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5 篇 中国科学院研究生...
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帘文蛤精子超微结构的电镜观察

帘文蛤精子超微结构的电镜观察

引用

中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：周小龙董迎辉林志华浙江万里学院生物与环境学院上海海洋大学水产与生命学院

利用扫描电镜和透射电镜研究了帘文蛤(Meretix lyrata)精子的超微结构。帘文蛤的精子为典型的原生型,全长42.2±1.8μm,包括头部,中段和尾部三部分。头部为稍弯曲的狭茧形,长约2.4μm,由前端的顶体(Acrosome)和其后的细胞核(Nuclear... 详细信息

利用扫描电镜和透射电镜研究了帘文蛤(Meretix lyrata)精子的超微结构。帘文蛤的精子为典型的原生型,全长42.2±1.8μm,包括头部,中段和尾部三部分。头部为稍弯曲的狭茧形,长约2.4μm,由前端的顶体(Acrosome)和其后的细胞核(Nuclear)组成,顶体长0.5μm,呈倒"V"形,前端电子密度较小,后端电子密度较大,顶体内膜与细胞核之间有一柱状的亚顶体腔,腔内物质电子密度较低。细胞核长约1.9μm,由前到后逐渐变粗,前部直径0.6μm,后部直径1.0μm,核内含有高度浓缩的染色质,偶见染色较浅的空泡状结构存在,无核前窝,有明显核后窝(Posterior nuclear fossa)和植入窝(Implantation fossa)。中段由5个呈辐射状排列的线粒体(Mitochondria)和中央的中心粒复合体(Centriolar complex)构成,线粒体近球形,由内、外两层膜组成,内膜向腔内折叠形成极明显的褶皱嵴突;中心粒复合体由相互垂直的近端中心粒(Proximal centriole)和远端中心粒(Distal centriole)构成。尾部鞭毛长39.3±1.9μm,直径约0.22μm,由波浪状质膜(Plasma membrance)和包裹其中的轴丝(Axoneme)组成,轴丝由中央的两个单根微管和周围的9个成对微管组成。帘文蛤精子超微结构的观察有助于加深对受精机理的认识,而对帘文蛤、文蛤、斧文蛤精子超微结构的比较和分析,可为文蛤属的种类鉴别提供细胞学依据。

关键词：帘文蛤精子超微结构扫描电镜透射电镜

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企鹅珍珠贝(Pteria penguin)组织蛋白酶D的cDNA克隆、序列特征分析和应激表达研究

企鹅珍珠贝(Pteria penguin)组织蛋白酶D的cDNA克隆、序列特征分...

引用

中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：潘俐玲黄桂菊成书营王晓宁喻达辉农业部南海渔业资源开发与利用重点开放实验室中国水产科学研究院南海水产研究所上海海洋大学水产与生命学院

通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因(命名为pgCTSD)。该基因cDNA全长1,767 bp,其中5’UTR为38 bp,3’UTR为553 bp,ORF 1,176 bp,编码392个氨基酸,包括信号肽(Met-Ala)、前体域(Leu-Lys)和成... 详细信息

通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得了企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因(命名为pgCTSD)。该基因cDNA全长1,767 bp,其中5’UTR为38 bp,3’UTR为553 bp,ORF 1,176 bp,编码392个氨基酸,包括信号肽(Met-Ala)、前体域(Leu-Lys)和成熟域(Tyr-Ser)3部分,分子量为42.3 KDa,等电点为8.04。pgCTSD氨基酸序列与大珠母贝(Pinctada maxima)pmCTSD的相似性最高(79%),与其他物种的相似性在59%～75%之间。荧光定量分析表明,空白对照组中pgCTSD mRNA在闭壳肌、性腺、肝胰脏、外套膜和鳃组织中都有表达,且在闭壳肌中表达量最少,肝胰脏中最高。与试验对照组相比,LPS刺激6h后,性腺和肝胰脏显著下调,闭壳肌的表达量虽不大但增加显著,外套膜和鳃组织变化不显著;哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)刺激6h后,肝胰腺和外套膜显著下调,闭壳肌和鳃显著上调,性腺无显著变化。肝胰腺中pgCTSD对LPS和弧菌刺激的应答反应表明pgCTSD参与了免疫反应。上述结果为进一步开展pgCTSD的抗病抗逆功能研究奠定了重要基础。

关键词：企鹅珍珠贝组织蛋白酶D LPS刺激弧菌刺激组织表达模式

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湖北钉螺硫氧还蛋白过氧化物酶基因全长cDNA克隆、表达与纯化

湖北钉螺硫氧还蛋白过氧化物酶基因全长cDNA克隆、表达与纯化

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：马宪亮张仪中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室

目的克隆湖北钉螺(Oncomelania hupensis,Oh)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidases,TPx)基因全长cDNA,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白。方法从湖北钉螺体内,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增出Oh TPx基因片段,依据... 详细信息

目的克隆湖北钉螺(Oncomelania hupensis,Oh)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidases,TPx)基因全长cDNA,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白。方法从湖北钉螺体内,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增出Oh TPx基因片段,依据RACE试剂盒说明书设计3’端与5’端特异性引物,使用RACE试剂盒扩增Oh TPx基因的3’端与5’端cDNA,通过克隆测序,比对拼接出Oh TPx基因全长cDNA。构建pGEM-Teasy-OhTPx重组质粒,与pET28a表达载体双酶切(BamHⅠ,XhoⅠ)并连接,构建出重组表达质粒pET28a-Oh TPx,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,通过组蛋白标签Ni-NTA层析柱分离纯化获得重组融合蛋白。结果PCR扩增出Oh TPx基因片段为674bp,RACE试剂盒扩增比对拼接出Oh TPx基因全长cDNA为1063bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为Oh TPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为28kDa。结论获得Oh TPx基因全长cDNA,成功构建了pET28a-Oh TPx表达质粒,高效表达并纯化Oh TPx重组融合蛋白。

关键词：湖北钉螺硫氧还蛋白过氧化物酶蛋白纯化

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香港巨牡蛎与长牡蛎幼虫及稚贝表型性状研究

香港巨牡蛎与长牡蛎幼虫及稚贝表型性状研究

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：张跃环王昭萍闫喜武霍忠明于瑞海中国海洋大学水产学院教育部重点实验室大连海洋大学生命科学与技术学院

为了评估香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和长牡蛎(***)在北方沿海的早期表型性状,于2010年7月,以2009年6月在青岛繁育的两种牡蛎为材料,在大连研究了温度(Mt:22±1.0及Ht:28±1.0℃)、盐度(S:20±1.0及S:30±1... 详细信息

为了评估香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和长牡蛎(***)在北方沿海的早期表型性状,于2010年7月,以2009年6月在青岛繁育的两种牡蛎为材料,在大连研究了温度(Mt:22±1.0及Ht:28±1.0℃)、盐度(S:20±1.0及S:30±1.0)及中间育成环境(ID:室内及OD:室外)对两种牡蛎幼虫及稚贝表型性状的影响。结果表明:香港巨牡蛎壳宽显著大于长牡蛎(P<0.05),壳高及怀卵量显著小于长牡蛎(P<0.05),壳长、鲜重及壳重两者间无显著差异(P>0.05)。在温度和盐度相同情况下,长牡蛎卵径、受精率、孵化率及D形幼虫均大于香港巨牡蛎;香港巨牡蛎幼虫浮游前期生长较慢,而后快于长牡蛎。两种牡蛎幼虫存活能力在15日龄时高温组>中温组;相同温度下,香港巨牡蛎中盐组>高盐组,长牡蛎高盐组>中盐组。幼虫变态期间,较低的温度延迟了变态时间,降低了变态率,使得两种幼虫变态规格大型化。温度是影响幼虫生长、存活、变态的最主要因素,其次为盐度,交互作用几乎尚未起到作用。中间育成阶段,室外比室内培育效果更好,且香港巨牡蛎稚贝壳高在60日龄以后显著大于长牡蛎(P<0.05),环境是影响稚贝生长的最主要因素;无论室内还是室外两种牡蛎稚贝的存活率均在90%以上,且各实验组间无显著差异(P>0.05)。本文以长牡蛎作为对照组,在北方沿海在不同温度、盐度及其育成环境下首次评估了香港巨牡蛎的早期表型性状,为其移植、驯化及其南贝北繁,北苗南养及其资源恢复和维护其生物多样性提供了科学依据。

关键词：香港巨牡蛎长牡蛎温度盐度表型性状

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新型灭钉螺药物氯代水杨胺应用研究

新型灭钉螺药物氯代水杨胺应用研究

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：徐兴建元艺魏凤华李桂玲陈茹娟周正平魏望远郭见多陈更新戴建荣邱东川陈琳董兴齐李炳桂陈红根刘红云湖北省疾病预防控制中心华中科技大学四川省化学工业研究设计院湖南省血吸虫病防治所安徽省血吸虫病防治研究所安徽省池州市贵池区血防站江苏省血吸虫病防治研究所四川省疾病预防控制中心云南省地方病防治所云南省鹤庆县血吸虫病防治站江西省寄生虫病防治研究所

针对当前化学灭螺药物品种单一、价格昂贵等困境,在国家"863计划"资助下,由湖北省疾病预防控制中心血吸虫病防治研究所承担的科技部863计划课题《新型灭螺药氯代水杨胺开发与应用研究》项目,在合作单位华中科技大学同济医学... 详细信息

针对当前化学灭螺药物品种单一、价格昂贵等困境,在国家"863计划"资助下,由湖北省疾病预防控制中心血吸虫病防治研究所承担的科技部863计划课题《新型灭螺药氯代水杨胺开发与应用研究》项目,在合作单位华中科技大学同济医学院的密切合作下,通过实验室和现场反复实验以及农业部指定的灭螺药效鉴定资质单位中国疾病预防控制中心寄生虫病所等单位的检测,证实10%氯代水杨胺可湿性粉剂具有很好的杀灭钉螺效果。

关键词：新型灭螺剂氯代水杨胺应用研究

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基于形态学和DNA序列鉴定中国江珧(Atrina chinensis)

基于形态学和DNA序列鉴定中国江珧(Atrina chinensis)

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：薛东秀王海艳张涛张素萍徐凤山中国科学院海洋研究所中国科学院研究生院

江珧科种类在不同生境中形态变异极大,因此,基于形态学特征进行物种分类存在较大分歧。中国南海有一种俗称为"沙插"的江珧,本文通过形态特征鉴定为中国江珧(Atrinachinensis Deshayes,1841)。然而,它也被认为是栉江珧(*** Lin... 详细信息

江珧科种类在不同生境中形态变异极大,因此,基于形态学特征进行物种分类存在较大分歧。中国南海有一种俗称为"沙插"的江珧,本文通过形态特征鉴定为中国江珧(Atrinachinensis Deshayes,1841)。然而,它也被认为是栉江珧(*** Linnaeus,1767)的同物异名。为阐明中国江珧的分类地位,本文分别从中国沿海9个自然海域(辽宁大连獐子岛、山东威海刘公岛、山东青岛红岛、江苏连云港、福建漳州东山、广东汕头南澳岛、广东阳江闸坡、广西北海沙田,广西北海涠洲岛)采集样本,对其进行形态学比较(单因子方差分析(ANOVA),Tukey多重比较)和DNA序列(28S,mtCOI和16S rRNA)分析。结果表明:中国江珧与栉江珧四个形态学参数(壳长/壳高、壳长/壳宽、壳高/壳宽和后闭壳肌的相对大小)中,仅有后闭壳肌的相对大小在两种江珧间存在显著性差异。三种DNA序列的分析结果也基本一致,即中国江珧与栉江珧的遗传距离达到了种间水平(28S:0.017;COI:0.204～0.209;16S:0.125～0.133)。所构建的系统发育树表明中国江珧与旗江珧(Atrinavexillum)为姐妹群,而与栉江珧互为独立群。这两个种形态区别主要在于中国江珧贝壳近腹缘生长线褶起明显,因此,我们认为中国江珧(Atrina chinensis)为一个独立种,而不是栉江珧的同物异名。

关键词：中国江珧栉江珧形态变异 DNA序列

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蛤仔(Ruditapes Philippinarum)不同壳色品系遗传多样性分析

蛤仔(Ruditapes Philippinarum)不同壳色品系遗传多样性分析

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：杨霏闫喜武秦艳杰王琳楠梁健桑士田张国范大连海洋大学水产与生命学院

蛤仔是我国四大养殖贝类之一,其壳面具有不同的颜色和花纹,已有研究表明蛤仔的壳色和花纹均可稳定遗传给后代,且某些壳色品系具有优良的经济性状。为了进一步阐明不同蛤仔壳色品系的遗传结构和差异,我们选用33对微卫星引物对自然群体中... 详细信息

蛤仔是我国四大养殖贝类之一,其壳面具有不同的颜色和花纹,已有研究表明蛤仔的壳色和花纹均可稳定遗传给后代,且某些壳色品系具有优良的经济性状。为了进一步阐明不同蛤仔壳色品系的遗传结构和差异,我们选用33对微卫星引物对自然群体中的9个壳色品系(两道白、两道红、白蛤、海洋橙、墨蛤、斑马蛤、波纹蛤、奶牛蛤、自然杂色)进行了遗传多样性分析,并对其等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne),观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He),品系间遗传距离(D)等参数进行了计算。每个品系中随机选取36个个体进行分子标记分析。所选的33对微卫星引物中,29对引物来自转录区(EST),4对来自转录间隔区。结果发现,共22对引物具有多态性,在9个壳色品系中共检测到140个等位基因,每个位点的等位基因数为3-11个不等。9个壳色品系的平均等位基因数为3.8182-4.1818,平均有效等位基因数为1.9132-2.2578,平均Shannon’s信息指数(I)为0.7318-0.8772,平均观测杂合度为0.2243-0.2697,平均期望杂合度为0.3973-0.4726,Nei指数为0.3916-0.4658(表1)。结果表明9个壳色品系的蛤仔遗传分化不明显(表2),推测这些壳色品系从自然群体中分离隔离培养时间较短,彼此尚未产生明显的遗传差异。遗传聚类分析发现,具有优良经济性状的品系,如生长快的白蛤和抗逆性强的斑马蛤,遗传距离相对较远(图1)。提示我们可以通过两个品系之间的杂交及后续选育,获得生长快抗逆性强的品系,进行多性状复合、定向聚合育种,为蛤仔新品种培育奠定基础。

关键词：蛤仔壳色微卫星遗传多样性

来源：评论

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多种海水养殖贝类病原共检芯片的设计及初步应用

多种海水养殖贝类病原共检芯片的设计及初步应用

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：李晨王崇明曲朋黄倢农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所水产学院中国海洋大学

病毒、细菌、原生动物等引起的病害是贝类养殖业健康发展的主要威胁,迫切需要快速、稳定、准确、高通量的检测手段对疾病进行提前预警及诊断。随着基因芯片技术的发展及生物信息学数据库的完善,将基因芯片技术应用于贝类病原的检测成为... 详细信息

病毒、细菌、原生动物等引起的病害是贝类养殖业健康发展的主要威胁,迫切需要快速、稳定、准确、高通量的检测手段对疾病进行提前预警及诊断。随着基因芯片技术的发展及生物信息学数据库的完善,将基因芯片技术应用于贝类病原的检测成为未来的贝类病害诊断技术的发展趋势。本文选择鳗弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、假交替单胞菌、假单胞杆菌、气单胞菌等16种常见病原细菌,栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(AVNV)等3种贝类疱疹病毒,以及派金虫等5种贝类病原性原生动物等作为研究对象,筛选这些病原的致病力相关特征基因,利用NCBI同源性检索工具及生物信息学专业分析软件,设计出正向和反向特异性引物组序列44组;再以该引物组引导扩增的目的序列为模板,设计出57mer的固定探针序列。以同样方式设计共检芯片上质控系统各基因的引物及探针序列4组;组合成为8×7的方阵,可平行检测24种海水养殖贝类病原的共检芯片。合成了上述引物(其中1条5’-端带HEX标记)及探针,用这些引物与本实验室分离保存的病原基因组DNA模板或克隆的特征基因进行PCR,得到带有荧光标记的目的产物,再与包含56组固定探针的基因芯片杂交,经自动芯片扫描仪读取,结果表明,上述基因芯片对鳗弧菌、溶藻胶弧菌、副溶血弧菌、亮弧菌、哈维氏弧菌、假交替单胞菌、气单胞菌、AVNV、栉孔扇贝、小牛胸腺总基因组DNA,以及创伤弧菌和河流弧菌特征基因克隆序列检测的特异性很强,且与其他病原的引物及探针序列没有交叉反应,可以实现对上述病原生物的同步检测,其余病原的检测尚需后续研究中进一步验证。

关键词：贝类病原共检芯片设计应用

来源：评论

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沉积物暴露条件下文蛤(Meretrix meretrix)对重金属Cu、Pb的富集动力学研究

沉积物暴露条件下文蛤(Meretrix meretrix)对重金属Cu、Pb的富集...

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：李磊沈新强王云龙沈盎绿黄厚见国家海洋局第二海洋研究所中国水产科学研究院东海水产研究所农业部海洋与河口渔业资源及生态重点开放实验室上海海洋大学

通过构建海水-底泥-生物体体系,应用半静态双箱动力学模型室内模拟了沉积物暴露条件下文蛤(Meretrix meretrix)对Cu、Pb的生物富集实验,通过对富集与排出过程中文蛤体内重金属污染物的动态监测和对富集与排出过程监测结果的非线性拟合,... 详细信息

通过构建海水-底泥-生物体体系,应用半静态双箱动力学模型室内模拟了沉积物暴露条件下文蛤(Meretrix meretrix)对Cu、Pb的生物富集实验,通过对富集与排出过程中文蛤体内重金属污染物的动态监测和对富集与排出过程监测结果的非线性拟合,得到了文蛤富集重金属的吸收速率常数K、排出速率常数K、生物富集因子BCF、生物学半衰期B等动力学参数。拟合结果得到的Cu、Pb各动力学参数分别为,K为2.73-58.33;K为0.04-0.07;C为8.40-35.96;BCF为53.36.1545.05;B为10.42-18.36。对模型的拟合优度检验结果显示,沉积物暴露条件下文蛤对重金属Cu、Pb的生物富集数据符合双箱模型,模型的拟合优度良好。比较结果得出:吸收速率常数K及生物富集因子BCF均随着外部水体金属暴露浓度的增大而减小;C均随着外部水体金属暴露浓度的增大而增大;文蛤对Cu富集能力大于Pb;Cu在文蛤体内的生物学半衰期B大于Pb;理论平衡状态下生物体内Cu、Pb的含量C随着外部水体中金属暴露浓度的增大而增大,且呈显著正相关,实验结果表明沉积物暴露条件下双箱动力学模型在一定条件下是可以应用于文蛤的富集动力学研究的,仍需要进一步开展不同条件下实验研究分析。

关键词：文蛤重金属生物富集动力学沉积物暴露

来源：评论

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吕四渔场海区大竹蛏的繁育与生长

吕四渔场海区大竹蛏的繁育与生长

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表...第十五次学术讨论会

作者：陈爱华吴杨平姚国兴张志伟江苏省海洋水产研究所

2007～2011年间在江苏省海洋水产研究所省文蛤良种场对采自吕四渔场海域的大竹蛏开展了繁育与生长特性研究。结果表明,吕四渔场海区大竹蛏性腺发育以1年为1个周期,可分为增殖期、生长期、成熟期、排放期、休止期5个阶段,繁殖季节为5～7... 详细信息

2007～2011年间在江苏省海洋水产研究所省文蛤良种场对采自吕四渔场海域的大竹蛏开展了繁育与生长特性研究。结果表明,吕四渔场海区大竹蛏性腺发育以1年为1个周期,可分为增殖期、生长期、成熟期、排放期、休止期5个阶段,繁殖季节为5～7月份。肥满度随水温变化呈季节性变化,最大值出现在9月份,为102.94%;最低值出现在7月份,为68.30%。在工厂化育苗车间采用pH升高+流水刺激法,5年间催产25批次,总产卵量为43.86×10cell,平均孵化率为55.14±3.34%。共获得平均壳长6.04±1.38mm的稚贝4.212×10ind,育苗成活率为26.20±6.86%。在水温19.5～24.5℃条件下,D形幼虫经5～10d生长,发育变态为附着稚贝;经30d培育,稚贝壳长生长到5mm;经60d培育,稚贝壳长生长到1cm。大竹蛏生长与温度关系曲线显示,12月～3月份水温在13.7℃以下时大竹蛏生长滞缓,其余时间生长明显,平均月生长量为4.723 mm。连续2年对大竹蛏的周年生长进行跟踪测定,发现大竹蛏养殖到第二年年末壳长已达69.66mm,初步具备商品规格。稚贝生长过程中壳长与粒重的回归关系式为y=0.0669x,(R=0.9919)。研究结果为大竹蛏繁育技术的工艺化和人工养殖的开展积累数据,具有重要意义。

关键词：大竹蛏繁育生长

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