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新孢子虫酰基辅酶A结合蛋白体外功能研究

新孢子虫酰基辅酶A结合蛋白体外功能研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：周冰心傅勇晋高伟刘群刘晶国家动物寄生原虫实验室农业部动物流行病学重点实验室中国农业大学动物医学院

新孢子虫隶属于顶复门原虫,主要造成牛流产、死胎等繁殖障碍,给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。顶复门原虫主要通过Ⅱ型脂肪酸合成途径合成脂肪酸。酰基辅酶A结合蛋白(Acyl coenzyme A-binding protein,ACBP)可以高特异性、高亲和力结... 详细信息

新孢子虫隶属于顶复门原虫,主要造成牛流产、死胎等繁殖障碍,给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。顶复门原虫主要通过Ⅱ型脂肪酸合成途径合成脂肪酸。酰基辅酶A结合蛋白(Acyl coenzyme A-binding protein,ACBP)可以高特异性、高亲和力结合、储存并转运长链脂酰CoA,在脂肪酸代谢中发挥重要作用。新孢子虫是否也存在ACBP,其在虫体中发挥怎样的作用目前尚无相关报道。本研究对NcACBP功能的解析将为新孢子虫脂肪酸代谢通路提供理论依据,为防控新孢子虫病提供新的思路。材料与方法应用生物信息学软件及ToxoDB数据库,克隆新孢子虫ACBP基因,与其他物种ACBP进行进化树比较分析。表达、纯化NcACBP重组蛋白,并制备多克隆抗体。通过Westernblot,确定NcACBP的表达情况;通过间接免疫荧光试验,明确NcACBP的亚细胞定位。以硝基苯恶二唑(Nitrobenzoxadiazole,NBD)标记的棕榈酰CoA为NcACBP的底物,通过荧光分析仪检测NcACBP是否具有蛋白结合活性。构建酵母表达载体,对酵母ACBP基因缺失株进行酵母异源功能回补,评估NcACBP体外功能。最后,利用CRISPR/Cas9技术敲除NcACBP基因,药物筛选基因敲除单克隆虫株。结果与讨论成功从新孢子虫cDNA中扩增到286bp的ACBP基因,在进化树中与弓形虫ACBP1(TgACBP1)最为接近,同源性高达85%。NcACBP重组蛋白以包涵体形式表达,大小为10.3KDa。NcACBP亚细胞定位于新孢子虫胞浆。重组NcACBP在体外具有蛋白酶活力,并能够结合NBD标记的棕榈酰CoA。酵母回补实验表明NcACBP与酵母ACBP(ScACBP)具有相同的蛋白功能,NcACBP能够异源回补因ScACBP缺失导致酵母的异常表型变化。基因敲除质粒电转新孢子虫Nc1后,经药物筛选获得两株NcACBP基因敲除单克隆虫株,这为后续研究NcACBP在虫体生长繁殖和脂肪酸代谢中的功能奠定了基础。

关键词：新孢子虫酰基辅酶A结合蛋白蛋白功能基因敲除

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线虫诱导捕食性真菌Duddingtonia flagrans分泌蛋白质的差异表达分析

线虫诱导捕食性真菌Duddingtonia flagrans分泌蛋白质的差异表达...

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：梁萌陈林军王新芳王文蕊郭宏年王瑞杨晓野内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

一般认为,捕食线虫性真菌可分泌多种蛋白酶降解线虫体壁角质层,使菌丝可以进入虫体内,从而杀死线虫。故而,对捕食线虫性真菌在捕杀线虫过程中产生的生物化学物质进行深入研究,将对今后更好的利用捕食线虫性真菌防治家畜寄生性线虫病具... 详细信息

一般认为,捕食线虫性真菌可分泌多种蛋白酶降解线虫体壁角质层,使菌丝可以进入虫体内,从而杀死线虫。故而,对捕食线虫性真菌在捕杀线虫过程中产生的生物化学物质进行深入研究,将对今后更好的利用捕食线虫性真菌防治家畜寄生性线虫病具有极其重要的意义。为此,本研究采用基于质谱的非标记定量Label free技术,分别对马圆线虫第3期幼虫诱导的-Duddingtonia flagrans试验组和蒸馏水处理的同一菌株对照组发酵液进行蛋白质组学相对定量分析,共鉴定出的蛋白质总数为258个,其中马圆线虫第3期幼虫诱导组蛋白质数为209个,蒸馏水处理组蛋白质数为232个。显著差异表达蛋白质数为上调蛋白24个,下调蛋白22个。差异蛋白除参与碳代谢、氨基酸生物合成等生物学历程外,还参与甲烷代谢、生物调控等过程。被马圆线虫幼虫诱导的***组相较于蒸馏水处理组,从细胞功能注释结果可知,大部分差异蛋白发挥着催化和结合的分子功能。KEGG代谢通路分析表明,差异蛋白主要参与了碳代谢以及氨基酸生物合成。这表明***能对线虫幼虫刺激做出反应,导致机体内部处于应激状态。因此,对差异蛋白质组的深入解析和研究,有利于揭示***杀线虫的蛋白分子机制。

关键词：捕食线虫性真菌 Duddingtonia flagrans 液体发酵非标记定量蛋白质组学

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表观遗传学修饰对新孢子虫感染小鼠巨噬细胞IL-12延迟表达的调控

表观遗传学修饰对新孢子虫感染小鼠巨噬细胞IL-12延迟表达的调控

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：翟涛宫鹏涛张西臣杨举杨正涛李建华吉林大学动物医学学院

本研究通过新孢子虫感染巨噬细胞引起IL-12的动态变化、mi RNAs和组蛋白修饰对IL-12分泌的调控等研究,观察表观遗传学修饰对新孢子虫感染的巨噬细胞IL-12表达的影响,以期探明新孢子虫感染的免疫逃避机制。试验结果显示,在6h时可以检测到... 详细信息

本研究通过新孢子虫感染巨噬细胞引起IL-12的动态变化、mi RNAs和组蛋白修饰对IL-12分泌的调控等研究,观察表观遗传学修饰对新孢子虫感染的巨噬细胞IL-12表达的影响,以期探明新孢子虫感染的免疫逃避机制。试验结果显示,在6h时可以检测到IL-12的表达,但在18h内,IL-12均处于较低的表达水平。24h检测到IL-12的表达量开始升高,36h时IL-12的表达量进一步升高。表明新孢子虫在感染小鼠巨噬细胞后,在前18h抑制巨噬细胞IL-12的表达。新孢子虫感染的巨噬细胞mi RNA对IL-12的调控试验结果显示转染了mi R-187激动剂的巨噬细胞,IL-12的表达量具有一定程度的上升,而转染了mi R-187抑制剂的巨噬细胞,IL-12的表达量略有下降。表明mi R-187在新孢子虫感染的巨噬细胞中,可以促进IL-12的表达。通过对mi R-187可能作用的靶标基因进预测,利用双荧光素酶报告基因系统检测重组载体Luc基因表达的变化。结果表明在共转染了mi R-187和含有靶标基因重组载体的试验组中,Luc2的表达率明显下降,而在共转染了mi R-187和含有突变靶标基因重组载体的试验组中,Luc2的表达率没有变化。表明mi R-187可以和预测的靶标基因相互作用,阻碍Luc2基因的表达。新孢子虫感染的巨噬细胞IL-12启动子区的组蛋白修饰试验结果显示,IL-12p40启动子区的启动子数量明显上升,但在其余位点均未发现明显变化。表明新孢子虫感染巨噬细胞后,可以通过改变H3K27me2的变化来调控IL-12p40的表达。本研究结果从表观遗传学角度解析了新孢子虫在感染早期,通过延迟IL-12分泌从而有助于其建立感染的免疫逃避机制。

关键词：新孢子虫巨噬细胞 IL-12 表观遗传学

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镰形扇头蜱Serpin分子RHS2对免疫调节的影响

镰形扇头蜱Serpin分子RHS2对免疫调节的影响

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：许正茂周勇志曹杰巴音查汗周金林中国农业科学院上海兽医研究所新疆农业大学动物医学学院

丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,Serpin)是种类最多的蛋白酶抑制剂超家族,有其保守结构,通过一种自杀性底物的方式发挥其蛋白酶抑制剂的功能。大部分Serpin都表现出蛋白酶抑制剂活性,在多种生理过程中发挥作用,包括食物... 详细信息

丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,Serpin)是种类最多的蛋白酶抑制剂超家族,有其保守结构,通过一种自杀性底物的方式发挥其蛋白酶抑制剂的功能。大部分Serpin都表现出蛋白酶抑制剂活性,在多种生理过程中发挥作用,包括食物消化、血液凝固、免疫应答、炎症反应等。对一些节肢动物的Serpin分子研究表明,它们在调节内源性蛋白酶平衡、先天性免疫反应、发育和繁殖上具有重要作用。本实验室前期从镰形扇头蜱中克隆了RHS2基因,中肠特异表达,在q PCR和RNA干扰实验中发现其在蜱的吸血阶段大量表达,对蜱自身吸血发育和生殖产卵无显著影响。故本研究通过应用流式细胞术和ELISA方法检测RHS2体外诱导骨髓源细胞分化和对腹膜巨噬细胞分泌细胞因子的影响,以阐述其对宿主免疫调节的影响。其结果如下:1、RHS2刺激C57BL/C小鼠骨髓细胞5 d和9 d,应用流式细胞术检测免疫细胞亚群所占比例,发现RHS2刺激组相对于空白对照组和GST蛋白组,巨噬细胞所占比例显著上升(64.25%,29.33%,29.10%),MDSC(0.99%,8.86%,9.33%)和树突状细胞(0,14.17%,16.33%)所占比例显著下降。2、分离C57BL/C小鼠腹膜巨噬细胞,加入RHS2和LPS共刺激12 h和24 h,使用ELISA方法检测其分泌细胞因子的情况。发现分泌IL-1β显著上升,TNF-α显著下降,对IL-6的产生无显著影响。结论:RHS2可以抑制骨髓细胞向树突状细胞分化,促进向巨噬细胞分化,并抑制腹膜巨噬细胞分泌TNF-α,促进IL-1β分泌,说明RHS2在免疫调节和内毒素诱导的炎症反应中发挥作用。

关键词：丝氨酸蛋白酶抑制剂流式细胞术 ELISA 免疫细胞亚群细胞因子

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Purification and freezing of Toxoplasma gondii tissue cysts

Purification and freezing of Toxoplasma gondii tissue cysts

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者： Chaoyue Wang Xinlei Yan Xianyong Liu Xun Suo National Animal Protozoa Laboratory & College of Veterinary Medicine China Agricultural University

The protozoan parasite Toxoplasma gondii is capable of infecting all warm blooded animals and *** are three infectious stages of *** in its intermediate and definitive hosts: tachyzoites,tissue cysts or bradyzoites,and *** tachyzoites in liquid nitrogen is used to maintain *** strains in *** this study,we tried freezing tissue ***/c mice infected with 200 tachyzoites of Toxoplasma gondii Pru strain were subjected to tissue cysts isolation from the brain between 4 and 8 weeks post *** cysts were purified using gradient density centrifugation with human lymphocytes separation *** the tissue cysts were treated with Trypsin-EDTA to disrupt the cyst wall and frozen in liquid nitrogen with a medium containing 90% fetal bovine serum and 10% *** viability of the freezed tissue cysts or bradyzoites was confirmed by observing the invasion of bradyzoites released from the cysts in Vero *** successful freezing of tissue cysts or bradyzoites provides more choice for manipulating *** in laboratory.

关键词： Toxoplasma gondii tissue cysts bradyzoites freezing

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Toxoplasma gondii ROP18I suppresses IFN-γ/STAT1 pathway by targeting NMI in human cells

Toxoplasma gondii ROP18I suppresses IFN-γ/STAT1 pathway by ...

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者： Jing Xia Hong-Juan Peng Department of Pathogen Biology Guangdong Provincial Key Laboratory of Tropical Disease Researchand Key Laboratory of Prevention and Control for Emerging Infectious Diseases of Guangdong Higher InstitutesSchool of Public HealthSouthern Medical University

Background:Toxoplasma gondii rhoptry protein ROP18,which is secreted into the host cell during the parasite invasion,has been identified as a key factor modulating the acute virulence of *** studies have shown that ROP18 exerts its virulence effects in murine cells by interacting with immune-related GTPases(IRGs),however,these proteins are poorly conserved in

关键词： NMI ROP Toxoplasma gondii ROP18I suppresses IFN STAT1 pathway by targeting NMI in human cells

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Research on the Mechanism of the Intracellular Protozoa-Host Interaction

Research on the Mechanism of the Intracellular Protozoa-Host...

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者： Hongjuan Peng Department of Pathogen Biology Guangdong Provincial Key Laboratory of Tropical Diseases ResearchSchool of Public HealthSouthern Medical University

Intracellular protozoa-host interaction encompasses the host's defense response to the intracellular protozoan and the regulation of the host by the protozoa(including secretions and metabolites).In addition to passive immunity,the host adopts different strategies to establish protective *** the other hand,the parasite has also evolved various immune evasion mechanisms such as molecular simulation,molecular camouflage and *** result of immunization is excessive inflammatory response,sustained inflammation and immunopathological results experienced by the *** gondii has a significant representation in the study of intracellular pathogens because of its clear information of its genome and the simplicity of its operation and culture.

关键词： ROP Research on the Mechanism of the Intracellular Protozoa-Host Interaction

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禽白血病病毒和柔嫩艾美耳球虫共感染鸡脾脏蛋白质组分析

禽白血病病毒和柔嫩艾美耳球虫共感染鸡脾脏蛋白质组分析

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：崔宁明淑贞王方昆李宏梅赵孝民山东农业大学动物科技学院山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心

鸡柔嫩艾美尔球虫(Et)和禽白血病病毒(ALV)是鸡群中常见的两种病原,混合感染的现象在临床上是普遍存在的。研究表明这两种病原都会加重机体的免疫损伤,但两种病原在共感染情况下的相互作用还未见报道。为了探究Et和ALV共感染的致病性和... 详细信息

鸡柔嫩艾美尔球虫(Et)和禽白血病病毒(ALV)是鸡群中常见的两种病原,混合感染的现象在临床上是普遍存在的。研究表明这两种病原都会加重机体的免疫损伤,但两种病原在共感染情况下的相互作用还未见报道。为了探究Et和ALV共感染的致病性和可能的调节机制,本研究利用i TRAQ技术对不同亚群ALV(J:r NX0101和K:r JS11C1)分别和Et共感染SPF蛋鸡,以感染鸡的脾脏以及健康鸡脾脏蛋白为样本,进行了定量蛋白质组学研究。通过比较蛋白质组学分析,共鉴定蛋白质1737个。对鉴定的脾脏蛋白质进行了功能注释发现609(35.06%)差异表达蛋白参与免疫相关的生物过程,注释到不同的病原感染和各种疾病相关的通路中。其中白血病r-NX0101毒株感染主要影响了宿主的转录、翻译以及翻译后修饰等相关的功能,以及与肿瘤形成与迁移密切相关的基质粘附蛋白的表达,这些差异蛋白可能与J亚群ALV的致肿瘤特性密切相关;r-JS11C1感染主要是富集翻译后修饰相关的宿主功能蛋白。r-NXO101和***共感染则对具有细胞溶解功能蛋白的富集最为显著,并且还有一些差异蛋白参与到重要的免疫学相关的代谢通路;而r-JS11C1和***共感染则主要影响应激和神经系统疾病相关蛋白的表达。ALV-J与***共感染使脾脏中具有细胞溶解功能蛋白显著富集,导致宿主对病原感染靶细胞杀伤能力减弱,病原致病性协同增加。对病原共感染鸡脾脏蛋白质组的完整分析将为阐明共感染致病机理提供新思路和理论依据,增加我们对病原与宿主相互作用的认识。

关键词：禽白血病病毒鸡球虫共感染致病机制脾脏蛋白组学

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黄羽肉鸡实验性感染火鸡组织滴虫的研究

黄羽肉鸡实验性感染火鸡组织滴虫的研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者：禚振男郭平王子静刘丹丹陶建平许金俊江苏动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室

组织滴虫病是由火鸡组织滴虫引起的一种禽类原虫病。长期以来,该病的防治主要依靠药物。近年来,因公共卫生要求,药物已受到限制或禁止,使得该病防治陷入困境,流行严重,迫切需要研制安全的新药或疫苗。如何评价药物或疫苗的控制效果,建... 详细信息

组织滴虫病是由火鸡组织滴虫引起的一种禽类原虫病。长期以来,该病的防治主要依靠药物。近年来,因公共卫生要求,药物已受到限制或禁止,使得该病防治陷入困境,流行严重,迫切需要研制安全的新药或疫苗。如何评价药物或疫苗的控制效果,建立动物感染模型并明确其致病机理是关键。江苏地区黄羽肉鸡饲养范围广,数量多且为地面平养,组织滴虫病发病率较高,本研究选用该品种通过人工感染,对组织滴虫病致病机理进行了探究。将从田间分离的强毒虫株JSYZ-A株虫体通过泄殖腔感染15日龄苏禽黄羽肉鸡,在感染后7-31d内,每3d扑杀5只感染鸡,采集不同组织脏器的样品和非抗凝血,组织样品进行虫体18S r RNA DNA PCR检测和组织病理学检查,血液样品进行生化指标检测,同时进行称重。虫体动态分布结果表明,在感染后7d起,黄羽肉鸡的盲肠和肝脏中可检测到虫体,且两个脏器中的虫体维持时间最长;心脏、十二指肠、空肠、脾脏、肺脏、法氏囊、腺胃、直肠中,偶尔能够检测到虫体;胰脏、脑组织中未检测到虫体。组织肝脏和盲肠病变程度在10-16d时最高,19d后病变程度减轻。PCR检测的结果与组织病理学结果基本一致。火鸡组织滴虫主要靶器官为肝脏和盲肠,但其并非单一感染盲肠和肝脏,而是会侵染机体的各个组织。同时,火鸡组织滴虫的感染会导致感染鸡体重明显减轻,机体的一系列生化指标出现紊乱,如谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰胺转移酶、球蛋白、尿素浓度的上升,葡萄糖、甘油三酯浓度的下降。本研究揭示了病原在体内的动态分布和血液生化指标变化规律,为后续更深入开展组织滴虫病的致病机理研究、药物的研发和疫苗的研制提供了有价值的参考。

关键词：火鸡组织滴虫聚合酶链式反应动态分布生化指标病理学

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Sometimes the devil that you know IS worse: How comparative and functional genomics have led to new discoveries about Toxoplasma gondii development and pathogenesis

Sometimes the devil that you know IS worse: How comparative ...

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会

作者： Sarah Sokol Sheen Wong Sethu Nair J.P.Dubey Jon P.Boyle Department of Biological Sciences University of Pittsburgh Animal Parasitic Diseases Laboratory U.S.Department of Agriculture

Hammondia hammondi is the nearest relative of Toxoplasma gondii,but unlike *** this parasite species is obligately *** have compared *** and *** development in vitro and identified multiple ***-specific growth *** replicating slower than ***,*** was resistant to p H-induced tissue cyst formation early after ***,in the absence of stress *** spontaneously converted to a terminally differentiated tissue cyst stage while *** did *** *** could infect new host cells for up to 8 days following excystation,and this period was exploited to generate stably transgenic *** with RNAseq analyses,our data clearly show that *** zoites grow as stringently regulated life stages that are fundamentally distinct from *** tachyzoites and *** are now using this system to better understand bradyzoite development and cyst formation,and to identify differences in the host response to these genetically similar,but phenotypically distinct,parasite species.

关键词： Toxoplasma gondii Hammondia hammondi bradyzoite cyst

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