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氟佐隆在牛组织的残留消除研究

氟佐隆在牛组织的残留消除研究

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：鹿欣伦胡成云崔卫波刘学张雨梅扬州大学兽医学院

氟佐隆又名吡虫隆,啶蜱脲,氟啶蜱脲,是一种新型的几丁质抑制剂,主要用于反刍动物外寄生虫病的防治。JECFA规定氟佐隆在牛中的MRLs为:肌肉0.2 mg/kg,肝脏0.5 mg/kg,肾脏0.5mg/kg,脂肪7.0 mg/kg。目前奶、蛋中无MRLs数据。我国目前尚无相... 详细信息

氟佐隆又名吡虫隆,啶蜱脲,氟啶蜱脲,是一种新型的几丁质抑制剂,主要用于反刍动物外寄生虫病的防治。JECFA规定氟佐隆在牛中的MRLs为:肌肉0.2 mg/kg,肝脏0.5 mg/kg,肾脏0.5mg/kg,脂肪7.0 mg/kg。目前奶、蛋中无MRLs数据。我国目前尚无相应的MRLs规定。本文建立了氟佐隆在牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中残留检测的HPLC方法。色谱条件为:C18色谱柱(150×4.6mm),乙腈:水(68:32,V/V)为流动相,流速1.2 mL/min,260 nm检测。组织样品用乙腈提取,经Florisil固相萃取柱净化后HPLC进行检测。空白组织中分别添加0.08、1.0和10.0 mg/kg氟佐隆,肌肉样品氟佐隆回收率在82.00%～94.59%,肾脏样品回收率81.86%～95.39%,肝脏样品回收率为81.89%～95.26%,脂肪样品回收率为80.84%～95.24%;日内和日间变异系数1%～6%;方法的检测限(LOD)为0.02 mg/kg,定量限(LOQ)为0.08 mg/kg。选用干奶期荷斯坦奶牛1 8头,皮下注射1.5 mg/kgb.w.氟佐隆,分别于给药后2 w、6 w、8 w、10 w、12 w和16 w,取肌肉、肾脏、肝脏和脂肪(皮脂、肾脂和腹脂)样品,-20℃低温冻存,用于在牛组织中的残留消除规律的研究。试验结果表明氟佐隆在组织中的残留消除速度较慢,在脂肪组织中的分布及残留量最高。氟佐隆在脂肪中的残留量>>肝脏>肾脏>肌肉。肌肉中残留量在用药后8 w达到峰值,12 w后低于检测限;肝脏和肾脏中残留水平在用药后10 w达到峰值,16 w后接近或低于检测限;在脂肪组织中10 w达到峰值,16 w后仍高于检测限。在皮下、腹部和肾脏脂肪中的残留量没有显著性著异(P>0.05)。皮下给药后氟佐隆在牛组织中的残留量均未超过JECFA规定的残留限量。

关键词：氟佐隆残留牛组织

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饲料和谷物样品中赭曲霉毒素A的IAC-UPLC-MS/MS检测方法研究

饲料和谷物样品中赭曲霉毒素A的IAC-UPLC-MS/MS检测方法研究

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：孟辉王战辉王莹张素霞沈建忠中国农业大学动物医学院

【目的】赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）是曲霉属和青霉属的菌类产生的次生代谢产物,广泛存在于饲料和食品中。OTA有强烈的肾毒性和潜在的致癌性。OTA在食品中含量很低,但是其在动物体内与血浆及组织蛋白结合,不容易通过代谢途径降解... 详细信息

【目的】赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）是曲霉属和青霉属的菌类产生的次生代谢产物,广泛存在于饲料和食品中。OTA有强烈的肾毒性和潜在的致癌性。OTA在食品中含量很低,但是其在动物体内与血浆及组织蛋白结合,不容易通过代谢途径降解,有很长的半衰期（37天）,对人和家畜的健康构成严重危害,引起了国内外的广泛关注。欧盟对OTA在谷物和饲料中的最高残留量（MRL）做出了严格的限定(谷物0.5～25μ***,饲料5～300μ***)。因此,本研究旨在建立一种基于免疫亲和色谱柱（IAC）-UPLC-MS/MS方法对饲料和谷物中痕量OTA进行检测。【方法】使用单克隆抗体C2A4G和CNBr-activated Sephrose 4B制备了IAC柱并对柱容量等指标进行了测定;谷物和饲料样品的前处理方法:向2克样品（±0.01g）中加入10 mL提取液（甲醇-0.02 M PBS pH 4.0,50/50,v/v）,涡旋3分钟,8000 g离心10分钟,5mL提取液经过滤后用10 mL PBS（pH 7.4）稀释过柱。4ml甲醇洗脱后吹干。500μl流动相（0.1%甲酸乙腈,0.1%甲酸水,30/70,v/v）复溶过膜进样（10μL）。UPLC-MS/MS条件:以0.1%甲酸乙腈（A）和0.1%甲酸水（B）作为流动相,洗脱条件0～2 min,30%A～70%B;0～2 min,30%A～70%B:2～3 min,100%A～0%B;3～4 min,30%A～70%B;流速为0.3ml/min。采用电喷雾离子源,正离子模式和多反应监测模式对OTA进行定性和定量分析。【结果】制备的IAC柱容量为13.85nmo1·mL/gel。使用空白基质匹配标准溶液法制定标准曲线,OTA在0.1～20μg/L范围内,峰面积与浓度呈现良好的线性关系。在谷物中（玉米,小麦,大豆和小米）添加1/10 MRL、MRL、2 MRL三个浓度水平,分别为0.3、3、6μ***,处理后测定,回收率、批内变异系数以及批间变异系数分别为72.6%～104.1%、2.6～8.3%、3.3～10.4%。该方法对谷物（玉米,小麦,大豆和小米）以及饲料（全价猪饲料和鸡饲料）的检测限分别为0.2和0.3μ***,定量限分别为0.5和1.0μ***。【结论】本研究建立了检测饲料和谷物中OTA含量IAC-UPLC-MS/MS方法,该方法快速、灵敏、重现性好,其准确度及精密度均符合残留检测的的要求。

关键词：赭曲霉毒素A 免疫亲和色谱柱 UPLC-MS/MS

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固体脂质纳米在兽医药的应用前景和毒性研究进展

固体脂质纳米在兽医药的应用前景和毒性研究进展

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：谢书宇袁宗辉华中农业大学动物科学技术动物医学院国家兽药残留基准实验室(HZAU)

21世纪以来,纳米药物载体系统为人类高效、合理的利用药物提供了新技术。固体脂质纳米是以具有生理相容性和生物可降解性的高熔点天然或合成的固体脂质为骨架材料所制成的亚微粒尺度的新型载药系统,至20世纪90年代以来已成为国内外药剂... 详细信息

21世纪以来,纳米药物载体系统为人类高效、合理的利用药物提供了新技术。固体脂质纳米是以具有生理相容性和生物可降解性的高熔点天然或合成的固体脂质为骨架材料所制成的亚微粒尺度的新型载药系统,至20世纪90年代以来已成为国内外药剂学领域的研究热点,因其低廉的生产成本和规模化的生产方式将在兽医药领域有着广泛的应用和明确的产业化前景。尽管制备固体脂质纳米的大部分脂质材料和活性剂是已经公认为安全并被批准应用于药剂学、食品以及化妆品领域的辅料,但脂质材料纳米化以后的特殊生物学效应是否会给生物体带来潜在的毒性还不得而知,因此固体脂质纳米药物的毒性研究是其临床化进程中非常重要的环节。本文首先介绍了纳米颗粒独特的理化性质,探讨了固体脂质纳米潜在的毒性效应,进而分析了系统研究固体脂质纳米药物毒性效应的必要性和紧迫性。在此基础上,本文介绍了目前国内外对固体脂质纳米药物的毒性研究概况,并根据现有的研究报道总结分析了脂肪酸、甘油酯、氢化蓖麻油等常见脂质材料制备的固体脂质纳米的急性毒性、局部毒性、细胞毒性和组织器官毒性;重点介绍了固脂质纳米的理化特性与其毒性效应之间的关系如脂质材料、活性种类、活性剂的浓度、纳米颗粒的电位和粒径对其毒性的影响:探讨了固体脂质纳米药物的给药途径对其毒性效应的影响;分析讨论了固体脂质纳米载体系统对其承载药物毒性的影响。针对当前固体脂质纳米药物毒性研究方法还不够系统和完善,毒性机制的认识还不够深入的情况,作者认为固体脂质纳米药物的安全性评价除了应遵循新药毒理学研究的一般原则外,还应借助现代分子生物学技术、基因组学和蛋白基因组学等技术重点考察固体脂质纳米在分子水平的毒性,增强对固体脂质纳米药物毒性效应机制的认识,建立系统规范的固体脂质纳米药物安全性评价体系,推动固体脂质纳米药物在兽医药的临床化进程。

关键词：固体脂纳米药物毒性研究应用前景

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铜、锌暴露胁迫对土壤蚯蚓的分子生态毒性的初步研究

铜、锌暴露胁迫对土壤蚯蚓的分子生态毒性的初步研究

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：熊文广白玲邹梦佳曾振灵孙永学国家兽药安全评价(环境评估)实验室(华南农大) 华南农业大学兽医学院

【目的】近年来高铜高锌添加剂因具有促进动物生长和防腹泻等效果,在畜牧养殖业中广泛应用。动物饲喂含铜锌饲料后,大部分铜、锌由粪尿排入环境,给生态环境造成潜在的威胁。本实验研究了蚯蚓在CuSO4、ZnO暴露胁迫下生态毒理指标的变化,... 详细信息

【目的】近年来高铜高锌添加剂因具有促进动物生长和防腹泻等效果,在畜牧养殖业中广泛应用。动物饲喂含铜锌饲料后,大部分铜、锌由粪尿排入环境,给生态环境造成潜在的威胁。本实验研究了蚯蚓在CuSO4、ZnO暴露胁迫下生态毒理指标的变化,为初步评估CuSO4、ZnO饲后的生态毒性提供基础数据。【方法】实验动物:赤子爱胜蚓,暴露胁迫浓度:CuSO4(0、100、200和400mg/kg)和ZnO(0、125、250和500 mg/kg),实验条件:20±1℃,湿度75%±7%,避光。分别于给药后的第5、10、15 d采集蚯蚓,清肠后称重,液氮速冻,-20℃保存,检测蚯蚓体内抗氧化酶系统(CAT、SOD、GPx、GST的活性和MDA的浓度),检测热休克蛋白70(Hsp70)和金属硫蛋白(MT)基因的相对表达量,运用cDNA末端快速克隆技术(RACE法)克隆赤子爱胜蚓的CAT和SOD基因的全长序列。【结果】(1)在CuSO4胁迫下,蚯蚓CAT在400 mg/kg和SOD在200、400 mg/kg下均表现出时间依赖性;Hsp70基因的表达量在第10、1 5天具有明显的剂量依赖性。(2)在ZnO胁迫下,SOD在250、500 mg/kg处理下,呈现时间依赖性递增关系,GPx在暴露胁迫的第5d所有浓度组均显特性上升;MT基因的表达量在第10天呈现剂量依赖性,而Hsp70基因的表达量的上调具有一定的阈值范围。【结论】(1)在CuSO4的暴露胁迫下,蚯蚓体内除GST外,CAT、SOD和GPx酶均表现不同程度的时间-剂量依赖性;与MT基因的表达量相比,Hsp70基因的表达量能较好指示CuSO4的生态毒性(2)MT基因的表达量能较好地指示土壤中ZnO的污染胁迫生态毒性效应,而Hsp70基因的表达量对ZnO的污染胁迫生的指示作用不佳;(3)首次克隆出赤子爱胜蚓的CAT酶的cDNA全长序列(登录号:JN617999)和Cu/Zn-SOD酶的cDNA全长序列(登录号:JN579648)。

关键词：生态毒理 CuSO4 Zno 赤子爱胜蚓生物标志物

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黏菌素对小鼠肾毒性及其机制的初步探讨

黏菌素对小鼠肾毒性及其机制的初步探讨

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：代重山李继昌李健东北农业大学动物医学学院澳大利亚蒙纳士大学药学院 FADDI研究室

【目的】探究黏菌素对小鼠肾脏毒性作用及其产生毒性的可能机制。【方法】160只昆明系雌性小鼠分为4组,每组40只,硫酸黏菌素高、中、低剂量组(静脉注射15.0、7.5、3.75 mg/kg)和对照组(等量生理盐水),连续给药7 d,并于第1、3、7和15 d,... 详细信息

【目的】探究黏菌素对小鼠肾脏毒性作用及其产生毒性的可能机制。【方法】160只昆明系雌性小鼠分为4组,每组40只,硫酸黏菌素高、中、低剂量组(静脉注射15.0、7.5、3.75 mg/kg)和对照组(等量生理盐水),连续给药7 d,并于第1、3、7和15 d,测定小鼠血清肌酐(Cre)、尿素氮(BUN)及肾脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,并进行肾脏病理学半定量评价(SQS)。【结果】黏菌素可引起小鼠体重显著下降,给药1 d后,高剂量组体重下降。与对照组比较,黏菌素高剂量组体重在3、7、15d均明显下降(P<0.05),中剂量组小鼠体重在7 d时出现明显下降(P=0.015);肾脏脏器系数在给药7 d后显著降低(P<0.05);在给药3后,Cre升高,剂量依赖性明显,中剂量组和高剂量组分别增至(131±10)、(168±11)μmol/L(P<0.05)。BUN升高,在给药3、7d后,高剂量组分别增至(10.2±2.56)(P<0.05)、(12.17±293)mmol/L(P<.01),中剂量组分别增至6.8±0.91(P>0.05)、10.73±1.43 mmol/L(P<0.05),在给药后15 d(停药8d后),Cre及BUN有所恢复,仅Cre与对照组差异显著(P<0.05),低剂量组与对照组相比无显著差异(P>0.05)。SOD活性降低,高剂量组在给药3、7d、15 d后分别降至(54.25±6.59)(P<0.05)、(49.25±3.77)(P<0.01)、(50.25±2.62)(P<0.01)mmol/mg Pro(P<0.01),中剂量组在给药后7、15 d分别降至(56±4.32)、(57.33±3.5)mmol/mg Pro(P<0.05);MDA含量升高,高剂量组在给药3、7d、15 d后分别增至(1.67±0.10)(P<0.05)、(1.91±0.13)(P<0.01)、(50.25±2.62)(P<0.01)mmol/mg Pro;中剂量组在给药后7d、15 d分别增至(1.66±0.09)(P<0.05)、(1.64±0.08)(P<0.05)mmol/mg Pro。组织病理学研究发现,主要病理变化为肾小管坏死,给药1 d后,高剂量组小鼠肾脏轻度损伤,SQS为(1±0.71)分(P<0.05),中剂量组及高剂量组在给药3、7d SQs分别为(1.4±0.5)和(1.6±3.6)、(2.4±0.89)和(3.6±1.14)分(P<0.05)。【结论】黏菌素诱发肾毒性具有明显的时间依赖性及剂量依赖性,氧化应激损伤可能是黏菌素肾毒性的重要机制之一。

关键词：黏菌素肾毒性时间依赖性剂量依赖性氧化应激

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喹烯酮诱导人肝癌HepG2细胞S期阻滞及死亡的分子机制

喹烯酮诱导人肝癌HepG2细胞S期阻滞及死亡的分子机制

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：张朝明赵文霞汤树生孙雨王丛丛赵东旭张燊周延肖希龙中国农业大学动物医学院国家兽药安全评价中心

目前,喹烯酮在我国畜牧业中被广泛地用作动物生长促进剂,该药物是我国首创的一类新兽药,属于喹噁啉1,4一二氧化物衍生物,其化学结构同喹多克辛、卡巴氧和喹乙醇相似,而后三者因对人类健康具潜在的危害已被许多国家禁止或限用做动物饲料... 详细信息

目前,喹烯酮在我国畜牧业中被广泛地用作动物生长促进剂,该药物是我国首创的一类新兽药,属于喹噁啉1,4一二氧化物衍生物,其化学结构同喹多克辛、卡巴氧和喹乙醇相似,而后三者因对人类健康具潜在的危害已被许多国家禁止或限用做动物饲料添加剂。由于喹烯酮与喹多克辛、卡巴氧和喹乙醇具有相同的母核结构,其在动物饲料中的使用安全性引起了广泛的关注。前期的彗星试验和胞质分裂阻滞微核试验研究表明,喹烯酮对人肝癌HepG2细胞具有遗传毒性作用。然而,喹烯酮诱导产生细胞毒性的具体作用机制目前还不清楚。本研究是为了探讨喹烯酮诱导HepG2细胞周期阻滞和死亡的具体分子机制。MTT实验结果表明,喹烯酮可以呈剂量和时间依赖性地抑制HepG2细胞的存活率,其24h作用的IC值药为10ug/ml。分别将0、1.25、2.5、5、7.5、10ug/ml的喹烯酮作用于HepG2细胞24h后,流式细胞仪检测结果表明,喹烯酮能够使HepG2细胞周期阻滞于S期,细胞凋亡率随浓度的升高而增大。凋亡DNA Ladder实验结果表明,喹烯酮能够引起HepG2细胞DNA片段化。Western Blot结果显示,PARP-1、caspase-3、caspase-8总蛋白随喹烯酮药物浓度升高而含量降低,其相应的剪切体蛋白表达量升高,Bcl-2家族蛋白Bid蛋白（caspase-8的底物蛋白）也被激活,肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）在HepG2细胞中表达量上调,p21蛋白表达量也升高,但p21WAF1/Cip1调节蛋白p53的表达量不受喹烯酮处理细胞的影响。综上所述,喹烯酮可通过p53非依赖性的途径引起HepG2细胞周期阻滞及死亡,TNFR1受体介导的信号转导通路可能在这一过程中发挥了重要作用。

关键词：喹烯酮细胞凋亡细胞周期 TNFR1

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黏菌素对小鼠神经行为功能及坐骨神经形态学的影响

黏菌素对小鼠神经行为功能及坐骨神经形态学的影响

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：代重山李继昌李健东北农业大学动物医学学院 Facility for Anti-infective Drug Development and Innovation Monash Institute of Pharmaceutical Sciences Monash UniversityVictoria 3052Australia

【目的】探究黏菌素对小鼠运动、感觉功能的影响及对小鼠坐骨神经的病理损伤程度。【方法】80只昆明系雌性小鼠分为高剂量组(7.5mg/kg/12h)、中剂量组(7.5mg/kg/24h)和低剂量组(5mg/kg/24h),静脉注射硫酸黏菌素,连续给药7d,并于第1、3和... 详细信息

【目的】探究黏菌素对小鼠运动、感觉功能的影响及对小鼠坐骨神经的病理损伤程度。【方法】80只昆明系雌性小鼠分为高剂量组(7.5mg/kg/12h)、中剂量组(7.5mg/kg/24h)和低剂量组(5mg/kg/24h),静脉注射硫酸黏菌素,连续给药7d,并于第1、3和7 d(以给药当天为第0 d)进行步态评分、热痛觉测试、后肢支撑力及转棒实验,并每组随机剖杀2～3只小鼠,取坐骨神经进行病理学检查。为评价神经毒性的恢复性,在第15d对相关指标进行测定。【结果】与对照组相比,给药1d后,各剂量组行为学无显著变化(p>0.05),透射电镜检查发现,高剂量组,坐骨神经轴浆变性溶解,滑面内质网扩张,形成小泡,轴浆中多泡小体减少。给药3d后,高剂量组体重显著下降(p<0.05),热觉传导最先出现异常(p<0.01),电镜观察发现,高剂量组坐骨神经髓鞘变性,同心圆的板层状结构破坏,中剂量组轴浆轻度变性溶解,低剂量组无显著变化(p<0.05);给药7d后,高剂量组体重显著下降(p<0.01),热觉阈值显著延长(p<0.01),步态评分、后肢支撑力、平衡能力均出现异常变化(p<0.05),中剂量组体重显著下降(p<0.05),热觉阈值显著延长(p<0.05),其他行为学指标未见显著变化(p>0.05),病理学检测发现,高剂量组坐骨神经大部分髓鞘出现脱落,内陷,深染,施旺细胞核浓缩,轴索内线粒体空泡化,中剂量组变化轻微。在第15 d,高剂量组热觉阈值显著延长(p<0.05),其他行为学指标均未见异常变化,少数神经纤维的轴膜变性,边缘呈收缩状,轴浆浓缩,神经丝、微管和微丝析出形成细网状和斑块状结构。在实验期间,低剂量组为发现异常变化。【结论】黏菌素可不同程度的损伤动物的感觉、运动及中枢神经,并可造成坐骨神经髓鞘及轴索变性。

关键词：黏菌素神经行为功能坐骨神经超微结构小鼠

来源：评论

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APAP致小鼠急性药物性肝损伤模型建立方法的研究

APAP致小鼠急性药物性肝损伤模型建立方法的研究

引用

中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：刘芳萍周琼刘颖姝韩晴东北农业大学动物医学学院

【目的】急性肝损伤是多种肝脏疾病的发生、发展及最终走向肝功能衰竭的始动环节和共同途径,目前对急性肝损伤的防治仍是一个全球性的严峻课题。醋氨酚（APAP）致小鼠急性药物性肝损伤模型是研究保肝药物常用的模型之一,是通过活性氧或... 详细信息

【目的】急性肝损伤是多种肝脏疾病的发生、发展及最终走向肝功能衰竭的始动环节和共同途径,目前对急性肝损伤的防治仍是一个全球性的严峻课题。醋氨酚（APAP）致小鼠急性药物性肝损伤模型是研究保肝药物常用的模型之一,是通过活性氧或活性氮引起药物性肝损伤的典型代表物。本试验旨在通过对染毒途径、剂量和时间的研究,建立理想的APAP致小鼠急性药物性肝损伤动物模型,为深入研究和探讨急性肝损伤的发病机制,开发新的安全高效药物等奠定基础。【方法】选用健康、体重20±2 g的雄性昆明系小鼠（清洁级）,进行APAP最佳染毒途径、剂量以及时间的筛选。分别采取腹腔注射和灌胃两种途径给予小鼠400 mg·kg剂量APAP溶液,染毒后16 h检测血清转氨酶活性,并观察肝脏病变,优选最佳染毒途径;分别以100、150、200、250、300 mg·kg剂量给予小鼠APAP溶液,染毒后16 h检测血清转氨酶活性,确定最佳染毒剂量;以最佳染毒途径和剂量给予小鼠APAP溶液,分别于染毒后4、8、12、16、20 h检测小鼠血清转氨酶活性,优选最佳染毒时间。以此为基础复制急性肝损伤动物模型。30只小鼠随机分成3组,每组10只,为模型组、溶剂组和空白对照组。模型组以200 mg·kg剂量APAP溶液给小鼠灌胃,溶剂组灌胃等体积温生理盐水。于染毒后12 h各组迅速采血和肝脏,通过检测血清转氨酶（ALT、AST）及GSTA1活性,肝组织中MDA、SOD、GSH、GSH-Px、NO、GSTA1含量,并制作肝脏病理切片米评价模型。【结果】以200 mg·kg剂量给小鼠灌胃APAP溶液,染毒后12 h,模型组小鼠血清ALT、AST、GSTA1活性均显著升高,与对照组相比差异极显著（P<0.01）;模型组肝组织SOD、GSH、GSH-Px含量显著升高,与对照组相比差异极显著（P<0.01）;模型组肝组织MDA、NO、GSTA1含量显著降低,与对照组相比差异极显著（P<0.01）。病理切片模型组可见肝小叶内细胞浸润明显,呈空泡状和坏死灶,小叶内和汇管区有大量炎性细胞浸润,细胞浑浊,核固缩或已溶解破碎,肝细胞索模糊。【结论】以200 mg·kg剂量APAP溶液灌胃,染毒12 h可成功复制小鼠急性药物性肝损伤模型。

关键词： APAP 小鼠急性药物性肝损伤动物模型

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基于荧光微球标记的腐马菌素B1快速定量检测免疫层析试纸条研究

基于荧光微球标记的腐马菌素B1快速定量检测免疫层析试纸条研究

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：李姮中国农业大学动物医学院国家兽药残留基准实验室

【目的】腐马菌素（Fumonisin,FB）是一类由串珠镰刀菌、轮状镰刀菌等产生的真菌毒素。食用其污染的玉米不仅为畜牧业带来损失,而且对人类健康造成威胁,引起食道癌和神经管缺陷。分析FB残留的常用方法有高效液相色谱法、液相色谱串联质... 详细信息

【目的】腐马菌素（Fumonisin,FB）是一类由串珠镰刀菌、轮状镰刀菌等产生的真菌毒素。食用其污染的玉米不仅为畜牧业带来损失,而且对人类健康造成威胁,引起食道癌和神经管缺陷。分析FB残留的常用方法有高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法和酶联免疫吸附法等。上述方法灵敏、准确、特异,但是存在检测方法复杂,耗时长,费用高等缺点,不适用于市场现场监督。胶体金免疫层析试纸条法操作简便、快速,但灵敏度相对偏低,且只能用于定性或半定量分析。本研究建立了一种以荧光微球标为标记物的快速、简单、可定量检测玉米中FB的免疫层析试纸条。【方法】将50μg Ab溶于4ml 50mM MES（pH 6.5）中,加入100μL荧光微球,室温反应15分钟。加入0.5 mgEDC,涡动混匀,室温振荡反应2小时。加入0.1 M/L甘氨酸封闭30分钟。以12000r/m离心15min,弃上清,以0.05M PB重悬沉淀,4℃保存备用。取lg玉米样品由5 mL 0.01 M PBS溶液提取,涡动混匀5分钟后超声振动5分钟,以12000r/m离心5分钟,取上清20倍稀释于0.01M PBST溶液中。将120μL待测样品与1μL荧光微球标记抗体混合于96孔板中,避光振荡反应5分钟后,试纸条垂直插入微孔中,反应15分钟,取出试纸条置于烘箱中40℃烘干,用荧光检测仪进行读数。【结果】试纸条检测系列浓度标准品,每个浓度检测5次,绘制标准曲线,其线性回归方程为y=-267.2x+840.8,回归系数R=0.9949,定量检测范围为0.23—2.2 mg/kg,IC为1.32 mg/kg。玉米样品定量检测范围为230—2200 mg/kg。玉米样品中添加3个FB浓度,回收率均在91.4%—118.2%之间,RSD<12%。与呕吐毒素、玉米赤霉醇、赭曲霉毒、单端孢霉烯交叉反应低,特异性良好,与FB2交叉反应为1.3%。【结论】该方法具有预处理简单、检测速度快、灵敏度高、定量检测的优点,可适用于玉米样品中腐马菌素的现场快速定量检测,满足各国对伏马菌毒素的最低检出要求。

关键词：快速定量检测振荡反应免疫层析试纸条

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黏菌素致小鼠中枢神经组织线粒体功能障碍:一种神经毒性的新观点

黏菌素致小鼠中枢神经组织线粒体功能障碍:一种神经毒性的新观点

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

【目的】评价黏菌素对线粒体形态及其功能的影响。【方法】20只昆明系雌性小鼠分为黏菌素实验组合生理盐水对照组,实验组小鼠单次静脉注射黏菌素7.5mg/kg,每天2次（间隔12 h）,连续给药7 d,分别于第1、3、7和15 d（以给药当天为第0 d）... 详细信息

【目的】评价黏菌素对线粒体形态及其功能的影响。【方法】20只昆明系雌性小鼠分为黏菌素实验组合生理盐水对照组,实验组小鼠单次静脉注射黏菌素7.5mg/kg,每天2次（间隔12 h）,连续给药7 d,分别于第1、3、7和15 d（以给药当天为第0 d）取大脑皮层及腰段脊髓,制作电镜样品,观察线粒体结构变化。另取160只昆明系雌性小鼠分为高剂量组（15mg/kg）、中剂量组（7.5mg/kg）和低剂量组（5mg/kg）,连续静脉给药7d,并于第1、3、7 d及14 d各剖杀10只小鼠,取大脑及腰段脊髓,梯度密度离心法提纯线粒体,通过测定线粒体悬液540nm处吸光度A值的变化来检测线粒体膜通透性转换孔（MPTP）的开放情况;用荧光分光光度法测定线粒体跨膜电位（AΨm）的改变;用四哇盐（MTT）比色法检测各时间点大脑、小脑、脊髓、坐骨神经中线粒体呼吸链酶的活性的改变。【结果】与对照组相比,小鼠大脑皮层神经元及脊髓中线粒体的变化随给药时间呈现逐渐加重的现象,二者变化趋势基本一致,d1时线粒体形态没有明显病理改变,到d3时开始大多数线粒体肿胀,线粒体峭断裂、减少甚至溶解消失,部分呈现空泡化。至d7,线粒体明显空泡化,线粒体峭紊乱,减少或消失,线粒体基质空泡化,脊髓线粒体损伤更为严重,部分神经元坏死,内质网肿胀。此外,在高剂量组,d 3和7,大脑及脊髓线粒体通透性（MPT）显著增加,在中剂量组,至d7,及脊髓线粒体通透性（MPT）显著增加。线粒体膜电位异常,在高剂量组,至d 7,脊髓线粒体膜电位显著降低。线粒体呼吸链酶的活性降低,在高剂量组,至d 3,脊髓线粒体呼吸链酶的活性显著降低,至d 7,大脑及脊髓线粒体呼吸链酶的活性均显著降低。在d15,即停药8 d后,线粒体超微结构及功能（MPT、MTT及△Ψ）均有所恢复,但高剂量组仍显著异常。【结论】线粒体形态及功能的异常参与黏菌素诱发的神经毒性的发生,暗示了黏菌素诱发神经毒性的一种新观点。

关键词：黏菌素神经毒性超微结构线粒体通透性(MPT) 线粒体膜电位(△Ψm)线粒体酶活性

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