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作者

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排序：

Study on the Sporulation and Toxin for Corynespora *** Kiwi Brown spot

Study on the Sporulation and Toxin for Corynespora *** Kiwi ...

引用

中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：崔永亮 Wen X.W. 龚国淑 Xu J. Zhou Y. Zheng X.Q. Qi X.B. Lv Zh. Liu N. Agricultural college Sichuan Agricultural University Sichuan Provincial Academy of Natural Resource and Sciences

Kiwi brown spot is one major disease in Sichuan kiwifruit production areas in recent years,which occurs in mid-to-late of June and widely spreads in mid-to-late of July,and the diseased leaf rate nearly reaches 50%~ 80%in most of production orchards in *** this paper,the sporulation condition of the causal agent Corynespora *** optimized,and the pathogenesis of synthesized toxin was *** test of eight pathogenic isolates from the infected leaves in different disease sites showed that strain CQ2-0 from Qionglai had the strongest *** of the sporulation condition for three strong pathogenic strains demonstrated that nutritional deficiency positively stimulate sporulation,and the optimized condition was that pathogen was cultured on PDA medium with initial pH 4 at 25℃ under continuous *** of toxin production condition and toxicity of CQ2-0revealed that the fungus produced toxin in the modified Frise No.3 medium at 25 ℃ with light on ***,typical brown spot symptoms appeared when inoculated with mycelial plugs,spore suspension,and crude toxin of the *** was concluded that toxin secreted by Corynespora *** the main pathogenic factor.

关键词： Study on the Sporulation and Toxin for Corynespora sp.of Kiwi Brown spot

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玉米大斑病菌转录因子StSTE12基因的结构分析及其可能调控的靶基因筛选

玉米大斑病菌转录因子StSTE12基因的结构分析及其可能调控的靶基...

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：王玥张盼马兰唐聪巩校东谷守芹韩建民董金皋河北农业大学真菌毒素与植物分子病理学实验室

玉米大斑病是世界各地玉米产区严重威胁玉米生产的一种真菌性病害,该病直接影响玉米的产量和品质,常造成严重的经济损失。引起玉米大斑病的病原菌为玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）,该病菌的致病过程包括病菌与寄主相互识别、病... 详细信息

玉米大斑病是世界各地玉米产区严重威胁玉米生产的一种真菌性病害,该病直接影响玉米的产量和品质,常造成严重的经济损失。引起玉米大斑病的病原菌为玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）,该病菌的致病过程包括病菌与寄主相互识别、病菌侵入和侵染寄主并在其内成功定殖等过程。侵入及侵染过程主要包括分生孢子萌发形成附着胞,附着胞依靠机械压力穿透玉米表皮细胞,侵入丝进入叶肉组织完成定殖过程,随后菌丝在叶片内不断扩展,释放致病性毒素,造成玉米叶肉细胞死亡,最终形成坏死病斑,影响玉米的光合作用。本实验室在前期研究中已经克隆了玉米大斑病菌Fus3/Kss1-homolog MAPK级联途径下游的一个转录因子基因StSTE12,并且构建了RNAi载体,获得了3株该基因的不同沉默程度RNAi转化子。本研究在此基础上利用生物信息学技术,明确了玉米大斑病菌StSTE12基因位于scaffold3正链的1061747-1064127,其ID为105656;该基因的编码蛋白具有Ste12-like蛋白所特有的保守结构域（STE homeodomain和ZnFH锌指结构）及空间结构。利用Western blotting技术,分析了玉米大斑病菌在菌丝发育、分生孢子形成及附着胞形成等不同发育时期StSte12蛋白的表达情况。结果表明,StSte12蛋白在附着胞形成时期的表达量最大。通过搜索酿酒酵母基因组数据库,得到了酿酒酵母中受转录因子ScSte12调控的下游靶基因;进一步查询玉米大斑病菌基因组数据库,获得了上述所有基因的同源基因;通过对StSte12下游靶基因的结构特征进行分析,发现所有基因均具T\CGAAACA\G的匹配序列,其中间部分GAAAC为高度保守的序列。利用RT-PCR和Real-time PCR技术对StSTE12基因RNAi转化子进行分析,结果初步证实转录因子StSte12的下游调控基因为StBEM2、StBUD8、StCHS7、StPCK1、StKAR5、StBEM1、StSHO1。该研究为深入探讨玉米大斑病菌StSte12转录因子的调控机制奠定基础。

关键词：玉米大斑病菌 StSTE12 转录因子靶基因

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玉米弯孢叶斑病菌与大斑病菌互作过程中防御酶活性的变化

玉米弯孢叶斑病菌与大斑病菌互作过程中防御酶活性的变化

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：王晓东李婉莹刘限苏家高增贵沈阳农业大学植物免疫研究所

亲和病原菌侵染寄主后不但可以诱导寄主产生对该病害的抵抗作用,而且还可以诱导寄主产生对其他多种病害的抵抗作用。目前,大多数报道是非致病性病原菌诱导寄主产生对致病菌的诱导抗病性作用,对于亲和病原菌诱导寄主产生对该菌或其他亲... 详细信息

亲和病原菌侵染寄主后不但可以诱导寄主产生对该病害的抵抗作用,而且还可以诱导寄主产生对其他多种病害的抵抗作用。目前,大多数报道是非致病性病原菌诱导寄主产生对致病菌的诱导抗病性作用,对于亲和病原菌诱导寄主产生对该菌或其他亲和病原菌的广谱诱导抗病性作用研究较少。植物在受到病原菌的侵染后,会引起植物防御酶系的开启。在植物体内产生的与抵抗病原微生物有关的酶主要有苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PP0)和过氧化氢酶(CAT)。PAL是苯丙氨酸代谢过程最关键的酶,主要与植物抗毒素的物质香豆素、木质素、类黄酮及其异类黄铜衍生物等合成关系密切,在植物抗病性反应中发挥着重要作用。PPO催化醌类和木质素的合成,使细胞免受病原菌的侵害。本试验从细胞壁物质的变化初步分析了亲和病原菌的诱导抗病性作用机制,分析玉米弯孢叶斑病菌与大斑病菌互作过程的防御酶系的变化规律,探讨两者的互作关系。通过测定9个处理中防御酶系PAL、POD、PPO和CAT的活性结果表明,经弯孢叶斑病菌诱导后再挑战接种大斑病菌的处理,PAL酶活性高于清水对照,共有两个酶活高峰,分别在24h和72h,并且第二次酶活高峰大于第一次酶活高峰;多酚氧化酶(PPO)酶活性在8h和72h均出现酶活性高峰,接种8h后出现的酶活高峰大于72h出现的酶活高峰;过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)酶活性均在24h和72h出现酶活性高峰。且接种玉米弯孢病菌后再挑战接种大斑病菌处理,大斑病病斑大小较单独接种大斑病菌处理与同时接种弯孢病菌和大斑病菌处理的病斑明显小。说明玉米弯孢叶斑病菌对大斑病菌有一定的抑制作用。

关键词：弯孢叶斑病菌大斑病菌交互保护作用酶活

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辽宁省辣椒疫病菌不同生理小种生物学特性比较研究

辽宁省辣椒疫病菌不同生理小种生物学特性比较研究

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘长远张里梁春浩王辉关天舒于舒怡刘丽辽宁省农业科学院植物保护研究所沈阳农业大学植物保护学院

辣椒疫病(Phytophthora capsici Leonian)是世界辣椒生产上重要的病害,每年造成的产量损失极大,目前已成为辽宁省辣椒生产上重要的土传病害。植物病原菌不同生理小种在形态特征上很难加以区分,开展不同生理小种生物学特性研究,有利于植... 详细信息

辣椒疫病(Phytophthora capsici Leonian)是世界辣椒生产上重要的病害,每年造成的产量损失极大,目前已成为辽宁省辣椒生产上重要的土传病害。植物病原菌不同生理小种在形态特征上很难加以区分,开展不同生理小种生物学特性研究,有利于植物病原菌不同生理小种的鉴定。本文对辽宁省不同生理小种进行了生物学特性比较研究,为辣椒疫病菌生理小种的辅助鉴定提供了依据。研究表明,CDA是1号生理小种(HDG菌株)生长最佳的培养基,TR是2号(SYT菌株)和3号生理小种(JZB菌株)生长最佳培养基;1号、2号、3号生理小种在CDA、PDA、TR和OMA培养基上菌丝生长浓密程度不-;3个生理小种利用碳氮源能力-致,利用双糖比单糖和多糖能力强,以蛋白胨为最佳氮源,利用尿素最差,铵态氮不利于病菌生长。1号生理小种菌株最适生长温度范围为28～30℃,2号、3号生理小种为28℃。在偏酸条件易生长,但3个生理小种对pH要求存在差异;黑暗比光照更有利于病菌生长。CDA是1号、3号生理小种产孢子囊的最佳培养基,TR是2号生理小种产孢子囊的最佳培养基,半乳糖、无机铵盐不适宜产孢,1号、2号生理小种最佳产孢温度分别为28℃和25℃,3号生理小种最易产孢温度为30℃;最适产孢pH值为7;在光照和光暗交替条件下3个生理小种均能产孢子囊,1号、3号生理小种在光暗交替条件下产孢量最大,2号生理小种在光照条件下产孢量最大,只有1号生理小种在黑暗条件下可产孢子囊。黑暗比光照条件更适于孢子囊萌发,在相同条件下3号生理小种孢子囊萌发率最高,1号生理小种孢子囊萌发率最低,1号生理小种孢子囊萌发的最适温度范围为25～30℃,2号、3号生理小种最适温度范围为25～28℃。孢子囊萌发的最适pH值为5。

关键词：辣椒疫病生理小种生物学特性比较,辽宁省

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生防内生枯草芽孢杆菌Jaas ed1在西瓜植株内的定殖能力检测

生防内生枯草芽孢杆菌Jaas ed1在西瓜植株内的定殖能力检测

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：王卿林玲罗楚平邓晟江苏省农业科学院植物保护研究所

为研究从茄子茎秆中分离出来的具有广谱抗菌活性的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株Jaas ed1与作物的互作关系,用利福平（rifampicin,Rif）抗性和绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）标记Jaas ed1,并检测标记后的菌株... 详细信息

为研究从茄子茎秆中分离出来的具有广谱抗菌活性的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株Jaas ed1与作物的互作关系,用利福平（rifampicin,Rif）抗性和绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）标记Jaas ed1,并检测标记后的菌株在西瓜根和茎中的定殖能力。首先用驯化方法筛选抗Rif的突变菌株,将野生型菌株Jaas ed1进行Rif抗性标记。用化学转化方法将携带有gfp基因的穿梭载体pGFP22导入野生型菌株Jaas ed1中并于荧光显微镜下观察工程菌株GFP的表达情况,将野生型菌株Jaas ed1进行GFP标记。然后检测Rif抗性标记菌株和GFP标记菌株对植物病原真菌的拮抗活性和遗传稳定性。将Rif抗性标记菌株和GFP标记菌株分别灌浇西瓜苗根部,再用表面消毒—研磨—铺平板技术回收检测Rif抗性标记菌株在西瓜苗根部和茎部的定殖数量,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察GFP标记菌株在西瓜苗根部和茎部的定殖情况。结果成功获得了Rif抗性标记的菌株,命名为Jaas ed1,GFP标记的菌株命名为Jaas ed1-GFP。Jaas ed1和Jaas ed1-GFP对植物病原真菌的拮抗能力与野生型菌株没有明显变化,并且都具有良好的遗传稳定性。在灌根接种Jaas ed1后的35天内能在西瓜苗根部检测到Jaas ed1,20天内能在茎部检测到Jaas ed1;并且在根部定殖的数量显著大于茎部,接种后3天根部Jaas ed1的数量为1.62×10～4 cfu/g鲜重,茎部仅为2.95×10～2 cfu/g鲜重。灌根接种Jaas ed1-GFP后的第3天,在荧光显微镜下观察到西瓜苗根部存在大量的Jaas ed1-GFP,在激光共聚焦显微镜观察到西瓜苗茎内的Jaas ed1-GFP分布集中在维管束中。表明来源于茄子茎秆的内生枯草芽孢杆菌Jaas ed1能够在西瓜植株体内定殖。Jaas ed1能够从土壤中进入西瓜根部组织,并且能够侵入到茎部微管束组织中,从而在整个植株体内转移。

关键词：枯草芽孢杆菌Jaas ed1 内生细菌利福平绿色荧光蛋白定殖维管束

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真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘四谢甲涛程家森姜道宏付艳苹湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学/农业微生物学国家重点实验室

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒。弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注。在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协... 详细信息

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒。弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注。在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协同进化。目前关于真菌病毒与寄主互作的研究主要集中在栗疫病菌弱毒病毒与栗疫病菌之间的互作,其他真菌病毒与寄主（病毒与核盘菌等）的互作体系也已陆续建立。前期研究过程中克隆得到真菌病毒BfHV-2/10HN454,该病毒基因组由6 251个核苷酸（不含Poly A结构）组成,含有两个推定的开放性阅读框（ORF）。ORF1编码具有RdRp结构域特性的蛋白,基于该结构域分析,病毒BfHV-2/10HN454与Hypoviridae科的病毒亲缘关系较近;ORF2推定编码的蛋白与人及动物的epidermal growth factor receptor（EGFR）pathway substrate（EGFRS）蛋白具有一定的相似性。其中与西印度海牛（Trichechus manatus latirostris）的EGFRS蛋白（XP04384482.1）相似性最高为25%,E值为0.053。保守结构域搜索发现该蛋白存在Chromosome segregation ATPases（Cell division and chromosome partitioning）保守结构域,E值为1.17e-07,并将该蛋白命名为EGFRS-1ike蛋白。EGFRS蛋白在生物体内与突触囊泡的回收和EGFR受体的内吞及其在质膜上的定位相关,但在病毒基因组中尚未见报道。该蛋白的类似基因为何会出现在真菌病毒BfHV-2/10HN454基因组中,其在寄主体内是否会表达并对寄主产生影响?为了解答该问题,我们通过农杆菌介导转化（ATMT）技术将该基因分别导入核盘菌和灰葡萄孢菌中,同时获得了生长缓慢、畸形扇变、菌丝尖端变细且分支增多、产孢量降低及致病力减弱的转化子;进一步通过DAPI染色及电镜观察细胞核,发现转化子的细胞核形态异常、核仁较少见且发生聚集现象。这些生物学表型与原始携带病毒BfHV-2/10HN454的菌株10HN454表型相似。说明该蛋白可能在核盘菌和灰葡萄孢菌中表达并且具有一定的功能,对寄主产生了一定的影响,相关分子机理研究正在进行之中。

关键词：真菌病毒 EGFRS-like蛋白病毒与寄主互作

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水稻细菌性基腐病GFP标记菌株的构建及其侵染研究

水稻细菌性基腐病GFP标记菌株的构建及其侵染研究

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：何哲龙周海亮蔡丽侯明生华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室

近年来,由菊欧文氏菌玉米致病变种(Dickeyazeae)引起的水稻细菌性基腐病正上升为水稻上的一种重要病害。2009年本病在湖北省枝江和阳新首次发现,2010年又在大冶等地相继发生为害。根据田间调查发现,本病在水稻整个生育期均可发生为害,... 详细信息

近年来,由菊欧文氏菌玉米致病变种(Dickeyazeae)引起的水稻细菌性基腐病正上升为水稻上的一种重要病害。2009年本病在湖北省枝江和阳新首次发现,2010年又在大冶等地相继发生为害。根据田间调查发现,本病在水稻整个生育期均可发生为害,种子萌芽过程中侵入,可造成烂种、烂芽;分蘖至灌浆期发病,植株茎基部变黑腐烂,并伴有恶臭味,随着病情加重,病株根茎处易折断。发病较轻时,田间病株呈零星分布,在同一稻丛中常与健株相混生。分蘖期发病,病株先是心叶青卷,随后枯黄,外观似螟虫为害的枯心苗。圆秆拔节期发病,叶片自下而上逐渐发黄,叶鞘近水面处有边缘褐色、中间青灰色的长条形病斑。孕穗期以后发病,常表现为急性青枯死苗现象,病株先失水青枯,形成枯孕穗、半枯穗和枯穗,有的病株基部以上2～3个茎节也同时变成黑褐色,并生有少量倒生根。重病田块发病率高达80%以上,一般田块发病在50%左右,产量损失在50%以上。该病在局部地区已经成为水稻高产、稳产的严重障碍。为了研究菊欧文氏菌玉米致病变种在水稻中侵染、定植和传播的方式,我们运用绿色荧光蛋白标记技术对菊欧文氏菌玉米致病变种菌株进行标记。载体pPROBE-AT-gfp是以pBBR1为骨架的广宿主载体,作为携带GFP基因的载体能用于菊欧文氏菌中,作GFP基因表达载体。本研究将载体pPROBE-AT-gfp通过电击法转入野生型菊欧文氏菌玉米致病变种菌株中,加入1mL的NB培养基28℃培养1h。然后加入到150μg/μL氨苄青霉素的NA培养基上培养48h,挑取单菌落进行培养,筛选获得了绿色荧光蛋白标记菌株。用已获得的绿色荧光蛋白标记菌株对水稻幼苗进行伤根接种,对接种后3、6、12、24h的水稻根进行观察,发现菊欧文氏菌玉米致病变种菌株从植物根部伤口进入根内之后逐步上移,24h时已在根部成功定植。后续试验正在进行当中。

关键词：细菌性基腐病 GFP基因电击转化侵染

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Pathogenicity Differentiation and Genetic Analysis of Curvularia lunata in Northern China

Pathogenicity Differentiation and Genetic Analysis of Curvul...

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者： Li Guofu Xiao Shuqin Gao Ying Xue Chunsheng Department of Plant Protection Shenyang Agricultural University

Thirty-eight isolates of Curvularia lunata,the causal agent of Curvularia leaf spot,were collected in 9 corn-growing locations throughout four provinces of Northern China during 2003 ~ 2004,to determine their pathogenicity on host differentials（Shen135,CN165,Mo17,Luyuan92,78599-1,Ye478,B73,E28 and Huangzaosi）.The isolates were grouped into 3 different pathogenic types（Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ） based on their infection types on the host differentials and disease *** analysis of within and between pathogenic types by universally primed PCR（UP-PCR） revealed high genetic diversity in *** population.A phylogenetic dendrogram was generated by the UPGMA method based on the average similarity coefficient between pathogenic type groups using program of the NTSYSpc2.10 *** clusters（A,B,C,D,E and F） were resolved at the 0.64 similarity *** were 11 isolates in pathogenic type Ⅰ（55%） which belong to cluster A（68.75%）,pathogenic type Ⅱ（68.75%） also had 11 existing in cluster B,C,D,F（52.38%）,pathogenic Ⅲ（100%） had 1exiting in cluster F（100%）.Our current studies demonstrated UP-PCR is an useful tool for identifying pathogenicity of ***.

关键词： Curvularia lunata Pathogenic type Host differential UP-PCR Genetic diversity

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烟草突变株SN01、SN02抗PVYN相关基因的克隆及表达分析

烟草突变株SN01、SN02抗PVYN相关基因的克隆及表达分析

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：朱丹安梦楠赵艳琴赵秀香吴元华沈阳农业大学植物保护学院内蒙古民族大学农学院

烟草抗病突变株SN01、SN02为本实验室筛选获得的高抗PVY（potato virus Y vein necrosis strain）的具有自主知识产权的烟草新种质。为了进一步明确其抗PVY的分子机制,本文研究其抗病相关基因,并分析抗感烟株中该基因的表达量差异情况... 详细信息

烟草抗病突变株SN01、SN02为本实验室筛选获得的高抗PVY（potato virus Y vein necrosis strain）的具有自主知识产权的烟草新种质。为了进一步明确其抗PVY的分子机制,本文研究其抗病相关基因,并分析抗感烟株中该基因的表达量差异情况。首先通过比较GenBank中不同植物抗PVY基因序列,根据保守区设计引物,采用RT-PCR技术从抗病突变株SN01和SN02及其对应感病亲本NC89和K326中成功克隆获得了真核生物翻译起始因子4E（eIF4E）全长基因,并分别命名为eIF4E01、eIF4E02、eIF4E89和eIF4E26,其开放阅读框ORF长度均为669bp,编码222个氨基酸。将eIF4E01、eIF4E02提交到GENEBANK得到登录号GenBank:KJ143694和GenBank:KJ1 84848。应用实时荧光定量技术研究了在接种PVY后不同时间点（第0天、3天、6天、9天、12天和15天）在抗感材料中cIF4E基因表达量差异情况。结果表明,接种病毒以后各材料eIF4E基因均表达上调,但差异较大。抗病突变株SN01和SN02在接种病毒后eIF4E上调幅度明显低于其感病亲本NC89和K326,除在第12天和第15天SN01的eIF4E基因相对表达量较其感病亲本NC89略有升高外,突变株中eIF4E基因的表达量都低于其感病亲本。根据上述结果可以推断:eIF4E基因是通过接种PVY后诱导的差异表达基因,抗病突变株SN01和SN02的抗病作用与eIF4E基因相关,即此两个抗病突变株中的eIF4E基因的抑制表达是其抗PVYN的分子机制之一。

关键词：烟草抗PVYN突变株 eIF4E基因克隆差异表达

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芸薹黄化病毒P0末端氨基酸序列对于其生物学功能的影响分析

芸薹黄化病毒P0末端氨基酸序列对于其生物学功能的影响分析

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：孙倩向海英李源源王颖张宗英张永亮王献兵李大伟于嘉林韩成贵中国农业大学植物病理学系与农业生物技术国家重点实验室

芸薹黄化病毒(brassica yellows virus,BrYV)是我们实验室发现的一种新的侵染十字花科作物的病毒,寄主范围比较广泛,在我国大陆广泛分布,能够引起叶片黄化和卷曲的症状。BrYV属于黄症病毒科(Luteovidea)马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)... 详细信息

芸薹黄化病毒(brassica yellows virus,BrYV)是我们实验室发现的一种新的侵染十字花科作物的病毒,寄主范围比较广泛,在我国大陆广泛分布,能够引起叶片黄化和卷曲的症状。BrYV属于黄症病毒科(Luteovidea)马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)。基因组序列分析发现BrYV存在三种基因型(BrYV-A、BrYV-B和BrYV-C),主要差异在于5′端ORF序列。由于该属病毒编码的P0蛋白氨基酸序列同源性很低,导致P0的抑制子活性差异也较大,为此我们对BrYVP0功能进行了初步研究。BrYV-A 5′端ORF0编码产生的P0蛋白同马铃薯卷叶病毒属部分病毒编码产生的P0蛋白一样具有抑制子功能。BrYV-A P0全长249个氨基酸,相对分子量约为29kDa。通过共侵润接种本生烟实验证明,BrYV-A P0不仅能够抑制单链GFP引发的局部转录后基因沉默,还能抑制单链GFP引发的系统转录后基因沉默,且与甘蔗黄叶病毒(sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)P0类似,能引起接种叶注射区域迅速坏死。为了定位影响BrYV-A P0蛋白沉默抑制功能和接种叶坏死活性的关键氨基酸,我们进行了末端氨基酸截短突变分析。将P0蛋白N末端融合Myc标签就会导致蛋白丧失抑制基因沉默和诱导坏死反应活性,说明N末端对生物学功能至关重要,而C末端融合标签对蛋白功能影响较小。对P0 C端初步缺失237～249位氨基酸蛋白功能仍不受影响,为了进一步定位C末端的关键氨基酸,又构建了一系列C端截短突变体。实验结果表明,缺失223～249位氨基酸蛋白功能完全丧失,既不能抑制局部转录后基因沉默和系统转录后基因沉默,也不能诱导注射叶片产生坏死反应。而缺失224～249位氨基酸蛋白恢复了抑制局部转录后基因沉默和诱导坏死的活性,但不能抑制系统转录后基因沉默。说明第223位氨基酸是P0抑制局部沉默和诱导注射叶片坏死所必需的。通过软件对P0的二级结构进行预测,发现I222处于α螺旋的最末端,而I223恰好处于coil卷曲的起点位置,推测该位置可能对P0蛋白结构的形成至关重要。本实验获得的研究结果为进一步研究BrYV的P0沉默抑制和激发坏死的分子机制提供参考数据。

关键词：芸薹黄化病毒 P0 基因沉默抑制坏死截短突变体

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