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机构

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4 篇 华南农业大学
4 篇 淮海工学院
4 篇 华中农业大学
3 篇 西南大学
3 篇 南京师范大学
3 篇 中国科学院南海海...
3 篇 广州中山大学
2 篇 南京农业大学
2 篇 江苏大学
2 篇 三峡大学
2 篇 湖南中医药大学
2 篇 浙江工业大学
2 篇 华东师范大学
2 篇 中国农业大学
2 篇 厦门大学
2 篇 汕头大学

作者

7 篇 陈向东
6 篇 刘建忠
5 篇 陆勇军
4 篇 何磊
4 篇 沈冬
4 篇 孙红岩
3 篇 李明春
3 篇 林韵
3 篇 陈建军
3 篇 王淑军
3 篇 谢建平
3 篇 但学明
2 篇 袁培博
2 篇 凌娟
2 篇 蔡峻
2 篇 李文均
2 篇 何伟
2 篇 曹理想
2 篇 王姣
2 篇 赵贝贝

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基于高通量测序技术评估细菌可培养性

基于高通量测序技术评估细菌可培养性

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：郭峰厦门大学

环境中绝大多数细菌尚未被经典的微生物分离实验所分离纯化培养,这无疑限制了研究者对它们的深入研究与应用.一般认为微生物不可培养的主要原因是实验室条件无法完全构建特定细菌所存在的环境中生长所需的某些关键因素.此外,也存在某些... 详细信息

环境中绝大多数细菌尚未被经典的微生物分离实验所分离纯化培养,这无疑限制了研究者对它们的深入研究与应用.一般认为微生物不可培养的主要原因是实验室条件无法完全构建特定细菌所存在的环境中生长所需的某些关键因素.此外,也存在某些微生物是由于生长速度慢或平板分离方法的低通量特点所引起的分离过程中对它们的忽略.采用对平板上所有菌落逐一挑取的方法存在费时费力和高费用等问题,本研究采取刮取平板上所有微生物进行菌种检测的思路,对一个活性污泥样品进行R2A平板分离实验,而后提取总DNA对细菌16S rRNA基因V4区进行高通量测序,基于文献的界定门、纲、目、科、属、种水平的16S rRNA基因相似度对平板存在的新种以上微生物进行评估,结果表明,所测的48个R2A平板上共有检测出2016个种水平分类操作单元(operational taxonomic units,OTUs),其中共有322个新种(与所有模式菌株98.65％相似度以下)细菌,包括1个新纲、9个新目、16个新科、91个新属和205个新种.其中以大于等于3个平板上出现的高频度新种OTU为?个,包括......,但是高分类阶元(新科以上)的新种细菌一般在测序数据中所占相对丰度极低(通常小于0.01％).本研究暗示,常规平板分离过程可能存在大量被人为忽略的新种菌落,可能是由于其生长缓慢和菌落较小等原因所导致.

关键词：细菌学可培养性平板分离实验菌种检测高通量测序

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菌藻混合发酵对豆渣中维生素含量和风味成分的影响

菌藻混合发酵对豆渣中维生素含量和风味成分的影响

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：刘爱民王静马银花刘宇卢存龙董德武安徽师范大学生命科学学院生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室安徽芜湖北京东路1号 241000

黄豆豆渣的营养价值较高,往往被直接丢弃,小球藻富含单细胞蛋白,具有很大的开发和利用价值,将酵母菌和小球藻混合发酵豆渣是很好的资源利用方式.本试验以新鲜豆渣为原料,接入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粘红酵母(Rhodotorula ... 详细信息

黄豆豆渣的营养价值较高,往往被直接丢弃,小球藻富含单细胞蛋白,具有很大的开发和利用价值,将酵母菌和小球藻混合发酵豆渣是很好的资源利用方式.本试验以新鲜豆渣为原料,接入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粘红酵母(Rhodotorula glutinis),葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)(按1∶1∶1)和小球藻,在25℃进行厌氧半固态发酵5d.采用高效液相色谱(HPLC)测定豆渣发酵前后维生素B2 (VB2)和维生素B12 (VB12)含量,采用液液萃取法结合气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对豆渣发酵前后风味成分进行分析.结果表明,豆渣经发酵后,VB2和VB12含量分别增长约1.5倍和6.9倍;经GC-MS分析,共鉴定出47种风味物质,醇类(8.26％)、酯类(4.84％)、醛类(19.24％)和酮类(3.01％)相对含量较高,是豆渣发酵产物的特征性风味成分.

关键词：豆渣混合发酵维生素风味成分

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高效木质素降解菌的筛选及产漆酶性质的研究

高效木质素降解菌的筛选及产漆酶性质的研究

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：陈建军刘梁涛曹香林河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 河南师范大学水产学院河南新乡453007

为了获得高产漆酶的菌株用于降解木质素,分别从新乡周边腐木堆积处、秸秆堆积处和造纸厂废水这些木质素含量丰富的地方取样.本研究以木质素为唯一碳源,初筛出42株对木质素具有降解能力的菌株,采用愈创木酚平板法对产漆酶的菌株进行复筛... 详细信息

为了获得高产漆酶的菌株用于降解木质素,分别从新乡周边腐木堆积处、秸秆堆积处和造纸厂废水这些木质素含量丰富的地方取样.本研究以木质素为唯一碳源,初筛出42株对木质素具有降解能力的菌株,采用愈创木酚平板法对产漆酶的菌株进行复筛得到4株产漆酶能力较强的菌株,通过生理生化及18SrDNA序列分析对菌株进行鉴定,确定了这四株菌分别为黄孢原毛平革菌、疣孢漆斑菌、白腐菌、粗毛革孔菌,并通过液态发酵培养及ABTS法对漆酶活性和木质素降解能力进行研究.结果表明黄孢原毛平革菌在经过培养6天后,漆酶活力达到最高,为233.33 U/L.利用液态发酵研究了碳源、氮源、金属离子、pH、温度对其发酵产漆酶的影响,确定了该菌株的最优碳源为乳糖,最优氮源为酵母粉,最适铜离子浓度为0.6 mmol/L,最适温度为30℃,最适pH为4.在此条件下木质素去除率达到了84.7％,具有良好的降解木质素的能力,为进一步利用此菌株进行工业化生产奠定了基础.

关键词：漆酶筛选黄孢原毛平革菌酶活

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来自耐热芽孢杆菌的protease-resistant α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达及性质研究

来自耐热芽孢杆菌的protease-resistant α-半乳糖苷酶基因的克隆...

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：赵瑞丽陈向东武汉大学生命科学学院武汉430072

豆粕粉是目前家禽和牲畜饲养中最常见的饲料,该饲料中含有大量的抗营养因子棉子糖和水苏糖,不仅造成营养物质的吸收受阻,还引起动物腹胀、腹泻、消化不良等现象.α-半乳糖苷酶可用于动物饲料添加以水解α-1,6-半乳糖苷键,从而消除抗营... 详细信息

豆粕粉是目前家禽和牲畜饲养中最常见的饲料,该饲料中含有大量的抗营养因子棉子糖和水苏糖,不仅造成营养物质的吸收受阻,还引起动物腹胀、腹泻、消化不良等现象.α-半乳糖苷酶可用于动物饲料添加以水解α-1,6-半乳糖苷键,从而消除抗营养因子棉子糖和水苏糖.本研究从一株耐热芽孢杆菌中克隆到α-半乳糖苷酶基因,并在大肠杆菌BL21中进行表达.该α-半乳糖苷酶的大小为85KD,以四聚体的形式存在.最适温度和pH分别为55℃和pH 6.0,可耐受的温度是60℃,pH范围为5-11.该α-半乳糖苷酶可耐受蛋白酶K、碱性蛋白酶、α-糜蛋白、胰蛋白酶四种蛋白酶的处理.同时其耐受多种小分子糖类的影响.薄层色谱实验(TLC)表明,该α-半乳糖苷酶可快速高效降解蜜二糖、棉子糖和水苏糖.这些特性使得该α-半乳糖苷酶在制糖、食品和饲料工业等领域有极大的潜在应用价值.

关键词：芽孢杆菌 α-半乳糖苷酶耐蛋白酶蜜二糖棉子糖水苏糖

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海洋菌株MCDA01产几丁质脱乙酰酶的培养基及发酵条件优化研究

海洋菌株MCDA01产几丁质脱乙酰酶的培养基及发酵条件优化研究

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：顾张慧刘姝叶琦房耀维王淑军淮海工学院海洋生命与水产学院江苏连云港222005 淮海工学院海洋生命与水产学院江苏连云港222005 淮海工学院江苏省海洋资源开发研究院江苏连云港222005

几丁质脱乙酰酶(CDA)广泛应用于将甲壳素通过生物脱乙酰作用催化为壳聚糖.由于壳聚糖有血液相容性、安全性、微生物降解性等诸多优异的性能,有巨大的商业潜力,并且广泛应用于食品业,轻工业,印染业,环保和医学等领域.本试验以提高天目不... 详细信息

几丁质脱乙酰酶(CDA)广泛应用于将甲壳素通过生物脱乙酰作用催化为壳聚糖.由于壳聚糖有血液相容性、安全性、微生物降解性等诸多优异的性能,有巨大的商业潜力,并且广泛应用于食品业,轻工业,印染业,环保和医学等领域.本试验以提高天目不动杆菌MCDA01几丁质脱乙酰酶的产量为目的,以发酵液上清中的几丁质脱乙酰酶活力为检测指标,通过单因素试验和正交试验相结合的方法对产几丁质脱乙酰酶菌株MCDA01的发酵培养基和发酵条件进行优化.菌株MCDA01的初始酶活为5.712 U/mL.研究结果得出菌株MCDA01最佳培养基配方是：蛋白胨20 g/L、玉米粉10 g/L、硫酸镁1g/L;在此培养基配方下,菌株MCDAO1产几丁质脱乙酰酶活力达到最大11.802 U/mL.菌株MCDA01产酶的最优发酵条件为：pH 7.0、温度30℃、培养时间48 h、装液量20％、接种量3％;在此最优条件下酶活达到22.412 U/mL,比初始酶活提升了4倍.本研究结果为菌株MCDA01用于几丁质资源的开发和利用奠定了基础.

关键词：几丁质脱乙酰酶培养基产酶条件条件

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无乳链球菌血浆抗性的代谢组学研究

无乳链球菌血浆抗性的代谢组学研究

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：彭宣宪中山大学生命科学学院广州大学城510006

代谢组学(metabonomics/metabolomics)代谢组学是继基因组学和蛋白质组学之后新近发展起来的一门学科,是关于生物体内源性代谢物质的整体及其变化规律的科学。在无乳链球菌血浆抗性代谢组学研究中,首先石斑鱼血浆可以显著增加无乳链球... 详细信息

代谢组学(metabonomics/metabolomics)代谢组学是继基因组学和蛋白质组学之后新近发展起来的一门学科,是关于生物体内源性代谢物质的整体及其变化规律的科学。在无乳链球菌血浆抗性代谢组学研究中,首先石斑鱼血浆可以显著增加无乳链球菌的生长,说明无乳链球菌具有血清抗性。代谢组学分析表明,无乳链球菌应激石斑鱼血浆的代谢特征是下调氨基酸、碳水化合物、脂质代谢,上调核酸代谢。通路分析发现,整个TCA循环和绝大部分嘌呤代谢途径中的代谢物在不同的血浆剂量处理组中变化趋势一致,而且具有血浆剂量依赖性,提示这2条代谢通路可能是无乳链球菌对抗血浆杀灭作用的关节调节途径。在候选生物标志物中,苹果酸和腺苷分别具有最大的正相关系数和负相关系数,而且它们分属于TCA循环和嘌呤代谢。因此认为无乳链球菌的血清抗性与TCA循环和嘌呤代谢紧密相关,并以苹果酸和腺苷的变化为典型特征。重编代谢组学证明,苹果酸可以通过三羧酸循环提升无乳链球菌的PMF,从而逆转无乳链球菌的血清抗性代谢组为血清敏感的代谢组,最终促进石斑鱼血浆杀灭无乳链球菌;而腺苷的作用则相反。这些研究结果从一个崭新角度揭示了细菌细菌抗性的代谢特征。

关键词：代谢组学细菌血清抗性无乳链球菌

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枯草芽胞杆菌细胞间遗传重组过程中DNA片段转移的可视化

枯草芽胞杆菌细胞间遗传重组过程中DNA片段转移的可视化

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：邓丽萍张晓明陈向东武汉大学生命科学学院武汉430072

相较于公认的自然转化、接合和转导介导的细菌水平基因转移途径,本实验室研究的枯草芽胞杆菌细胞间遗传重组过程已通过相关实验证实,其方式有别于以上传统的细菌水平基因转移途径,并且发现此过程中供体染色体DNA是以长片段形式的转移过... 详细信息

相较于公认的自然转化、接合和转导介导的细菌水平基因转移途径,本实验室研究的枯草芽胞杆菌细胞间遗传重组过程已通过相关实验证实,其方式有别于以上传统的细菌水平基因转移途径,并且发现此过程中供体染色体DNA是以长片段形式的转移过程使最大化地提高重组频率.为了进一步证明此过程的发生,我们构建了供体菌*** 92082-SO (trpC+,△comK,spoIVA∷lacO),在相近的lysA和trpC基因间的spoIVA基因插入了约120个的Lac操纵基因拷贝(序列长度为近5 Kb),同时构建了*** 92082-LTA [lysA-,trpC-,amyE∷(Ppen-lacI△11-gfpmut2)]/pBE2作为受体菌, 其在amyE基因位置插入了Ppen-lac1△11-gfpmut2融合表达lacI-GFP蛋白,以此组成了lacO/LacI-GFP系统.当受体菌的赖氨酸和色氨酸缺陷型发生回补时,供体基因组上lacO序列也将被带入受体菌中,此时受体菌表达的lacI-GFP融合蛋白会结合在多拷贝的lacO序列上,通过荧光共聚焦显微镜可以观察到荧光点聚集,以此可视化了枯草芽胞杆菌细胞间遗传重组过程中染色体DNA的长片段转移过程.此外,通过此系统的重要时间节点的观测可以更有助于我们深入研究此过程的发生机制,以期许为水平基因转移方式有更深入的理解和补充.

关键词：枯草芽胞杆菌细胞间遗传重组 lacO/LacI-GFP系统可视化

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猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立

猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：陈红英徐朋丽赵宇张宇韩昊莹张鸿鑫河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 郑州市猪重大疫病防控重点实验室河南郑州450002 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

为了建立一种能够同时快速检测猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)和猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type3,PCV3)的双重PCR方法,参考GenBank中PCV2和PCV3基因组序列,设计并合成了2对合适的特异性引物,建立PCV2和PCV3单项PCR扩增方法,并通过对双重PCR条件的优化,建立能够同时检测PCV2和PCV3的双重PCR检测方法,即利用一次PCR反应,能同时扩增出476bp(PCV2)和270bp(PCV3)两条特异性片段,而对猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪流行性腹泻病毒、猪博卡病毒、沙门氏菌、大肠杆菌核酸扩增均为阴性;PCV2和PCV3的最低检测量分别为8000拷贝/μL和332拷贝/μL.本研究建立的双重PCR方法具有敏感性高、特异性强、重复性好,该方法适合对PCV2和PCV3的鉴别诊断和联合检测.

关键词：猪圆环病毒2型猪圆环病毒3型聚合酶链式反应鉴别诊断

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rAAV-14-3-3ζ-siRNA干扰肺腺癌细胞生长的实验研究

rAAV-14-3-3ζ-siRNA干扰肺腺癌细胞生长的实验研究

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：高强宁毅袁亚丽湖南中医药大学医学院湖南长沙410208 中山大学化学与化学工程学院广东广州510275

目的：研究AAV介导的siRNA下调过表达“失巢凋亡”基因14-3-3ζ后肺腺癌A549细胞的生长变化情况.方法：设计靶向14-3-3ζ的siRNA,克隆到psiRNA质粒H1启动子下游,从psiRNA质粒上扩增H1-shRNA表达单位亚克隆到含报告基因的pAAV-MCS-EGFP... 详细信息

目的：研究AAV介导的siRNA下调过表达“失巢凋亡”基因14-3-3ζ后肺腺癌A549细胞的生长变化情况.方法：设计靶向14-3-3ζ的siRNA,克隆到psiRNA质粒H1启动子下游,从psiRNA质粒上扩增H1-shRNA表达单位亚克隆到含报告基因的pAAV-MCS-EGFP质粒的MlμI酶、切位点,构建重组质粒,然后在人胚肾293细胞中包装出重组病毒rAAV-14-3-3ζ-siRNA,简称rAAV-14ζ.检测细胞HT1080测定重组病毒的感染滴度.以1×104v.p./cell为起始梯度单位,rAAV-14ζ感染肺腺癌细胞系A549,通过QRT-PCR和Western-Blot双检测siRNA的抑制效果,MTT实验分析A549细胞的增殖抑制情况,PS染色法观察A549细胞凋亡情况.结果：通过酶切鉴定和测序确定重组质粒构建成功;被感染的HT1080细胞中观察到绿色荧光表达,证明rAAV包装成功.QRT-PCR实验和Western-Blot实验检测到siRNA下调14-3-3ζ基因的表达(P＜0.01,P＜0.01);MTT实验测得A549细胞生长有变缓的趋势,但没有显著性差异(P＞0.05),凋亡实验检测到1×106v.p./cell感染量的rAAV有引起肺腺癌细胞A549凋亡的迹象,48h早期凋亡率(13.06±1.49％),晚期凋亡率(8.43±0.56％).结论：本研究证明构建的rAAV病毒能在体外细胞水平干扰A549细胞系的生长.

关键词： 14-3-3ζ 腺病毒相关病毒干扰

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三亚湾瓦氏马尾藻的分子鉴定及其共生菌的分析

三亚湾瓦氏马尾藻的分子鉴定及其共生菌的分析

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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会

作者：冯世祥王刚陈果张燕英凌娟董俊德孙红岩华南农业大学海洋学院广东广州510642 中国科学院南海海洋研究所广东广州510301

[目的]：马尾藻品种较多,很难从形态上对其鉴定,本文对三亚湾的瓦氏马尾藻进行分子鉴定,研究其附生细菌的多样性,为进一步分析藻与共附生微生物之间的关系打下基础。[方法]：采用分离培养的方法和基于16S rDNA基因序列分析的方法。[结果... 详细信息

[目的]：马尾藻品种较多,很难从形态上对其鉴定,本文对三亚湾的瓦氏马尾藻进行分子鉴定,研究其附生细菌的多样性,为进一步分析藻与共附生微生物之间的关系打下基础。[方法]：采用分离培养的方法和基于16S rDNA基因序列分析的方法。[结果]：本研究获得87株细菌分离株,序列比对及系统进化树分析结果表明：26株分离株序列与Apha proteobacterium(变形菌)相似度为99％的菌种,占总菌种数的比重最大(30％),为优势菌;2株菌株的序列与单胞杆菌序列相似度为99％,A1-62株与Labernzia的序列相似度99％,7株菌株与海洋螺杆菌为同种菌,2株与发光杆菌同源度为99％,4株菌株的序列与Rugeria的序列相似度99％,A-154株与黄杆菌为同种菌,A-14菌株序列与Ruegeria(鲁杰氏菌)序列的相似度为100％,为同一种细菌,21株菌株与Thalassob ius为同种菌,A-93菌株与弧菌同源相似度84％,余下20株对比序列的相似度低于99％,Al-140与Alpha proteobacterium(DQ227660),相似度分别为75％,疑为一种未知菌株。[结论]：瓦氏马尾藻附生的细菌的种类是多样的,构成一个复杂的生态群落。其中Alpha proteobacterium的数量最多,这种菌营养类型多种多样,有光合种类,还有与动植物共生种类,Atpha proteobacterium含有分解藻类分泌的酸类、醇类、糖类化合物的酶。

关键词：瓦氏马尾藻附生细菌 16SrDNA 分子鉴定

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