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结膜吸吮线虫全基因组序列特征研究

结膜吸吮线虫全基因组序列特征研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：张露菲叶昌林王灵军郑明辉曹建平刘晖遵义医学院寄生虫学教研室贵州省教育厅基因检测与治疗特色重点实验室遵义市公安局新蒲分局中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所

目的阐明结膜吸吮线虫(Thelazia callipaeda,***)的全基因组序列特征。方法对获得的结膜吸吮线虫基因组组装数据采用Gene Mark、Gene ID软件从头预测及Ge Mo Ma软件同源预测,并利用EVM软件对预测结果进行整合的方法预测其基因组全部基因... 详细信息

目的阐明结膜吸吮线虫(Thelazia callipaeda,***)的全基因组序列特征。方法对获得的结膜吸吮线虫基因组组装数据采用Gene Mark、Gene ID软件从头预测及Ge Mo Ma软件同源预测,并利用EVM软件对预测结果进行整合的方法预测其基因组全部基因;将得到的基因序列分别在公共数据库及三个专有数据库中进行注释。结果结膜吸吮线虫全基因组(79.34 Mb)的Scaffolds和Contigs基因结构分析共得到了6,333个具有较高可信度的基因;将这些基因在公共数据库中BLAST比对可以注释其中97.85%的基因,其中NR数据库中注释了最多的基因(98.69%),而富集到KEGG途径的基因最少(50.50%);功能基因的KOG富集分析发现功能基因共4517个;在三个专有数据库中(CAZyme、TCDB和PHI)中比对,分别注释得到136、139和1498个基因,其中PHI数据库中注释基因数目最多(1498),此外,还通过细胞色素酶的专有数据库预测到了238个细胞色素P450基因。结论本文初步阐明了结膜吸吮线虫基因组结构特征,并对其功能基因和代谢途径进行了较详细分析。此外,通过对细胞色素P450基因预测得到较多数量的基因,表明可能在生长发育及致病机制中起到重要作用。

关键词：结膜吸吮线虫全基因组序列分析功能基因细胞色素P450

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Translationally controlled tumor protein is required for the fast growth of Toxoplasma gondii and maintenance of its intracellular development

Translationally controlled tumor protein is required for the...

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者： Jun Zheng Yaping Chen Zhaoran Li Shinuo Cao Zhaoxia Zhang Honglin Jia State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Veterinary Research InstituteChinese Academy of Agricultural Sciences (CAAS)

Translationally controlled tumor protein(TCTP)is a highly conserved,multifunctional protein that has been implicated in a range of cell physiological processes,especially cell growth and development.A TCTP-like gene has been identified in the Toxoplasma genome(Toxoplasma gondii TCTP;TgTCTP),although its function remains *** sequence analysis of TgTCTP

关键词： Translationally controlled tumor protein is required for the fast growth of Toxoplasma gondii and maintenance of its intracellular development

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环形泰勒虫喀什株感染牛淋巴细胞系的建立

环形泰勒虫喀什株感染牛淋巴细胞系的建立

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：马全英李有全刘军龙刘爱红王锦明赵帅阳陈银银徐建林殷宏关贵全罗建勋家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

牛环形泰勒虫病是由泰勒虫属的原虫寄生于牛的淋巴细胞和红细胞内所引起的一种蜱传性血液原虫病,临床症状主要表现为高热、贫血、体表淋巴结肿胀等,该病发病率和病死率高,给畜牧业生产造成了巨大的经济损失。环形泰勒虫裂殖体阶段虫体... 详细信息

牛环形泰勒虫病是由泰勒虫属的原虫寄生于牛的淋巴细胞和红细胞内所引起的一种蜱传性血液原虫病,临床症状主要表现为高热、贫血、体表淋巴结肿胀等,该病发病率和病死率高,给畜牧业生产造成了巨大的经济损失。环形泰勒虫裂殖体阶段虫体能够感染宿主巨噬细胞、树突状细胞及B淋巴细胞,且感染宿主细胞体外培养时可以获得类似肿瘤样细胞的无限增殖能力。本研究以感染环形泰勒虫新疆喀什株的黄牛为材料,当动物体温升高,体表淋巴结穿刺发现大量裂殖体出现时,手术摘出淋巴结,体外培养裂殖体感染淋巴细胞。实验确定了环形泰勒虫裂殖体感染细胞培养的最适培养基,血清浓度及细胞接种密度,稳定细胞的增长时间,细胞株的生长曲线及细胞周期的确定。结果细胞在含10%FBS的RPMI-1640培养基中可稳定生长,以5×105cells/ml接种时可使细胞密度达到2.5-2.8×106cells/ml,细胞活率维持在95%以上;细胞72h为一个培养周期,平均直径为13.5um,连续传代20代细胞形态不变,生长周期恒定,由此形成一个稳定的细胞系,为环形泰勒虫病疫苗的研究提供新的疫苗株。

关键词：环形泰勒虫感染牛淋巴细胞细胞系

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马泰勒虫EMA2基因的真核表达及其在293T细胞中的定位

马泰勒虫EMA2基因的真核表达及其在293T细胞中的定位

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：张杨王盼举张梦圆吾力江宋晶晶李仿鑫巴音查汗新疆农业大学动物医学学院

马泰勒虫病是一种严重危害宿主马的胞内寄生性原虫病,该病由媒介硬蜱传播,导致宿主马出现不同程度的临床症状,如发热,贫血,黄疸,严重时亦可引起死亡。新疆由于其独特地理环境,媒介硬蜱分布广,马泰勒虫病的感染情况可达90%,部分地区死亡... 详细信息

马泰勒虫病是一种严重危害宿主马的胞内寄生性原虫病,该病由媒介硬蜱传播,导致宿主马出现不同程度的临床症状,如发热,贫血,黄疸,严重时亦可引起死亡。新疆由于其独特地理环境,媒介硬蜱分布广,马泰勒虫病的感染情况可达90%,部分地区死亡率可达30%。马泰勒虫裂殖子表面抗原蛋白(Theileria equi merozoite antigen)含有一个糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白,被证实是蛋白与细胞膜结合的唯一方式,在***膜表明的GPI锚定蛋白能通过周期性的改变逃避宿主免疫。为了解马泰勒虫EMA2基因在293T细胞的表达定位情况,本次试验通过对实验室前期保存的马泰勒虫流行株总DNA扩增出EMA2基因,克隆测序后进行序列分析,将阳性克隆亚克隆至真核表达载体PCMV-N-Flag真核表达载体中,构建真核表达质粒PCMV-N-Flag-EMA2。质粒纯化后体外转染293T细胞,通过Western blot技术和间接免疫荧光技术检测EMA2蛋白在转染细胞的表达情况。Western blot结果显示融合真核表达载体的质粒PCMV-N-Flag-EMA2在293T细胞内所所表达的蛋白大小约为34k Da,表明构建的真核表达质粒在293T细胞中进行了正确的表达。通过倒置荧光显微镜对转染24h的293T细胞进行观察,转染重组质粒后的293T细胞膜表面显示有很强的绿色荧光,说明EMA2蛋白多分布于细胞膜表面,与EMA2蛋白的相关描述一致。本次试验可为研究筛选膜蛋白抗原和药物靶标奠定基础。

关键词：马泰勒虫 EMA2蛋白真核表达细胞定位

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巴贝斯虫过氧化物氧化还原酶(Prxs)的研究

巴贝斯虫过氧化物氧化还原酶(Prxs)的研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：张厚双黄经纬龚海燕曹杰周勇志周金林中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室

巴贝斯虫病是由巴贝斯虫引起的一种可通过蜱虫传播的血液寄生虫病。田鼠巴贝斯虫(***)可感染人和动物,主要症状为头痛、疲劳、发烧、溶血和贫血,对免疫缺陷和免疫力低下的人群具有致死性,严重危害了人类的健康。过氧化物氧化还原酶(Pero... 详细信息

巴贝斯虫病是由巴贝斯虫引起的一种可通过蜱虫传播的血液寄生虫病。田鼠巴贝斯虫(***)可感染人和动物,主要症状为头痛、疲劳、发烧、溶血和贫血,对免疫缺陷和免疫力低下的人群具有致死性,严重危害了人类的健康。过氧化物氧化还原酶(Peroxiredoxins,Prxs)是生物体内普遍存在的一个重要的具有抗氧化活性和调节信号转导的抗氧化蛋白家族的新成员,它对生物体具有保护作用。本研究中,我们鉴定了田鼠巴贝斯虫三个Prxs分子(Prx1,Prx2和PrxQ),并进行了蛋白特征化分析,结果表明:Prx1和Prx2与宿主Prxs同源性略高,PrxQ与宿主蛋白无同源性。我们对三个蛋白进行了体外原核表达与纯化,并进行了酶活性分析鉴定,结果表明三个蛋白均表现出较好的抗氧化能力,具有较高的还原酶活性。Western blotting证明三个重组蛋白抗血清能够识别各自在虫体内的天然蛋白。IFA鉴定结果表明,三蛋白均定位于虫体内部。对蛋白在红细胞期的表达动态进行了分析表明:Prx1和PrxQ蛋白表达于虫体感染的初期,Prx2表达于虫体感染的后期。应用蛋白酶抑制剂可显著降低三个Prxs蛋白的酶活性,虫体感染率明显减少,但三个Prxs蛋白在虫体内的表达量无明显降低。以上结果表明:在蛋白酶抑制剂的作用下,三个Prxs蛋白在虫体内的表达量不受影响,而其酶活性均可被明显抑制,且PrxQ与宿主蛋白无同源性,可作为药物靶标的候选分子。进一步将对其作为药物靶标的可能性及蛋白其他功能等方面进行更深入的研究。

关键词：田鼠巴贝斯虫过氧化物氧化还原酶药物靶标功能研究

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一种具有EF-手性结构域的多房棘球绦虫囊壁蛋白—emu-TegP11的鉴定

一种具有EF-手性结构域的多房棘球绦虫囊壁蛋白—emu-TegP11的鉴定

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：吴金恩苏梦杨静陈晓倩郭小蜡郑亚东中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

Teg Ps(tegumental proteins,Teg Ps)是一类位于蠕虫表面的囊壁蛋白,主要参与离子吸收和免疫逃逸。研究表明棘球绦虫有多种Teg Ps蛋白,但它们的功能仍未见报道。通过全基因组学分析,发现棘球绦虫至少含有14种Teg Ps蛋白(Teg Ps1-14),其... 详细信息

Teg Ps(tegumental proteins,Teg Ps)是一类位于蠕虫表面的囊壁蛋白,主要参与离子吸收和免疫逃逸。研究表明棘球绦虫有多种Teg Ps蛋白,但它们的功能仍未见报道。通过全基因组学分析,发现棘球绦虫至少含有14种Teg Ps蛋白(Teg Ps1-14),其中大部分具有EF-手型结构域或/和动力蛋白轻链状结构域。在25种扁形动物中,尽管Teg P11蛋白之间的同源性很低,但在结构上却高度保守。免疫组化结果证实,多房棘球绦虫Teg P11蛋白(emu-Teg P11)存在于胞外囊泡,且在不同发育阶段原头蚴中的分布不尽一致。迁移实验结果表明,emu-Teg P11与Ca2+的结合能力较弱。经emu-Teg P11蛋白处理后,巨噬细胞的NO分泌水平显著上升(p<0.001)。并且,emu-Teg P11可以作为促炎细胞因子的诱导物,诱导IL-12B和IL-6分别上调8.8和3.7倍,而IL-3和IL-10几乎保持不变(两者上调都不超过1.3倍)。以上结果提示,emu-Teg P11在棘球绦虫感染期间,可能作为免疫调节剂参与对宿主免疫系统的调节。基于这种免疫调节特性,emu-Teg P11可作为潜在的疫苗和驱虫剂靶标。

关键词：多球棘球绦虫 EMU-Teg P11 皮质蛋白

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重组质粒pSMART2b-Rhomboid3的构建及抗柔嫩艾美耳球虫的初步应用

重组质粒pSMART2b-Rhomboid3的构建及抗柔嫩艾美耳球虫的初步应用

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：祝涛朱刚宫鹏涛张西臣杨举杨正涛李建华吉林大学动物医学学院

本研究以柔嫩艾美耳球虫的Rhomboid3基因作为抗原分子,用真核表达载体p SMART2b传递和表达该抗原分子,并将该重组质粒导入293细胞中进行表达,然后将重组质粒免疫鸡只,检测其引起鸡体的细胞免疫及体液免疫情况,最后通过攻虫试验,计算抗... 详细信息

本研究以柔嫩艾美耳球虫的Rhomboid3基因作为抗原分子,用真核表达载体p SMART2b传递和表达该抗原分子,并将该重组质粒导入293细胞中进行表达,然后将重组质粒免疫鸡只,检测其引起鸡体的细胞免疫及体液免疫情况,最后通过攻虫试验,计算抗球虫指数(ACI)来综合评价重组质粒p SMARAT2b-Rhomboid3对鸡群球虫病的保护效果,探索其成为球虫疫苗的潜力。试验结果表明成功构建了重组质粒p SMARAT2b-Rhomboid3。通过将构建的重组质粒p SMARAT2b-Rhomboid3和空载体p SMARAT2b分别用50μg和100μg的剂量经腿部肌肉免疫注射鸡只,每次间隔1周共免疫3次,然后对抗体水平、细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ)水平、T淋巴细胞增殖情况及毒性T淋巴细胞活性进行测定。结果显示免疫剂量50μg和免疫剂量100μg组的抗体水平、IL-2、IFN-γ、T淋巴细胞增殖及毒性T淋巴细胞活性都有明显升高(P<0.01),免疫剂量100μg组比免疫剂量50μg组的高,且两个免疫组与对照组相比,差异极显著(P<0.01)。重组质粒p SMARAT2b-Rhomboid3抗柔嫩艾美耳球虫保护结果表明免疫重组质粒50μg和100μg剂量组的与红对照组相比,卵囊数明显减少,体重增加,盲肠病变减少,且差异显著(P<0.05)。经过综合评价免疫剂量50μg组和免疫剂量100μg组的ACI分别为181.25和184.22,均显示出较好的保护效果。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 Rhomboid3 重组质粒免疫保护

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马泰勒虫昭苏流行株在去脾小鼠体内的扩繁试验

马泰勒虫昭苏流行株在去脾小鼠体内的扩繁试验

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：刘世芳王盼举张梦圆闻秀秀吾丽江王莉君巴音查汗新疆农业大学动物医学学院

马泰勒虫病是马泰勒虫寄生于马属动物网状内皮系统、红细胞内而引起的蜱传血液原虫病。该病临床上表现稽留热、贫血、呼吸困难、黄疸及败血症等症状,如诊治不及时,死亡率极高,对地方马产业的发展危害较大。据前期实验调查发现,该病在新... 详细信息

马泰勒虫病是马泰勒虫寄生于马属动物网状内皮系统、红细胞内而引起的蜱传血液原虫病。该病临床上表现稽留热、贫血、呼吸困难、黄疸及败血症等症状,如诊治不及时,死亡率极高,对地方马产业的发展危害较大。据前期实验调查发现,该病在新疆流行广泛,流行区域主要包括伊犁、阿勒泰及巴州等地州。原生动物实验动物模型的建立一方面可较好的扩繁、保存地方虫株,另一方面借助模式动物可为深入了解原生动物感染机制提供试验数据;为了研究泰勒虫病原生物学特性,许多学者试图找到一种能够被其感染的小型实验动物,如Fell等曾用放射性鼠以及复合免疫缺陷鼠(SCID鼠)作为动物模型,成功感染了环形泰勒虫,但SCID鼠不仅成本高并对试验环境要求高等缺点。至于此,本试验选用了去除脾脏、降低其免疫力的昆明白小鼠为试验动物,接种了马泰勒虫昭苏流行株,进行了小鼠体内扩繁试验:每24h接种一次,并血液涂片检查,持续3-5-10d,当小鼠体内染虫率达15%以上时,腹主动脉采血收集血液。结果显示,接种后第48小时可在小鼠血液里观察到虫体,第7-9d小鼠的平均染虫率可达15%以上,说明马泰勒虫在除脾后的昆明白小鼠血液内能够增殖、扩繁。同时进行虫体复苏试验,对收集染虫率在15%以上的昆明白小鼠血液经-4℃、-20℃各20分钟后冻存于液氮中,保存2-5月的虫株进行了复苏,可复苏、扩繁。该试验数据可为后续建立马泰勒虫感染动物模型及体外培养地方虫株等基础应用型研究提供丰富的实验材料。

关键词：马泰勒虫实验动物模型昆明白小鼠扩繁试验

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红细胞期巴贝斯虫体内Trx体系相关分子的鉴定与功能分析

红细胞期巴贝斯虫体内Trx体系相关分子的鉴定与功能分析

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：龚海燕周勇志曹杰张厚双赵少若海旭南熊康张浩周金林中国农业科学院上海兽医研究所

巴贝斯虫是一种经过媒介蜱传播的红细胞内寄生性原虫,可感染马牛羊犬等哺乳动物,甚至包括人类,不仅给畜牧业带来巨大经济损失,也对人的健康造成威胁。巴贝斯虫感染呈全球性分布,主要集中在欧洲和美国,但近年来,在我国大陆(云南、内蒙等... 详细信息

巴贝斯虫是一种经过媒介蜱传播的红细胞内寄生性原虫,可感染马牛羊犬等哺乳动物,甚至包括人类,不仅给畜牧业带来巨大经济损失,也对人的健康造成威胁。巴贝斯虫感染呈全球性分布,主要集中在欧洲和美国,但近年来,在我国大陆(云南、内蒙等地)和台湾均出现人体血清学试验阳性的病例报告。为了寻找可靠的药物靶标,我们将视线聚焦于巴贝斯虫的抗氧化体系。巴贝斯虫生活在红细胞内的高度氧化环境中,经长期的进化,产生了对抗宿主的一套氧化还原体系,其中最常见的是硫氧还蛋白(Trx)体系。为了分析这一氧化还原体系,我们构建了田鼠巴贝斯虫的转录组文库,此文库包括3182个编码基因。文库中包含一个硫氧还蛋白还原酶(TrxR)和六个硫氧还蛋白相关分子(Trxs)。Trx R全长1766bp,编码一个含553个氨基酸的分泌蛋白。编码的蛋白与其他寄生虫Trx R的同源性在53到58%之间,与人的同源性为44%。免疫荧光检测表明TrxR存在于细胞核以外的某个部位。重组表达的Trx R具有还原活性,其活性受其反应浓度影响,最适反应PH值为6.5,其酶活性可被Auranofin抑制。Trxs则为长度在11到23k Da的一系列分子,含有Trx domain或Trx-like domain。其中两个Trx分子经预测有信号肽,其他4种则无。Trx6和Trx3分别来自于染色体I和II,其它几种Trxs来自染色体III。在p H值为7.0的条件下,Trx1重组蛋白可还原胰岛素,且重组Trx1蛋白与Trx R有明显的相互反应活性,并能减少H2O2对293T细胞的损伤。此研究暗示了Trx体系可能在巴贝斯虫体内担负抗氧化的重要功能,进而可能成为潜在的药物靶标。此研究为抗巴贝斯药物的研发提供了新的信息和理论基础。

关键词：巴贝斯虫硫氧还蛋白体系抗氧化

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应用基因随机突变提高鸡柔嫩艾美尔球虫EtMIC2蛋白质免疫原性的研究

应用基因随机突变提高鸡柔嫩艾美尔球虫EtMIC2蛋白质免疫原性的研...

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：陈正涛王秀臻王方昆李宏梅赵孝民山东农业大学动物科技学院泰山医学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心

定向进化技术作为开发鉴定新型变体蛋白的有效工具被广泛应用于蛋白质工程领域,改善抗原的免疫原性是定性进化技术的重要应用之一,其中使用随机突变构建基因突变库是定向进化技术的常用方法。Et MIC2蛋白是鸡柔嫩艾美尔球虫的重要候选... 详细信息

定向进化技术作为开发鉴定新型变体蛋白的有效工具被广泛应用于蛋白质工程领域,改善抗原的免疫原性是定性进化技术的重要应用之一,其中使用随机突变构建基因突变库是定向进化技术的常用方法。Et MIC2蛋白是鸡柔嫩艾美尔球虫的重要候选疫苗分子之一,在球虫的整个生活周期内都表达,但研究表明Et MIC2蛋白仅能诱导部分免疫保护力。本研究旨在通过定向进化中的随机突变技术提高Et MIC2蛋白的免疫原性,为柔嫩艾美尔球虫的防控提供基础,并为其他寄生虫及病原的防控提供借鉴。研究采用随机突变技术ep PCR构建Et MIC2基因突变库,酵母表面展示技术展示变体蛋白库,通过Et MIC2多克隆抗体运用荧光激活细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting techniques,FACS)筛选高免疫原性Et MIC2变体蛋白,对筛选出的蛋白进行原核表达并制备亚单位疫苗,通过动物实验评估其免疫原性及免疫保护力。结果显示:约107 Et MIC2基因突变库构建成功,Et MIC2突变蛋白库成功展示于酵母表面,FACS技术筛选出7株具有高反应原性的变体蛋白;动物实验结果显示,与Et MIC2天然蛋白免疫组相比,1130及2119变体蛋白免疫组的体重增长显著增高、卵囊排出及盲肠病变积分均显著降低(P<0.05),ACI指数分别高达172.48和167.21,显著高于Et MIC2天然蛋白组137.92(P<0.05),且血液中淋巴细胞增殖水平显著升高(P<0.05)。研究表明,通过随机突变技术成功获得两株(1130,2119)具有高免疫原性及免疫保护力的Et MIC2变体蛋白,研究证明采用定向突变技术提高寄生虫抗原的免疫原性及保护力是有效可行的。

关键词：柔嫩艾美尔球虫 EtMIC2 随机突变酵母表面展示 FACS

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