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- 1 篇 教育学
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5 篇 狂犬病病毒
5 篇 单克隆抗体
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4 篇 克隆
4 篇 细粒棘球绦虫
4 篇 大肠杆菌o157
4 篇 检测
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机构

15 篇 中国农业科学院上...
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10 篇 华南农业大学
10 篇 上海交通大学
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6 篇 新疆畜牧科学院兽...
6 篇 吉林大学
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3 篇 中国农业科学院家...
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3 篇 山东绿都生物科技...
3 篇 中国农业大学
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3 篇 河南农业大学

作者

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7 篇 张守峰
7 篇 陆承平
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6 篇 张文宝
6 篇 石保新
6 篇 杨志彪
6 篇 朱建国
5 篇 王进成
5 篇 岳华
5 篇 丁铲
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4 篇 蔡建平
4 篇 崔立
4 篇 阿依努尔
4 篇 薛飞群
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3 篇 张菲

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151 篇 中文
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微小隐孢子虫卵囊壁蛋白CP41基因的克隆及表达

微小隐孢子虫卵囊壁蛋白CP41基因的克隆及表达

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：于慧珠陈兆国岳城米荣升夏延富中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心新疆农业大学动物医学学院湖南农业大学动物医学学院

为克隆和表达编码微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)卵囊壁蛋白CP41基因,以本室繁殖保存的微小隐孢子虫鼠基因型卵囊提取总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD 18-T并进行序列测定,与GenBank下载的序列进行同源性比对。将鉴... 详细信息

为克隆和表达编码微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)卵囊壁蛋白CP41基因,以本室繁殖保存的微小隐孢子虫鼠基因型卵囊提取总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD 18-T并进行序列测定,与GenBank下载的序列进行同源性比对。将鉴定正确的序列亚克隆到pGEX-5x-3原核表达载体,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并复性纯化包涵体蛋白。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列比较,同源性为90.50%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下高效表达,表达产物大小约为46ku,Western blotting分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶单克隆抗体(Mouse ant-GST)、微小隐孢子虫感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白免疫的兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫原性和免疫反应性。

关键词：微小隐孢子虫卵囊壁蛋白 CP41 克隆表达

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2007年山东省动物源大肠杆菌对15种抗生素的抗药性研究

2007年山东省动物源大肠杆菌对15种抗生素的抗药性研究

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：李云王庆艳朱小玲胡明张秀美陆黎明沈建忠刘玉庆山东省农科院畜牧兽医研究所中国农业大学动物医学院

采用MH肉汤微量稀释法分析了来自齐鲁医院和山东省主要规模化养殖场奶牛、猪、肉鸡、饲养员粪样及饲养环境中的712株大肠杆菌分离株对15种抗生素的敏感性。结果表明鸡场和医院大肠杆菌平均抗药性频率达到81.3%、63.38%;菌株抗药性最为... 详细信息

采用MH肉汤微量稀释法分析了来自齐鲁医院和山东省主要规模化养殖场奶牛、猪、肉鸡、饲养员粪样及饲养环境中的712株大肠杆菌分离株对15种抗生素的敏感性。结果表明鸡场和医院大肠杆菌平均抗药性频率达到81.3%、63.38%;菌株抗药性最为普遍。多数对12、13种抗生素产生抗性。猪场次之,平均抗药性频率为52.7%;比较集中在对9、10种抗生素抗性;奶牛场最低,平均抗药性频率为18.7%,大部分菌株集中在1、2种抗性。饲养员和动物的抗药性程度和抗药谱密切相关,表明抗药性菌株可以通过环境和食物链在不同宿主之间传播。肉鸡抗药性程度甚至高于医院治疗病人,给人医治疗带来很大的隐患。50%以下抗药性频率的抗生素有氟苯尼考、头孢唑啉、安普霉素、头孢噻呋、硫酸粘菌素、阿米卡星,建议使用。选择14株多抗菌株在消除药物后,连续传代8天,60%菌株抗药性程度不变,5%抗药性程度提高,而35%菌株抗药性程度降低,平均抗药谱由14.2种降低到12.6种。这一方法及其结果表明,通过传统的药敏试验加上无药传代培养,可以区分生理耐受性和遗传抗药性,采取不同治疗策略:对于稳定的抗药性突变,可以更换敏感药物;对于生理性适应和耐受,则轮换用药可能无济于事,但间歇用药或限制用药可以保障治疗效果。

关键词：抗药性监测大肠杆菌大肠杆菌分离株奶牛场耐药性抗生素动物源山东省

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Stx2噬菌体φMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性

Stx2噬菌体φMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：苏良科严亚贤陆承平上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海 200240 上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海 200240 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京 210095

利用λ噬菌体的Red重组系统，将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌0157：H7 Min27株的stx2基因中，获得O157：H7 Min27的突变菌株Min27(△six：：cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导，结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的Stx2噬... 详细信息

利用λ噬菌体的Red重组系统，将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌0157：H7 Min27株的stx2基因中，获得O157：H7 Min27的突变菌株Min27(△six：：cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导，结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的Stx2噬菌体，命名为φMin27(△stx：：cat)。将φMin27(△stx：：cat)感染21株不同血清型的大肠杆菌，采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选，观察它对细菌的裂解和溶原转换情况。其中2株血清型分别为O60和O 138的大肠杆菌可以被该突变噬菌体溶原感染，表现出对氯霉素的抗性，但没有形成噬菌斑，而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后，能释放出感染性的φMin27(△stx：：cat)颗粒，并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。试验结果表明φMin27(△stx：：cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌，且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体，显示出φMin27(△stx：：cat)噬菌体具有携带外源基因在不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力，为进一步研究Stx噬菌体在不同属菌株之间的溶原转换和Stx毒素表达机制提供了重要的技术平台。

关键词：大肠杆菌 Stx2噬菌体感染特性基因突变

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上海交通大学

上海交通大学

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

上海交通大学是我国历史最悠久的高等学府之一,是教育部直属、教育部与上海市共建的全国重点大学,是国家"七五"、"八五"重点建设和"211工程"、"985工程"的首批建设高校。一百多年来,学校为国... 详细信息

上海交通大学是我国历史最悠久的高等学府之一,是教育部直属、教育部与上海市共建的全国重点大学,是国家"七五"、"八五"重点建设和"211工程"、"985工程"的首批建设高校。一百多年来,学校为国家和社会培养了20余万各类优秀人才,包括一批杰出的政治家、科学家、社会活动家、实业家、工程技术专家和医学专家,如江泽民、陆定一、丁关根、汪道涵、钱学森、吴文俊、张光斗、邹韬奋、黄炎培、邵力子、蔡锷、王安、陈敏章、陈竺等。在中国科学院、中国

关键词：上海交通大学上海市教育部国家重点学科全国重点大学

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广州株O157：H7主要毒力基因克隆与序列分析

广州株O157：H7主要毒力基因克隆与序列分析

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：薛素强朱文冠江飙王艳郭霄峰华南农业大学兽医微生物教研室

目的了解大肠杆O157:H7广州株(GZ)所携带毒力基因的特点。方法采用PCR方法扩增目的基因、TA克隆、测序和序列分析。结果本文报道广州株(GZ)O157:H7 pO157质粒溶血素基因(hly C、A、B、D),志贺样毒素2(Stx2)基因序列。测序结果表明:HlyA... 详细信息

目的了解大肠杆O157:H7广州株(GZ)所携带毒力基因的特点。方法采用PCR方法扩增目的基因、TA克隆、测序和序列分析。结果本文报道广州株(GZ)O157:H7 pO157质粒溶血素基因(hly C、A、B、D),志贺样毒素2(Stx2)基因序列。测序结果表明:HlyA基因的长度为2997bp,编码999个氨基酸残基。HlyA基因与GenBank中编号为AB011549、AF074613的同源性为100%;与X86087、AB032930的同源性分别为99.6%和98.5%。HlyB基因的长度为2121bp,编码706个氨基酸残基,与AB011549、X86087、AF074613的同源性为100%;与AB032930的同源性为99.3%。HlyC基因的长度为492bp,编码163个氨基酸残基,与AB011549、AJ243564的同源性为100%;与AB032930、X86087和X80891的同源性分别为98.2%、99.6%和99.4%。HlyD基因的长度为1440bp,编码479个氨基酸残基,与AB011549、AF074613的同源性为100%;与AB032930和X86087的同源性分别为99%和99.7%。Stx2A基因的长度为960bp,编码319个氨基酸残基,与AB015057、AB048239、AB168104、AB168110、AJ605767和AY633462的同源性为100%;与AB048836和AF500189的同源性分别为99%和99.3%。Stx2B基因的长度为270bp,编码89个氨基酸残基。与AB015057、AB168106、AB168109、AB168104、AB168110、AF500189、AJ605767和AY633462的同源性都为100%。结论本文克隆了广州株(GZ)O157:H7 hly基因与stx2基因并进行测序,获得两毒力因子的基因信息。

关键词： EHEC O157:H7 pO157 hly stx2

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猪链球菌2型两代表性分离株对感染小型猪部分免疫指标的影响(英文)

猪链球菌2型两代表性分离株对感染小型猪部分免疫指标的影响(英文...

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：崔立杨志彪沈艳华修国朱建国

为探讨致病性猪链球菌2型感染猪后对外周T淋巴细胞功能活性等免疫指标的影响,本研究选用2月龄健康巴马小型猪30只,经肌肉途径以1×10～7CFU·ml-1/kg体重剂量接种两代表性分离株(四川分离株ZY05719和江苏分离株HA9801,建立了具... 详细信息

为探讨致病性猪链球菌2型感染猪后对外周T淋巴细胞功能活性等免疫指标的影响,本研究选用2月龄健康巴马小型猪30只,经肌肉途径以1×10～7CFU·ml-1/kg体重剂量接种两代表性分离株(四川分离株ZY05719和江苏分离株HA9801,建立了具有典型临床症状和病理组织特征的感染小型猪模型。试验检测了感染后不同时问猪血液中细菌含量和白细胞变化;用流式细胞仪测定T细胞亚群、MTT法检测PHA刺激外周淋巴细胞的增殖功能、ELISA法检测细胞因子IL-1,IL-8,TNF-α,IFN-γ;用NBT还原试验检测嗜中性粒细胞吞噬能力。结果表明,猪链群菌2型感染会引起小型猪的急性死亡、亚急性感染和慢性迁延。急性死亡猪的血液中细菌含量高达10～6CFU/ml。感染后的12h即可见IL-1、IL-8、TNF-α、IFN-γ分泌量显著增加,其中以TNF-α增幅最显著。同时可见CD4+T细胞的水平明显下降,CD8+T细胞的水平上升,急性死亡猪甚至出现CD4+/CD8+T细胞比值倒置,即感染猪免疫处于抑制状态。急性死亡猪血液中的淋巴细胞转化能力变化无规律,而出现亚急性症状的猪的转化指数在下降一周后,逐渐恢复。亚急性感染后白细胞数量在感染后的1-2天下降,而后上升,于感染后第5天达到峰值;嗜中性粒细胞吞噬能力在感染后一直低于感染前水平。血液中白细胞数量、嗜中性粒细胞吞噬能力和淋巴细胞转化能力的变化随感染猪的不同症状而表现并不一致。结果提示:ZY05719菌株和HA9801菌株的致病性存在差异。T淋巴细胞亚群变化及细胞因子分泌功能与SS2感染进展有关。

关键词：猪链球菌2型巴马小型猪 T淋巴细胞亚群增殖功能细胞因子

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广西狂犬病分子流行病学的研究

广西狂犬病分子流行病学的研究

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：熊毅刘棋盘龙波王雯罗廷荣朱伟韦友传陆专灵郭建刚李华明广西大学动物科学技术学院广西区兽医防疫检疫站

本研究从2000年开始从广西各地采集了1563份犬脑、4份发病牛脑、1份发病猪脑和1份猫脑组织,通过对这些动物脑组织的PCR检测,分离出42株狂犬病毒株,并对N基因3′端455个核苷酸片段进行测序分析。根据核苷酸同源性及遗传进化树分析,广西... 详细信息

本研究从2000年开始从广西各地采集了1563份犬脑、4份发病牛脑、1份发病猪脑和1份猫脑组织,通过对这些动物脑组织的PCR检测,分离出42株狂犬病毒株,并对N基因3′端455个核苷酸片段进行测序分析。根据核苷酸同源性及遗传进化树分析,广西狂犬病流行毒株可分成4个群,Ⅰ群有GX01、GX08、GX09、GX014、GX019、GX091,GX123,GX173,GX174,GX195,GX260、GX443,GX452,GX510、GX520,GX BS、GXSL,GXGG、GXLA、GXHX、GXGL、GXNniu和GXWXp共23株,它们的核苷酸同源性在97.6-100%之间;Ⅱ群有GX074、GX219、GX304、GX441、GX442、GX496、GX0510、GXBX、GXBM、GXQZ共10株。它们的核苷酸同源性在98.5-100%之间;Ⅲ群只有GXN119株;Ⅳ群有GX506、GX508、GX509、GX120、GXB03、GXcat、GX201、GX102共8株,它们的核苷酸的同源性在99.1-99.6%之间。通过氨基酸变异分析,与兽用疫苗株ERA比较。所有38个毒株的第58位氨基酸由P变为S,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ群的34株共同发生了H26Y、C40S、S61N、V95L、G106D和P135S位点的变异,Ⅰ群发生了T90N和E110D、Ⅱ群发生了T42S的群特异性变异。氨基酸分析结果与核苷酸同源性、遗传进化树的分析一致。各群毒株呈现明显的地域分布特征,Ⅰ群主要分布在桂东地区、Ⅱ群主要分布在桂西地区,Ⅳ群主要分布在桂南地区。

关键词：狂犬病 N基因序列分析核苷酸同源性分子流行病学

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PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：苗岚飞崔尚金张超范胡守萍陈长木周盛华岳丰雄戚亭谢红玲张垚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室东北农业大学动物医学学院

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID=10～7/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于... 详细信息

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID=10～7/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第0、7、14、28、35天进行PCV2接种。阴性对照组和一次性攻毒组分别在接种后7、14、28和42天处死,连续攻毒组在首次接种后42天处死。试验过程中每天观察、记录小鼠生活状态并在处死前进行体重测量。脱颈椎法分批处死小鼠并采集心、肝、脾、肺、肾、胸腺、淋巴、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、舌、脑等组织进行病理切片观察。用PCR方法对机体中PCV2病毒的分布和含量进行分析,用ELISA试剂盒检测血清中的抗PCV2抗体水平。通过试验发现:三组试验小鼠体重均有增加,其中阴性对照组小鼠体重增长比率大于一次性攻毒组和连续攻毒组,而一次性攻毒组又明显高于连续攻毒组。PCR检测结果显示一次性攻毒组和连续攻毒组体内存在病毒复制并有其特定的转归规律,对照组体内无病毒复制。ELISA方法证实一次性攻毒组和连续攻毒组均产生抗PCV2抗体,但连续攻毒组抗体水平要明显高于一次性攻毒组,整个实验过程中对照组未检测到抗PCV2抗体。将采集的病料进行组织切片观察发现一次性攻毒组和连续攻毒组有明显的微观病理损伤,损伤最严重的器官是淋巴结,对照组未发现明显病理损伤。据此,根据攻毒组小鼠体重增长比率的差异、淋巴结内持续的病毒复制、血清PCV2抗体阳性、明显的微观病理损伤得到小鼠已经感染了PCV2的结论,并初步探讨了小鼠感染PCV2的检测标准。本试验成功建立了PCV2感染SPF昆明小鼠的动物模型,为PCV2的致病机理研究、疫苗研究等奠定了理论基础。

关键词： SPF昆明小鼠 PCV2 微观病理损伤动物模型

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猪源ETEC、STEC、AEEC毒力基因及其与O抗原型的关系

猪源ETEC、STEC、AEEC毒力基因及其与O抗原型的关系

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：陈祥高崧潘志明黄金林苗晓青焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室、江苏省人兽共患病学重点实验室

【目的】揭示从我国部分地区仔猪腹泻或水肿病病猪体内分离到的300个大肠杆菌分离株所属病原性大肠杆菌的病原型(pathotype)、毒力基因及其与O血清型的关系。【方法】O血清型采用常规的凝集试验进行测定,毒力基因采用PCR方法检测。【结... 详细信息

【目的】揭示从我国部分地区仔猪腹泻或水肿病病猪体内分离到的300个大肠杆菌分离株所属病原性大肠杆菌的病原型(pathotype)、毒力基因及其与O血清型的关系。【方法】O血清型采用常规的凝集试验进行测定,毒力基因采用PCR方法检测。【结果】通过对这300个分离株的O血清型及其毒素、紧密素和黏附素基因进行鉴定,结果显示除50株未定型、17株自凝外,测定出233个分离株的血清型,这些分离株覆盖了45个血清型,其中以O149、O107、O139、O93和O91为主,共133株,占定型菌株的57.1%;拥有estⅠ、estⅡ、elt、stx2e和eaeA基因的菌株分别为102(34.0%)、190(63.3%)、81(27.0%)、57(19.0%)和54(18.0%)株;分离株中有51株K88基因阳性(其中菌毛表达率为100%),75株F18基因阳性(其中菌毛表达率为50.7%),在K88菌株中,O149血清型与estⅡ或estⅡ+elt密切相关,在F18菌株中,O107血清型与estⅠ或estⅡ、O139血清型与stx2e紧密相关。依其毒力特征可将这些分离株分为以下6种类型:ETEC、STEC、AEEC、ETEC/STEC、AEEC/ETEC和AEEC/ETEC/STEC,分别拥有190、24、36、32、17和1个菌株,占分离株的63.3%、8.0%、12.0%、10.7%、5.7%和0.3%。通过分析这些分离株的O血清型、毒素类型和黏附素型之间的相关性:猪源ETEC以O149、O107、O93和O98等血清型为主,O149:K88菌株主要与estⅡ或estⅡ+elt肠毒素相关,O107:F18菌株主要与estⅡ相关,O93和O98血清型菌株主要与estⅡ肠毒素相关;STEC菌株以O139:F18血清型为主,拥有stx2e;AEEC菌株拥有紧密素。无明显优势血清型;EFEC/STEC菌株以O107:F18和O116:F18血清型为主,主要与estⅠ+stx2e或estⅡ+stx2e密切相关,ETEC/AEEC菌株以O91和O107血清型为主,全部拥有肠毒素estⅠ和紧密素基因。【结论】我国至少存在6种病原型的猪肠道致病性大肠杆菌,其中ETEC为我国部分地区猪大肠杆菌病的主要病原,同时其病原型日益复杂。

关键词：仔猪大肠杆菌血清型毒力基因产肠毒素大肠杆菌产志贺毒素大肠杆菌黏附与脱落性大肠杆菌

来源：评论

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食源性致病菌六联融合毒素的构建及免疫学特性研究

食源性致病菌六联融合毒素的构建及免疫学特性研究

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：宫彬彬于师宇孟宪梅卢士英任洪林柳增善王克坚吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室近海海洋环境科学国家重点实验室厦门大学海洋与环境学院近海海洋环境科学国家重点实验室厦门大学海洋与环境学院

[目的]构建四种食源性致病菌融合毒素基因及重组表达载体,制备六联融合毒素的血清抗体。[方法]采用柔性Linker序列（G-G-G-G-S）对目的基因进行串联(Hb1-VT-SE-VT-BoNTaHc-SE),构建重组表达质粒pET-22b（+）-F6并在*** BL21中进行表达,... 详细信息

[目的]构建四种食源性致病菌融合毒素基因及重组表达载体,制备六联融合毒素的血清抗体。[方法]采用柔性Linker序列（G-G-G-G-S）对目的基因进行串联(Hb1-VT-SE-VT-BoNTaHc-SE),构建重组表达质粒pET-22b（+）-F6并在*** BL21中进行表达,将表达蛋白纯化后免疫豚鼠制备血清抗体,利用ELISA和琼脂扩散试验验证抗体的特异性与敏感性。[结果]成功构建了重组表达质粒pET-22b（+）-F6并在*** BL21中成功表达,37℃表达蛋白主要以包涵体形式存在（表达量10.2%）,基因序列全长3 384bp,编码1 127个氨基酸,蛋白分子量为127 205,测序结果与设计序列一致性为100%。ELISA和琼脂扩散试验表明,融合毒素F6与四种食源性致病菌有良好的反应原性,与多种非目标菌不反应。[结论]成功的构建了多联融合毒素基因的表达质粒及制备了抗血清。为利用融合毒素的方法检测食源性致病菌,进而建立食源性致病菌广谱、快速的检测方法奠定基础。

关键词：食源性致病菌基因串联融合毒素血清抗体 ELISA检测

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