检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：邢少贞王建张湘莉兰刘艳楠童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所

目的以粪肠球菌为宿主菌,从医院的污水中筛选出相应的粪肠球菌噬菌体***195,本文简称为IME195,分析该噬菌体的生物学特性,并通过高通量测序得到其全基因组,深入研究其基因组学特征。方法我们利用医院的污水,将污水进行浓缩,以临床的耐... 详细信息

目的以粪肠球菌为宿主菌,从医院的污水中筛选出相应的粪肠球菌噬菌体***195,本文简称为IME195,分析该噬菌体的生物学特性,并通过高通量测序得到其全基因组,深入研究其基因组学特征。方法我们利用医院的污水,将污水进行浓缩,以临床的耐药粪肠球菌为宿主菌,通过原液点滴法筛选噬菌体,纯化并进一步检测其效价,研究其最佳感染复数（MOI）和一步生长曲线,通过投射电子显微镜观察其形态,大量培养后取适量噬菌体原液通过蛋白酶K/SDS法提取全基因组,Ion Torrent高通量测序,获得全部序列,对其进行拼接注释。结果通过原液点滴法得到噬菌斑,边缘分明,斑体透明的裂解性噬菌体IME195最佳感染复数为0.01,一步生长曲线显示IME195的潜伏期为40min,爆发量为58,电镜观察该噬菌体为短尾噬菌体,通过BLastx初步确定为尾病毒目,短尾噬菌体科,基因测序表明,噬菌体IME195,大小为18607bp,通过Rast进行基因功能注释,CGView构建全基因组图谱。结论按照国际病毒分类委员会的标准,该噬菌体IME195属于短尾噬菌体科（podoviridae）烈解性噬菌体,爆发时间较短,运用生物信息学深入分析了噬菌体的基因组学方面无毒力基因,适合用于噬菌体治疗或与药物联合使用。

关键词：粪肠球菌噬菌体一部生长曲线最佳感染复数基因组学

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埃可病毒6型表面特异性抗原的表达及其多克隆抗体的制备

埃可病毒6型表面特异性抗原的表达及其多克隆抗体的制备

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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：李素梅齐永徐亭亭潘英李素芹李佳萌陈晨王新国徐艺菲李越希南京军区军事医学研究所南京医科大学基础医学院中国药科大学生命科学与技术学院

目的在原核细胞中表达埃可病毒6型的表面蛋白VP1,制备其多克隆抗体。方法筛选VP1抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX-4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1,分别转化大肠杆菌(***)BL21(DE3),经I... 详细信息

目的在原核细胞中表达埃可病毒6型的表面蛋白VP1,制备其多克隆抗体。方法筛选VP1抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX-4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1,分别转化大肠杆菌(***)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High Affinity GST-NTA resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,采用间接ELISA法检测血清效价,Western blot法检测特异性。结果经双酶切及测序鉴定,证明质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1构建正确;在相对分子质量约39 000和20 000处,分别可见VP1-GST和VP1-His融合蛋白的表达,表达量分别约占菌体总蛋白的25%和30%,发现VP1-GST为可溶性蛋白,而VP1-His主要以包涵体的形式存在,需对VP1-His蛋白进行透析复性,纯度均在90%以上;免疫新西兰大白兔后获得高效价的特异性兔抗血清。结论两种标签的融合蛋白均具有良好的免疫原性和抗原性,所制备的多克隆抗体具有较好的特异性,为埃可病毒检测方法的建立奠定了基础。

关键词：埃可病毒6型 VP1蛋白包涵体多克隆抗体

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赤霉素（GA3）处理对重楼种子萌发相关生理指标的影响

赤霉素（GA3）处理对重楼种子萌发相关生理指标的影响

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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：罗忠黄珍张鹏孟艳艳杨翠宋发军中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室

为分析赤霉素（GA）处理对重楼种子萌发相关生理指标的影响,本研究检测了500mg·L-1 GA处理以及对照处理的华重楼种子萌发过程中SOD、POD、CAT和G6PDH酶活性以及内源激素ZT、GA、IAA和ABA含量的变化,结果表明:在90天检测范围内,GA... 详细信息

为分析赤霉素（GA）处理对重楼种子萌发相关生理指标的影响,本研究检测了500mg·L-1 GA处理以及对照处理的华重楼种子萌发过程中SOD、POD、CAT和G6PDH酶活性以及内源激素ZT、GA、IAA和ABA含量的变化,结果表明:在90天检测范围内,GA处理种子的SOD活性达到最大值的时间（第30天）早于对照处理种子（第60天）,CAT酶活性最高峰值高于对照种子;而且,除第0天样品外,GA处理种子的G6PDH酶活性、CAT酶活性均大于对照;GA处理种子的ZT、内源GA和IAA含量的最高峰值及其出现时间均高于和早于对照处理种子;而GA处理种子POD酶活性均低于对照处理种子,GA处理种子的ABA含量比对照处理种子的下降幅度更大,最低值更小。这些结果表明500 mg·L-1外源GA处理促进了华重楼种子中SOD、CAT、G6PDH酶活性以及ZT、内源GA和IAA含量的增加,降低了POD酶活性以及ABA含量。本研究结果为深入研究GA促进华重楼种子高效萌发的生理生化机制提供了参考。

关键词：华重楼种子萌发赤霉素生理生化指标

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代谢工程构建重组耶氏解脂酵母生产中长链聚羟基脂肪酸酯

代谢工程构建重组耶氏解脂酵母生产中长链聚羟基脂肪酸酯

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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：高翠娟连思琪祁庆生临沂大学生命科学学院香港城市大学环境工程学院山东大学微生物技术国家重点实验室

中长链聚羟基脂肪酸酯(mcl-PHA)是一大类由微生物合成的天然生物聚酯,因具有可再生性和生物降解性愈来愈受到人们的关注。Mcl-PHA可由一些假单胞菌利用自身的脂肪酸合成途径或β-氧化途径来合成。耶氏解脂酵母具有很好的脂/脂肪酸分解... 详细信息

中长链聚羟基脂肪酸酯(mcl-PHA)是一大类由微生物合成的天然生物聚酯,因具有可再生性和生物降解性愈来愈受到人们的关注。Mcl-PHA可由一些假单胞菌利用自身的脂肪酸合成途径或β-氧化途径来合成。耶氏解脂酵母具有很好的脂/脂肪酸分解代谢能力,但是它体内缺乏PHA合成酶(intrinsic)不能合成mcl-PHA。本文采用代谢工程策略构建重组解脂酵母,外源表达来自铜绿假单胞菌PAO1(*** PAO1)的PHA合成酶基因PhaC1。在PhaC1基因的末端添加PTS1过氧化物酶体定位信号序列,使其在过氧化物酶体内发挥功能。利用pINA1312载体构建表达框,借助载体上的zeta序列元件将PhaC1基因表达框整合至酵母基因组,完成基因的稳定表达。重组菌PSOC在葡萄糖为唯一碳源的培养基中几乎不产PHA,添加0.5%的油酸时可合成占细胞干重0.67%的mcl-PHA。在含三油酸甘油酯的培养基中发酵72 h产生1.51%PHA。本实验表明解脂酵母成为有潜力的生产细胞工厂,在将来可以利用一些食品厨余垃圾等富含油脂的廉价资源生产mcl-PHA。

关键词： mcl-PHA PHA合成酶代谢工程重组耶氏解脂酵母

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产油脂酵母资源化利用啤酒生产废水的研究

产油脂酵母资源化利用啤酒生产废水的研究

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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：王冬梅郭书贤梁跃辉刘欢张艳平南阳理工学院生物与化学工程学院南阳市工业微生物重点实验室车用生物燃料技术国家重点实验室海南大学食品学院

为探索啤酒生产废水综合利用的方法和途径,本文采用液体发酵的方法,从7个酵母菌株中筛选出既能产单细胞油脂（SCO）和单细胞蛋白（SCP）,又能有效降解COD的菌株,考察了优良酵母菌株的发酵周期和动力学特征,并对其所产油脂的脂肪酸组成... 详细信息

为探索啤酒生产废水综合利用的方法和途径,本文采用液体发酵的方法,从7个酵母菌株中筛选出既能产单细胞油脂（SCO）和单细胞蛋白（SCP）,又能有效降解COD的菌株,考察了优良酵母菌株的发酵周期和动力学特征,并对其所产油脂的脂肪酸组成和单细胞蛋白的氨基酸组成进行分析。结果表明:6#菌株--Trichosporon porosum D02、1#菌株--Lipomyces starkeyi 1809对废水的资源化利用程度最高,6#和1#2个优良酵母菌株在发酵120h时的油脂产量、粗蛋白产量、COD降解率分别达到8.93g/L、6.1 g/L、89.09%和4.62 g/L、4.42 g/L、81.47%。2个优良酵母菌株所产油脂的脂肪酸组成均以C和C系为主,含量最高的为油酸C和棕榈酸C16:0,不饱和脂肪酸指数（IUFA）分别达到80.33%和61.57%。除脯氨酸未检出外,2个优良酵母菌株单细胞蛋白均含有17种氨基酸,其中8种必需氨基酸含量分别为50.08%和45.19%,完全达到了FAO/WHO的40%的要求。发酵动力学分析表明:底物消耗和COD降解与菌体生长同步,属与生长相关型,而油脂积累与菌体生长不完全同步,属与生长部分相关型;本研究不仅可以有效地降低啤酒废水中的COD含量,而且还可以获得高附加值的产品,从而为实现啤酒生产废水的资源化利用提供了新的途径。

关键词：啤酒生产废水产油脂酵母微生物油脂单细胞蛋白 COD 油脂脂肪酸组成必需氨基酸

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体外糖酵解途径高速公路的构建

体外糖酵解途径高速公路的构建

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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：马春玲马红武中国科学院天津工业生物技术研究所

EMP途径是一切生物有机体中普遍存在的葡萄糖降解的途径,而代谢途径中的限速酶往往决定反应的速度,所以限速酶的研究对于途径高速公路的构建具有重要的作用。传统研究关键酶的方法是通过基因工程改造在目标酶基因前插入调节性的启动子,... 详细信息

EMP途径是一切生物有机体中普遍存在的葡萄糖降解的途径,而代谢途径中的限速酶往往决定反应的速度,所以限速酶的研究对于途径高速公路的构建具有重要的作用。传统研究关键酶的方法是通过基因工程改造在目标酶基因前插入调节性的启动子,来调节酶的表达量进而研究酶对途径通量的影响,但是这种方法费时费力,而且不能同时对多个酶进行研究,并且胞内反应由于受到细胞膜以及胞内基因调控的影响不利于代谢途径的快速研究,而胞外反应由于不受这些因素的影响,并且具有反应速率快,容易控制等特点,是一个研究代谢途径的有效方法。本文主要通过体外多酶反应确定已有菌株的关键酶,再通过体内改造菌株以达到糖酵解途径高效生成目标产物乳酸。在确定途径关键酶的过程中通过在粗酶中添加不同浓度纯酶来提高反应速率的方法来确定粗酶中含有的纯酶含量,根据已有的含量,从初始底物出发,分别添加相同倍数的粗酶中相应纯酶量,通过测定产物变化计算获得通量控制系数(FCCs)确定关键酶,并进行体外连续反应初步验证关键酶效果。本文利用纯酶滴定的方法确定粗酶中含有1.09μM Glk,1.74μM Pgi,2.26μM PfkA,6.7μM FbaA,3.6μM TpiA,41μM GapA,19.6μM Pgk,132nM PykA,初始底物为5mM Glu,5mM ATP,2mM NAD+,2mM ADP,2mM Pi添加等量粗酶,在这个基础上添加相应粗酶含量的2倍纯酶,通过HPLC来测定乳酸,计算途径中不同酶改变后通量控制系数(FCCs)的变化,FCCs越大代表酶浓度改变后对途径的通量影响越大。得出的结果是:PykA改变后,FCCs的变化最大,其次是GapA,推测该菌株PykA是限速酶,GapA可能是限速酶。

关键词：糖酵解途径代谢途径

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离子液体双相体系在DHEA生物双羟化反应中的应用

离子液体双相体系在DHEA生物双羟化反应中的应用

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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：李会李聪孙锦史劲松许正宏江南大学药学院

三羟基雄甾烯酮(7α,15α-diOH-DHEA)是一种重要的医药中间体,可用于合成多种包括利尿剂、内酯类醛固酮受体拮抗剂和妇科用药等在内的药物。其是合成全球销量较大的口服避孕药"Yasmin"的活性成分屈螺酮的关键中间体。利用赤霉... 详细信息

三羟基雄甾烯酮(7α,15α-diOH-DHEA)是一种重要的医药中间体,可用于合成多种包括利尿剂、内酯类醛固酮受体拮抗剂和妇科用药等在内的药物。其是合成全球销量较大的口服避孕药"Yasmin"的活性成分屈螺酮的关键中间体。利用赤霉菌(Gibberella intermedia)能够将去氢表雄酮(DHEA)转化为7α,15α-diOH-DHEA,但目前菌株双羟化能力较低,底物DHEA在水中的低溶解度进一步限制了双羟化效率。有机溶剂-水双相体系的应用有效解决了甾体底物水溶性差的问题,同时省去产物后续分离提取操作步骤。但有机溶剂的使用不仅污染环境,还会对人体健康造成危害,无法满足绿色安全生产要求。而离子液体作为一种新型绿色化学溶剂,在生物催化领域中逐渐替代有机溶剂发挥着较强的作用。与传统有机溶剂相比,离子液体的不易挥发性及不易燃等优点,显示出了离子液体双相体系在真菌全细胞生物转化中具有较大的应用潜力。本研究通过考察不同种类离子液体-水双相体系中赤霉菌*** CA双羟化DHEA生物转化反应的影响,构建合适的离子液体-水双相体系,并在此基础上,优化双羟化反应条件,以期进一步提高产物得率。通过比较五种不同种类的离子液体([Bmim][PF]、[Hmim][PF]、[Bmim][BF]、[Bmim][NTF]、[Emim][EtSO])对底物转化率和产物得率的影响,选择[Emim][EtSO]作为构建该体系的离子液体,并对该双相体系中离子液体的浓度、底物的投料浓度及投料时间等条件进行优化。结果表明,最适双相体系转化条件为:菌体生长14 h后,向转化培养基中加入1.0%(V离子液体:V水)的[Emim][EtSO],同时投加6 g/L底物DHEA。转化72 h时,底物DHEA的转化率和7α,15α-diOH-DHEA产物得率分别达到91.2%和64.3%。

关键词： DHEA 7α,15α-diOH-DHEA Gibberella intermedia CA 离子液体双相体系

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RNA-seq技术在可变剪接研究中的应用

RNA-seq技术在可变剪接研究中的应用

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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：斯阳明邢永强蔡禄内蒙古科技大学数理与生物工程学院

目的:随着下一代测序技术(Next-Generation Sequencing,NGS)的发展,RNA测序(RNA-seq)迅速成为测定研究RNA转录本和多样性的手段。大规模并行RNA-seq的使用给生物信息学领域研究带来了新的机遇和挑战。可变剪接是真核生物基因表达过程中... 详细信息

目的:随着下一代测序技术(Next-Generation Sequencing,NGS)的发展,RNA测序(RNA-seq)迅速成为测定研究RNA转录本和多样性的手段。大规模并行RNA-seq的使用给生物信息学领域研究带来了新的机遇和挑战。可变剪接是真核生物基因表达过程中的关键环节,是蛋白质多样性的主要来源,在生物的分化、发育及疾病的发生中扮演重要角色。识别可变剪接位点一直都是研究的重点。RNA-seq测序技术产生的海量数据为可变剪接的研究带来了新的思路和方法。RNA-seq高通量测序数据处理和分析的方法是从理论上预测可变剪接位点的关键,对后续的实验工作有一定的指导意义。本文扼要介绍高通量RNA-seq测序流程的基础,尝试构建一套从原始数据处理、注释及拼接到可变剪接位点识别及其可视化的分析流程。方法:利用软件对RNA-seq原始数据进行质量控制;对原始数据进行修饰和建立索引;对原始序列进行比对;利用比对结果进行转录本的拼接;对拼接的转录本进行丰度统计;对转录本进行可变剪接表达分析;从分析结果中挑选最优结果进行可视化。结果:通过对大量公开数据库的RNA-seq原始数据进行分析测试,从众多分析软件和方法中筛选,从而构建了一整套从原始数据处理到结果的可视化的基于RNA-seq数据的可变剪接分析流程。展望及后续工作:建立一整套基于RNA-seq数据有效的可变剪接分析流程是可变剪接理论工作中至关重要的一步,它为后续实验验证工作的开展提供了方向,为构建可变剪接生物大分子相互作用网络奠定了基础。我们将对现有的分析软件进行比较,分析其优势与劣势;并时刻关注最新的文献,了解该领域最新进展,不断用新的研究方法来丰富分析流程体系。

关键词： RNA-seq 可变剪接生物信息学转录组学

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利用纤维床反应器固定化拜氏梭菌Clostridium beijerinckii NCIMB 8052高效生产丙酮丁醇的研究

利用纤维床反应器固定化拜氏梭菌Clostridium beijerinckii NCIMB...

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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：刘俊郭亭沈晓宁柳东应汉杰南京工业大学国家生化工程技术研究中心材料化学工程国家重点实验室

丁醇是重要的四碳平台化合物,同时还是新型高效的液态燃料,联合国国际能源署已将丁醇列为第二代生物燃料。由于石油价格的波动,并且全球温室效应加剧,利用产溶剂梭菌(clostridia)生产丁醇越来越受到重视。本实验室建立了一套2L多批次连... 详细信息

丁醇是重要的四碳平台化合物,同时还是新型高效的液态燃料,联合国国际能源署已将丁醇列为第二代生物燃料。由于石油价格的波动,并且全球温室效应加剧,利用产溶剂梭菌(clostridia)生产丁醇越来越受到重视。本实验室建立了一套2L多批次连续固定化发酵体系,选取多种固定化材料介质,对拜氏梭菌Clostridium beijerinckii NCIMB 8052进行摇瓶多批次固定化发酵筛选,最终确定预处理过的棉纤维为最佳固定化材料。为了保持稳定、高效的溶剂生产,我们进一步对固定化发酵体系进行了条件优化,考察了体系中发酵液的不同循环转速(20、30、60、100rpm)和初始葡萄糖浓度(30、20、18g/L)下的发酵动力学。最佳发酵条件下(转速30 rpm,初始葡萄糖浓度18 g/L),多批次连续固定化发酵实验进行了12批次共计107h,平均每批次发酵丙酮丁醇生产浓度分别为4.9g/L、1.9g/L,葡萄糖消耗速率为2.57g/L/h,其中溶剂生产力1.1g/L/h,得率为0.43g/g,比同等条件下的游离批次发酵分别提高了279.3%,19.4%。此外,宏观上,发现拜氏梭菌在纤维材料表面无法形成生物膜,实验室结合电子扫面显微镜(SEM)对拜氏梭菌和丙酮丁醇梭菌固定化细胞进行了形态比对分析;从群体效应体系上分析,发现拜氏梭菌中缺乏agr D序列,实验室对拜氏梭菌进行了agr D表达后并未生成生物膜。实验后期,将结合基因工程和分离手段,提高拜氏梭菌的固定化连续发酵的溶剂生产;分析拜氏梭菌细胞吸附及细胞间交流的机理机制。

关键词：拜氏梭菌生物膜 Clostridium beijerinckii NCIMB 8052 固定化纤维床反应器

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中国生物工程学会第九届学术年会

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中国农业科技导报 2015年第5期17卷 156-156页

中国生物工程学会第五届理事会任期将于2015年12月届满,根据中国科协全国学会组织通则和中国生物工程学会章程,第五届理事会将进行换届工作。经中国生物工程学会第五届理事会第十次常务理事会会议决定并经中国科协批准,定于2015年11月7~... 详细信息

中国生物工程学会第五届理事会任期将于2015年12月届满,根据中国科协全国学会组织通则和中国生物工程学会章程,第五届理事会将进行换届工作。经中国生物工程学会第五届理事会第十次常务理事会会议决定并经中国科协批准,定于2015年11月7~8日在上海召开中国生物工程学会第六次全国会员代表大会,审议第五届理事会工作报告和财务报告,

关键词：中国科协理事会工作财务报告换届工作常务理事会技术交流生物技术领域生物医药生物工程学联系方式

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