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10 篇 中国农业科学院上...
9 篇 河南省动物疫病预...
9 篇 四川农业大学
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作者

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12 篇 丁壮
11 篇 王川庆
11 篇 刘长明
11 篇 赵军
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10 篇 闫若潜
10 篇 赵明军
10 篇 金梅林
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9 篇 常洪涛
9 篇 危艳武
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8 篇 卢冰霞
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Infectivity of a genotype 4 hepatitis E virus cDNA clone by intrahepatic inoculation of laboratory rats

Infectivity of a genotype 4 hepatitis E virus cDNA clone by ...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者： Yumin Zhu Xiaoming Yu Yuanshu Zhang Yanyan Ni Fusheng Si Ruisong Yu Shijuan Dong Yaowei Huang Zhen Li Institute of Animal Science and Veterinary Medicine Shanghai Academy of Agricultural Sciences Shanghai Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding College of Veterinary Medicine Nanjing Agricultural University Center for Molecular Medicine and Infectious Diseases College of Veterinary Medicine Virginia Polytechnic Institute and State University

A cDNA clone of a genotype 4 swine hepatitis E virus (HEV) strain (SAAS-FX17), identified in Shanghai, has been constructed. Capped RNA transcripts were prepared in vitro and shown to be replication-competent in Huh7 cells. Sprague-Dawley (SD) rats administered the RNAtranscripts by intrahepatic inoculation developed active infections as evidenced by fecal virus shedding and sero-conversion to anti-HEV. The former was first detected between 23-30 days post-inoculation (dpi) and persisted until 45 dpi. Sera of rats inoculated with RNA transcripts became anti-HEV positive between 30 and 40 dpi, and reverted to anti-HEV negative at 52 dpi. Our data indicate for the first time that intrahepatic inoculation of rats with RNA transcripts of an HEV cDNAclone may serve as an alternative animal model for HEV research.

关键词： Hepatitis E virus (HEV) infectious clone genotype 4 rat animal model

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大肠杆菌表面展示Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白及其免疫原性

大肠杆菌表面展示Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白及其免疫原性

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：张建新汤炜周雪杨汐静韩冰孙虎男于立权朴范泽崔玉东黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

奶牛乳房炎是全球奶牛业最常见的疾病之一,可引起严重的经济损失。奶牛乳房炎感染菌多种多样,金黄色葡萄球菌(***)就是其中最主要的致病菌之一。***引起的奶牛乳房炎常采用抗生素加以控制和治疗。但由于抗生素的长期广泛使用和滥用,不... 详细信息

奶牛乳房炎是全球奶牛业最常见的疾病之一,可引起严重的经济损失。奶牛乳房炎感染菌多种多样,金黄色葡萄球菌(***)就是其中最主要的致病菌之一。***引起的奶牛乳房炎常采用抗生素加以控制和治疗。但由于抗生素的长期广泛使用和滥用,不仅造成了***耐药菌株频繁出现,而且抗生素在奶产品中的残留也严重威胁着食品安全。因此,研究和使用疫苗来防控***感染已成为奶业领域的热点。已有研究证明,***灭活苗、荚膜多糖结合苗等免疫效果不理想;抗原亚单位疫苗虽然有一定免疫保护效果,但存在着细胞免疫应答弱、生产工艺复杂等诸多缺点。因此,本研究拟利用大肠杆菌Lpp’OmpA来表面展示***的TRAP蛋白,并研究其免疫原性,为探索新型奶牛乳房炎***疫苗提供数据支持。本研究通过over-lapPCR方法融合了lpp’ompA和lpp’ompA-traP基因,利用表达载体pQE30,分别构建了质粒pLO和pLO-TRAP。利用宿主菌XL1-Blue,转化获得了XL1-Blue/pLO和XL1-Blue/pLO-TRAP菌株。XL1-Blue/pLO-TRAP经IPTG诱导表达,产生了预期大小的蛋白。经全菌体ELISA、流式细胞术检测和激光共聚焦扫描显微镜观察证明,TRAP借助Lpp’OmpA成功地展示在大肠杆菌XL1-Blue表面。将重组大肠杆菌XL1-Blue/pLO、XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP蛋白用弗氏佐剂乳化后,分别免疫接种ICR小鼠,免疫后不同时间采取血清检测TRAP特异性抗体水平和抗体亚类;利用ELISPOT检测IL-4和IFN-γ、间接ELISA方法IL-17A;然后分别用***和HLJ23-1菌株对免疫小鼠进行攻毒。结果,XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP均能够刺激产生高水平的TRAP特异性抗体;细胞因子检测结果表明,XL1-Blue/pLO-TRAP组能刺激小鼠产生良好的细胞免疫和体液免疫,与TRAP免疫组相似。我们的实验结果表明,大肠杆菌表面展示的Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白具有良好的免疫原性。

关键词：奶牛乳房炎 TRAP蛋白大肠杆菌表面展示免疫保护

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H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白S145N变异毒株的致病性研究

H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白S145N变异毒株的致病性研究

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：赵军王新卫王川庆陈陆郑鹿平王泽霖河南农业大学禽病研究所

作者在研究1998～2008年中国H9N2亚型禽流感病毒(AIV)分离株HA基因的进化时发现有2个致病性最强的毒株因HA基因第145位氨基酸的突变导致产生一个潜在的糖基化位点,从而使其不与单抗H6、F6等反应。为进一步探究这类变异毒株HA基因变异对H... 详细信息

作者在研究1998～2008年中国H9N2亚型禽流感病毒(AIV)分离株HA基因的进化时发现有2个致病性最强的毒株因HA基因第145位氨基酸的突变导致产生一个潜在的糖基化位点,从而使其不与单抗H6、F6等反应。为进一步探究这类变异毒株HA基因变异对H9亚型AIV的致病性的影响,本研究对12株具有上述血凝素分子特征的H9流行毒株进行了致病性方面的系统研究。结果显示这类毒株在HA裂解位点处仅有1个碱性氨基酸,均为典型的低致病性AIV毒株,但145位氨基酸均发生漂变(S→N),导致在145～147aa多了一个糖基化位点NGT,并丧失了与单抗的血凝抑制反应特性。该类毒株对SPF鸡胚、鸡和细胞的致病力大大增强,EID50、ELD50为10-8.0～-9.5/0.2ml,高于疫苗株1～2滴度;MDT/MLD最低,多数在60～80h;1日龄SPF鸡的ICPI为0.23～1.7,6周龄SPF鸡的IVPI为0.21～1.1,而疫苗株均为0;可以在不加胰酶的CEF、CEK、DF-1、MDCK单层细胞上不经适应而直接繁殖,12～24h出现病变。人工感染SPF鸡或免疫鸡,从第2天起均可从咽喉、泄殖腔分离到病毒,免疫抗体或同源抗体均不能阻止其攻毒后的排毒。表明这类毒株致病性的增加与HA基因的变异密切相关。因HA基因145-147aa位增加了一个NGT,蛋白结构分析显示血凝素头部蛋白减少了一个β折叠。三维空间构象的变化导致抗HA抗体作用位点的变异或缺失,并影响其邻近的受体结合位点,从而改变该毒株的抗原性和其它生物学特性。这是一类HA蛋白S145位发生变异的毒株,虽然约占当前流行毒株总数的5%-7%,但它更能抵抗机体的防御机制,因而有更大的生存空间。在强大的免疫压力和自然选择下这类毒株有可能逐步成为优势毒株,造成更大的危害,这为该病的防控提出了新的挑战。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒变异毒株 HA基因糖基化位点致病性

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猪瘟病毒诱变型E2基因重组干酪乳杆菌的构建及免疫学特性

猪瘟病毒诱变型E2基因重组干酪乳杆菌的构建及免疫学特性

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：孙绍美张书光张云娟柴俊刘旭川张以芳云南农业大学动物科学技术学院

猪瘟是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。猪瘟病毒E2蛋白是它主要的保护性抗原蛋白,能够诱导机体产生中和抗体,因此常选择猪瘟病毒E2蛋白作为检测猪瘟和制备其新型疫苗的首选抗原。... 详细信息

猪瘟是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。猪瘟病毒E2蛋白是它主要的保护性抗原蛋白,能够诱导机体产生中和抗体,因此常选择猪瘟病毒E2蛋白作为检测猪瘟和制备其新型疫苗的首选抗原。乳酸菌(lactic acid bacteria)是一类能利用碳水化合物产生乳酸的益生细菌统称,可通过口服免疫动物,在动物肠内产生乳酸及其它有益物质,提高动物免疫力及抗病能力。以猪瘟病毒E2基因重组质粒转化乳酸菌构建的重组乳酸菌,具有乳酸菌自身的优良特性及表达外源目的蛋白的双重特性。本研究以pET28a-E2重组质粒为模板,应用PCR扩增得到猪瘟病毒诱变E2基因,并纯化后连接到pNZ44质粒载体中,并通过酶切及测序分析正确,表明成功构建了插入目的基因片段的pNZ44-E2重组表达质粒。重组质粒电转化入已筛选的动物源性干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)中,经培养诱导表达,超声波裂解,SDS-PAGE检测到E2蛋白目的条带,表明成功获得LV-pNZ44-E2重组乳酸菌工程菌;经免疫荧光抗体染色,能在重组菌菌体内见到特异性免疫荧光,而非重组菌菌体内没有荧光,说明E2蛋白能在乳酸菌表达并具有良好的生物学活性。将筛选到的优良重组乳酸菌作为益生菌,经口服免疫实验动物家兔;从实验动物粪便中能分离到重组乳酸菌及用PCR检测到目的基因,表明该重组工程菌能在动物肠道内定植存活。采取血清用ELISA进行特异性抗体检测,ELISA检测实验动物的血清阻断率大于40%,判定为阳性,说明有免疫动物中有猪瘟抗体存在。采抗凝全血进行淋巴细胞增殖实验,猪瘟病毒抗原对实验动物的淋巴细胞有明显的刺激增殖作用,表明口服重组干酪乳杆菌后既可引发机体的体液免疫,也可引发细胞免疫应答。本研究将为益生菌株的改造及表达猪瘟E2蛋白的重组乳酸菌作为口服疫苗防治猪瘟奠定科学的基础。

关键词：猪瘟病毒 E2基因干酪乳杆菌免疫学特性

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山东地区毛皮动物犬瘟热病毒流行病学调查及病毒H基因的遗传变异分析

山东地区毛皮动物犬瘟热病毒流行病学调查及病毒H基因的遗传变异...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：王贵升尹斐斐孙震徐鸿徐聪牛树田梁俊文王金宝田夫林山东大学生命科学学院山东省动物疫病预防与控制中心山东农业大学动物医学院山东省动物卫生监督所

2013年夏季以来,山东地区,毛皮动物疑似犬瘟热病例中主要症状以神经症状、肺出血、肠粘膜脱落和肾脏肿大为主,病死率为100%。采用RT-PCR方法,共检测40家养殖规模在3000只以上的养殖场的155份病例,包括68份棉拭子样品和87份病料。送检病... 详细信息

2013年夏季以来,山东地区,毛皮动物疑似犬瘟热病例中主要症状以神经症状、肺出血、肠粘膜脱落和肾脏肿大为主,病死率为100%。采用RT-PCR方法,共检测40家养殖规模在3000只以上的养殖场的155份病例,包括68份棉拭子样品和87份病料。送检病例中犬瘟热的检出率为63.87%。在神经症状病例中犬瘟热检出率达68.52%。病原在眼鼻分泌物和粪便中检出率低于10%,脑组织的检出率在40%以上。同时在犬瘟热阳性病例的脑组织样品中分离到大肠杆菌、克雷伯氏菌、奇异变形杆菌等细菌。对分离到的6株犬瘟热病毒的H基因进行了全基因序列的扩增。核苷酸同源性在90.6-100%之间,氨基酸同源性在89.9-99.8%之间。分离株wgswh01与wgswh02氨基酸同源性99%;wgsbz01,wgszu01,wgsly01和wgsly02四毒株之间的氨基酸同源性在99%以上;与前两株的氨基酸同源性在89.4-90.2%之间。wgswh01和wgswh02株的与疫苗株OP株的核苷酸同源性98.8%,与经典野毒株CDVA75-17的核苷酸同源性为92.5%,遗传进化上与疫苗株处于同一分支。wgsbz01,wgszu01,wgsly01和wgsly02四毒株在遗传进化上与野毒株处于同一分支。据报道,CDVH基因在309～311位的N-糖基化位点是野毒株所特有而疫苗株都没有的。wgswh01与wgswh02株在309～311位没有N-糖基化位点,而wgsbz01,wgszu01,wgsly01和wgsly02株,在该位置都存在一个糖基化位点,NGS。提示,山东地区,2013年夏季,在以神经症状、肺脏出血、肠粘膜脱路和肾脏肿大为主要特点的毛皮动物病例中主要病原为犬瘟热病毒,且该病毒在脑组织中的检出率比较高,遗传进化上与野毒株近源。在毛皮动物犬瘟热的防治工作中,疫苗选择时应考虑毒株的更换,同时,要做好细菌病的防治。

关键词：犬瘟热病毒流行病学调查 H基因遗传进化

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Genetic Diversity of Bartonella quintana in Macaques Suggests Zoonotic Origin of Trench Fever

Genetic Diversity of Bartonella quintana in Macaques Suggest...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者： Jie-Ying Bai Xiao-Fei Zhang Lin Zeng Laboratory Animal Center Academy of Military Medical Sciences

Bartonella quintana is a bacterium that causes a broad spectrum of diseases in humans including trench fever. Humans were previously considered to be the primary, if not the only reservoir hosts for B. quintana. In order to identify the animal reservoir and extend our understanding of the ecological and evolutionary history of B. quintana, we examined blood samples from macaques and performed multi-locus sequence typing (MLST) analysis. We demonstrated the prevalence of B. quintana infection was common in macaques from main primate centers in China's mainland. Overall, 18.0% (59/328) of rhesus macaques and 12.7% (39/308) of cynomolgus macaques were found to be infected with B. quintana by blood culture and/or polymerase chain reaction. The infection was more frequently identified in juvenile and young monkeys compared to adult animals. In contrast with the relatively low level of sequence divergence of B. quintana reported in humans, our investigation revealed much higher genetic diversity in non-human primates. We identified 44 new nucleotide variable sites and 14 novel sequence types (STs) among the B. quintana isolates by MLST analysis. Some STs were found only in cynomolgus macaques, while some others were detected only in rhesus macaques, suggesting evidence of host-cospeciation, which were further confirmed by phylogenetic analysis and splits decomposition analysis. Our findings suggest that trench fever may primarily be a zoonotic disease with macaques as the natural hosts.

关键词： Bacteria Bartonella quintana MLST macaque trench fever zoonotic disease

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Identification of a conserved linear B-cell epitope of Streptococcus GapC protein by phage-displayed peptide library

Identification of a conserved linear B-cell epitope of Strep...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者： Limeng Zhang Xue Zhou Ziyao Fan Wei Tang Hunan Sun Liquan Yu Zhanbo Zhu Fanze Piao Yudong Cui College of Life Science and Technology Heilongjiang Bayi Agricultural University

Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae and Streptococcus uberis are three common pathogens causing bovine mastitis. The GapC of Streptococcus is a highly conserved surface layer protein that is responsible for inducing protective immune response in mice. To identify protective epitope of GapC, a monoclonal antibody (mAb1F2) against the recombinant GapC of S. dysgalactiae was generated by screening a phage-displayed random 12-peptide library. After three rounds of biopanning, 25 phage clones were randomly selected and their specificity to the mAb was verified by sandwich ELISA. Their amino acid of 13 among total 25 phage colones were sequenced and deduced. It was found that their amino aicd sequences can match amino acids 30TRINDLT36 of GapC. It showed that mAb1F2 could react with the motif 30TRINDLT36 fused GST in Western bloting. So it proposed that the motif 30TRINDLT36 represented a linear B-cell epitope of the GapC. A single replacement of amino acid for the epitope 30TRINDLT36 demonstrated that residues R31A, I32A, N33A, D34A and L35A constitute the core of the epitope. The high homology was found after alignment of the epitope sequences from different streptococcus species. The identified epitope would be useful in development of epitope-based marker vaccines against Streptococcus infection.

关键词： S. dysgalactiae GapC monoclonal antibody epitope mapping phage display

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脑心肌炎病毒VP1蛋白B细胞表位解析与阻断ELISA抗体检测方法的建立

脑心肌炎病毒VP1蛋白B细胞表位解析与阻断ELISA抗体检测方法的建立

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：陈兴慧何庆东白娟王先炜姜平南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室

脑心肌炎病毒(EMCV)可引起仔猪的急性致死性心肌炎和母猪的繁殖障碍等疾病,并具有重要公共卫生学意义。本研究采用杂交瘤细胞技术,研制获得18株能稳定分泌抗EMCV抗体的杂交瘤细胞株,细胞培养上清ELISA抗体效价为1:1600～1:6400,小鼠腹... 详细信息

脑心肌炎病毒(EMCV)可引起仔猪的急性致死性心肌炎和母猪的繁殖障碍等疾病,并具有重要公共卫生学意义。本研究采用杂交瘤细胞技术,研制获得18株能稳定分泌抗EMCV抗体的杂交瘤细胞株,细胞培养上清ELISA抗体效价为1:1600～1:6400,小鼠腹水抗体效价达1:1000000。15株单抗的亚类为IgG1,3株单抗的亚类为IgG2b,所有单抗的轻链均为κ型。Westernblot结果表明,其中17株能特异性识别病毒VP1蛋白,2B6株能识别病毒VP2蛋白。IFA结果为,11株单抗都能识别EMCV。利用原核表达系统,对VP1蛋白进行截短表达,结果获得41个重组截短蛋白,采用间接ELISA和Westernblot精确定位了17株单克隆抗体所识别的抗原表位,结果共鉴定出5个抗原表位:V(2)ENAEK(7)(单抗6E11、7A7和7C9识别),A(17)DFVA(21)(单抗2C8识别),F(19)VAQPVY(25)(单抗1D1、1F3、2A2、2A5、4B2、4B9、4F1、5A1、5A11和5G1识别),P(42)IGAFTVK(49)(单抗1G8和3A9识别)和F(36)YDRSSPIGAFTVKS(50)(单抗4E2识别)。选择EMCVVP1单抗7C9进行辣根过氧化物酶标记,应用纯化的EMCV重组VP1蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了检测EMCV抗体的阻断ELISA方法。通过对30份EMCV阴性血清检测,确定其判定标准为:阻断率PI≥39.10%时为阳性,PI≤29.46%时为阴性,29.46%﹤PI﹤39.10%时为可疑。30份临床血清样品检测结果显示,该方法与中和试验符合率为90%,且阻断ELISA的敏感性高于血清中和试验。该方法与口蹄疫病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型等参考阳性血清均无交叉反应;批内和批间重复性试验结果显示变异系数均小于10%。应用该阻断ELISA方法检测我国不同猪群580份血清,EMCV抗体阳性率为41.03%。本研究为VP1蛋白功能研究和EMCV诊断方法研究建立奠定了较好基础,具有较好应用前景。

关键词：脑心肌炎病毒单克隆抗体 VP1蛋白 B细胞表位阻断ELISA

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重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作用研究

重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：吴志明闫若潜程俊贞赵明军刘梅芬杨晓璐张书阳河南省动物疫病预防控制中心河南科技大学动物科技学院许昌市动物疫病预防控制中心

为了研究基因工程重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2,重组复合蛋白)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将120只21日龄SPF鸡随机平均分为4组,于21日龄时进行攻毒和重组复合蛋白注射,以进行重组复合蛋白在鸡体内抗传... 详细信息

为了研究基因工程重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2,重组复合蛋白)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将120只21日龄SPF鸡随机平均分为4组,于21日龄时进行攻毒和重组复合蛋白注射,以进行重组复合蛋白在鸡体内抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)作用实验。分别通过临床观察实验和检测4组鸡在攻毒前1d(0DPC)和攻毒后(DPC)不同天泄殖腔的排毒率、外周血中持续带毒时间、IBDV在不同组织器官的动态分布、血清中IBDV抗体水平、外周血中鸡IFN-α、IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6(ChIFN-α,ChIL-2,ChIFN-γ,ChIL-4和ChIL-6)的表达水平、外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾脏淋巴细胞增殖活性等指标以揭示重组复合蛋白的抗病毒和免疫增强作用机理。结果表明:与IBDV攻毒对照组(第2组)相比,重组复合蛋白与IBDV同时应用组(第4组)鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间显著降低,且第4组鸡的排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器管带毒时间均显著低于第2组。攻毒后7d～42(d7～42DPC),第4组鸡的IBDVELISA抗体水平极显著低于第2组(P<0.01)。3～35DPC,第4组鸡血清中ChIFN-α、ChIFN-γ和ChIL-2、ChIL-6的表达水平极显著高于其他3组对照组(p<0.01),ChIL-4表达水平于3～21DPC期间极显著高于其他3组对照鸡(p<0.01)。第4组鸡的PBLC增殖活性于7～21DPC期间、脾淋巴细胞增殖活性于7～14DPC期间均极显著高于第2组(p<0.01)。结果表明:重组复合蛋白在机体内对IBDV具有显著抑制作用;重组复合蛋白可通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体PBLC和脾淋巴细胞增殖活性等方式增强机体的细胞免疫能力,从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用。

关键词：重组鸡干扰素/白细胞介素-2复合蛋白传染性法氏囊病病毒抗病毒免疫增强机理

来源：评论

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猪圆环病毒2型单克隆抗体研制与夹心ELISA抗原检测方法的建立

猪圆环病毒2型单克隆抗体研制与夹心ELISA抗原检测方法的建立

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：翟淑燕陈兴慧白娟王先炜姜平南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室

猪圆环病毒2型(PCV2)是影响世界养猪业经济损失的重要致病原之一。本研究利用纯化的猪圆环病毒2型(PCV2)免疫Balb/c小鼠,通过单克隆抗体技术,筛选获得3株能稳定分泌抗PCV2-Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3E5、3E6和5A6。体外培... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是影响世界养猪业经济损失的重要致病原之一。本研究利用纯化的猪圆环病毒2型(PCV2)免疫Balb/c小鼠,通过单克隆抗体技术,筛选获得3株能稳定分泌抗PCV2-Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3E5、3E6和5A6。体外培养连续传代至第20代,分泌抗体的效价基本一致。3E5、3E6和5A6培养的上清效价分别为1:12800、1:1600和1:6400,腹水效价为1:6400000、1:640000和1:800000;3株单抗亚类鉴定,重链均为IgG2a型,轻链为κ型;间接免疫荧光试验结果显示,3株单抗均可与PCV2毒株产生特异性荧光反应;病毒中和试验结果为,3E5和3E6均具有良好的中和活性,而5A6不具有中和活性;Westernblot结果表明,3株单抗均能与纯化PCV2Cap蛋白(约30kDa)发生特异性反应,其识别的表位需要Cap蛋白N端42-50aa区域的参与。利用PCV2单克隆抗体3E5作为捕获抗体,兔抗PCV2血清为第一抗体,成功建立了PCV2夹心ELISA抗原检测方法。该方法与猪圆环病毒1型、猪流行性腹泻病毒、猪巨细胞病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪脑心肌炎病毒及副猪嗜血杆菌等均无交叉反应性。检测PCV2细胞毒,其最低检测下限为102.59TCID50/mL;批内和批间试验变异系数均小于10%。采用倍比稀释PCV2标准样品绘制病毒抗原定量检测的标准曲线,检测范围为390.6～25000TCID50/mL,相关系数r值为0.99。该方法与经β-丙内酯灭活的PCV2细胞毒、真核表达的PCV2Cap蛋白均可有效反应,但不能与甲醛灭活的PCV2抗原反应。应用该方法定量检测6份细胞毒样品中PCV2含量,结果与间接免疫荧光法测得的病毒TCID50相似;用该方法检测临床发病猪淋巴结组织样品中PCV2含量,发现仔猪表现PMWS的临床症状与其组织中PCV2的病毒含量有明显的正相关性。以上结果表明该方法在应用于PCV2含量检测和PCVAD诊断方面,具有重要应用前景。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白单克隆抗体夹心ELISA

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