HLD-C、LDL-C、AST、GGT、丙二醛(MDA)无显著性改变(P>0.05);治疗前后肝脏B超检查脂肪肝程度无明显改变(P>0.05)。2.与治疗前相比,解毒降脂片治疗组TG、LDL-C、ALT、AST、MDA明显下降,差异有显著性(P<0.01);CHO-C、GGT下降,与治疗前相比,差异有显著性(P<0.05);与治疗前相比,治疗后HDL-C无变化(P>0.05):治疗前后肝脏B超检查脂肪肝程度明显减轻(P<0.05)。3.治疗后组间比较,治疗组TG、ALT较对照组明显下降,差异有显著性(P<0.01)。结论解毒降脂片同时兼具调脂、保肝、抗氧化、清除自由基、保护心血管、降血糖等多种作用,不仅可以解决血脂异常合并NASH肝功能异常的降脂治疗难题,而且有可能成为治疗代谢综合征及其并发血管病变的一箭多雕的药物。

关键词：非酒精性脂肪性肝炎脂肪肝 2型糖尿病血脂异常解毒降脂片

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人干燥综合征A抗原基因克隆表达及其重组蛋白临床应用研究

人干燥综合征A抗原基因克隆表达及其重组蛋白临床应用研究

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：李倩高扬李永哲倪安平于孟学刘音朱立平林嘉友甘晓丹中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科

目的克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60KD),旨在获得特异性重组抗原,探索使用重组抗原建立ELISA、免疫印迹、蛋白芯片等检测方法,用于自身抗体的临床。方法利用基因工程技术,首先从Hela细胞提取总RNA.应用逆转录RT- PCR方法扩增cDNA,再... 详细信息

目的克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60KD),旨在获得特异性重组抗原,探索使用重组抗原建立ELISA、免疫印迹、蛋白芯片等检测方法,用于自身抗体的临床。方法利用基因工程技术,首先从Hela细胞提取总RNA.应用逆转录RT- PCR方法扩增cDNA,再以此为模板扩增目的基因.将PCR产物与表达载体PET-30a双酶切后进行连接反应,构建重组表达载体,转化大肠杆菌*** BL21,碱裂解法进行质粒小量制备,通过双酶切鉴定和PCR扩增鉴定,并经测序证实为SSA60KD目的基因。表达载体构建成功后。在大肠杆菌宿主菌*** DH5α中表达,产生了大量重组融合蛋白。利用金属螯合亲和层析法,对其进行纯化。得到了高纯度的具有Ro抗原活性的重组蛋白.达到ELISA检测要求。建立ELISA检测方法。对592例风湿病患者血清进行了检测分析。结果抗Ro60KD抗体对pSS诊断的敏感性为49.19%.特异性为60.46%;对SLE诊断的敏感性为57.69%,特异性为64.06%;该抗体在pSS、SLE、RA、SSc、MCTD中的阳性率分别为49.19%、57.69%、8.33%、15.00%、16.67%.抗体阳性率在pSS与SLE两组间无差异(P=0.200);在RA、SSc、MCTD三组间无差异(P=0.888);但在(pSS+SLE)组与(RA+SSc+MCTD)组间有显著性差异(P<0.001)。为SS、SLE等疾病的临床诊断、鉴别诊断、病程监控及改善预后提供有效工具:为探讨其与特定风湿性疾病的关系提供新的手段。结论本研究成功地构建了SSA 60KD重组表达载体,表达并纯化了60KD重组蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原,建立了ELISA方法.检测了风湿病患者血清中抗60KD抗体.为进一步探讨自身抗体与疾病的相关性、了解抗原抗体相互作用及其在发病机制中的作用:为使用重组抗原用于临床检测;为进行抗原表位的定位研究、小肽的筛选及蛋白功能的研究奠定了基础。随着分子生物学和免疫学技术的进步,以重组蛋白或合成多肽为抗原用于自身抗体检测,具有广阔的临床应用前景。目前国内尚无使用重组抗原ELISA法检测SSA60KD抗体试剂盒问世。本研究正进一步扩大样本量进行临床检测。除SSA60KD外。用同样方法还完成了SSA52KD、SSB、rRNP基因的克隆表达。为建立ELISA、免疫印迹、蛋白芯片等满足不同临床需求多种检测方法继续探索。

关键词：干燥综合征 ELISA 重组抗原 SLE 重组蛋白临床应用研究基因克隆表达

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