目的一患儿因出生后发现面容、肢体异常:眉毛浓,连眉,睫毛长,人中长,高腭弓,口唇薄,右手4-5指并指,前来我院就诊。患儿外周血细胞染色体核型分析及SNP array结果均未见异常。我们通过运用靶向捕获结合高通量测序(TGS)技术为该患儿筛查可能致病的原因。方法采患儿外周血进行g DNA提取,运用TGS技术对胎儿进行226个已知的骨骼系统疾病致病基因筛查,并采用Sanger测序验证。结果患者NIPBL基因存在嵌合性c.4321-1G>A杂合突变,嵌合比例约为30%。功能实验验证发现该突变可引起剪接改变。该突变为新发突变,在国内外尚未见报道。200例正常人对照中也未发现该突变。NIPBL基因为Corneliade Lange综合征的致病基因之一。这是中国人群中首次报道嵌合性Cornelia de Lange综合征病例。结论通过运用TGS技术,我们对患者g DNA进行检测,发现了NIPBL基因未见报道的嵌合性c.4321-1G>A突变,并在国内首次报道嵌合性Cornelia de Lange综合征病例。高通量测序技术具有测序深度大、准确性好等优点,是诊断嵌合性单基因病的有效技术。
目的分离鉴定导致一常染色体显性遗传腓骨肌萎缩症家系的致病基因,为基因诊断提供遗传学依据。方法利用全基因组扫查初步确定致病基因的区域,全外显子组测序发现候选基因变异,利用斑马鱼模型进行体内验证。结果全基因组扫查显示两处阳性区域(LOD score大于2),分别是2号染色体(171204750-173914775)和22号染色体(28866225-36418280)。结合全外显子组测序结果将致病基因确定为NEFH(c.3090ins G)。Sanger测序验证该突变与表型共分离。利用morpholino敲低斑马鱼同源基因的胚胎尾部出现不同程度地弯曲,运动能力明显降低,而且运动神经元轴突于背侧发出,在向腹侧延伸时出现截短和分叉。人野生型NEFH m RNA与MO共注射可以降低斑马鱼胚胎的畸形比例,而且轴突发育也恢复至由背侧至腹侧规律走行,但人突变型NEFH m RNA并没有逆转胚胎的异常表型。结论该CMT家系的致病基因是NEFH(c.3090ins G),其可能通过影响神经丝正常网状结构的形成,从而导致CMT发生。
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