利用RNAisoPlus试剂盒提取紫苏总RNA,以其为模板采用RT-PCR方法扩增出紫苏DGAT1基因的c DNA编码区序列并构建克隆载体pMD-DGAT1,再将克隆载体pMD-DGAT1和pBI121空载体进行Xba I和Bam H I双酶切,连接目的片段构建表达载体pBI121-DGAT1。...
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利用RNAisoPlus试剂盒提取紫苏总RNA,以其为模板采用RT-PCR方法扩增出紫苏DGAT1基因的c DNA编码区序列并构建克隆载体pMD-DGAT1,再将克隆载体pMD-DGAT1和pBI121空载体进行Xba I和Bam H I双酶切,连接目的片段构建表达载体pBI121-DGAT1。克隆得到目的片段长度为1657bp,与GenBank中紫苏DGAT1基因序列的最大同源性为97%,所构建表达载体pBI121-DGAT1双酶切得到的两条片段长度与连接前一致,成功转化四尾栅藻并得到表达,转化后四尾栅藻的油脂含量较转化前提高近1倍。结果表明紫苏DGAT1基因克隆及四尾栅藻表达载体构建成功。
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