细胞膜色谱(cell membrane chromatography,CMC)是以可保持膜受体原有结构与生物活性的细胞膜为固定相的仿生亲合色谱技术,具有"识别与分离"双重特性[1]。研究表明CMC适用于从中药及其方剂中筛选发现能被特定受体"识别"的目标组分[2-3]。红花(Carthamustinctorius)为常用中药,具有抗凝血、兴奋子宫、镇痛镇静、抗炎、免疫活性等作用[4,5]。RBL-2H3细胞是嗜碱性白血病细胞株,其细胞膜表面高表达IgE受体,常作为研究过敏反应和类过敏反应的模型细胞[6,7]。本研究利用RBL-2H3细胞制备细胞膜色谱柱并通过十通切换阀与HPLC/MS建立在线联用方法。RBL-2H3/CMC及在线联用方法的特异性、选择性、重现性、色谱柱活性时间均能满足实验要求。利用该方法从红花总提取物中筛选出能够作用于RBL-2H3细胞膜色谱柱的活性成分羟基红花黄色素A(HSYA)(图1A、1B、1C)。组胺和β-氨基已糖苷酶释放率实验结果表明,浓度在1-50 u M范围内时,HSYA能够抑制RBL-2H3细胞组胺释放率和β-氨基已糖苷酶释放率,且随HSYA浓度的增大抑制作用增强,呈剂量依赖性(图1D),HSYA在细胞水平具有抗过敏作用的活性。RBL-2H3/CMC-HPLC/MS联用方法可作为一种从中草药中快速发现潜在抗过敏作用活性成分的有效方法。
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