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携带TAT-Apoptin重组减毒鼠伤寒沙门菌对肿瘤细胞的作用

携带TAT-Apoptin重组减毒鼠伤寒沙门菌对肿瘤细胞的作用

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者：田文静郁川陈桂华廖成水翟崇凯张春杰程相朝河南科技大学动物疫病与公共安全重点实验室洛阳职业技术学院

为研究携带TAT-Apoptin重组减毒鼠伤寒沙门菌对肿瘤细胞的作用,将构建好的能稳定携带TAT-Apoptin的重组减毒沙门菌体外感染黑色素瘤细胞B16F10和肺癌细胞LL/2,Western-blot检测TAT-Apoptin在不同肿瘤细胞内的表达情况,CCK-8法检测不同MO... 详细信息

为研究携带TAT-Apoptin重组减毒鼠伤寒沙门菌对肿瘤细胞的作用,将构建好的能稳定携带TAT-Apoptin的重组减毒沙门菌体外感染黑色素瘤细胞B16F10和肺癌细胞LL/2,Western-blot检测TAT-Apoptin在不同肿瘤细胞内的表达情况,CCK-8法检测不同MOI及感染时间条件下细胞增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并分析Caspase-1,3,6,8,9和细胞色素C等信号蛋白的表达情况。Western-b1ot结果显示,重组菌感染两细胞后,均可检测到约20KD的TAT-Apoptin蛋白条带;CCK-8法实验结果表明,MOI浓度越大,抑制率越高,并且随着感染时间的增加,抑制率逐渐下降,说明重组菌抑制B16F10和LL/2细胞增殖具有浓度依赖性和时间依赖性;重组菌感染B16F10、LL/2细胞24h后,荧光显微镜下可观察到TUNEL阳性细胞;这表明重组菌能够诱导B16F10和LL/2细胞凋亡;进一步对凋亡信号蛋白分析发现,重组菌感染肿瘤细胞B16F10和LL/2后,能诱导Caspase-3,Caspase-6,Caspase-8,Caspase-9和细胞色素C的表达,互补菌对照组和细胞培养空白组均不能诱导上述信号蛋白的表达,此外Caspase-1在LL/2细胞中表达显著升高,以上结果表明,重组减毒鼠伤寒沙门菌能够有效递呈TAT-Apoptin基因在黑色素瘤细胞B16F10和肺癌细胞LL/2内表达,且能够诱导这两种肿瘤细胞凋亡,其可能通过外源性死亡受体途径和内源性线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡,并且诱导肺癌细胞LL/2凋亡还与炎症相关因子Caspase-1的介导有关。

关键词：减毒鼠伤寒沙门菌 TAT-Apoptin 表达信号通路抗肿瘤

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猪流行性腹泻病毒COE基因重组乳酸菌的构建及免疫原性分析

猪流行性腹泻病毒COE基因重组乳酸菌的构建及免疫原性分析

引用

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者：杨洁张以芳云南农业大学动物科学技术学院

本研究以乳酸乳球菌乳链菌肽表达（Nisin controlled expression,NICE）系统为抗原递呈载体,以PEDV COE基因片段为靶基因,构建了表达PEDV COE基因的重组乳酸乳球菌,并对其免疫原性进行了初步评价。根据GenBank中已发表的PEDV序列,设计1... 详细信息

本研究以乳酸乳球菌乳链菌肽表达（Nisin controlled expression,NICE）系统为抗原递呈载体,以PEDV COE基因片段为靶基因,构建了表达PEDV COE基因的重组乳酸乳球菌,并对其免疫原性进行了初步评价。根据GenBank中已发表的PEDV序列,设计1对引物,对云南某猪场采集的疑似患PED病猪肠病料进行RT-PCR扩增,获得778bp的PEDV部分保护性抗原基因,将其克隆至pMD19-T后测序,核苷酸序列同PEDV参考序列同源性为94.5%9.6%。根据目的基因和表达载体特点,设计1对引物,以pMD19-S为模版扩增COE基因（约510bp）。将COE基因与乳酸乳球菌表达载体pNZ8148进行连接,电转化乳酸乳球菌NZ9000,得到重组菌pNZ8148-COE/NZ9000。重组菌用Nisin诱导后,SDS-PAGE可检测到分子量约20kDa的蛋白,与预期蛋白大小一致;间接免疫荧光试验表明,重组菌表达蛋白位于菌体表面且具有反应原性。将构建的重组乳酸乳球菌pNZ8148-COE/NZ9000口服免疫初生仔猪,加强免疫后10d采集免疫动物的血液、粪便样品,处理后用MTS法和ELISA法检测T淋巴细胞转化情况、特异性抗体（IgG和sIgA）及细胞因子（IL-4和IFN-γ）,评价重组菌刺激产生的体液免疫和细胞免疫水平。同时,在免疫前后测定仔猪体重,评价其对仔猪生长发育的影响。试验结果经统计分析表明,各免疫组对仔猪体重增加没有负影响;含有PEDV COE基因的重组乳酸菌口服免疫仔猪后,淋巴细胞增殖试验刺激指数SI、血清抗体IgG、粪便中的sIgA、外周血淋巴细胞悬液中IL-4和IFN-γ含量均高于PBS对照组和空载体对照组,组间差异显著（P<0.05）。由此说明,重组菌pNZ8148-COE/NZ9000具有良好的免疫原性,并能诱导机体产生黏膜免疫反应和系统免疫反应。本研究为进一步开发新型、有效的PEDV口服疫苗奠定了基础。

关键词： PEDV COE基因乳酸乳球菌 NICE系统口服疫苗

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乳酸杆菌对仔鸡营养物质消化和代谢的研究

乳酸杆菌对仔鸡营养物质消化和代谢的研究

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者：毛贵林易中华涂小丽吴娟娟朱年华江西农业大学动物科技学院江西省动物营养重点实验室

本研究以SPF鸡作为悉生动物(Gnotobiotic Animals)模型,通过添加鸡源性乳酸杆菌,研究其对仔鸡对脂肪、蛋白质和氨基酸消化代谢、肌肉脂肪沉积和脂肪酸组成的影响,揭示肠道菌群对宿主营养代谢的作用机理。试验选用SPF鸡种蛋100枚,无菌处... 详细信息

本研究以SPF鸡作为悉生动物(Gnotobiotic Animals)模型,通过添加鸡源性乳酸杆菌,研究其对仔鸡对脂肪、蛋白质和氨基酸消化代谢、肌肉脂肪沉积和脂肪酸组成的影响,揭示肠道菌群对宿主营养代谢的作用机理。试验选用SPF鸡种蛋100枚,无菌处理孵化后,选择优质仔鸡60羽分3组,2组转入无菌隔离器内饲养,分别饲喂经钴-60照射后检测无菌的饲粮(GF组)和无菌饲粮+乳酸菌液(LC组);另外1组置于普通环境传统饲喂常规饲粮(COV组)。试验期35天。采用内源指示剂法于饲养21-25日龄进行代谢试验,将所收集的粪样65℃烘干后称重,测定其水份、能量、粗蛋白、粗脂肪、氨基酸、脂肪酸、盐酸不溶灰分等指标,计算各营养物质的表观代谢率。结果显示:(1)与无菌SPF组相比,添加乳酸杆菌粗蛋白消化率由56.85%提高到62.62%;能量和粗脂肪消化率没有差异。与传统饲养模式(COV)相比,能量和粗蛋白质消化率分别由68.89%和66.16%降低到62.51%和62.62%,粗脂肪消化率提高(由61.53%提高到69.62%,P<0.05)。对粗灰分的代谢率没有显著差异(P>0.05)。(2)与无菌组鸡相比,添加乳酸杆菌对仔鸡的氨基酸代谢率没有显著差异(P>0.05),但传统饲养鸡总氨基酸代谢率显著提高(由79.72%和77.27%提高到85.34.%,P<0.05);通过分析各种氨基酸的消化率发现:传统养殖模式下,除蛋氨酸的消化率降低外,大部份氨基酸的消化代谢率显著增加(P<0.05);赖氨酸的消化率在各组间没有显著差异。(3)添加乳酸杆菌的仔鸡的腿肌干物质含量由22.40%提高到25.76%;肌肉中硬脂酸的含量显著降低(p<0.05)。结论:乳酸杆菌提高粗蛋白的消化代谢率,降低鸡肉组织中硬脂酸的组成比例;传统饲养鸡的肠道正常菌群提高能量和粗蛋白和氨基酸的消化代谢率,但降低粗脂肪代谢率。

关键词：乳酸杆菌 SPF鸡脂肪氨基酸代谢

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Novel Hybrid Peptide Cecropin A(1-8)-LL37(17-30)with Potential Antibacterial Activity

Novel Hybrid Peptide Cecropin A(1-8)-LL37(17-30)with Potenti...

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者： Xu-Biao Wei Ru-Juan Wu Da-Yong Si Xiu-Dong Liao Lu-Lu Zhang Ri-Jun Zhang Laboratory of Feed Biotechnology State Key Laboratory of Animal NutritionCollege of Animal Science and TechnologyChina Agricultural University

Hybridizing different antimicrobial peptides(AMPs) is a particularly successful approach to obtain novel AMPs with increased antimicrobial activity but minimized *** hybrid peptide cecropin A(l-8)-LL37(17-30)(C-L) combining the hydrophobic N-terminal fragment of cecropin A(C) with the core antimicrobial fragment of LL37(L) was designed and synthesized.C-L showed higher antibacterial activity against all indicator strains than C and L,and no hemolytic activity to sheep erythrocytes was observed.C-L kills bacterial cells and causes disruption of surface structure,as determined by scanning electron *** effects were observed in the combination of C-L with several antibiotics(chloramphenicol,thiamphenicol,or neomycin sulfate) against Escherichia coli and Staphylococcus aureus.

关键词： hybrid peptide cecropin A(1-8)-LL37(17-30) antibacterial activity hemolytic activity synergistic interaction

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Physicochemical Properties of Radix Astragalice Bioconverted by Solid-State Fermentation Using Lactobacillus plantarum and Enterococcus faecium

Physicochemical Properties of Radix Astragalice Bioconverted...

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者： Hongxing Qiao Hongtao Shi Chuanzhou BIAN Shengzhen Zhao College of Biological Engineering Henan University of Animal Husbandry and Economy

In order to prepare fermented Traditional Chinese medicine（TCM）,the solid-state of Radix Astragali（RA） was used with Lactobacillus plantarum,Enterococcus faecium and Lactobacillus plantarum mixed with Enterococcus faecium through solid-state fermentatio The Bacterial count,the active substance and the physicochemical properties of RA were examined during this *** 6 d of fermentation,the bacterial count of the three samples were 9.2×10CFU/g for ***,7.8×10CFU/g for *** and 11.5×10 CFU/g for *** mixed with *** production of polysaccharide using *** fermentation was 9.43%on 10day,the production of saponins by using *** mixed with *** was 21.6630mg/g on 15 day,While the production of flavonoid using *** was 2.0835mg/g on 20 *** production of acetic acid,methylacetic,ethyl acetic acid,and lactic acid using *** mixed with *** fermented group were1866.24mg/kg on 15 day,203.80mg/kg on 30 day,996.04 mg/kg on 15 day,and 3081.99mg/kg on20 day,***,the fermented RA also revealed much better than those of unfermented *** data implies that the solid-state bio-processing strategy may be an innovative approach to enhance the activity of RA.

关键词： Radix Astragalice Lactobacillus plantarum Enterococcus faecium solid-state fermentation

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抗菌肽AP2对感染鼠伤寒沙门氏菌小鼠的保护作用

抗菌肽AP2对感染鼠伤寒沙门氏菌小鼠的保护作用

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者：付爱坤莫秋芬吴艳萍王一冰王阳李卫芬浙江大学动物科学学院饲料研究所杭州310058

沙门氏菌是重要的肠道病原菌,其主要临床症状是肠胃炎和伤寒症.非伤寒型沙门氏菌(Salmonella Typhimurium,***)主要引起食物源疾病,可造成较高的发病率和死亡率.抗菌肽apidaecin是从蜜蜂淋巴液中分离得到的小肽.AP2是apidaecin 1b (AP 1... 详细信息

沙门氏菌是重要的肠道病原菌,其主要临床症状是肠胃炎和伤寒症.非伤寒型沙门氏菌(Salmonella Typhimurium,***)主要引起食物源疾病,可造成较高的发病率和死亡率.抗菌肽apidaecin是从蜜蜂淋巴液中分离得到的小肽.AP2是apidaecin 1b (AP 1b)N端的GNN突变成RVR后的改良肽,AP2具有比AP 1b更高效的抑制革兰氏阴性菌活性,且具有耐酸、耐高温和耐胃蛋白酶的优良特性.本研究首先以鼠伤寒沙门氏菌(*** CMCC 50115,ST)和大肠杆菌(Escherichia coli K88,E coli K88)为研究对象,探讨AP2对典型革兰氏阴性菌的体外抑菌效果;在此基础上,构建ST感染小鼠模型,探讨AP2对ST感染小鼠疾病发生的治疗作用.选择6-8周龄雄性C57BL/6小鼠48只,随机分为4组：对照组(CK)和AP2给药组(AP2),沙门氏菌感染组(ST和AP2保护组(AP2+ST),每组3个重复,AP2组和AP2+ST组灌胃给予10μg/mL的AP2溶液,CK和ST组给予无菌PBS溶液,200μL/次/天,持续2周;然后,ST组和AP2+ST组小鼠灌胃服用4× 108CFUs的ST菌液诱导疾病模型,CK组和AP2组服用无菌PBS溶液,200μL/次/只/天,持续观察9天.AP2对E,coliK88和ST的最小抑菌浓度(MICs)均为5μg/rnL,抑菌效果优于AP1b.小鼠试验表明,与ST组相比,AP2+ST组小鼠体重降低幅度显著减少(p＜0.001),且AP2显著缓解了ST诱导的肠道结构破坏和炎症反应.同时,AP2可显著降低小鼠肝脏组织中GPT(P＜0.01)和血清中GPT(P＜0.05)含量,且显著下调细胞因子IL-1β(P＜0.001)和IFN--γ(P＜0.05)的表达水平.表明,AP2对能够显著抑制沙门氏菌活性,缓解沙门氏菌诱导的小鼠全身性炎症反应,对感染小鼠具有较好的保护作用.

关键词：抗菌肽沙门氏菌抑菌活性

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水貂源肠道益生菌菌种的鉴定及理化特性研究

水貂源肠道益生菌菌种的鉴定及理化特性研究

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者：张璐王贵升温建新青岛农业大学动物科技学院山东省畜牧兽医局

水貂肠道疾病造成水貂生产性能指标较低,死亡率相对较高,皮张质量普遍偏低,毛绒品质差,是当今水貂养殖业面临的重要问题。肠道正常菌群平衡是微生态学理论的基础条件,一旦正常菌群数量平衡遭到破坏,水貂的抵抗力就会下降,外观看毛皮质... 详细信息

水貂肠道疾病造成水貂生产性能指标较低,死亡率相对较高,皮张质量普遍偏低,毛绒品质差,是当今水貂养殖业面临的重要问题。肠道正常菌群平衡是微生态学理论的基础条件,一旦正常菌群数量平衡遭到破坏,水貂的抵抗力就会下降,外观看毛皮质量会严重下降,出现被毛凌乱、甚至掉毛的现象。使用益生菌的目的就是补充肠道内有益菌的数量,从而使被破坏的菌群数量恢复平衡,使体内益生菌数量占据主导地位,减少有害菌的定植。针对水貂养殖上的生产现状和存在的相关问题,以及水貂产皮饲养时间长,使相关研究进展缓慢的特点,需要研制出水貂专用的微生态制剂,从而改善水貂的免疫力,提高繁殖性能、优化水貂生产性能,最大程度地给养殖业带来水貂的经济效益。本研究选择四株水貂源性益生菌（Lb1、Lp2、Pp3、Ef4）对一株耐药性强的致病性大肠杆菌（EPEC5）体内体外的抑制作用进行研究。本试验的益生菌菌株,均由山东省动物疫病预防与控制中心细菌检测室于2011年至2013年保存。选择了其中四种共32株疑似益生菌,通过菌株3代活化,将菌株中已失去活性的剔除;镜检后将菌株不纯的纯化后,上机最终鉴定。选择了其中四种共32株疑似益生菌,将四株益生菌进行MRS固体培养基划线分离培养纯化,经过全自动微生物鉴定仪鉴定,结果表明:Lb1为短乳杆菌、Lp2为植物乳杆菌、Pp3为戊糖片球菌、Ef4为屎肠球菌。用电子比浊仪测量60小时内四种益生菌的麦氏浊度,测得菌株Lb1在6 h开始进入对数期,约在16 h进入稳定期;菌株Lp2在12 h开始进入对数期,约在18 h进入稳定期;菌株Pp3在12 h开始进入对数期,约在26 h进入稳定期;菌株Ef4在10h开始进入对数期,约在16h进入稳定期。四株益生菌麦氏浊度结果对比可以表明:不同益生菌进入稳定期的时间不相同,并且繁殖速度也有明显差异,其中菌株Lp2的生长繁殖数量最高,即在稳定期约有8.4×10～9CFU/mL。

关键词：水貂益生菌分离鉴定

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枯草芽孢杆菌CGMCC 1.921对蛋鸡生产性能、蛋品质及粪和肠道微生物数量的影响

枯草芽孢杆菌CGMCC 1.921对蛋鸡生产性能、蛋品质及粪和肠道微生...

引用

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者：郭军蕊董晓芳佟建明中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

本试验旨在研究枯草芽孢杆菌CGMCC 1.921对蛋鸡生产性能、蛋品质及粪和盲肠微生物数量的影响。试验选用28周龄健康海兰褐壳蛋鸡360只,随机分为5个处理,每个处理6个重复,每个重复12只鸡。第1组为对照组,饲喂基础饲粮;第2-5组分别在基础... 详细信息

本试验旨在研究枯草芽孢杆菌CGMCC 1.921对蛋鸡生产性能、蛋品质及粪和盲肠微生物数量的影响。试验选用28周龄健康海兰褐壳蛋鸡360只,随机分为5个处理,每个处理6个重复,每个重复12只鸡。第1组为对照组,饲喂基础饲粮;第2-5组分别在基础饲粮中添加1.0×10～5,1.0×10～6,1.0×10～7,1.0×10～8 cfu枯草芽孢杆菌CGMCC1.921/g饲粮。试验周期为24周。结果表明:添加不同水平枯草芽孢杆菌CGMCC 1.921对产蛋率、采食量、蛋重、只产蛋量及死淘率无显著影响(P>0.05),但在试验8-16和17-24周,各试验组的料蛋比显著低于对照组(P<0.05),且在试验全期,试验2、4、5组料蛋比显著低于对照组(P<0.05)。添加枯草芽孢杆菌CGMCC 1.921对蛋壳颜色、蛋壳厚度、蛋形指数、蛋白高度、蛋黄颜色和哈夫单位无明显改善作用(P>0.05),但对蛋壳强度有显著的提高(P<0.05)。对于粪中大肠杆菌和沙门氏菌数量,添加枯草芽孢杆菌CGMCC 1.921从试验第8周起对粪中大肠杆菌和沙门氏菌数量显著降低(P<0.05)。对于盲肠内容物微生物数量,第2、4、5组乳酸菌数量显著高于对照组(P<0.05);对于双歧杆菌数量,试验2、3、4、5组显著高于对照组(P<0.05);对于大肠杆菌和沙门氏菌数量,试验3、5组显著低于对照组(P<0.05);试验4、5组的产气荚膜梭菌数量显著低于对照组(P<0.05);而饲粮中添加枯草芽孢杆菌对弯曲杆菌和肠球菌无显著影响(P>0.05)。对于大肠杆菌/乳酸菌,试验2、3、4、5组显著低于对照组(P<0.05)。空、回肠试验4、5组双歧杆菌数量显著高于对照组(P<0.05),空肠试验5组乳酸菌数量显著高于对照组(P<0.05)。综上,饲粮中添加枯草芽孢杆菌对蛋鸡生产性能和蛋品质有一定改善作用,且可以降低粪及盲肠内容物中大肠杆菌和沙门氏菌等有害菌数量,提高肠道内容物中双歧杆菌和乳酸菌有益菌的数量。

关键词：蛋鸡枯草芽孢杆菌生产性能蛋品质微生物

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Assessment of probiotic characteristics of Bacillus subtilis from soil

Assessment of probiotic characteristics of Bacillus subtilis...

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者： Guo Mengjiao Ai Wenhao Guang'en Hao Li Rong Wang Hairong Chai Tongjie College of Veterinary Medicine Shandong Agricultural UniversityChinaSino-German Cooperative Research Centre for Zoonosis of Animal Origin Shandong Province Collaborative Innovation Centre for the Origin and Control of Emerging Infectious Diseases of Taishan Medical College

The aim of this study was to select candidate probiotics for *** Bacillus subtilis strains isolated from soil from China's Mount Tai were identified and investigated in vitro for their functional characteristics as potential new probiotic *** growth curves were drawn,the strains' survival in acidic condition(pH 1.5 and pH 3.0) and bile salts were assessed in vitro,and their inhibition of pathogenic bacteria and antibiotic susceptibility were *** all the strains showed a high survival rate at the pH value of 3.0,*** B5 showed greater resistance at lower pH values(1.5) and in bile salts,which indicates its good adaptability to gastrointestinal *** strain also had a significant inhibitory effect on pathogenic bacteria,yet remained susceptible to common *** B5 was thus selected and added to dietary to evaluate how it effect rabbits growth *** showed that adding *** B5 significantly improved rabbits' average weight gain per day and feed conversion ratio,while reduced cultivable anaerobic Clostridium in cecum contents significantly compared with antibiotic and control groups.

关键词： Bacillus subtilis Probiotic potential Acid and bile salt tolerance Antimicrobial activities Rabbit

来源：评论

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Assessment of probiotic characteristics of Bacillus subtilis from soil

Assessment of probiotic characteristics of Bacillus subtilis...

引用

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者： Ai Wenhao Guo Mengjiao Guang'en Hao Li Rong Wang Hairong Chai Tongjie Collaborative Innovation Centre for the Origin and Control of Emerging Infectious Diseases of Taishan Medical College Tai''an City 271000 Shandong Province China College of Veterinary Medicine Shandong Agricultural University China Sino-German Cooperative Research Centre for Zoonosis of Animal Origin Shandong Province Tai''an China

The aim of this study was to select candidate probiotics for *** Bacillus subtilis strains isolated from soil from China's Mount Tai were identified and investigated in vitro for their functional characteristics as potential new probiotic *** growth curves were drawn, the strains' survival in acidic condition (pH 1.5 and pH 3.0) and bile salts were assessed in vitro, and their inhibition of pathogenic bacteria and antibiotic susceptibility were *** all the strains showed a high survival rate at the pH value of 3.0, *** B5 showed greater resistance at lower pH values (1.5) and in bile salts, which indicates its good adaptability to gastrointestinal *** strain also had a significant inhibitory effect on pathogenic bacteria, yet remained susceptible to common *** B5 was thus selected and added to dietary to evaluate how it effect rabbits growth *** showed that adding *** B5 significantly improved rabbits' average weight gain per day and feed conversion ratio, while reduced cultivable anaerobic Clostridium in cecum contents significantly compared with antibiotic and control groups.

关键词： Bacillus subtilis Probiotic potential Acid and bile salt tolerance Antimicrobial activities Rabbit

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