检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：李伯安侯俊李永利徐军史佳彬毛远丽解放军第三○二医院临检中心

乙型肝炎病毒(HBV)感染致肝细胞损伤的机制,与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用密切相关。而乙型肝炎e抗原(HBeAg)是由HBV DNA前-C基因区编码的一种非颗粒性的分泌蛋白,随HBV复制而增加,临床上将其作为判断HBV活动性复制的指标之一。... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)感染致肝细胞损伤的机制,与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用密切相关。而乙型肝炎e抗原(HBeAg)是由HBV DNA前-C基因区编码的一种非颗粒性的分泌蛋白,随HBV复制而增加,临床上将其作为判断HBV活动性复制的指标之一。因此研究HBeAg与肝细胞内蛋白的相互作用及其机理,能在一定程度上对HBV的致病机制做出解释,并为寻找有效防治方法提供新线索。酵母双杂交技术是一种研究蛋白-蛋白间相互作用的比较快速、可靠并可大规模筛选的方法。本实验所采用酵母双杂交系统-3,基于两种单倍体酵母a和α型可以配合形成二倍体,而其中表达的外源蛋白仍能相互作用的机理,免去了低效率文库质粒与诱饵质粒共转染的问题,大大提高了杂交效率;在原技术基础上增加了3个报告基因,降低了假阳性率。我们利用该技术,根据中国HBV流行株序列设计引物,应用多聚酶链反应(PCR)技术,由乙型肝炎患者血清中分离出HBeAg编码基因序列。经测序鉴定正确后,克隆入酵母表达载体pGBKT7中构建"诱饵"质粒,转化酵母细胞AH109(a型),表达后通过Western-blotting鉴定产物活性。随后与预转了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187(α型)进行配合,经营养缺陷和蓝白斑双重筛选,获得了HBeAg结合蛋白阳性克隆245株。提取阳性克隆酵母质粒,通过Cacl2穿孔法转化大肠杆菌,接种于氨苄青霉素- LB平板,筛选阳性克隆并进行序列测定。测序结果在GenBank中进行生物信息学分析,发现未知功能的新基因有6条,已知蛋白基因35条。为进一步确证经酵母双杂交技术筛选出的结合蛋白与HBeAg在体外也存在相互作用,我们根据Genbank中提供的序列信息设计引物,以H epG2细胞的mRNA为模板,通过逆转录-PCR扩增出CD81及新基因AK026018的全序列,测序鉴定后,经相应的限制性内切酶消化后,克隆入酵母表达载体pGADT7,在TNT网织红细胞裂解物中进行体外翻译,掺入同位素35S,与HBeAg进行体外免疫共沉淀反应,经SDS-PAGE电泳,-20℃条件下放射自显影,再次证实上述蛋白间结合作用的可靠性。在新基因功能的研究方面,我们对HBeAg结合蛋白新基因AK026018进行了初步探讨。首先明确了该基因表达产物的亚细胞定位,主要于细胞浆中的;通过其对HeoG2细胞基因表达谱芯片的研究,推测该基因可能在细胞中起着多种复杂作用,可通过多种途径对许多类型基因表达进行调控或影响。通过过表达及siRNA抑制实验证实,在L2.2.15细胞株中HBeAg的分泌量与细胞内AK026018 mRNA的含量正相关。同时CD81过表达实验证实,随着CD81 mRNA量的增加HBeAg的分泌量反而降低。因此推测AK026018基因及CD81对HBeAg的分泌分别有促进及阻碍作用。

关键词：乙型肝炎病毒e抗原酵母双杂交白细胞分化抗原81(CD81) 未知功能基因AK026018

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乙肝病毒表面抗原确认试验在健康体检中的应用

乙肝病毒表面抗原确认试验在健康体检中的应用

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：顾志冬孟俊冯晓静林孝怡樊绮诗上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科

目的ELISA方法具有灵敏、性价比高、大容量等优点,被更常用于健康人群筛查。但其检测过程中依旧存在操作误差而致的假阳性反应结果等情况发生。本试验室对我院体检的4867例表观健康者进行乙肝表面抗原检测,并利用乙肝表面抗原确认试剂... 详细信息

目的ELISA方法具有灵敏、性价比高、大容量等优点,被更常用于健康人群筛查。但其检测过程中依旧存在操作误差而致的假阳性反应结果等情况发生。本试验室对我院体检的4867例表观健康者进行乙肝表面抗原检测,并利用乙肝表面抗原确认试剂对阳性结果进行确认,以了解在健康人群筛查中使用乙肝表面抗原确认试验的意义。方法:收集2006年9月至2006年10月两月间到我院进行健康筛查的4867里体检者血清标本,标本新鲜进行乙肝表面抗原及抗原确认试验检测,记录吸光度值并按试剂盒说明书标准判断阴、阳性结果。收集阳性及灰区结果标本,置-20℃保存。所有操作均按照仪器及试剂盒操作说明书规范进行。结果:1.4876例标本中,HBsAg有反应性样本为306例,所占比例为6.28%;处于灰区不能由第一次检测判断结果的标本为86例,所占比例为1.76%,经第二次检测。大于临界值而被判断为HBsAg有反应性标本38例,小于临界值被判断为HBsAg无反应性标本为48例。2.306例HBsAg有反应性样本确认试验结果:306例HBsAg有反应性样本中,有3例标本确认失败,所有阳性反应标本中,利用原倍血清进行确认试验就可确认的标本有206例,占67.32%,需通过1:100稀释后进行确认的标本84例,占27.54%,共计93.46%的标本通过一次稀释即可完成确认试验。尚有13例,占4.25%的标本需要不同程度的扩大稀释倍数才能完成确认试验。3.在A值0.5-2.0区间内,出现了2例标本。在作1:100稀释时,A值反而升高,提示出现了钩状效应,样本进行1:10,000稀释后才被确认。4.复检依旧处于灰区的42例标本中,半年后,对能随访到的其中29例体检者(重新采血随访发现,在16例复检判断为阴性的样本中,有6例标本A值已低于灰区低限,可明确判断为反应阴性,有6例标本依旧处于灰区,另有4例标本A值已大于灰区高限,可明确判断反应阳性。在13例复检判断为阳性的样本中,有10例子标本A值已大于灰区高限,可明确判断反应阳性,另有3例依旧处于灰区。由上结果可知,随访可使灰区结果更容易判断,根据复检结果进行判断,可导致假阴性结果的出现。5.将3例假阳性标本进行化学发光检测,发现2例为无反应,将ELISA检测的一步法分解为两步法反应后依旧显示假阳性反应结果,提示该结果为酶免方法学假阳性反应,另有1例化学发光法为有反应结果,经中和试验确认,再结合病史和二对半HBV标志物检测结果,提示该结果可能为假阳性结果,原因不明。讨论:本文研究显示,共计出现了1.76%的灰区结果,究其原因,主要是因为国产ELISA反应的CV较大,造成较多的灰区标本。以前这些都只能通过重复检测来获得相对准确的结果。通过确认试验可一次性确定绝大多数标本的结果。我们注意到,阳性样本中出现了望例高HbsAg标本,在进行一步法检测时,出现了HOOK效应,虽未对结果判断造成影响,但依旧存在产生假阴性结果的危险。应在常规检测中推广使用二步法来避免这种情况的发生。随样本检测A值的升高,出现了较多比例的需要稀释后继续确认的样本,会给临床使用中带来不便。其原因是确认用的中和试剂中用来中和HbsAg的抗体量略显不足。为避免多次稀释,方便临床使用,建议试剂生产商应大幅加大表面抗体的浓度以避免多次稀释而可能性带来的实验误差。

关键词：健康人群乙肝表面抗原确认试验检测灰区

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P15基因甲基化检测在MDS中的临床意义

P15基因甲基化检测在MDS中的临床意义

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：甘勇中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科

目的骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic ***)是一种中老年人多发的恶性疾病,是白血病前期.本病代表一种从正常造血干细胞逐步转为白血病克隆的发病模式.目前其发病机理尚不清楚。P15基因甲基化在AML和MDS中发生率高.提示其异常可能是... 详细信息

目的骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic ***)是一种中老年人多发的恶性疾病,是白血病前期.本病代表一种从正常造血干细胞逐步转为白血病克隆的发病模式.目前其发病机理尚不清楚。P15基因甲基化在AML和MDS中发生率高.提示其异常可能是MDS发病中各种因素诱导基因异常最后导致临床发病的一个早期公共途径。MDS病程中不同阶段如RA→RAS→RAEB→RAEB-T→CMML其P15基因甲基化部位及甲基化比率有何特点.将是本实验研究的主要重点。方法采用亚硫酸氢盐修饰后测序法(bisulfite-treated genomic sequencing)测定MDS患者及其对照组标本单个核细胞基因组中P15基因5′端启动子CpG岛的甲基化状态。利用BiSearch引物设计软件.我们针对经亚硫酸氢盐(bisulfite)修饰后P15基因的5′端启动子中的CpG岛设计了引物.通过PCR产物的直接测序可以检测5′端启动子区域CpG岛中的5个CpG位点上胞嘧啶(C)的甲基化状态。结果我们分析了30例MDS病人、20例正常对照以及3例由MDS转为AML的样品。发现p15基因5′端启动子在30例MDS中发生甲基化的阳性率为70%(21/30),与正常对照组20%(4/20)相比较(P<0.05)有显著差异。各亚型中p15基因5′端启动子甲基化阳性率分别为RA33.3%(3/9)、RA-S83.3%(5/6)、RAEB85.7%(6/7)、RAEB-t80%(4/5)、CMML100%(3,3)。发生甲基化位点的数目MDS的不同阶段也有所不同。在MDS的前期,如RA、RAS阶段,发生甲基化的位点较少。一般是一到两个。而到了MDS病程的后期.特别是在RAEB、CMML阶段.以及由MDS转为的AML。发生甲基化的位点增加到了三到五个。我们同时也观察了一位MDS-RA病人在发病及治疗缓解后的甲基化状态的变化.发现了在治疗缓解后其P15基因5′端启动子CpG岛的甲基化位点的消失。结论P15基因是一种肿瘤抑制基因.其甲基化在MDS和AML有很高的发生率.说明P15基因甲基化与正常造血细胞恶性变有密切关系。本研究重点放在MDS和AML发生率最高的P15基因5′端启动子CpG岛甲基化.并连续观察MDS病程中不同阶段P15基因5′端启动子CpG岛发生甲基化的数目及阳性率。通过实验数据可以看出.随着MDS病程的不断进展。P15基因5′端启动子CpG岛发生甲基化的数目及阳性率是不断增加的.而随着治疗后的缓解,P15基因5′端启动子CpG岛发生的甲基化可以消失或减少.这使得P15基因5′端启动子CpG岛甲基化的检测可以在MDS的诊断、病程的监测及预后的判断方面起着重要的作用。若可通过测定P15基因甲基化的表达产物(蛋白),来诊断早期MDS。其检测方法将在临床上有广泛应用。将能大大提高MDS的确证率.同时可指导开发抗甲基化药物。对早期患者起到对因治疗作用,这将可能是MDS临床诊断和治疗的重大突破.

关键词： MDS AML 基因甲基化启动子 CpG 甲基化检测 P15 临床意义

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中华医学会第七次全国内分泌学学术会议纪要

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中华内分泌代谢杂志 2006年第2期22卷 195-201页

作者：曾正陪巩秋红李光伟关海霞滕卫平叶蕾杨军宁光马中书邱明才童安莉窦京涛北京协和医院北京中日友好医院中国医科大学附属第一医院上海交通大学附属瑞金医院天津医科大学总医院解放军总医院

第七次全国内分泌学学术会议于2005年8月24日至28日在北京九华会议中心举行,本次会议共收到学术论文1 200篇,来自全国各地的1 300余名代表出席了会议.7位国内专家应邀作了大会专题报告;73篇专题发言,172篇口头报告分别在4个分会场进行交... 详细信息

第七次全国内分泌学学术会议于2005年8月24日至28日在北京九华会议中心举行,本次会议共收到学术论文1 200篇,来自全国各地的1 300余名代表出席了会议.7位国内专家应邀作了大会专题报告;73篇专题发言,172篇口头报告分别在4个分会场进行交流,829位代表作书面和列题交流.会议还就内分泌学界当前4个"热点"问题举行了专题讨论。

关键词：学术会议纪要内分泌学中华医学会专题报告学术论文专题讨论

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虫媒病毒及虫媒病毒病研究进展

虫媒病毒及虫媒病毒病研究进展

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中华医学会第七次全国医学病毒学学术会议

作者：梁国栋中国疾病预防控制中心病毒病所北京100052

本文论述了虫媒病毒与虫媒病毒病、虫媒病毒与新发传染病、我国的虫媒病毒及虫媒病毒病、我国虫媒病毒研究进展以及加强虫媒病毒及相关疾病研究的意义。