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稻曲病菌分生孢子高产突变体A2588的T-DNA插入位点侧翼基因克隆

稻曲病菌分生孢子高产突变体A2588的T-DNA插入位点侧翼基因克隆

引用

中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：于俊杰聂亚锋俞咪娜尹小乐黄磊赵洁陈志谊刘永锋江苏省农业科学院植物保护研究所

本研究克隆稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)分生孢子高产突变菌株A2588的TDNA插入突变基因,解析该基因在稻曲病菌分生孢子形成中的功能,为进一步揭示稻曲病菌的分生孢子形成机制提供理论基础。研究通过测定A2588的产分生孢子能力、孢... 详细信息

本研究克隆稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)分生孢子高产突变菌株A2588的TDNA插入突变基因,解析该基因在稻曲病菌分生孢子形成中的功能,为进一步揭示稻曲病菌的分生孢子形成机制提供理论基础。研究通过测定A2588的产分生孢子能力、孢子萌发率、菌丝直线生长能力和热敏感性等生物学特性,利用hiTAIL-PCR、RACE和半定量PCR等方法克隆TDNA插入突变基因,并结合生物信息学方法分析T-DNA插入导致分生孢子产量提高的分子机理。与稻曲病菌野生型菌株70-22相比,突变菌株A2588在PS培养液中可产生数量为10倍以上的分生孢子,在MM培养液中产生数量约20倍的分生孢子,其在PS培养液中培养的菌球较为致密;在PSA和MM固体培养基上A2588产孢周期较短,孢子萌发率较低,虽然菌丝生长速度无明显差异,但热处理后菌丝不能恢复正常生长速率。hiTAIL-PCR和RACE法克隆了A2588中TDNA侧翼基因,并利用RT-PCR检测侧翼基因表达水平,结果表明T-DNA侧翼基因spo76表达水平下降,进一步分析发现T-DNA可能插入至spo76的启动子区域,从而破坏了该基因启动子的部分功能。spo76基因编码区全长4 682bp,含有2个分别为94bp和85bp内含子,可编码1个1 500个氨基酸的SP076蛋白,SP076蛋白通常参与有丝分裂中姐妹染色单体黏合分离和DNA损伤修复。稻曲病菌突变菌株A2588中,T-DNA插入导致spo76启动子功能部分缺失,spo76表达水平下降,可能使A2588产孢周期缩短,产生更多分生孢子,且细胞修复能力降低。

关键词：稻曲病菌分生孢子 ATMT转化 spo76

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灰葡萄孢致病相关基因BC1G07326的克隆及其功能验证

灰葡萄孢致病相关基因BC1G07326的克隆及其功能验证

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘信强谢甲涛付艳苹姜道宏陈桃李国庆程家森湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学)

由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起的灰霉病是一种世界性分布的重要植物病害,灰葡萄孢的寄主范围极其广泛,能侵染400多种植物,造成严重的经济损失。灰葡萄孢对寄主的致病作用是一个极其复杂的过程,多种致病因子参与其中,例如,细胞壁... 详细信息

由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起的灰霉病是一种世界性分布的重要植物病害,灰葡萄孢的寄主范围极其广泛,能侵染400多种植物,造成严重的经济损失。灰葡萄孢对寄主的致病作用是一个极其复杂的过程,多种致病因子参与其中,例如,细胞壁降解酶、毒素、抵抗寄主防卫反应的酶类及小分子物质。灰霉病的防治是农业生产上的难题之一,从分子水平上探究灰葡萄孢的致病机制可为灰霉病的防治奠定一定的基础。本研究主要利用基因敲除和基因互补技术对灰葡萄孢基因BC1G7326的功能进行初步研究,目前主要取得以下研究结果。灰葡萄孢基因BC1G7326在致病过程中表达显著上调,该基因开放阅读框1 911bp,包含12个外显子,11个内含子,编码一种含有346个氨基酸的未知蛋白。通过SingalP4.1 server软件预测显示,位于其N端的前20个氨基酸为信号肽序列,因此,推测该蛋白可能是分泌蛋白。通过Blast分析表明,BC1G7326蛋白仅在核盘菌中发现了同源蛋白,未发现保守结构域。我们以灰葡萄孢菌株B05.10为研究材料,利用同源重组的方法对该基因进行了敲除,采用PEG介导原生质体转化技术共获得20个敲除转化子,通过PCR和Southern blot技术对部分敲除转化子进行验证,并对敲除转化子的生物学特性进行了初步研究。结果显示,与出发菌株B05.10相比,敲除转化子的生长速度、菌丝形态、菌落形态和产酸没有显著差异,致病力显著减弱。关于敲除转化子的其他生物学特性的研究正在进行当中。

关键词：灰葡萄孢致病 BC1G07326

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玉米灰斑病的发病程度与玉米主要农艺性状的相关性分析

玉米灰斑病的发病程度与玉米主要农艺性状的相关性分析

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：王桂清李凡海聊城大学农学院

为了探明玉米灰斑病发病程度对玉米产量的影响,试验研究了灰斑病发病程度与参试玉米材料常见农艺性状的相关性。通过对父本齐319、母本A050、F、F和F各世代的种植,并在大喇叭口期进行灰斑病菌的接种,分别在接种30天、60天后调查发病情况... 详细信息

为了探明玉米灰斑病发病程度对玉米产量的影响,试验研究了灰斑病发病程度与参试玉米材料常见农艺性状的相关性。通过对父本齐319、母本A050、F、F和F各世代的种植,并在大喇叭口期进行灰斑病菌的接种,分别在接种30天、60天后调查发病情况,于收获时测定了参试玉米材料的株高、穗长、穗重、最粗穗径、中间穗径、百粒鲜重、百粒干重等,并对7个农艺性状和发病级别的相关性进行了分析。结果表明,玉米常见的7个农艺性状均随玉米灰斑病发病等级的提高而下降,即7个农艺性状与发病程度呈负相关:株高由强到弱（相关系数r=-0.41,rb=-0.05,a为接种30天,b为接种60天）,穗长由强到弱（r=-0.62,r=-0.35）,最粗穗径由弱到强（r=-0.45,r=-0.69）,中间穗径由弱到强（r=-0.47,r=-0.78）,穗重由强到弱（r=-O.56,r=-0.08）,百粒鲜重由强到弱（r=-O.63,r=-0.18）,百粒干重由强到弱（r=-0.66,r=-0.23）;两个调查阶段的发病程度间呈正相关（r=0.55）;玉米灰斑病不同发病等级对株高、穗长和穗重的影响差异性极显著（P值分别为0.009 4、0.000 1和0.009 9）,对最粗穗径、中间穗径、百粒鲜重和百粒干重的影响差异性不显著（P值分别为0.445 7、0.3647、0.454 6和0.551 6）。6个农艺性状对百粒干重的影响,百粒干重主要决定于百粒鲜重（r=0.98）,其次决定于穗重（r=0.81）、株高（r=0.53）、穗长（r=0.65）、最粗穗径（r=0.36）、中间穗径（r=0.33）。百粒干重的预测模型:Y=O.016 3X+0.811 7X十0.047 2X+0.135 4 X+0.093 7 X+0.211 5X_玩62.206 9X+0.542 1X-8.990 5（Y表示百粒干重;X表示株高;X表示穗长;X表示穗重;X表示最粗穗径;X表示中间穗径;X表示百粒鲜重;X表示接种灰斑病菌30天的发病级别;X表示接种灰斑病菌60天的发病级别）。

关键词：玉米灰斑病玉米农艺性状相关性分析主成分回归分析

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内蒙古水稻秧苗立枯病原腐霉菌的分离鉴定

内蒙古水稻秧苗立枯病原腐霉菌的分离鉴定

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：银玲景山幸二田迅李依韦冀照君赵汝张晓宇内蒙古民族大学生命科学学院日本岐阜大学流域圈科学研究中心

近年来内蒙古中东部地区盐碱地大面积开发种植水稻。水稻育苗是水稻生产的一个关键环节,直接关系到水稻的产量问题。目前内蒙古水稻生产还未发展到工厂化水平,秧苗培育是庭院式拱棚技术。在这样的农业种植区每年都有水稻立枯病的爆发,... 详细信息

近年来内蒙古中东部地区盐碱地大面积开发种植水稻。水稻育苗是水稻生产的一个关键环节,直接关系到水稻的产量问题。目前内蒙古水稻生产还未发展到工厂化水平,秧苗培育是庭院式拱棚技术。在这样的农业种植区每年都有水稻立枯病的爆发,给水稻生产带来严重经济损失。水稻立枯病是寒地水稻常见的苗期病害,发生此类病害后,茎部发生枯萎,植株矮化、变黄发生轻时,苗床秧苗变黄,严重发生时会引起秧苗成片枯死甚至全床毁苗。有关水稻立枯病害,国内外学者的研究结果差异较大,对于内蒙古水稻立枯病原菌种类鉴定研究至今还没有报道。本研究在2012～2013年分别从内蒙古通辽市科左后旗3个苏木镇(金宝屯镇、茂道吐苏木、阿都沁镇)和内蒙古赤峰市巴林右旗1个镇(大板镇)水稻产区,采集秧苗立枯病害标样,分离纯化到157个腐霉属菌株,通过形态学观察和rDNA-ITS序列分析以及致病性测定研究,明确了该地区水稻秧苗立枯病原腐霉菌的种类,为内蒙古水稻立枯病的防治奠定重要的基础。研究结果,得到腐霉属的5个种,分别是Pythium arrhenomans为131株,比例最大,占83.4%,而且4个采样区均有分布,具有普遍的分布性;Pythium middletonii为13株,分离比率为8.28%;Pythium torulosum为6株,分离比率为3.82%;Pythium catenulatum为3株,分离比率为1.91%;Pythium plurisporium为1株,分离比率为0.64%。对分离的腐霉属5个株系进行了致病性测定,5个种对水稻秧苗均有致病性,但是从分离比例和分布情况可以判断出,***是内蒙古地区水稻秧苗立枯病原腐霉菌的优势种。

关键词：内蒙古水稻秧苗立枯病腐霉属菌

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稻曲病菌菌核降解真菌的筛选

稻曲病菌菌核降解真菌的筛选

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：李丹阳邓启得雍明丽胡东维浙江大学生物技术研究所/水稻生物学国家重点实验室

稻曲病是由稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)侵染水稻花丝造成的一种水稻穗部真菌病害,典型症状是形成外部具有大量厚垣孢子的稻曲球。在一定环境条件下,稻曲球的表面可形成一至数个菌核。本实验室最近从越冬、萌发特性和条件子囊孢子... 详细信息

稻曲病是由稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)侵染水稻花丝造成的一种水稻穗部真菌病害,典型症状是形成外部具有大量厚垣孢子的稻曲球。在一定环境条件下,稻曲球的表面可形成一至数个菌核。本实验室最近从越冬、萌发特性和条件子囊孢子捕捉的分析表明,菌核萌发产生的子囊饱子可能是主要的初侵染源,在病害循环中起重要作用。因此,针对菌核和子囊孢子的控制是稻曲病防治技术的关键环节。目前,国内外主要采用化学农药对其侵染期进行防治,但常常因降雨等环境原因造成防治效果不佳,同时也带来农药残留、环境污染和病原菌产生抗药性等潜在问题。近年来,利用拮抗微生物防治植物病害的研究进展较快,在水稻纹枯病、白叶枯病等作物病害的防治上均已经取得很好效果,而利用拮抗菌防治水稻稻曲病的报道还很少,且现有的一些稻曲病生防菌的筛选试验主要是研究拮抗菌对稻曲病菌丝的抑制。本实验利用28种嗜低温真菌,以及用蘑菇为培养基,从稻田土壤中筛选出的55株生长较好的真菌,进一步与菌核共培养,观察其对菌核的降解效果,筛选出6株对菌核有明显降解作用的生防菌株,利用通用引物ITS5、ITS4扩增出rDNA-ITS对筛选到的真菌进行测序并结合形态学特征分析,筛选出的几种生防菌株分别为:鸡爪菌(Bionectria ochroleuca)、粘鞭霉(Gliomastix polychroma)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、草酸青霉(Penicillium oxalicum)、粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)、疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)。被降解菌核的透射电镜(TEM)观察表明,筛选到的几种生防真菌对菌核的降解作用有寄生和腐生两种方式。田间试验进行中。本研究的结果为稻曲病的综合控制提供了新的途径。

关键词：稻曲病菌菌核生防菌

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中国烟草青枯病菌遗传多样性研究

中国烟草青枯病菌遗传多样性研究

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘海龙黎妍妍刘浩郑露黄俊斌华中农业大学湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室湖北省烟草科学研究院

烟草青枯病是烟草上发生最为严重的细菌性病害,由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起。烟草青枯病在我国主要产烟区普遍发生,其中以广东、广西、福建、湖南及贵州烟区危害最为严重。近年来,由于气候变化等方面原因,该病的发... 详细信息

烟草青枯病是烟草上发生最为严重的细菌性病害,由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起。烟草青枯病在我国主要产烟区普遍发生,其中以广东、广西、福建、湖南及贵州烟区危害最为严重。近年来,由于气候变化等方面原因,该病的发生范围在我国有由南向北蔓延之势。青枯菌作为复合种,具有丰富的种内遗传多样性,不同地理起源的青枯菌在进化过程中演化出明显的菌系多样性。目前,国际上已有三个公认的青枯菌亚分类系统,即生理小种、生化型和演化型。作为新的分类体系,演化型的划分能更精确的反映青枯菌这一复合种的地理起源及种内的遗传多样性。本研究从中国福建、广东、广西、贵州、云南、湖南、湖北、安徽、江西、重庆10个省市的烟区采集分离得到116个青枯菌菌株,对其生理小种、生化型和演化型进行了鉴定,并通过内切葡聚糖酶基因(eql)序列对其进行了系统发育分析,基于BOX-PCR技术对烟草青枯菌的多态性进行了研究。结果表明,中国烟草上分离得到的青枯菌均属于1号生理小种;生化型属于Ⅲ型(94.8%)和Ⅳ型(5.2%);演化型属于演化型Ⅰ型;基于eql基因系统发育分析表明,全部烟草青枯菌可以被划分为4个序列变种,即序列变种15、17、34和44,其中序列变种44所包含的菌株数在全部菌株中所占比例最高,为37.1%,主要分布在广西、云南、安徽、湖北、重庆5省市;采用BOX-PCR对116个菌株进行多态性分析表明BOX-PCR扩增出20条特异性条带,条带大小介于300～4 000bp,用UPGMA聚类分析法进行聚类分析,在相似系数为8 1%时可将这些菌株划分为13个类群。本文通过对中国不同省份烟草青枯菌的多样性进行研究,可为青枯病防治和抗青枯病品种选育和利用提供理论依据。

关键词：青枯菌菌系序列变种遗传多样性

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内生性枯草芽孢杆菌的分离、鉴定及其对芝麻枯萎病的防治效果

内生性枯草芽孢杆菌的分离、鉴定及其对芝麻枯萎病的防治效果

引用

中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：杨辉辉黄思良庞发虎黎起秦王坦广西大学农学院南阳师范学院生命科学与技术学院

由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的芝麻枯萎病为严重影响芝麻生产的土传性病害。为开发防治芝麻枯萎病的生防菌,笔者于2012年夏,从河南省南阳市采集芝麻样品,采用常规组织分离法得到166株内生细菌,经平板对峙和促生试验,筛选到3... 详细信息

由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的芝麻枯萎病为严重影响芝麻生产的土传性病害。为开发防治芝麻枯萎病的生防菌,笔者于2012年夏,从河南省南阳市采集芝麻样品,采用常规组织分离法得到166株内生细菌,经平板对峙和促生试验,筛选到3株对芝麻枯萎病菌***生长有抑制作用的枯草芽孢杆菌(A3-28、A4-2和B5-47)。利用细菌16S rDNA通用引物27F和1492R对3株内生菌的DNA进行PCR扩增,得到1 425～1 433bp的16S rDNA的片段。菌株A3-28、A4-2和B5-47的16S rDNA序列GenBank登录号分别为KJ000099、KJ008914和KJ000100。用BLAST程序进行同源性分析结果表明,供试3株内生菌的16S rDNA序列与GenBank中多株枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的相关序列的同源性高达100%。依据菌株的形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析结果,将3株内生菌鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。为检测内生性枯草芽孢杆菌对芝麻枯萎病的生防效果,将芝麻种子(品种:韩芝1号)播种于蛭石与土壤按1:1混合的灭菌基质上,待芝麻幼苗长至2叶期后喷施病原菌分生孢子悬浮液(10～6个/mL),1天后分别喷施枯草芽孢杆菌的NB菌体悬浮液(10～7 cfu/mL),在接种后7～22天观察发病情况。试验结果表明,菌株A3-28、A4-2和B5-47对芝麻枯萎病盆栽防治效果分别为50.12%、46.3%和42.7%。供试3株内生性枯草芽孢杆菌中,菌株A3-28与A4-2对芝麻植株生长有明显促进作用,菌株A3-28有解有机磷和无机磷的活性,而菌株B5-47仅有解有机磷活性。3株生防菌均可在无氮培养基上生长。

关键词：芝麻内生性枯草芽孢杆菌枯萎病生物防治

来源：评论

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大豆孢囊线虫3号和4号生理小种不同龄期差异表达基因分析

大豆孢囊线虫3号和4号生理小种不同龄期差异表达基因分析

引用

中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：王高峰彭德良高丙利黄文坤孔令安龙海波彭焕简恒中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室中国农业大学植物病理系中国科学院上海生命科学研究院湖州现代农业生物技术产业创新中心中国热带农业科学院环境与植物保护研究所热带作物虫害综合治理重点实验室

大豆孢囊线虫Heterodera glycines是大豆上重要病源线虫,而有关大豆孢囊线虫不同生理小种与寄主互作机理差异的研究仍十分缺乏。本研究通过分析大豆孢囊线虫3号与4号生理小种同大豆高感品种中黄13互作阶段的转录水平差异来探讨3号与4号... 详细信息

大豆孢囊线虫Heterodera glycines是大豆上重要病源线虫,而有关大豆孢囊线虫不同生理小种与寄主互作机理差异的研究仍十分缺乏。本研究通过分析大豆孢囊线虫3号与4号生理小种同大豆高感品种中黄13互作阶段的转录水平差异来探讨3号与4号生理小种对大豆寄主中黄13的应答差异。最终,应用有限的线虫材料通过抑制性消减杂交技术分别构建了大豆孢囊线虫侵染后二龄、三龄和四龄雌虫这3个龄期共6个cDNA抑制消减文库。在这6个cDNA抑制消减文库中共发现689个候选的差异表达基因。通过qRT-PCR分析最终确定92个为3号与4号生理小种之间的差异表达基因,其中包括8个效应蛋白编码基因。并且,在3号与4号生理小种寄生阶段后期鉴定到更多的差异表达基因。对侵染后三龄和四龄雌虫阶段的差异表达基因进行GO分析后发现,这些基因的功能主要涉及线虫的物质代谢。此外,以其中包括8个效应蛋白编码基因在内的13个差异表达基因为研究对象,应用qRT-PCR技术比较分析了这13个基因在3号与4号生理小种侵染前和侵染后二龄、三龄以及四龄雌虫这4个不同发育阶段的相对表达量,结果发现这些基因的表达丰度在3号与4号生理小种的一个或多个龄期表现差异,包括侵染前二龄阶段。同时,比较分析这13个基因在3号与4号生理小种间的发育表达模式后发现,其中有6个基因的发育表达趋势在这两个生理小种间存在差异,这一现象首次在大豆孢囊线虫中观察到。

关键词：大豆孢囊线虫生理小种转录水平差异 cDNA抑制消减文库

来源：评论

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黄瓜绿斑驳花叶病毒葫芦上的种传规律及热处理效果评价研究

黄瓜绿斑驳花叶病毒葫芦上的种传规律及热处理效果评价研究

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：宋顺华宫国义耿丽华吴萍孟淑春邢宝田北京市农林科学院蔬菜研究中心/农业部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/农业部都市农业(北方)重点实验室

黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）以带毒种子为主要初侵染源,给我国西甜瓜生产造成了严重的威胁。在西瓜大量采用嫁接栽培技术的生产方式下,该病毒主要通过砧木种子带毒传播,西瓜种子很少带毒,甚至不带毒。加强砧木种子的带毒检测和使用有... 详细信息

黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）以带毒种子为主要初侵染源,给我国西甜瓜生产造成了严重的威胁。在西瓜大量采用嫁接栽培技术的生产方式下,该病毒主要通过砧木种子带毒传播,西瓜种子很少带毒,甚至不带毒。加强砧木种子的带毒检测和使用有效方法处理种子可以从源头控制该病害的蔓延和流行,是防控CGMMV的关键措施。本研究以带毒的葫芦种子作为材料,采用DAS-ELISA、RT-PCR与生物学检测相结合的方法检测葫芦种子的带毒率和传毒率,评价干热处理对病毒的钝化效果。6个批次的葫芦种子有5个批次种子阳性,带毒率在14%00%,贮藏1年后传毒率在2.3%.6%。DAS-ELISA灵敏度检测种子带毒量在感染种子研磨液与健康种子研磨液的体积比例为1:1 000时仍能检测出阳性。干热处理6个批次的葫芦商品种子（5个品种）,其中4个批次的种子为CGMMV阳性,只有1个批次阳性种子的实生苗出现1株阳性。本研究表明:RT-PCR检测比DAS-ELISA灵敏度高,两种方法均能从种子浸泡液准确的检测葫芦种子的带毒情况,使之应用检测大批量商品葫芦种子更加简便可行;种传率的高低与种子的带毒率有关,葫芦种子的种传率低而带毒率高,但收获1年以后的种传率与其他研究的新鲜葫芦种子相差不大,说明葫芦种子以表面带毒为主,而且非常稳定;72℃/72h干热处理种子能有效的钝化CGMMV,防治效果显著,但其防效没有100%,还应结合使用其他防治方法;生物学检测方法可以检测病毒的传染性,证明病毒与病害发生的直接相关性,是种子处理后的唯一检测方法;CGMMV在葫芦作物上的隐性带毒现象非常普遍,这在病害的防控上是一个严重的安全隐患,也是限制生物学检测方法应用的一个瓶颈,必须结合室内其他鉴定方法以提高检测结果的准确性。

关键词：黄瓜绿斑驳花叶病葫芦种子带毒率传毒率干热处理

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一株金叶女贞内生细菌的分离、鉴定及其对黑斑病的生防效果

一株金叶女贞内生细菌的分离、鉴定及其对黑斑病的生防效果

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：王坦黄思良黎起秦陶爱丽南阳师范学院生命科学与技术学院广西大学农学院

近年由细交链孢菌（Alternaria alternata）侵染引起的金叶女贞黑斑病在河南省南阳市严重发生,对园林景观为害较大。作者从健康金叶女贞植株体内分离对该病有生防潜能的内生细菌,以期为病害生物防治打下基础。从分离的290株内生细菌中,... 详细信息

近年由细交链孢菌（Alternaria alternata）侵染引起的金叶女贞黑斑病在河南省南阳市严重发生,对园林景观为害较大。作者从健康金叶女贞植株体内分离对该病有生防潜能的内生细菌,以期为病害生物防治打下基础。从分离的290株内生细菌中,筛选到对病原菌有较强拮抗活性的菌株A71,与病原菌平板对峙培养时抑菌率达75.7%。菌株A71革兰氏染色为阴性,杆状,单端丛生鞭毛,在NA平板上单菌落呈圆形,乳白色,边缘整齐,不透明。该菌具有运动性,能氧化葡萄糖产酸,能还原硝酸盐,水解油脂,利用柠檬酸盐,过氧化氢酶试验呈阳性,V-P试验阳性,不能水解淀粉,不产生HS;明胶液化试验、淀粉水解试验、吲哚试验及甲基红试验阴性,可在氯化钠浓度小于2%的NA培养液中生长。菌株A71在pH:6～9和25～30℃温度条件下生长较好,可利用11种供试碳源（蔗糖、木糖、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、L-山梨糖、木糖醇、甘露醇、D-果糖、L-阿拉伯糖）和2种供试氮源（硝酸钾、硫酸铵）。利用16SrDNA序列通用引物27F和1492R对菌株A71基因组DNA进行PCR扩增,经测序后确定扩增产物片段为1420bp（GenBank登录号为JN620415）。用BLAST程序进行比较发现,菌株A71的16S rDNA序列与多株Burkholderia cepacia菌株的同源性高达99%00%。通过内生菌的形态学特征、生理生化测试及16SrDNA序列分析结果,将菌株A71鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cepacia）。对金叶女贞喷施菌株A71的NB菌体悬浮液（10～7cfu/mL）,以喷施清水为对照,每处理3个重复。试验结果表明,菌株A71对金叶女贞黑斑病的田间防治效果为54.1%。

关键词：金叶女贞内生细菌洋葱伯克氏菌生物防治

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