目的:探讨真核翻译起始因子eIF3a在博来霉素诱导的肺纤维化中的作用及下游蛋白NDRG1,p27,p53的表达。方法:(1)动物实验:雄性SD大鼠(200g±20g)20只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组(气管内滴注盐酸博莱霉素注射液:5mg/kg)。造模28天后处死,取血浆组织检测。(2)细胞实验:分离培养原代大鼠肺成纤维细胞,观察TGF-β1诱导细胞增殖和分化及对e IF3a、NDRG1的影响,同时分别使用e IF3a si RNA干扰片段观察e IF3a在这一过程中的作用。结果:(1)HE染色和Masson染色结果显示,与对照组相比,模型组肺组织肺泡壁厚度增加、基质增厚、肺间隔增宽,成纤维细胞增生,胶原沉积明显,Real Time PCR检测模型组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原m RNA表达水平明显增高。(2)免疫组化结果显示,与对照组相比,NDRG1在纤维化组织中表达明显升高。(3)与对照组相比,模型组血浆TGF-β1含量及肺组织TGF-β1 m RNA和蛋白表达水平明显增高,α-SMA、e IF3a、NDRG1 m RNA和蛋白水平升高,p27、p53 m RNA水平下降。(4)TGF-β1显著促进肺成纤维细胞增殖、增加(S+G2)期细胞周期比率,同时促进细胞分化,α-SMA与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,并上调e IF3a,NDRG1表达,下调e IF3a表达能取消这一作用。结论:e IF3a在博来霉素诱导的肺纤维化中起重要作用,e IF3a可能通过上调NDRG1表达,下调p27,p53表达而影响肺纤维化过程。
目的:慢性气道炎症是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的重要病理特征之一。有研究发现Wnt/β-catenin信号通路在急性肠炎、肥胖和风湿性关节炎等炎症性疾病中发挥重要作用,而Wnt/β-catenin信号通路是否参与调节香烟诱导的气道炎症目前还不清楚。本研究采用化学激动剂和si RNA干扰等手段探究Wnt/β-catenin信号通路在香烟提取物(CSE)诱导的炎症细胞模型中的可能调节机制。方法:采用2%的CSE刺激人气道上皮细胞(16HBE)24h,并分别予以10μM Wnt通路激活剂SB216763和50n Mβ-catenin si RNA预处理,采用realtime-PCR、Western blot以及细胞免疫荧光等方法检测Wnt/β-catenin通路和P38通路相关基因的m RNA和蛋白表达水平,采用ELISA检测炎症因子TNF-α和IL-1β的表达情况。结果:2%CSE可显著下调16HBE细胞中Wnt受体Fzd4、配体Wnt3a、下游转录因子Tcf4 m RNA的表达以及β-catenin m RNA和蛋白的表达,上调炎症因子TNF-α和IL-1β的分泌水平。Wnt通路激活剂SB216763和β-catenin si RNA分别有效地降低和增加了CSE诱导的炎症因子TNF-α和IL-1β的表达上调,表明激活Wnt/β-catenin通路有助于缓解CSE诱导的炎症反应。同时,SB216763和β-catenin si RNA还分别降低和增加了CSE诱导的磷酸化P38蛋白表达的上调,表明Wnt/β-catenin通路可能通过作用于P38信号通路参与调节香烟诱导的炎症反应。结论:Wnt/β-catenin/P38通路可能参与调节香烟诱导的炎症反应,激活Wnt/β-catenin信号通路可降低香烟诱导的炎症因子TNF-α和IL-1β的表达上调。
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