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新生儿糖尿病致病相关基因和治疗探索多中心协作初步研究

新生儿糖尿病致病相关基因和治疗探索多中心协作初步研究

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：罗飞宏李堂陈临琪胡敏杜虹沈水仙曹凌峰赵诸慧金晶杨毅支涤静陆忠程若倩复旦大学附属儿科医院 200032 山东省青岛市儿童医院 266000 苏州大学附属儿童医院 215003 浙江省嘉兴妇幼保健院 313000 黑龙江省哈尔滨市儿童医院

研究背景：新生儿糖尿病(NDM)是指出现在生后一月内或前6周的持续性高血糖状态(>7.0mmol/l)，病程大于2周。部分患者I临床表现隐匿，不易察觉，故生后6个月内诊断的糖尿病患儿都要考虑NDM。NDM起病早治疗困难，常因多种原因夭折;发... 详细信息

研究背景：新生儿糖尿病(NDM)是指出现在生后一月内或前6周的持续性高血糖状态(>7.0mmol/l)，病程大于2周。部分患者I临床表现隐匿，不易察觉，故生后6个月内诊断的糖尿病患儿都要考虑NDM。NDM起病早治疗困难，常因多种原因夭折;发病机制复杂，其中编码钾通道的KCNJ11、ABCC8等基因变异起重要作用。国内尚无NDM发病机制和临床治疗的研究报道。目的：采用多中心协作的方法，分别研究编码Kit6.2的KCNJ11基因和编码SUR1的ABCC8基因突变情况，并探讨KATP通道阻滞剂格列本脲治疗NDM的可行性。方法：收集10名NDM患者一般资料，测定空腹血糖、C肽、胰岛细胞自身抗体和糖化血红蛋白。知情同意后抽取外周血，抽提DNA，设计42对引物，PCR扩增KCNJ11、ABCC8各外显子作DNA序列分析。5名患者先常规胰岛素治疗，同时加格列本脲口服，随访血糖至今。结果：1)研究对象平均出生体重2530.50(535.86g，平均发病时间77.00(54.42天，初诊时平均HbA1c 16.8％(12.3％、平均血糖32.22(13.37mmol/L;血清C肽水平减低，GAD65和IA-2抗体(-)。3)采用胰岛素治疗的患者其平均剂量为0.6(0.2U/kd.d;采用格列本脲治疗者初始平均用药剂量0.10(0.02mg/kg.d，最终剂量0.28(0.22mg/kg.d，最终HbA1c 6.03％(0.38％，采用格列本脲治疗者1例窒息死亡，5例采用胰岛素治疗者初期血糖控制良好，1年后随访均死于其它疾病。4)DNA序列初步分析显示一位患者的KCNJ11基因存在V59M纯合突变，其父母为杂合突变;在一位患者及其父母中发现了ABCC8杂合D209E突变，其他患者尚未见突变。结论：本组NDM患者表现持续性高血糖、胰岛功能低下、自身抗体阴性，临床与1b型糖尿病相似，纯胰岛素注射治疗者不明原因死亡率高。DNA序列分析表明2名患者存在KCNJ11和ABCC8基因突变。采用格列本脲阻止胰岛钾通道开放，增加胰岛素释放，初步观察表明可完全控制NDM血糖且不产生显著的副作用，表明在是我国NDM患者中采用该方法治疗有良好的临床可行性。提示进一步加强NDM多中心协作研究，将为我国探索NDM的合理诊治、挽救患者的生命提供全新的思维模式。

关键词：新生儿糖尿病致病相关基因临床治疗

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1岁内起病肾病患者的NPHS2、WTl基因分析及临床特点

1岁内起病肾病患者的NPHS2、WTl基因分析及临床特点

引用

中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：李建国赵丹丁洁肖慧捷范青锋管娜陈彦张宏文北京大学第一医院儿科 100034

目的：对1岁内起病的肾病患者进行NPSH2和WT1(外显子8和9)基因检测，以探讨早发肾病的临床和遗传学特点，为病因诊断、治疗方案的选择、预后和遗传咨询提供信息。对象和方法：收集2003～2008年在我院儿(肾)科住院的1岁内起病的肾病... 详细信息

目的：对1岁内起病的肾病患者进行NPSH2和WT1(外显子8和9)基因检测，以探讨早发肾病的临床和遗传学特点，为病因诊断、治疗方案的选择、预后和遗传咨询提供信息。对象和方法：收集2003～2008年在我院儿(肾)科住院的1岁内起病的肾病患者，除外有继发因素者，如经过治疗则符合激素耐药肾病(SRNS)诊断。PCR扩增及直接测序：对NPHS2基因的8个外显子和WTl基因的外显子8和外显子9进行PCR扩增并直接测序;采用PCR及RT-PCR的方法检测WT1基因突变及+KTS/-KTS比例。对确诊为WT1突变的患者行染色体核型分析，对无法进行染色体核型分析的患者行Y染色体性别决定基因SRY的PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增SRY产物。结果：1.一般资料：共21例，男11例，女10例;起病年龄(6.09±4.53)月，诊断年龄(15.68±19.63)月。2.5例WT1突变患者的临床特点：①性别：4例(80％)为女性表型(2例核型为46，XY)，1例为男性伴泌尿生殖器畸形：②首发症状：2例间断眼睑浮肿(2/5，40.0％)，3例无浮肿(偶然发现);③尿蛋白定量：平均为210mg/kg.d;④4例患者经过治疗后尿蛋白无下降;⑤随访：2例分别随访6月，2年，肾功能均正常。3.16例未检出突变患者的临床特点：①性别：6例为女性(37.5％);②首发症状：明显浮肿者13例(81.3％);③平均尿蛋白定量：99.6mg/kg.d;④13例经过治疗后4例有尿蛋白降低;⑤随访：9例随访超过6个月，1例出现慢性肾衰竭，4例死亡。4.基因检测结果：①检出5例WT1基因突变，1例(1186 G>AHet，D396N)，1例(IVS 9+4 T>C Het)，3例(WS 9+5 G>A Het);突变率为23.8％(5/21)，在女性表型患者中为40.0％(4/10)。②发现1例NPHS2(860A>GHet，Q287R)变异和WTl同时突变的患者(未见报道)。结论：WT1突变患者隐匿起病，浮肿轻而蛋白尿程度重，即使给予积极治疗尿蛋白无下降。WT1突变率高，且发生在女性表型和男性伴外生殖器畸形的SRNS患者中，其中包括FS或DDS，提示对于1岁内起病的女性或男性伴泌尿生殖器畸形的SRNS患者均应常规行WT1外显子8和9检测和染色体核型分析。NPHS2突变率低，同韩国报道的一致，提示NPHS2突变具有种族差异。发现1例NPHS2单杂合变异和WT1突变同时存在的患者，可能协同WTl突变的致病作用而加重了患者的临床表现。

关键词：婴儿肾病 NPSH2基因 WTl基因病因诊断基因检测遗传分析

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哮喘患儿诱导痰中转化生长因子-B1、白介素5与气道重塑关系的探讨

哮喘患儿诱导痰中转化生长因子-B1、白介素5与气道重塑关系的探讨

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：陈强李莉刘建梅丁山柯江维邹音江西省儿童医院呼吸科 330006 江西省儿童医院放射科江西省儿童医院检验科江西省儿童医院病理科

目的：探讨哮喘患儿诱导痰中嗜酸性粒细胞(EOS)、转化生长因子-p1(TGF-1β1)、白介素-5(IL-5)与气道重塑的关系;讨论吸入性糖皮质激素对哮喘患儿气道重塑的影响。方法：对30例住院的急性支气管哮喘患儿(哮喘组)、30例健康儿童(对照... 详细信息

目的：探讨哮喘患儿诱导痰中嗜酸性粒细胞(EOS)、转化生长因子-p1(TGF-1β1)、白介素-5(IL-5)与气道重塑的关系;讨论吸入性糖皮质激素对哮喘患儿气道重塑的影响。方法：对30例住院的急性支气管哮喘患儿(哮喘组)、30例健康儿童(对照组)、15例经规范化糖皮质激素吸入治疗6～12个月的哮喘缓解期(缓解组)儿童用5％高渗盐水进行超声雾化诱导痰液，以酶联免疫法(ELISA)测定诱导痰中IL-5水平，免疫细胞化学方法测定诱导痰中TGF-β1表达，同时进行诱导痰中EOS计数，三组病人均测定肺功能FEV1等值，进行肺部高分辨CT(HRCT)检查，测定肺CT的段支气管壁厚度，气道外径(T/D)和气道壁面积占气道总面积百分比(WA％)。结果：1.哮喘组EOS计数为(17.24±12.11)％、IL-5为(25.45±18.05)pg/t;缓解组EOS计数为(3.665±2.13)％、IL-5为(7.335±4.39)pg/L,对照组EOS计数为(1.4±1.27)％、IL-5为(6.49±5.31)pg/L，哮喘组与对照组、哮喘组与缓解组比较差异有统计学意义，P均<0.01。2.30例哮喘患者有27例痰液中出现TGF-P1 阳性表达，缓解组有2例TOF-β1阳性表达，而对照组中未见有TGF-β1阳性表达。哮喘组TGF-β1 阳性表达率与WA％呈正相关(r=0.409 P<0.05)，与肺功能FEV1％pre呈负相关(r=-0.684 P<0.01)。3.哮喘组IL-s与EOS计数呈正相关(r=0.487 P<0.05)，与WA％变化趋势相同，但无统计学意义(r=O.06 P>0.05)。4.哮喘组肺功能FEV1％pre与WA％呈负相关(r=-0.399 P<0.05)。5.哮喘组T/D(18.16±2.42)％、WA％(59.255±6.54)％、FEV1％pre(％)(71.82±23.08);缓解组T/D(17.17±1.9)％、WA％(56.01±3.91)％、FEV1％pre(％)(96.18±12.8)％;对照组T/D(16.45±2.30)％、WA％(53.91±7.72)％、FEv1％pre(％)(107.465±17.11)％，哮喘组与对照组、哮喘组与缓解组比较差异有统计学意义，P均

关键词：哮喘患儿气道重塑吸入性糖皮质激素诱导痰嗜酸性粒细胞转化生长因子-p1 白介素-5

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早产儿脑损伤磁共振成像演变规律及临床意义

早产儿脑损伤磁共振成像演变规律及临床意义

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：段洋毛健富建华李娟薛辛东王晓明陈丽英天津医科大学第二附属医院新生儿科 300211 中国医科大学盛京医院新生儿科 110004 中国医科大学盛京医院放射线科 110004

目的：结合常规磁共振成像(MRI)和弥散加权成像(DWI)，动态评价不同类型早产儿脑损伤的MRI演变规律及临床意义，探讨早产儿脑白质损伤(CWMD)分类方法。方法：517例早产儿行常规MR/和DWI检查，诊断早产儿脑损伤314例，对其中69例随... 详细信息

目的：结合常规磁共振成像(MRI)和弥散加权成像(DWI)，动态评价不同类型早产儿脑损伤的MRI演变规律及临床意义，探讨早产儿脑白质损伤(CWMD)分类方法。方法：517例早产儿行常规MR/和DWI检查，诊断早产儿脑损伤314例，对其中69例随访。脑白质分区：(1)半卵圆中心;(2)脑室前角区域;(3)脑室后角区域;(4)胼胝体压部和，或膝部，内囊后肢，按受累区域数目将CWMD分为I～Ⅳ处损伤。结果：(1)脑室内出血(PCH)多合并脑白质损伤。(2)胎龄越小IVH患病率越高(P

关键词：磁共振成像弥散加权成像早产儿脑损伤演变规律临床观察

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儿童激素耐药型与激素敏感型肾病综合征尿蛋白组学的初步研究

儿童激素耐药型与激素敏感型肾病综合征尿蛋白组学的初步研究

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：黄爱文何庆南周频丁娟娟易文中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室

目的应用二维电泳和质谱分析等蛋白质组学方法筛选和鉴定激素耐药型原发性肾病综合征(SRNS)与激素敏感型原发性肾病综合征(SSNS)尿液中差异表达的蛋白质,寻找可能与原发性肾病综合征激素耐药、激素敏感及疾病预后相关的蛋白质。方法研... 详细信息

目的应用二维电泳和质谱分析等蛋白质组学方法筛选和鉴定激素耐药型原发性肾病综合征(SRNS)与激素敏感型原发性肾病综合征(SSNS)尿液中差异表达的蛋白质,寻找可能与原发性肾病综合征激素耐药、激素敏感及疾病预后相关的蛋白质。方法研究对象共20例,其中,治疗前和治疗后SSNS各5例、SRNS 5例、正常对照组5例,提取尿液全蛋白,采用固相pH梯度双向凝胶电泳(2-DE)方法,建立尿液全蛋白凝胶图谱;应用投射扫描仪对银染色后的凝胶图进行扫描,使用Image Master 2D V3.01分析软件分析和识别差异表达蛋白质点,利用基质辅助激光解吸,电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到差异蛋白质点的肽质量指纹图谱(PMF),通过Mascot软件进入NCBI数据库,鉴定出差异表达的蛋白质。结果正常对照组、SSNS治疗前组、SSNS治疗后组和SRNS组尿液2-DE凝胶的蛋白质平均检测点分别为105±7个、204±5个、55±5个和206±8个。SRNS组与SSNS治疗前组尿液2-DE凝胶比较筛选出差异蛋白质点66个,其中,仅存在于SRNS组的蛋白质点24个、仅存在于SSNS治疗前组的蛋白质点27个;SSNS治疗后组与正常对照组尿液2-DE凝胶比较筛选出差异蛋白质点75个,其中,仅在SSNS治疗后组出现的蛋白质点11个。本实验对其中18个差异明显的蛋白质点进行了MALDI-TOF-MS分析,鉴定出9类差异表达的蛋白质:①白蛋白结构3区与一个针对Bcl-xL和Bcl-2的抗凋亡配体的复合物;②白蛋白前体;③Igκ链NIG26前体;④α1-抗胰蛋白酶:⑤与Vegfα1-抗胰蛋白酶形成复合物的噬菌体来源的Fab片段;⑥转铁蛋白:⑦一个具有广泛的中和抗艾滋病毒-1抗体晶体结构与模拟肽的复合体;⑧甘露聚糖结合凝集素.相关蛋白19(Map19):⑨带异类电荷的糖蛋白复合体(protein HC)。结论成功鉴定了SRNS和SSNS存在9类差异表达的蛋白质,其中,尿液中自蛋白结构3区与一个针对Bcl-xL和Bcl-2的抗凋亡配体的复合物及白蛋白前体可能是SRNS的标志物;尿液中α1-抗胰蛋白酶和转铁蛋白可能是SSNS的标志物,protein HC和Map19可能与INS的预后与转归有关。

关键词：激素敏感型肾病综合征复合物治疗前激素耐药差异蛋白质点尿蛋白白蛋白激素耐药型肾病综合征抗胰蛋白酶初步研究

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先天性心脏病中NKX2．5、GATA4基因表达研究

先天性心脏病中NKX2．5、GATA4基因表达研究

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：石琳李仲智李晓峰陆进柏松袁峰高国庆首都儿科研究所附属儿童医院首都医科大学附属北京儿童医院

研究背景及目的先天性心脏病(CHD)是较常见的一种生后缺陷,严重影响小儿健康。心脏的发育是一个复杂的过程,涉及多种基因在不同时间和空间上的顺次精确表达,并受多种转录因子的调控。近年来研究发现某些心脏发育相关基因的正常表达是心... 详细信息

研究背景及目的先天性心脏病(CHD)是较常见的一种生后缺陷,严重影响小儿健康。心脏的发育是一个复杂的过程,涉及多种基因在不同时间和空间上的顺次精确表达,并受多种转录因子的调控。近年来研究发现某些心脏发育相关基因的正常表达是心脏正常发育及形成的关键。因此,研究心脏发育相关基因的表达有助于揭示人体心脏发育机理和先心病发生机制。在本研究中,我们以GAPDH作为内对照对先心病患儿(房间隔缺损、室间隔缺损、法洛氏四联征各10例)和6例非先心病患儿(对照组)心肌标本进行逆转录.实时荧光定量PCR分析,观察NKX2.5、GATA4这两个心脏发育相关基因在mRNA水平上的差异,从其转录水平上探讨NKX2.5、GATA4与先心病的发病关系,深化先心病形成的分子机制。方法30例CHD患儿,均来自儿童医院病房。患儿年龄4月-8岁,平均年龄3.5岁,CHD诊断依据①典型的临床表现:②心脏彩色超声心动图和心脏手术证实。全部病例包括室间隔缺损10例,房间隔缺损10例,法洛式四联症者10例,在手术过程中留取心肌组织,-70℃冻存。6例非先心病患儿作为对照,均没有先心病病史和遗传病家族史。年龄4月～9岁,平均年龄3.8岁。留取各病例心肌组织,提取心肌组织总RNA,逆转录为cDNA。应用美国Whitehead生物医学研究所基因研究中心的Web服务器提供的软件组中的Primer 3软件按照引物设计原则进行引物设计,用来扩增心肌组织NKX2.5、GATA4、GAPDHmRNA目的片段。引物长度18-22 bp,Tm值为56～64.6℃之间,扩增片段长度163-240 bp。应用双标准曲线、实时荧光定量PCR法比较NKX2.5、GATA4基因的mRNA水平在正常对照和CHD病人之间是否存在统计学差异。结果CHD患者中存在NKX2.5/GAPDH比值的差异,ASD、VSD组和TOF组显著低于对照组,提示:ASD、VSD和TOF组的NKX2.5mRNA表达较非CHD组显著降低;CHD患者中存在GATA4/GAPDH比值的差异,ASD显著高于对照组,VSD组显著低于对照组,TOF组与对照组无差别,提示与非CHD组比较,CHD病人存在GATA4基因mRNA水平量的差异;ASD组的GATA4mRNA表达显著增高;VSD组的GATA4mRNA表达显著降低;而TOF组的GATA4mRNA表达无变化。结论人心肌组织中有心脏发育相关基因NKX2.5和GATA4mRNA的表达;心肌组织中NKX2.5mRNA含量降低与CHD相关;GATA4mRNA在不同CHD中表达量不同,即NKX2.5mRNA和GATA4mRNA异常表达与CHD具有相关性,可能是CHD发病的另一种潜在分子机制。

关键词： GATA4 心肌组织心脏发育相关基因先天性心脏病 ASD CHD 基因表达

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早产儿血清VEGF和IGF-1浓度变化及与ROP的关系

早产儿血清VEGF和IGF-1浓度变化及与ROP的关系

引用

中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：杜鹃陈超复旦大学儿科医院新生儿科 200032

目的：测定不同胎龄早产儿和早产儿视网膜病(ROP)患儿血清血管内皮生长因子(VEOF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)浓度变化，并探讨其与ROP发生发展的关系。方法：选择新入院新生儿184例。根据胎龄分13天，其VEGF浓度在第5周反常性升... 详细信息

目的：测定不同胎龄早产儿和早产儿视网膜病(ROP)患儿血清血管内皮生长因子(VEOF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)浓度变化，并探讨其与ROP发生发展的关系。方法：选择新入院新生儿184例。根据胎龄分<32周早产儿组、32～36周早产儿组和足月儿组，各组根据是否吸氧再分为未吸氧和吸氧两个亚组。ROP组为出生体重<2kg，眼科筛查确诊为ROP的早产儿。新生儿分别在生后第1、3、5、7周用ELISA法检测血清VEGF和IGF-1浓度。结果：(1)在未吸氧新生儿中，早产儿组血清VEGF浓度随着日龄增加而下降，足月组血清VEGF浓度较平稳。第1周，<32周早产儿组和32～36周早产儿组VEGF浓度明显高于足月儿组(412±128pg/ml，522±224pg/ml与247±123pg/ml，P=0.000);第3周，32～36周早产儿组仍明显高于足月儿组(393±220pg/ml与247±177pg/ml，P=0.012)。在32～36周早产儿组中，吸氧和未吸氧亚组VEGF浓度差异有显著性(第1周：324±148pg/ml与522±224pg/ml，P=O.000;第3周:264±106pg/ml与393±220pe/ml，P=0.005);在<32周早产儿组和足月儿组中，吸氧与未吸氧亚组VEGF的差异无显著性。ROP组胎龄均<32周，均吸氧>13天，其VEGF浓度在第5周反常性升高，与<32周吸氧组和未吸氧组相比，差异无显著性;ROP组VEGF浓度在纠正胎龄31～34周高于非ROP早产儿组，在纠正胎龄31周(515±154pg/ml与347±161pg/ml，P=O.047)和34周(403pg/ml与280±158pg/ml，P=0.000)差异有显著性。(2)在未吸氧新生儿中，足月儿组血清IGF-1浓度随着日龄增加呈上升趋势，<32周早产儿组和32～36周早产儿组血清IGF-1浓度则随着日龄增加先下降，然后再缓慢回升，约在第5周恢复至出生时的水平。<32周早产儿组和32～36周早产儿组第1周和第3周血清IGF-1浓度显著低于足月儿组。在<32周早产儿组和32～36周早产儿组中，吸氧组与未吸氧组IGF-1浓度无统计学意义;在足月儿组，吸氧组血清IGF-1浓度明显低于未吸氧组。在纠正胎龄29～31周时，ROP组血清IGF-1浓度显著低于非ROP早产儿组(29周：15.07ng/ml与32.78±16.50 ng/ml，P<0.05;30周：14.79 ng/ml与33.92±14.85 ng/ml，P

关键词：早产儿视网膜病血清VEGF IGF-1浓度病理机制

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新生鼠缺氧缺血性脑损伤时细胞外信号相关蛋白激酶路径与HIF-1α...

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：熊英李丽华屈艺毛萌母得志四川大学华西第二医院儿科 610041

目的：探讨在体神经元缺氧缺血条件下缺氧诱导因子la(hypoxiainducible factor la，HIF-1a)蛋白及其靶基因血管内皮生长因子(VEGF)的表达及细胞外信号相关蛋白激酶(Erk1/2)信号通路的激活，推测Erk1/2信号通路与神经元HIF-1a及VEGF表达... 详细信息

目的：探讨在体神经元缺氧缺血条件下缺氧诱导因子la(hypoxiainducible factor la，HIF-1a)蛋白及其靶基因血管内皮生长因子(VEGF)的表达及细胞外信号相关蛋白激酶(Erk1/2)信号通路的激活，推测Erk1/2信号通路与神经元HIF-1a及VEGF表达调节的关系，以期更确切地阐明Erk1/2在发育期脑缺氧缺血性损伤(hypoxia ischemia brain damage，HIBD)时神经元HIF-1a及其靶基因表达中的作用。方法：10 d龄SD大鼠72只，分为缺氧缺血组(n=32)、U0126干预组(n=4)、溶剂(DMSO+PBS)干预组(n=4)和假手术组(n=32)。缺氧缺血组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉分离并结扎，氮氧混合气(92％氮气、8％氧气)缺氧2.5 h，即为HIBD模型;U0126干预组和溶剂干预组分别在麻醉状态下于右侧侧脑室内注射U0126和溶剂(DMSO+PBS)，30 min后做缺氧缺血处理，方法同HIBD模型制作;假手术组只分离右侧颈总动脉，不结扎，不做缺氧处理。缺氧缺血组和假手术组每组分别按缺氧缺血后2、4、8及24 h 4个时间点处死动物取脑组织，U0126干预组和溶剂(DMSO+PBS)干预组于缺氧缺血后4 h取脑组织。应用免疫组织化学法检测HIF-1a、VEGF、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白的分布和表达，Western blot定量检测HIF-1a、VEGF、Erk1/2及P-Erk1/2蛋白含量，RT-PCR检测HIF-1amRNA表达。结果：缺氧缺血组HIF-1a蛋白表达在术后4 h明显升高，8 h达高峰，24 h后下降;VEGF与HIF-1a有相同的变化趋势。P—Erk1/2蛋白于术后4 h明显升高，8 h后下降，24 h达到基线水平。假手术组各时间点HIF-1a、VEGF和p-Erk1/2均有极少量弱阳性表达。缺氧缺血组HIF-1a和VEGF蛋白表达明显高于假手术组，差异有统计学意义(p<0.01);缺氧缺血组p-Erk1/2于4h和8 h明显高于假手术组，差异有统计学意义(P<0.01)。Erk1/2蛋白表达随术后时间的延长没有明显变化，与假手术组比较无显著性差异(p>0.05)。应用Erk1/2特异性抑制剂U0126干预后，发现HIF-1a和VEGF蛋白的表达明显下降，与未应用抑制剂组比较差异有统计学意义(P<0.01)。而HIF-1a mRNA的表达无明显变化，与未应用抑制剂组比较差异无统计学意义(p>0.05)。结论：发育期HIBD时，可激活Erk1/2信号通路，并诱导HIF-1a蛋白及靶基因VEGF蛋白表达增加，Erk1/2在发育期HIBD时神经元HIF-1a表达中起重要的调节作用，此调节作用发生在蛋白水平，并不影响HIF-1a mRNA的表达水平。

关键词：缺氧缺血性脑损伤 HIF-1α VEGF表达 Erk1信号通路靶基因调节机制

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1岁内起病肾病患者的NPHS2、WT1基因分析及临床特点

1岁内起病肾病患者的NPHS2、WT1基因分析及临床特点

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：李建国赵丹丁洁肖慧捷范青锋管娜陈彦张宏文北京大学第一医院儿科

目的对1岁内起病的肾病患者进行NPSH2和WT1(外显子8和9)基因检测,以探讨早发肾病的临床和遗传学特点,为病因诊断、治疗方案的选择、预后和遗传咨询提供信息。对象和方法收集2003年～2008年在我院儿(肾)科住院的1岁内起病的肾病患者,除... 详细信息

目的对1岁内起病的肾病患者进行NPSH2和WT1(外显子8和9)基因检测,以探讨早发肾病的临床和遗传学特点,为病因诊断、治疗方案的选择、预后和遗传咨询提供信息。对象和方法收集2003年～2008年在我院儿(肾)科住院的1岁内起病的肾病患者,除外有继发因素者,如经过治疗则符合激素耐药肾病(SRNS)诊断。PCR扩增及直接测序:对NPHS2基因的8个外显子和WT1基因的外显子8和外显子9进行PCR扩增并直接测序;采用PCR及RT-PCR的方法检测WT1基因突变及+KTS/-KTS比例。对确诊为WT1突变的患者行染色体核型分析,对无法进行染色体核型分析的患者行Y染色体性别决定基因SRY的PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增SRY产物。结果1.一般资料:共21例,男11例,女10例;起病年龄(6.09±4.53)月,诊断年龄(15.68±19.63)月。2.5例WT1突变患者的临床特点:①性别:4例(80%)为女性表型(2例核型为46,XY),1例为男性伴泌尿生殖器畸形;②首发症状:2例间断眼睑浮肿(2/5,40.0%),3例无浮肿(偶然发现);③尿蛋白定量:平均为210mg/kg.d:④4例患者经过治疗后尿蛋白无下降;⑤随访:2例分别随访6月/2年,肾功能均正常。3.16例未检出突变患者的临床特点;①性别:6例为女性(37.5%);②首发症状:明显浮肿者13例(81.3%);③平均尿蛋白定量:99.6mg/kg.d;④13例经过治疗后4例有尿蛋白降低;⑤随访:9例随访超过6个月,1例出现慢性肾衰竭,4例死亡。4.基因检测结果:①检出5例WT1基因突变,1例(1186 G>AHet,D396N),1例(IVS 9 +4T>C Het),3例(IVS 9+5 G>AHet)突变率为23.8%(5/21),在女性表型患者中为40.0%(4/10)。②发现1例NPHS2 (860A>GHet,Q287R)变异和WT1同时突变的患者(未见报道)。结论WT1突变患者隐匿起病,浮肿轻而蛋白尿程度重,即使给予积极治疗尿蛋白无下降。WT1突变率高,且发生在女性表型和男性伴外生殖器畸形的SRNS患者中,其中包括FS或DDS,提示对于1岁内起病的女性或男性伴泌尿生殖器畸形的SRNS患者均应常规行WT1外显子8和9检测和染色体核型分析。NPHS2突变率低,同韩国报道的一致,提示NPHS2突变具有种族差异。发现1例NPHS2单杂合变异和WT1突变同时存在的患者,可能协同WT1突变的致病作用而加重了患者的临床表现。

关键词：肾病患者基因检测外显子泌尿生殖器 NPHS2 染色体核型分析激素耐药基因分析临床特点 WT1

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蛋白精氨酸甲基转移酶5在儿童急性淋巴细胞白血病细胞的表达和定位研究

蛋白精氨酸甲基转移酶5在儿童急性淋巴细胞白血病细胞的表达和定...

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：张瑞东郑胡镛李志刚崔蕾高超吴敏媛首都医科大学附属北京儿童医院血液病中心

研究背景蛋白精氨酸甲基转移酶(Protein Arginine Methyltransferases PRMTs)催化S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine,SAM)上的甲基转移到精氨酸残基上的反应。在真核细胞中根据其产生的甲基化产物的对称性可以分成两类:Ⅰ类可产生单... 详细信息

研究背景蛋白精氨酸甲基转移酶(Protein Arginine Methyltransferases PRMTs)催化S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine,SAM)上的甲基转移到精氨酸残基上的反应。在真核细胞中根据其产生的甲基化产物的对称性可以分成两类:Ⅰ类可产生单甲基化,不对称双甲基化产物;Ⅱ类的产物形成单甲基化/对称双甲基化产物,在哺乳动物中已经鉴定出5种Ⅰ类PRMTs(PRMT1、-2、-3、-4和-6),2种Ⅱ类PRMTs(PRMT5和7)。PRMT5又称JBP1、Skb1Hs和Hs17,最早是通过酵母双杂交分离获得的,PRMT5和蛋白甲基化参与了mRNA的剪接和运输,一些研究提示PRMT5与染色质重塑复合物一起参与了组蛋白遗传密码的形成,研究显示PRMT5是细胞周期和基因转录的调控子,但是PRMT5是否调控肿瘤的发生还不清楚。研究目的通过研究PRMT5蛋白和mRNA在儿童急性淋巴细胞白血病(Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL)细胞的表达,探讨PRMT5与儿童ALL发生、发展的相关性。研究方法用蛋白杂交(Western blot)技术检测ALL初诊患儿、ALL治疗缓解(Complete Remission,CR)患儿及ALL停药儿童骨髓细胞中PRMT5蛋白的表达情况,对照组骨髓取自特发性减少性血小板紫癜(Idiopathic Thrombocytopcnic Purpura,ITP)和骨科矫形患儿。用逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测初诊ALL患儿、CR3个月ALL患儿、停药儿童骨髓细胞中PRMT5的mRNA的表达:用免疫荧光染色检测PRMT5在骨髓细胞中的亚细胞定位和表达。研究结果***5蛋白水平表达:初诊组129名患儿中有121名检测到PRMT5蛋白表达增高,8名未检测到PRMT5蛋白表达增高;缓解患儿、停药儿童和对照儿童未检测到PRMT5蛋白表达增高。在PRMT5蛋白表达增高的初诊患儿中,10岁以下患儿PRMT5的表达高于10岁以上患儿的表达,P=0.004:T-急性淋巴细胞白血病患儿PRMT5的表达高于髓系白血病患儿,P=0.027。***5mRNA水平的表达:在29名初诊患儿中27人有PRMT5的mRNA表达增高,与他们蛋白水平的表达一致。随访15名骨髓CR 3个月时的患儿中,10人仍能检测到PRMT5的mRNA表达,但明显低于其初诊时的表达,P= 0.018:16名停药儿童中有5人未检测到PRMT5的mRNA表达。***5蛋白表达定位:免疫荧光染色结果显示,初诊白血病患儿骨髓中PRMT5阳性细胞荧光强度明显高于缓解患儿骨髓细胞的荧光强度。缓解患儿骨髓细胞中PRMT5蛋白分布在细胞浆中的细胞核附近,与高尔基体结合,而白血病细胞中的PRMT5蛋白主要定位在细胞核中。研究结论白血病细胞PRMT5蛋白和mRNA水平表达显著增高:白血病细胞中PRMT5蛋白定位发生改变,主要定位在细胞核。由此推测PRMT5与儿童白血病的发生发展密切相关,为开发新的白血病标志物应用于临床、进一步深入研究白血病发病机理,根据其机理开发研制新的抗白血病药物,为今后应用于临床治疗奠定理论基础。

关键词：白血病细胞 PRM 儿童白血病儿童急性淋巴细胞白血病精氨酸甲基转移酶甲基化定位研究

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