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161 篇 会议
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4 篇 小鼠
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机构

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7 篇 中国农业科学院农...
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6 篇 南京农业大学
6 篇 国家兽药安全评价...
6 篇 华中农业大学
5 篇 国家食品安全风险...
5 篇 华南农业大学
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3 篇 中国农业科学院上...
3 篇 西北农林科技大学
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作者

14 篇 邓旭明
14 篇 李继昌
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8 篇 汤树生
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7 篇 张朝明
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6 篇 费陈忠
6 篇 沈建忠
6 篇 李健
6 篇 曾振灵
6 篇 王丛丛

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转化毒理学与暴露组学技术在食品安全风险管理应用

转化毒理学与暴露组学技术在食品安全风险管理应用

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：吴永宁国家食品安全风险评估中心

【目的】中国正在基于风险分析框架建立国家风险评估制度用于食品安全公共卫生管理。风险分析有3个主要部分组成,图1显示其相互关系(1).特定风险管理措施的选项的获益与成本评估取决许多因素,如食品的供应与营养质量,消费者对于食品安... 详细信息

【目的】中国正在基于风险分析框架建立国家风险评估制度用于食品安全公共卫生管理。风险分析有3个主要部分组成,图1显示其相互关系(1).特定风险管理措施的选项的获益与成本评估取决许多因素,如食品的供应与营养质量,消费者对于食品安全的信心(2)。本文将对于中国食品安全评估结果用于风险管理的转化进行简单介绍。【方法】在传统食品安全领域,风险评估取决于确定性模型,如用未观察到(有害)效应的剂量(NO(A)EL)和暴露的平均水平或高端暴露量。二十一世纪,暴露科学在确定性模型利用分类数据和生物体液与组织中污染物水平的测量预测不同暴露途径的暴露水平。更加精确的概率性和分布性评估方法,对于表征危害和暴露在增加。研究个体化的总暴露开始采用进入机体的化合物的外暴露测量,这将提供更多的概率和分布评估方法(3-5)。这些结果提供了人群变异和不确定度的更多描述。另外,新技术带来的风险评估新结果不断出现,如暴露边界比(MOE)新技术使用,用来提供与实际风险定量直接相关的健康关注水平的相对指示。【结果】在健康相关指导值(HBGVs)表现形式为可接受、耐受量或者参考剂量(RfD),通常采用确定性方法产生,用以判断暴露量"安全"(在HBGV以下)或者"不安全"((在HBGV以下)。在过去许多年中,这是管理风险的红线。决策者和监督管理部门用其制定标准并规范暴露水平。考虑到不确定度和变异的存在,概率性模型(如HBGV的分布)可以提供更加详细的剂量-反应关系模型以提高透明度。风险评估者采用这些技术可以提供毒理学和暴露数据合理使用,这可通过不确定度模型描述接受。对于风险管理者,这些工作使得决策更加复杂,特别是特定保护人群。考虑到最敏感个体需要比一般人群需要特别保护(如决定保护目标至少保护群体当95%不超过可接受/耐受摄入量(这为长期目标)。对于某些污染物,建立更加特别的HBGV十分有用(如普通人群与孕妇分开制定)。对于这可以用2个例子说明,其一为全民食盐加碘的风险-获益分析(图2,6),另外为大米中无机砷国际限量(表1和图3)。【结论】在分子流行病学中已经设想将个体暴露组用于疾病与健康群体的区分。其应用目标一是在疾病与健康中寻找病因,其二二是鉴定有害暴露并减低这一暴露。风险评估手段和信息的进展会为风险管理者提供更多手段,包括转化毒理学和暴露组学平台。

关键词：暴露组学确定性模型暴露水平食品安全风险管理应用

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喹乙醇单克隆抗体的制备

喹乙醇单克隆抗体的制备

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：王磊李建喜张景艳杨志强王学智张凯孟嘉仁中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所

【目的】喹乙醇（Olaquindox,OLA）常被用于饲料添加剂,但过量或不规范使用有潜在的致畸和致突变性。欧盟、美国等禁止其用于饲料添加剂,我国规定只能添加于体重低于35 kg的猪饲料中。本研究旨在制备一种效价高、特异性强的喹乙醇单克... 详细信息

【目的】喹乙醇（Olaquindox,OLA）常被用于饲料添加剂,但过量或不规范使用有潜在的致畸和致突变性。欧盟、美国等禁止其用于饲料添加剂,我国规定只能添加于体重低于35 kg的猪饲料中。本研究旨在制备一种效价高、特异性强的喹乙醇单克隆抗体,为饲料中喹乙醇快速检测方法的建立奠定基础。【方法】首先,采用活泼酯化法合成喹乙醇免疫抗原（OLA-NHS-BSA）、检测抗原（OLA-NHS-OVA）和鉴别抗原（OVA-NHS）,利用BCA法和紫外分光光度法检测OLA-NHS-BSA和OLA-NHS-OVA的蛋白含量和偶联比。然后,采用皮下和腹腔注射的方法,分别用剂量为50μg/只、100μg/只和200μg/只的OLA-NHS-BSA免疫Balb/C小鼠,每隔2周免疫一次,免疫4次后,断尾采血,分离血清;分别使用OLA-NHS-OVA和OVA-NHS包被的检测板,通过间接ELISA法测定血.清效价,确定免疫方案和融合备用小鼠;融合前4天,通过腹腔注射,冲刺免疫融合备用小鼠。融合前一天取健康小鼠的腹腔细胞,制备饲养细胞;融合当天取冲刺免疫的小鼠制备脾细胞,在PEG诱导下与SP2/0骨髓瘤细胞按8:1的比例进行融合,37℃、5%CO条件下,在含有饲养细胞的HAT选择培养基中进行培养。11天左右,再分别使用OLA-NHS-OVA和OVA-NHS包被的检测板,通过间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,并利用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆;最后采用体内诱生腹水法制备大量喹乙醇抗体,通过间接ELISA法测定抗体效价。【结果】全抗原OLA-NHS-BSA和OLA-NHS-OVA的蛋白含量分别为4.69 mg/mL和8.85 mg/mL,偶联比分别为1:4.9和1:6.4,全抗原、半抗原和载体蛋白在200～500 nm的扫描图谱显示半抗原和载体蛋白偶联成功。第4次免疫后,二个免疫剂量组的小鼠血清效价均达1:16000以上,且以100μg/只剂量组的免疫效果最好,为最佳免疫方案。细胞融合后共培养576孔细胞,11天后观察筛选阳性杂交瘤细胞,有杂交瘤细胞生长的共513孔,融合率为89.06%,阳性孔有84孔,阳性率为14.58%;通过反复筛选、克隆最终得到一株分泌高效价和特异性抗体的杂交瘤细胞株3B6,细胞培养上清效价为1:5.12×10～4,制备的腹水效价为1:1.6×10～7,且均与OVA-NHS无交义。【结论】制备的单克隆抗体效价高、特异性强,是针对喹乙醇的特异性抗体,可以用于建立喹乙醇的快速免疫学检测方法。

关键词：喹乙醇单克隆抗体制备

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单宁酸锌的遗传毒理学试验

单宁酸锌的遗传毒理学试验

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：贺文庆陈秀云冯金利李维静卜仕金扬州大学兽医学院扬州大学医学院

【目的】通过体内和体外实验对单宁酸锌的遗传危害性做出初步评价,进而预测其致癌的可能性。【方法】①Ames试验（致突变试验）:选用TA97、TA98、TA100和TA102一组标准测试菌株进行试验,采用鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验标准判... 详细信息

【目的】通过体内和体外实验对单宁酸锌的遗传危害性做出初步评价,进而预测其致癌的可能性。【方法】①Ames试验（致突变试验）:选用TA97、TA98、TA100和TA102一组标准测试菌株进行试验,采用鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验标准判断法进行试验菌株的生物学特性和自发同变菌落数检测。②微核试验:50只清洁级昆明小鼠随机分为五组,其中单宁酸锌高剂量组按1/2 LD（2500 mg/kg b.w.）经口灌服染毒,中剂量组、低剂量组灌服染毒剂量分别为1/4 LD（1250mg/kg b.w.）、1/8 LD（625 mg/kg b.w.）。另分别设一环磷酰胺（CP）阳性对照组和阴性对照组。按常规方法进行小鼠骨髓微核试验,采用30 h两次给药法,于第二次给药后6 h取材、制片,计算微核率。③精子畸变试验:50只清洁级昆明小鼠随机分为五组,其中单宁酸锌按1/2 LD（2500 mg/kgb.w.）作为高剂量组经口灌服染毒,中剂量组、低剂量组灌服的染毒剂量分别为I/4 LD（1250 mg/kgb.w.）和1/8 LD（625 mg/kg b.W.）。另分别设一阳性对照组（环磷酰胺40 mg/kg）和阴性对照组（生理盐水）。按常规方法进行小鼠精子畸形试验,采用连续经口给予受试物5天,从首次给予受试物计第35天颈椎脱臼处死动物,取双侧附睾制片,每只动物计算1000个精子中的畸形数,计算畸形率。【结果】①Ames试验:结果显示,单宁酸锌在5 mg～0.005 mg范围内,有或无代谢活化系统（S9）时,4种鼠伤寒沙门氏菌试验株的每皿平均回变菌落数均在溶剂（灭菌蒸馏水）对照的两倍以内,未见剂量反应关系;②微核试验:单宁酸锌对小鼠骨髓细胞没有抑制及毒性作用（PCE/NCE≥1）。给药组与阴性对照组微核率相比著异无统计学意义（P>0.05）,而CP组与给药组、阴性对照组微核率比较差异有统计学意义（P<0.01）;③精子畸变试验:单宁酸锌的三个剂量组的精子畸形率经统计学处理与阴性对照组比较无显著性差异（P>0.05）,而阳性对照组与三个给药剂量组、阴性对照组比较,差异有统计学意义（P<0.01）。【结论】表明单宁酸锌对鼠伤寒沙门氏菌无致突变性,对小鼠骨髓细胞的微核率和精子无影响,可初步判定单宁酸锌无遗传毒性。

关键词：单宁酸锌 Ames试验微核试验遗传毒理

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有机胂添加剂暴露胁迫对蚯蚓和剑尾鱼的分子生态毒性效应研究

有机胂添加剂暴露胁迫对蚯蚓和剑尾鱼的分子生态毒性效应研究

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者： Muhammad Rizwan-ul-Haq 熊文广孙永学曾振灵国家兽药安全评价(环境评估)实验室(华南农大) 华南农业大学兽医学院

【目的】有机胂添加剂在畜禽饲喂后经粪尿进入环境中的潜在生态危害已引起人们的关注。本文进行了土壤蚯蚓和水生生物剑尾鱼在其暴露胁迫效应下的生物标志物分子指标研究,以期为有机胂污染的早期分子诊断和风险评估提供依据。【方法】... 详细信息

【目的】有机胂添加剂在畜禽饲喂后经粪尿进入环境中的潜在生态危害已引起人们的关注。本文进行了土壤蚯蚓和水生生物剑尾鱼在其暴露胁迫效应下的生物标志物分子指标研究,以期为有机胂污染的早期分子诊断和风险评估提供依据。【方法】将赤子爱胜蚓暴露于洛克沙砷(15,75,150mgAs/kg)和阿散酸(30,150,300 mg As/kg)土壤中分别于第5、10、15天采样;剑尾鱼暴露于洛克沙砷和阿散酸(12.5,2.5,0.5mgAs/L)的水环境中分别于第2、5和7天采样,进行了抗氧化酶系统(SOD、CAT、GSH-Px、GST)靶标酶活性检测;采用实时荧光定量PCR研究了GST和HSP70基因mRNA的相对表达量分析;通过RACE-PCR法克隆赤子爱胜蚓GST和HSP70基因和剑尾鱼GST基因的全长序列,并运用生物信息学分析其结构、功能和对应的蛋白质序列。【结果】(1)经洛克沙胂和阿散酸胁迫后赤子爱胜蚓SOD、CAT、GSH-Px活性均呈现先升高至第10天后出现下降变化趋势,GST活性在较高浓度下暴露初期即表现明显升高。剑尾鱼GST在阿散酸处理下出现显著抑制,GSH-Px活性在两种药物处理下呈现先抑制后增长变化,剑尾鱼SOD、CAT活性与蚯蚓变化相似。(2)成功克隆出赤子爱胜蚓GST和HSP70基因的全长序列和剑尾鱼的GST全长序列。赤子爱胜蚓GST cDNA序列全长984bp,包括一个编码206个氨基酸的621bp的ORF:HSP70 cDNA序列全长2481 bp,包括一个编码655个氨基酸的1968 bp ORF;剑尾鱼GST cDNA序列全长978 bp,包括一个编码223个氨基酸的673 bp的ORF。(3)赤子爱胜蚓经洛克沙砷处理后Hsp70与GST基因表达量均表现持续增加;阿散酸处理初期Hsp70表达量处于抑制状态,后随暴露时间延长表达量增加。剑尾鱼在较高浓度洛克沙砷处理下Hsp70的表达量出现先增加后下降,而阿散酸处理的Hsp70表达量均随着浓度和暴露时间的增加而增加,在洛克沙胂和阿散酸处理下GST基因表达量在第2天即出现显著抑制。【结论】本文从分子水平初步探讨了洛克沙砷和阿散酸对土壤蚯蚓和水生生物剑尾鱼的生态毒理效应,为有机胂的环境风险评估提供理论数据。首次克隆出的赤子爱胜蚓GST和HSP70基因全长序列和剑尾鱼GST全长序列,为下一步生态毒理研究的生物标志物筛选提供了基础。

关键词：有机胂添加剂蚯蚓剑尾鱼抗氧化酶系统基因表达量

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香连消毒液的致突变性和致畸性研究

香连消毒液的致突变性和致畸性研究

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：吴永魁张德利李乾学薛慧亮军事医学科学院军事兽医研究所

【目的】香连消毒液是由黄连、苦参、艾叶等提取的中药制剂,1:5稀释后可杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、沙门氏杆菌等,1:20稀释后可杀灭牛传染性鼻气管炎病毒、鸡新城疫病毒等,主要用于奶牛体表消毒及家禽饮水消毒等。我们通... 详细信息

【目的】香连消毒液是由黄连、苦参、艾叶等提取的中药制剂,1:5稀释后可杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、沙门氏杆菌等,1:20稀释后可杀灭牛传染性鼻气管炎病毒、鸡新城疫病毒等,主要用于奶牛体表消毒及家禽饮水消毒等。我们通过急性毒性、致突变性和致畸性试验,为该制剂的安全性毒理学评价提供实验依据。【方法】依据新兽药一般毒性和特殊毒性试验技术要求和卫生部颁布的《消毒技术规范》进行小鼠经口急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验和大鼠致畸试验。致畸试验中香连消毒液的给药剂量分别为1.11、3.33和10.00 mL/kg,同时设溶剂对照和阳性对照组,每组孕鼠12～13只,香连消毒液和溶剂对照组在大鼠妊娠第7～15d每天经口灌胃给药,阳性对照组在妊娠第11～13d每天腹腔注射给药,试验期间检查孕鼠临床症状并定期称重,于妊娠第20d处死孕鼠,检查胎鼠外观、生长发育、骨骼和内脏等指标。【结果】（1）小鼠急性毒性试验:按0.5mL/10g经口灌服香连消毒液后,小鼠出现步态不稳、卧地少动,几小时后恢复正常,该症状与溶剂对照组一致,7d内动物生长良好,无死亡。表明香连消毒液对小鼠急性经口LD大于50mL/kg。（2）Ames试验:在加与不加S9条件下,香连消毒液在100.0μL/m以下对TA97、TA98、TA100、TA102的回复突变菌落数与溶剂对照组和自发回变菌落数相近,无剂量反应关系,各阳性对照组的回变菌落数高于自发回变菌落数的数倍。表明香连消毒液对测试菌株无致突变性。（3）小鼠骨髓细胞微核试验:香连消毒液以5.0、10.0和20.0mL/kg经口给药,其微核率在1.40‰～1.90‰之间,与溶剂对照组（2.00‰）比较无显著性差异,与环磷酰胺阳性对照组（26.70‰）比较有显著性差异（P<0.01）。表明香连消毒液对体细胞无致突变性。（4）小鼠精子畸形试验:香连消毒液3个剂量组精子畸形率在2.55%～3.43%之间,与溶剂对照组（3.46%）比较差异无显著性,与阳性对照组（7.88%）比较有显著性差异（P<0.01）。表明香连消毒液对小鼠精子畸形发生率无影响,对雄性生殖细胞无致突变性。（5）大鼠致畸试验:香连消毒液各剂量组和溶剂对照组对孕鼠的一般临床症状、增重和生殖机能无明显影响;对胎鼠的生长发育无明显影响;对胎鼠的外观、骨骼和内脏无致畸作用。【结论】香连消毒液属实际无毒类物质,无致突变性,无胚胎毒性和致畸性。

关键词：香连消毒液致突变性致畸性

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洛克沙生促血管新生作用初步研究

洛克沙生促血管新生作用初步研究

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：胡成云崔卫波刘学张雨梅扬州大学兽医学院

洛克沙生是国内外广泛使用的一种有机胂饲料添加剂,近来的研究表明其能促进人血管内皮细胞生长,存在着促血管生成作用及潜在的致癌风险。有关洛克沙生促血管生成作用的研究极少,国内未见报道。本研究拟通过鸡胚尿囊膜血管生成模型、大... 详细信息

洛克沙生是国内外广泛使用的一种有机胂饲料添加剂,近来的研究表明其能促进人血管内皮细胞生长,存在着促血管生成作用及潜在的致癌风险。有关洛克沙生促血管生成作用的研究极少,国内未见报道。本研究拟通过鸡胚尿囊膜血管生成模型、大鼠动脉环血管生成模型,在体内外初步研究洛克沙生促血管生成作用,为探讨洛克沙生可能的特殊毒性及潜在的致癌风险研究积累基本资料,对洛克沙生作为饲料添加剂在畜禽生产中使用安全性的研究有积极意义。鸡胚尿囊膜血管生成模型中,洛克沙生的剂量分别为10.00μM、1.00μM、0.10μM、0.01μM,VEGF为阳性对照,生理盐水为阴性对照。以7日龄鸡胚尿囊膜载体给药2d后,载体周围一级血管和二级血管数的数量及相应的血管面积为评价指标。结果表明,与生理盐水对照组比较,洛克沙生及VEGF阳性对照新生的一级血管数、二级血管数及新生血管面积率显著增加(P<0.05);洛克沙生在0.01μM～1.00μM范围内,随剂量增加新生血管数及面积率增加,呈现一定的剂量效应关系,1.00μM洛克沙生组的血管数及血管面积率最大与10.0 ng/ml VEGF相似;但10.00μM洛克沙生剂量组一级和二级血管数及血管面积未随剂量增加而增加,反而减小,与0.01μM剂量相当。结论为洛克沙生较低剂量时对鸡胚尿囊膜血管有明显的促进作用,而较高剂量(10.00μM)时促血管生成作用减弱。大鼠动脉环血管生成模型中,剂量设置同鸡胚尿囊膜试验。培养4d时,以动脉环新生的血管总数和最长血管长度为评价参数;培养6d后,以区域内新生血管数为评价参数。结果表明,培养4d时洛克沙生不同剂量及VEGF处理与生理盐水对照组比较,新生血管数显著增加(P<0.05),且在0.01μM～1.00μM范围内,随洛克沙生剂量增加而血管数量增加;但10.00μM洛克沙生剂量组血管数反而减少。洛克沙生不同处理的最长血管长度参数与阴性对照组有显著差异(P<0.05)。但VEGF组差异不显著(P>0.05),洛克沙生不同剂量(0.10μM～10.00μM)间无显著差异。培养6 d,洛克沙生不同剂量及VEGF组区域内血管数,与生理盐水对照组比较有显著性增加(P<0.05)。试验结果说明,洛克沙生对大鼠动脉环新生血管有促进作用,1.00μM时促血管生成作用最强,与10 ng/ml VEGF相当。综上所述,洛克沙生在0.01μM～10.00μM剂量范围内,在体内外具有明显的促血管新生作用。

关键词：洛克沙生血管新生鸡胚尿囊膜血管生成动脉环血管生成

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洛克沙胂对土壤细菌nirS、nosZ、16S rDNA V3高变区基因多样性及其丰度的影响研究

洛克沙胂对土壤细菌nirS、nosZ、16S rDNA V3高变区基因多样性及...

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：白玲张草熊文广孙永学国家兽药安全评价(环境评估)实验室(华南农大) 华南农业大学兽医学院

【目的】洛克沙胂是在我国畜禽业被广泛使用的一种有机胂添加剂,在畜禽饲喂后经粪尿直接排放或以施肥而进入土壤和水体环境的排放量十分惊人,其给土壤质量及作物生长带来严重影响,并进威胁人类的健康。本文通过洛克沙胂对菜地土壤微生... 详细信息

【目的】洛克沙胂是在我国畜禽业被广泛使用的一种有机胂添加剂,在畜禽饲喂后经粪尿直接排放或以施肥而进入土壤和水体环境的排放量十分惊人,其给土壤质量及作物生长带来严重影响,并进威胁人类的健康。本文通过洛克沙胂对菜地土壤微生物群落多样性的影响研究,为其应用后的生态风险评估提供实际依据。【方法】本文以田间0～20cm菜地土壤为研究对象,经室内阴干3天后粉碎过2mm筛,取12份3kg菜地土壤在工气候箱培养孵育1～2周后成功建立了室内人工模拟土壤生态系统,分别添加二个梯度浓度(15mg/kg、75mg/kg和150mg/kg)洛克沙胂(各3个重复,设立3个空白组)进行污染暴露胁迫试验。在第1、2、3、5和8周分别采集试验土壤样品,采用BIOLOG、DGGE、qPCR等方法研究洛克沙胂对土壤碳利用功能多样性、16SrDNA V3高变区基因多样性、反硝化细菌nirS、nosZ基因多样性及各基因丰度的影响。通过建立菜地土壤功能多样性指数、基因多样性指数及基因丰度在洛克沙生暴露下的时间依赖和剂量依赖关系,对菜地土壤微生物群落代谢多样性及细菌总量变化情况进行评价。【结果】(1)菜地土壤细菌16S rDNAV3可变区、反硝化细菌nirS、nosZ基因的DGGE指纹图谱分析结果显示,在洛克沙胂暴露胁迫处理初期,不同浓度下均出现部分条带消失而另一部分条带增强变亮现象,随着洛克沙胂浓度升高,对土壤中微生物基因多样性的影响逐渐增强;(2)经qPCR实时荧光定量分析结果显示,反硝化细菌nirS、nosZ基因丰度均出现明显下降,表明洛克沙胂能明显抑制菜地土壤反硝化细菌的生长,药物浓度越高抑制越明显;(3)洛克沙胂能降低菜地土壤微生物群落的碳源代谢功能,包括代谢强度和代谢多样性。其抑制效应随着洛克沙胂暴露浓度的升高而加强,在后期抑制效应逐渐减小。【结论】经洛克沙胂暴露处理后的土壤微生物利用碳源的能力降低,呈剂量依赖性效应关系,药物浓度越大,土壤微生物对碳源利用能力和多样性指数越低。土壤nirS、nosZ基因、16S rDNA V3高变区基因可作为土壤微生物的分子标志物指示洛克沙生污染的生态效应,BIOLOG技术可用于土壤污染监测,为洛克沙胂环境污染胁迫的早期预警提供基础理论数据。

关键词：洛克沙胂土壤微生物群落多样性 BIOLOG

来源：评论

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用Hep G2细胞微核与RAPD方法评价喹烯酮及其主要代谢物的遗传毒性

用Hep G2细胞微核与RAPD方法评价喹烯酮及其主要代谢物的遗传毒性

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：张可煜王米费陈忠薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室

【目的】喹烯酮作为我国广泛使用的喹噁啉药物之一其安全性问题已受到人们广泛关注。为进一步了解和评价喹烯酮及其主要代谢物脱二氧喹烯酮和喹噁啉-2-羧酸可能存在的遗传毒性及对喹烯酮临床应用的影响。【方法】运用细胞阻滞微核和RAP... 详细信息

【目的】喹烯酮作为我国广泛使用的喹噁啉药物之一其安全性问题已受到人们广泛关注。为进一步了解和评价喹烯酮及其主要代谢物脱二氧喹烯酮和喹噁啉-2-羧酸可能存在的遗传毒性及对喹烯酮临床应用的影响。【方法】运用细胞阻滞微核和RAPD方法评价喹烯酮及其代谢物脱二氧喹烯酮、喹噁啉-2-羧酸对Hep G2细胞的遗传毒性。细胞阻滞微核实验中喹烯酮和脱二氧喹烯酮和喹噁啉-2-羧酸设2.5、5、1 5、30.μmol/L 4个剂量组及1μg/ml丝裂霉素C阳性对照组,阴性对照为0.5%DMSO培养基,药物接触24h后在含3μg/ml细胞松弛素B的培养基中培养24h后收获细胞,用冷的高渗KCl处理后加入固定液(甲醇:冰醋酸为3:1)混匀滴片,自然干燥,10%Giemsa染色10min,镜检分析。RAPD分析中设5、15、30μmol/L 3个药物剂量组,以38条随机引物(GC含量≥60%),扩增产物取10μL于2%的琼脂糖也泳,分析扩增条带的多态性。【结果】2.5、5、15、30μmol/L喹烯酮及其代谢物30μmol/L脱二氧喹烯酮和喹噁啉-2-羧酸处理Hep G2细胞24h后,细胞的微核率及核分裂指数与对照组相比均显著增加(P<0.05),结果如图1所示。在RAPD研究的38条引物中,共有4条引物不产生扩增产物条带,2条引物产生弥散型扩增产物条带,12条引物的扩增产物条带多态性较丰富,其余引物扩增产物多态性差异不明显。在12条引物差异扩增条带中30μmol/L喹烯酮组和30μmol/L喹噁啉-2-羧酸组与对照组差异最明显,在OPB、OPC-1、OPC-9、OPC-11、OPC-17等引物产物中30μmol/L喹烯酮组产生新的高分子量条带,而30μmol/L喹噁啉-2-羧酸组往往高分子量条带丢失。脱二氧喹烯酮组产生的条带著异较小。【结论】喹烯酮能诱导Hep G2细胞产生微核,而代谢物脱二氧喹烯酮和喹噁啉-2-羧酸在高剂量时也能诱导微核轻微增加。而RAPD方法检测基因组稳定性时其检测限高于微核,只能高剂量时才能出现较明显的随机引物扩增著异。同时发现30μmol/L喹噁啉-2-羧酸有诱导随机引物高分子量条带减少的现象,是否为喹噁啉-2-羧酸对基因组的攻击所致有待于进一步研究。

关键词：喹烯酮代谢物微核遗传毒性

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MAPK信号通路在喹乙醇诱导HepG2细胞凋亡中的作用

MAPK信号通路在喹乙醇诱导HepG2细胞凋亡中的作用

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：赵文霞张朝明汤树生孙雨张婷肖希龙中国农业大学动物医学院上海中医药研究所

【目的】本实验室前期研究发现线粒体介导的细胞凋亡可能是喹乙醇导致HepG2细胞损伤的主要途径,但是喹乙醇诱导细胞凋亡的具体作用机制仍然不是很清楚。因此本研究仍以HepG2细胞作为模型,探讨MAPK信号通路在喹乙醇诱导细胞凋亡中的作用... 详细信息

【目的】本实验室前期研究发现线粒体介导的细胞凋亡可能是喹乙醇导致HepG2细胞损伤的主要途径,但是喹乙醇诱导细胞凋亡的具体作用机制仍然不是很清楚。因此本研究仍以HepG2细胞作为模型,探讨MAPK信号通路在喹乙醇诱导细胞凋亡中的作用,从而为喹乙醇药物的安全评价提供实验依据。【方法】分别用不同浓度(0μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、800μg/mL)的喹乙醇染毒HepG2细胞24 h和800μg/mL喹乙醇不同时间点(0 h、0.5 h、1h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h)染毒HepG2细胞,采用Western Blot法检测细胞内MAPK家族3个成员即ERK1/2、p38 MAPK和JNK磷酸化蛋白的表达情况。分别应用MEK1/2特异性抑制剂U0126、p38 MAPK特异性抑制剂SB203580及JNK1/2抑制剂SP600125抑制相应的磷酸化蛋白的表达,然后用800μg/mL喹乙醇染毒24 h,Annexin V-FITC/PI凋亡检测法检测细胞凋亡。【结果】Western blot试验结果表明与空白对照组相比,ERK磷酸化蛋白表达量在800μg/mL喹乙醇处理组中明显升高,而p38 MAPK和JNK磷酸化蛋白表达量在400μg/mL喹乙醇处理组中明显升高(p<0.01)。在喹乙醇染毒细胞0.5 h时ERK1/2磷酸化蛋白表达量明显升高,随后1 h～4 h又呈下降趋势,直到6 h以后,随着喹乙醇染毒细胞时间的延长,ERK1/2磷酸化蛋白表达又开始升高;与ERK1/2磷酸化过程不同,p38 MAPK和JNK1/2分别在喹乙醇染毒细胞1h和4 h时开始激活,在以后的试验时间点保持持续的激活状态,且呈时间依赖效应。Annexin V-FITC/P1双染细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡发现喹乙醇染毒组细胞的凋亡率为23.10%±3.59%,较空白对照组(7.2%±0.93%)明显升高(p<0.01)。经U0126处理后,喹乙醇诱导的细胞凋亡率为25.51%±3.05%,与喹乙醇对照组相比无统计学差异;而经SB203580和SP600125处理后,喹乙醇诱导的细胞凋亡率分别为40.20%±3.98%及38.40%±4.44%,较喹乙醇对照组有明显升高(p<0.05)。而单独的U0126、SB203580及SP600125处理组细胞的凋亡率分别为6.80%±0.84%、7.30%±0.86%、7.40%±1.10%,与空白对照组相比无统计学差异。【结论】喹乙醇能显著地激活ERK1/2、p38 MAPK和JNK通路,且p38 MAPK和JNK通路可能参与抑制喹乙醇诱导HepG2细胞凋亡,而ERK1/2通路与凋亡的发生无关。

关键词：喹乙醇 MAPK 细胞凋亡 HepG2细胞

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阿司匹林丁香酚酯的Ames试验

阿司匹林丁香酚酯的Ames试验

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：孔晓军李剑勇刘希望杨亚军张继瑜周旭正魏小娟李冰牛建荣中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室

【目的】对阿司匹林于香酚酯进行鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验,评价该化合物是否具潜在致突变性。【方法】以鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株TA97、TA98、TA100、TA102为试验菌株,以及由多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝匀浆（S-9）制备的S-9混合... 详细信息

【目的】对阿司匹林于香酚酯进行鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验,评价该化合物是否具潜在致突变性。【方法】以鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株TA97、TA98、TA100、TA102为试验菌株,以及由多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝匀浆（S-9）制备的S-9混合液为代谢活化系统,经平板掺入法后计数各菌株回复突变菌落数。各菌株中,TA97和TA98可以检测各种移码型诱变剂;TA100、TA1535可以检测引起碱基对置换的诱变剂;TA102可以检测其他测试菌株不能检出或极少检出的诱变剂;S-9混合液则用以代谢活化某些需要代谢酶才能使沙门氏菌突变型产生回复突变的诱变剂。各菌株经特性鉴定后均符合Ames试验标准,S-9生物活性鉴定合格。AEE的LD为10.39g/kg,故最高剂量设为50mg/ml,中间剂量为25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml,低剂量为3.125mg/ml;同时设阳性诱变剂（叠氮钠、2-氨基芴）对照组、溶剂（DMSO）对照组、空白对照组、阿司匹林对照组、于香酚对照组,各组均包括加S-9和不加S-9两种情况,各剂量分别做三个平行平皿。试验时将培养至对数生长期的增菌培养液100ul加入2ml顶层培养基中,混匀;加各浓度AEE100ul,活化时需要加入S-9混合液500ul,再混匀,迅速倒入底层培养基上,转动平皿使顶层培养基均匀分布,固化后放入37℃恒温培养箱培养48h,观察结果。双盲法阅片,以以下公式计算突变率:突变率=诱发回变菌落数/自发回变菌落数。【结果】在不同浓度下,无论加或不加S9,各剂量组均未引起回复突变菌落数明显增加,亦无线性关系。【结论】Ames实验是国际上普遍认可的化合物致突变检测方法,其灵敏度和可靠性毋庸置疑,本实验将AEE与标准菌液混合后在最低营养条件下培养,计算突变率,并且分别做了+S9和-S9两种情况,在实验当中严格无菌操作,排除了各种外界环境导致的假阴性结果。结果显示,各受试物剂量组回复突变菌落数在有无S9情况下其突变率均未达到自发回变菌落数的二倍,其表明AEE无致突变性。

关键词：阿司匹林丁香酚酯 Ames试验

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