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马氏珠母贝生长性状QTL鉴定及基因型选择效应研究

马氏珠母贝生长性状QTL鉴定及基因型选择效应研究

引用

中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：韦国建刘文广林坚士何毛贤中国科学院南海海洋研究所

分子标记辅助选择(MAS)通过与目标性状紧密连锁的分子标记进行选择从而达到对目标性状的选择,与传统的育种方法相比,具有明显的优越性。马氏珠母贝是世界上用来生产海水珍珠的主要贝类,具有极高的经济价值。目前,马氏珠母贝的育种方法... 详细信息

分子标记辅助选择(MAS)通过与目标性状紧密连锁的分子标记进行选择从而达到对目标性状的选择,与传统的育种方法相比,具有明显的优越性。马氏珠母贝是世界上用来生产海水珍珠的主要贝类,具有极高的经济价值。目前,马氏珠母贝的育种方法还是主要采用传统的选择育种。为了提高其育种效率,有必要在马氏珠母贝中开展MAS育种。本文以遗传作图获得的QTL标记为基础,利用ARMS-PCR和MALDI-TOFMS技术,对QTL标记进行初步验证,然后利用已验证的标记对亲本的基因型进行分型,建立不同的基因型组配,剖析QTL实际的遗传效应。主要结果如下:1.对部分QTL标记在南科1号G3群体中进行了初步验证,发现QTL298299标记与软体部重和闭壳肌重显著相关,优势基因型为GG;QTL411871标记与壳长、铰合线、软体部重和闭壳肌重显著相关,优势基因型为AT。对QTLm59、QTL154165标记在南科1号G4群体和湛江养殖群体中进行了初步验证,发现QTLm59标记在这两个群体中均与壳高、壳长、壳宽和总重显著相关,优势基因型为GT;QTL154165标记在G4群体中与壳宽显著相关,而在湛江养殖群体中与壳高显著相关,优势基因型为AG。利用这两个标记SNP构建二倍型,C1(AAGT)在湛江养殖群体中及D1(AGGT)和D2(AAGT)在G4群体中对马氏珠母贝生长最为有利。2.利用已验证的QTL411871标记和SNP4375标记构建基因型组配:AAAT×AAAT;GGTT×GGAT。对其遗传效应进行分析,发现QTL411871标记优势基因型组配后其优势基因型的遗传效应小,SNP4375标记GG优势基因型组配后的遗传效应大,这2个标记优势基因型对生长性状的影响具有聚合效应。

关键词：马氏珠母贝数量性状位点遗传效应分子标记辅助选择

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基于多组学分析的珍珠贝矿化及其调控研究

基于多组学分析的珍珠贝矿化及其调控研究

引用

中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：杜晓东广东海洋大学

贝壳和珍珠是典型的生物矿化产物。生物矿化是自然界中广泛存在的一种生命现象。马氏珠母贝Pinctadafucatamartensii是研究生物矿化的良好材料,同时也是我国海水珍珠产业的最主要经济物种。作为本团队长期的研究对象,本研究以组装获得... 详细信息

贝壳和珍珠是典型的生物矿化产物。生物矿化是自然界中广泛存在的一种生命现象。马氏珠母贝Pinctadafucatamartensii是研究生物矿化的良好材料,同时也是我国海水珍珠产业的最主要经济物种。作为本团队长期的研究对象,本研究以组装获得的马氏珠母贝基因组精细图为参考,依托于高通量测序,通过比较基因组、蛋白质组及转录组等多组学数据关联分析结合经典实验学验证,着力于研究珍珠贝贝壳及珍珠形成、调控机制及生物矿化进化过程。基因组进化分析发现几丁质合成酶(CHS)、几丁质酶(Chitinase)及β-氮-氨基己糖苷酶(HEX)家族的扩张,与几丁质为核心的贝壳有机框架的形成密切相关。与糖胺聚糖合成相关的磺基转移酶(CHST)、类纤连蛋白(FNL)及类胶原的含有VWA domain的蛋白家族(VWAP)的扩张以及具有氨基酸偏好性和重复单元的特有基因家族的出现均在贝壳及珍珠层的形成发挥重要作用。利用原位杂交和RNA干扰技术等进一步证明CHSTs表达发生下调时,会引起外套膜外液中酸性粘多糖含量降低,影响珍珠层形成;贝壳中的VWAPs、CHS以及马氏珠母贝特有的chitin-binding protein、MRNP、PRMP、RRMP、GRMP、SRMP等基因表达受到抑制时,会导致贝壳珍珠层或棱柱层结晶发生紊乱。以上发现完善了珍珠层生物矿化模型,强调了基质蛋白家族的扩张和特有基因家族的出现与珍珠质的形态进化密切相关。此外,不同于生物矿化以几丁质为模板或以胶原为模板的独立进化理论,本研究发现贝壳矿化有机基质中几丁质与胶原共存,以及糖胺聚糖、类纤连蛋白和类胶原等蛋白家族在脊椎动物和无脊椎动物矿化中的作用,均提示生物矿化共祖的可能。贝壳及珍珠的生物矿化过程受多种因子调控。本课题组发现非编码RNA在其中发挥重要作用。通过马氏珠母贝外套膜组织mi RNA转录组测序,获得189条保守mi RNA和79条新的mi RNA。利用荧光定量PCR、活体过表达及双荧光素酶报告检测系统等实验方法证明了miR-2305、let-7、miR-9a、miR-10a-3p、miR-124等mi RNAs通过调控Pif、pearlin、CHST等矿化基因或NPY、AchR等调控因子的表达,参与贝壳生物矿化过程。

关键词：马氏珠母贝高通量测序生物矿化基质蛋白 miRNA

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贝类发育关键事件的差异蛋白质组学研究

贝类发育关键事件的差异蛋白质组学研究

引用

中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：刘保忠中国科学院海洋研究所

差异蛋白质组学是鉴定特定生物学过程中关键蛋白质的高效研究策略。我们以重要的模式贝类长牡蛎(Crassostreagigas)为研究对象,系统研究了其个体发育中关键时间节点的差异蛋白质组学,涵盖了受精、幼虫贝壳发生及附着变态等主要的贝类发... 详细信息

差异蛋白质组学是鉴定特定生物学过程中关键蛋白质的高效研究策略。我们以重要的模式贝类长牡蛎(Crassostreagigas)为研究对象,系统研究了其个体发育中关键时间节点的差异蛋白质组学,涵盖了受精、幼虫贝壳发生及附着变态等主要的贝类发育过程。从中鉴定了百余种差异表达蛋白,并进行了功能验证工作。在精子蛋白质组中鉴定到多个热休克蛋白家族成员,并对其蛋白进行了定位。HSP60主要存在于精子线粒体中,可能和线粒体蛋白的正确折叠相关,HSP70蛋白则广泛存在于精子细胞膜上和线粒体内,可能参与了促进蛋白折叠和精卵识别等过程。卵细胞蛋白质组中存在大量的由卵黄蛋白原(Vg)衍生来的蛋白质,它们除供应能量外可能还参与了抗微生物感染等功能。在受精过程中,多个蛋白的表达和定位发生了变化,可能参与了精卵识别、卵子激活、防止多精受精、抗氧化胁迫以及启动早期胚胎发育等过程。例如两种蛋白PSMA6及Apextrin分别定位于卵裂球间及卵裂球外部的细胞膜上,可能参与了早期卵裂球的极性决定;一种甲基化相关蛋白SAHH在发育早期转运至细胞核中,可能参与了表观遗传信息的调节。在从担轮幼虫到早期面盘幼虫的发育过程中,多种参与肌肉和神经发育的蛋白表达出现变化,反映了这两种系统的快速发育。同时,"质控蛋白"系统的多个成员出现在差异蛋白列表中,反映了蛋白的正确合成和折叠对个体正常发育的重要性。两种差异表达基因表达于贝壳发育区,提示其参与了幼虫初生贝壳发育的调节。在幼虫附着变态过程中,大量的细胞外基质蛋白(ECM)差异表达,反映了多种幼虫器官如面盘、神经系统、足、鳃等在短期内快速重构(re-modeling)的过程。一些抗氧化蛋白则被幼虫用于对抗变态过程中产生的强氧化压力。此外,从差异蛋白中还发现了一些信号通路相关分子,包括TGF-β及Wnt信号通路,提示这两类信号通路参与调节了贝类幼虫变态过程。通过上述研究,我们从蛋白水平对贝类繁殖发育关键事件进行了全景式的描述,鉴定到的差异蛋白为深入解析贝类受精、初生壳发生及变态过程的分子机制提供了重要的研究基础。

关键词：长牡蛎受精贝壳变态蛋白组

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海捕文蛤与池塘文蛤体内不同组织的重金属富集特性及安全评价

海捕文蛤与池塘文蛤体内不同组织的重金属富集特性及安全评价

引用

中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：孙宇赵永超许程林陈玉生李多吉红九钟非江苏省海洋水产研究所南通大学

为研究不同环境下,文蛤体内不同组织的重金属富集特征,测定了海捕文蛤与如东东凌池塘文蛤内脏团、足、闭壳肌、外套膜4个干质量组织中的Zn、Cu、Pb、Cd、Ni、Hg这6中重金属含量。结果表明,海捕文蛤4个组织中足和外套膜是重金属选择性富... 详细信息

为研究不同环境下,文蛤体内不同组织的重金属富集特征,测定了海捕文蛤与如东东凌池塘文蛤内脏团、足、闭壳肌、外套膜4个干质量组织中的Zn、Cu、Pb、Cd、Ni、Hg这6中重金属含量。结果表明,海捕文蛤4个组织中足和外套膜是重金属选择性富集的主要器官,Zn、Ni、Cd在4种组织中以足的含量最高,分别为86.425mg/Kg、34.475mg/Kg、0.756 mg/Kg,与其余组织均有显著差异(P<0.05)。而Cu、Pb在外套膜中含量最高,分别为29.970mg/Kg、0.490 mg/Kg,与其余组织均有显著差异(P<0.05),Zn、Ni、Hg在外套膜中含量最低,分别为46.080 mg/Kg、9.035 mg/Kg、0.014 mg/Kg,与其余组织均有显著差异(P<0.05)。池塘文蛤4个组织中足和外套膜是重金属选择性富集的主要器官。Zn、Cu、Hg在足中含量最高,分别为58.870 mg/Kg、29.470 mg/Kg、0.081 mg/Kg,与其余组织均有显著差异(P<0.05)。而Pb、Ni在外套膜中含量最高,分别为0.190 mg/Kg、14.245 mg/Kg,与其余组织均有显著差异(P<0.05)。6种金属中,海捕文蛤和池塘文蛤Zn在4种组织中的含量均为最高,数值范围分别为46.080 mg/Kg—86.425 mg/Kg、14.570 mg/Kg—58.870 mg/Kg。Cu含量在海捕文蛤和池塘文蛤均仅次之,数值范围分别为6.215 mg/Kg—29.970 mg/Kg、2.430 mg/Kg—29.470mg/Kg。Hg的含量在海捕文蛤和池塘文蛤不同组织中含量最低,数值范围分别为0.014mg/Kg—0.057 mg/Kg、0.035 mg/Kg—0.081 mg/Kg。海捕文蛤除外套膜外,Zn含量均为三级标准。内脏团、足、闭壳肌Cu含量均为二级标准以上,外套膜为三级标准。足的Ni含量为超三级标准,属轻度污染。毒性较大的Pb、Cd、Hg为二级标准以上,均未超标。池塘文蛤除内脏团外,Zn含量均为三级标准。Cu含量除足外,均为二级标准以上。闭壳肌、外套膜属三级标准。毒性较大的Pb、Cd、Hg为二级标准以上,均未超标。

关键词：文蛤组织重金属污染评价

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长牡蛎效应caspase-1的自激活及LPS结合活性的研究

长牡蛎效应caspase-1的自激活及LPS结合活性的研究

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：卢光侠于子超鹿蒙蒙刘冬杨王玲玲宋林生大连海洋大学辽宁省海洋动物免疫学与疫病防控重点实验室青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室

效应caspases(即含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶)可以通过切割多结构和修复蛋白来协调凋亡的执行阶段,在动物凋亡途径和免疫防御中发挥重要作用。开展有关长牡蛎caspase家族自激活机制和蛋白功能的研究不仅能够深入地了解长牡蛎的免疫... 详细信息

效应caspases(即含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶)可以通过切割多结构和修复蛋白来协调凋亡的执行阶段,在动物凋亡途径和免疫防御中发挥重要作用。开展有关长牡蛎caspase家族自激活机制和蛋白功能的研究不仅能够深入地了解长牡蛎的免疫防御机制,同时对于开发新的贝类病害防控策略也具有重要的参考价值。本研究从长牡蛎(Crassostrea gigas)中鉴定得到一个caspase-1基因,其含有典型的CASc结构域,全长主要由一个小亚基(p10)和含有酶活性位点QACRG的大亚基(p20)组成。氨基酸序列比对及聚类分析显示,Cg Caspase-1与人类和小鼠等其他物种的caspase-3/7相似性最高,最高相似性为40%-50%。酶活及抑制剂实验表明,Cg Caspase-1及其C端(Lys57-Lys306)具有caspase-3和caspase-3/7的活性且能被caspase-3/7特异性抑制剂和caspases家族蛋白酶泛抑制剂显著抑制,而Cg Caspase-1的N端(Met1-His56)不显示caspase活性,表明Cg Caspase-1是脊椎动物效应caspase-3/7的同源物,且依赖于CASc结构发挥caspase酶活作用(图1)。Cg Caspase-1酶原在原核系统重组表达过程中被切割成p20p10,p20和p10,并且Cg Caspase-1的C端也被切割成p20和p10,表明Cg Caspase-1在原核表达系统中通过水解切割而发生自激活(图2)。酶联免疫吸附反应(ELISA)实验表明,Cg Caspase-1及其C端都对脂多糖(LPS)有结合活性,而N端没有(图3)。表明Cg Caspase-1依赖于CASc结构域,可作为LPS的受体。Cg Caspase-1基因m RNA广泛表达于各个组织,且鳃和血淋巴细胞中表达最高。CgCaspase-1蛋白主要分布在血细胞的细胞质中。综上所述,Cg Caspase-1是脊椎动物效应caspase-3/7的同源物,可以在原核表达系统中通过水解切割而发生自激活,且依赖于CASc结构域能在牡蛎的先天免疫应答中发挥caspase活性和LPS结合活性。

关键词：长牡蛎 Caspase-1 自激活大亚基和小亚基 LPS识别受体

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基于多元统计分析的渔山列岛潮间带软体动物群落结构和次级生产力时空比较

基于多元统计分析的渔山列岛潮间带软体动物群落结构和次级生产力...

引用

中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：徐鹏刘好真刘懂焦海峰王一农尤仲杰宁波大学海洋学院宁波市海洋与渔业研究院

渔山列岛于2008年成为国家级海洋生态保护区,为了解渔山列岛保护区内潮间带软体动物次级生产力的时空变化。于1982年和2010年的3个季节（春、夏、冬）在渔山列岛对潮间带5个断面进行软体动物调查,采用多元统计分析软体动物时空差异,以B... 详细信息

渔山列岛于2008年成为国家级海洋生态保护区,为了解渔山列岛保护区内潮间带软体动物次级生产力的时空变化。于1982年和2010年的3个季节（春、夏、冬）在渔山列岛对潮间带5个断面进行软体动物调查,采用多元统计分析软体动物时空差异,以Brey经验公式计算分析软体动物次级生产力（P值,P/B值）。结果表明,年际间物种食性结构发生了明显的改变,1982年潮间带软体动物对次级生产力贡献率最大的物种有单齿螺（Monodonta labio）、锈凹螺（Chlorostoma rustica）,占软体动物总次级生产力的42.88%,2010年潮间带软体动物对次级生产力贡献率最大的物种有覆瓦小蛇螺（Serpulorbis imbricata）、条纹隔贻贝（Septifer virgatus）,占软体动物总次级生产力的75.96%。1982年,年均栖息密度为2758ind·m,年均生物量为2100.26g·m,年均次级生产力为240.04g·m·a,年均P/B值为0.63 a;2010年,年均栖息密度为699ind·m,年均生物量为1101.85g·m,年均次级生产力为94.82g·m·a,年均P/B值为0.55a。多因素方差分析表明软体动物次级生产力年际间差异显著（F=5.761,P<0.05）,季节间和潮位间差异都不显著（F=0.135,P>0.05;F=2.076,P>0.05）,P/B的值较低,表明该海域软体动物世代更替速度较慢,2010年的P/B值(0.55a)低于1982年的P/B值(0.63a),表明近30年来群落结构受到影响。总体来说,2010年相较于1982年在物种总种类数上没有大的差别,但物种组成发生了很大改变。此次调查,发现次级生产力与生物量和栖息密度有着密切的关系。2010年的年均次级生产力小于1982年的年均次级生产力,且2010年的年均P/B值小于1982年的年均P/B值。故随着时间的推移,表明近30年来渔山列岛潮间带软体动物生存环境受到比较大的影响,为亟需开展渔山列岛海洋生态环境保护提供重要的科学依据,并给相关部门保护海洋生态环境提供了警示意义。

关键词：潮间带软体动物次级生产力 P/B的值渔山列岛

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内源性大麻素在翡翠贻贝附着中的作用研究

内源性大麻素在翡翠贻贝附着中的作用研究

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：冯丹青盛彦青陈思羽方倩云苏培柯才焕厦门大学海洋与地球学院

内源性大麻素是生物体自身合成和分泌的一些脂类化合物,与外源性大麻素同样作用于大麻素受体,产生重要的生理效应。研究较多的内源性大麻素包括N-花生四烯酰乙醇胺(AEA)、2-花生四烯酰甘油酯(2-AG)以及两种类内源性大麻素油酰乙醇胺(OEA... 详细信息

内源性大麻素是生物体自身合成和分泌的一些脂类化合物,与外源性大麻素同样作用于大麻素受体,产生重要的生理效应。研究较多的内源性大麻素包括N-花生四烯酰乙醇胺(AEA)、2-花生四烯酰甘油酯(2-AG)以及两种类内源性大麻素油酰乙醇胺(OEA)、棕榈酰乙醇胺(PEA)。目前已在几种海洋贝类体内发现存在上述物质,但关于内源性大麻素在贝类中所起的生理作用研究很少。本文检测了AEA、2-AG、OEA和PEA对翡翠贻贝(Perna viridis)附着的影响,发现AEA和2-AG显著抑制其附着,半有效抑制浓度(EC50)分别为47.34和79.37μM,另外大麻素受体激动剂AM1241和HU308也抑制其附着,而大麻素受体拮抗剂SR141716A、AM251和SR144528没有表现出明显的竞争性抑制作用,说明AEA、2-AG可能通过翡翠贻贝的大麻素受体对其附着产生作用,但该受体不同于脊椎动物的大麻素受体。另发现,在AEA作用下,翡翠贻贝附着蛋白FP1V-1的表达受到显著抑制;在2-AG作用下,5种附着蛋白FP1V-1、FP1V-2、FP2、FP4V-1和FP4V-2的表达均受到抑制。本文进一步对海区采集的翡翠贻贝进行脂类提取和LC-MS/MS分析,发现其体内存在AEA、2-AG、OEA和PEA,且不附着的翡翠贻贝中2-AG的含量要显著高于附着个体,说明天然状态下翡翠贻贝的附着可能受到2-AG的调控。此外,对不附着和附着的翡翠贻贝进行了转录组学分析,发现翡翠贻贝中确实存在类大麻素受体基因;且不附着组中2-AG合成酶表达量显著上升,2-AG降解酶表达量则显著降低,这可解释不附着的翡翠贻贝中2-AG含量显著升高的现象;通过对基因差异表达的分析,推测2-AG可能通过影响了细胞能量的代谢、神经兴奋的传递或直接影响附着蛋白的表达从而抑制翡翠贻贝的附着,具体作用机制有待进一步探索和验证。本文首次在翡翠贻贝中发现内源性大麻素、内源性大麻素合成酶和降解酶以及类大麻素受体基因,表明翡翠贻贝中存在内源性大麻素系统,且该系统可能参与了翡翠贻贝附着的调控,为研究贝类的附着机理提供一种新思路,并为海洋污损贝类防除提供重要参考。

关键词：内源性大麻素翡翠贻贝附着污损贝类

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缢蛏多巴胺受体基因及其在损伤修复中的作用

缢蛏多巴胺受体基因及其在损伤修复中的作用

引用

中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：杜蕴超谢淑媚何圣耀牛东红李家乐上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心

多巴胺受体(Dopamine receptor)作为生物体中重要的神经递质受体,在生物体的生长、发育、代谢等多个生理过程中都发挥着重要的功能。本研究从缢蛏(Sinonovacula constricta)转录组文库中筛选获得多巴胺受体基因的部分片段,结合RACE技术... 详细信息

多巴胺受体(Dopamine receptor)作为生物体中重要的神经递质受体,在生物体的生长、发育、代谢等多个生理过程中都发挥着重要的功能。本研究从缢蛏(Sinonovacula constricta)转录组文库中筛选获得多巴胺受体基因的部分片段,结合RACE技术和Touch Down PCR技术,获得缢蛏多巴胺受体基因c DNA全长,包含两个可变剪接体,命名为ScDopR2a和ScDopR2b,长度分别为1824bp和2758bp。两个剪接体均包含相同的5’UTR(24bp)和开放阅读框(1440bp),共编码479个氨基酸残基。但是两个剪接体的3’UTR长度不同,分别为360bp和1294bp,其中ScDopR2b在poly A尾前插入936bp。在同源的ORF区设计引物,采用real-timePCR分析多巴胺受体基因在不同组织中的表达特征,结果表明多巴胺受体基因在水管、鳃、斧足的表达量显著高于其他组织。在该基因序列3’UTR插入片段区域设计特异引物检测Sc DopR2b的组织表达情况,结果表明在水管、鳃、斧足的表达量仍高于其他组织,表达趋势与ORF区大致相同。进一步设计缢蛏组织损伤实验,对进水管前端进行损伤处理,在处理后的第4h、8h、12h、24h、48h、60h和72h取样,荧光定量检测结果显示,在12和48小时呈上调,在8、24和72小时下调,且ScDopR2b表达趋势与同源区表达模式大致相同。研究结果表明多巴胺受体参与了损伤修复过程,其表达特征可能与多巴胺作为补偿性神经递质的作用有关。

关键词：缢蛏多巴胺受体可变剪接损伤修复

来源：评论

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方斑东风螺“急性死亡症”病原及其毒力基因研究

方斑东风螺“急性死亡症”病原及其毒力基因研究

引用

中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：刘晓靖王瑞旋凌慧姚托王江勇中国水产科学研究院南海水产研究所广东省渔业环境重点实验室农业部南海渔业资源开发利用重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为明确引起方斑东风螺(Babylonia areolata)"急性死亡症"的病原及相关的毒力因子,对"急性死亡症"疫区的方斑东风螺进行了病原分离纯化鉴定、人工感染试验等,经鉴定为塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)。本实验以4株分离... 详细信息

为明确引起方斑东风螺(Babylonia areolata)"急性死亡症"的病原及相关的毒力因子,对"急性死亡症"疫区的方斑东风螺进行了病原分离纯化鉴定、人工感染试验等,经鉴定为塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)。本实验以4株分离自发病方斑东风螺且具有不同程度毒力的塔氏弧菌及东风螺组织样品为研究对象,根据半数致死剂量(LD50)确定菌株毒力大小依次为:BBXP1>FBC1>FB20>FB13,针对17种弧菌毒力相关基因进行了检测分析,结果显示强毒株BBXP1、FBC1中的毒力基因检出率最高,携带12种毒力基因,弱毒株FB13毒力基因检出率最低,携带7种,表明弧菌的致病性可能与其携带毒力基因的数量具有相关性。其中,不耐热溶血毒素基因tlh、胞外碱性丝氨酸蛋白酶基因asp、金属蛋白酶基因vtmp、几丁质外切酶基因chi36、锌金属蛋白酶基因vtpA、塔氏弧菌溶血素基因vthA在4株塔氏弧菌中检测均呈阳性,且仅在患有"急性死亡症"的东风螺组织样品中检测出,在健康的组织样品中未检测出。进一步通过实时荧光定量PCR方法检测此6种毒力基因在4株不同毒力的塔氏弧菌中的m RNA表达差异,结果显示,asp、vtp A的m RNA表达量与弧菌的毒力呈正相关,随着塔氏弧菌致病性的增强,vtpA、asp的m RNA表达量呈上升趋势,且菌株的半致死剂量LD50与相对表达量具有显著相关性(r2=0.933,0.948;P<0.05);溶血素vth A的表达量则与弧菌的致病性呈现负相关,表明病原弧菌的致病性与毒力基因的表达密切相关。

关键词：方斑东风螺急性死亡症塔氏弧菌毒力基因

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缢蛏去不饱和酶（FAD5、FAD6）及延长酶（ELOVL5）基因的克隆、组织表达和功能研究

缢蛏去不饱和酶（FAD5、FAD6）及延长酶（ELOVL5）基因的克隆、组...

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中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第十八次学术讨论会

作者：冉照收廖凯徐继林宁波大学海洋学院

N-3长链多不饱和脂肪(n-3 LC-PUFA)在人类神经发育、免疫应答和心血管疾病的治疗中起着重要作用。贝类因富含n-3 LC-PUFA,是人类n-3 LC-PUFA的重要来源。因此,研究贝类n-3 LC-PUFA的合成及代谢途径对提高贝类营养品质具有重要的指导意... 详细信息

N-3长链多不饱和脂肪(n-3 LC-PUFA)在人类神经发育、免疫应答和心血管疾病的治疗中起着重要作用。贝类因富含n-3 LC-PUFA,是人类n-3 LC-PUFA的重要来源。因此,研究贝类n-3 LC-PUFA的合成及代谢途径对提高贝类营养品质具有重要的指导意义。缢蛏是我国重要的养殖经济贝类之一,DHA和EPA含量丰富,但目前还缺乏对缢蛏LC-PUFA合成路径的探究,而去不饱和酶(FAD5、FAD6)和延长酶(ELOVL5)是LC-PUFA合成途径中的关键酶。故本研究以缢蛏为研究对象,克隆得到了缢蛏FAD5(Scfad5-a, Scfad5-b)、FAD6(Scfad6)和ELOVL5(Scelovl5)基因全长c DNA序列。Scfad5-a和Scfad5-b全长为2631bp,开放阅读框(ORF)为1308bp编码435个氨基酸,2个转录本ORF相似度为97.32%,编码区氨基酸相似度为97.70%;Scfad6全长为1790bp,ORF为1305bp编码434个氨基酸;Scelovl5全长为2664bp,ORF为933bp编码310个氨基酸。定量PCR分析显示:这些基因在所有检测组织中均有表达。其中Scfad5-1在肠和性腺中较高表达,而Scfad5-2在性腺中较高表达;Scfad6在肠和唇瓣中较高表达;Scelovl5在消化腺、肠和唇瓣中较高表达。酿酒酵母异源表达显示:Scfad5-1和Scfad5-2均具有较高的FAD5活性,功能上两者并无显著性差异,且对20:3n-6的转化活性(11.32-12.55%)略高于20:4n-3(8.04-9.52%)。Scfad6的去不饱和活性对于18:3n-3为5.36%,而对于18:2n-6为2.04%。Scelovl5不仅能够延长C18和C20的PUFA底物,且对于单不饱和脂肪酸也有一定的催化能力,但对饱和脂肪酸未表现出延长功能。此外,Scelovl5对于n-6系较n-3系底物活力更强。以上结果表明:缢蛏具有一定的LC-PUFA合成能力;缢蛏的性腺发育和唇瓣的生理功能受到LC-PUFA合成代谢的调控;缢蛏的FAD和ELOVL对脂肪酸底物具有一定的选择性。本文为后续通过基因手段、营养和环境因子调控等来提高其LC-PUFA的合成能力奠定了理论基础。

关键词：缢蛏去不饱和酶延长酶

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