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文献类型

594 篇 会议

馆藏范围

594 篇 电子文献
0 种 纸本馆藏

日期分布

学科分类号

530 篇 农学
- 499 篇 兽医学
- 26 篇 畜牧学
- 3 篇 林学
- 1 篇 作物学
- 1 篇 农业资源与环境
52 篇 医学
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- 16 篇 中西医结合
- 9 篇 药学(可授医学、理...
- 9 篇 中药学(可授医学、...
- 5 篇 公共卫生与预防医...
- 1 篇 医学技术（可授医学...
5 篇 理学
- 3 篇 生物学
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5 篇 工学
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- 1 篇 农业工程
- 1 篇 生物医学工程（可授...
- 1 篇 食品科学与工程（可...
- 1 篇 生物工程
2 篇 教育学
- 2 篇 教育学

主题

29 篇 分离鉴定
20 篇 病理学观察
19 篇 病理学诊断
16 篇 组织病理学观察
14 篇 prrsv
14 篇 大肠杆菌
14 篇 巨噬细胞
13 篇 混合感染
13 篇 宿主细胞
13 篇 布鲁氏菌
13 篇 病理诊断
13 篇 信号通路
10 篇 原核表达
10 篇 鼠伤寒沙门菌
10 篇 rna
9 篇 生物学特性
9 篇 pcr
8 篇 毒力基因
8 篇 实验动物
8 篇 流感病毒

机构

88 篇 中国农业大学
46 篇 山东农业大学
42 篇 石河子大学
40 篇 河南科技大学
27 篇 四川农业大学
26 篇 东北农业大学
24 篇 洛阳职业技术学院
22 篇 内蒙古农业大学
20 篇 华中农业大学
16 篇 安徽农业大学
16 篇 山西农业大学
15 篇 黑龙江八一农垦大...
15 篇 甘肃农业大学
14 篇 河南科技学院
11 篇 南京农业大学
11 篇 西北农林科技大学
11 篇 扬州大学
11 篇 天津农学院
10 篇 宁夏大学
10 篇 内蒙古民族大学

作者

56 篇 赵德明
56 篇 周向梅
47 篇 杨利峰
37 篇 陈创夫
31 篇 廖成水
31 篇 程相朝
27 篇 成子强
25 篇 张春杰
17 篇 谷长勤
16 篇 李静
15 篇 程国富
15 篇 佘锐萍
15 篇 刘思当
14 篇 汪开毓
14 篇 郁川
13 篇 张万坡
13 篇 祁克宗
13 篇 胡薛英
12 篇 刘晓丽
12 篇 张辉

语言

585 篇 中文
9 篇 英文

检索条件"任意字段=中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会"

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鸡肉源沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌三重定量PCR检测

鸡肉源沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌三重定量PCR检测

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十三次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第三次学术研讨会、中国兽医病理学家第三次学术研讨会

作者：李慧芳宋阔阔姬晶晶杨子龙刘娜刘彦威刘利强刘建钗河北工程大学生命科学与食品工程学院河北省禽病工程研究中心

鸡肉已成为人们日常生活的重要消费品,然而鸡肉及其制品中的一系列食品安全问题制约着其健康发展,其主要的致病菌有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌等。目前对致病菌的检测虽有多种方法,但都存在一些问题,因此研究建立更高特异性、高... 详细信息

鸡肉已成为人们日常生活的重要消费品,然而鸡肉及其制品中的一系列食品安全问题制约着其健康发展,其主要的致病菌有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌等。目前对致病菌的检测虽有多种方法,但都存在一些问题,因此研究建立更高特异性、高通量、定量、快速的鸡与鸡肉制品中主要致病菌的检测方法显得尤为重要,可以为本地区开展鸡与鸡肉类产品的安全性研究、防控食源性疾病的发生提供技术支持。建立一种高通量、定量、快速检测技术,而定量PCR实现了PCR技术从定性到定量的飞跃,且适合多重反应。根据Gen Bank中已发表的禽源致病性沙门氏菌,金黄色葡萄球菌和肠球菌的基因组序列,采用Primer Express5.0软件分别设计一对特异引物,沙门氏菌扩增片段279bp,金黄色葡萄球菌扩增片段395bp,肠球菌扩增片段445bp,以SYBR Green I为扩增产物荧光染色剂,建立一种具有特异性、敏感性,且能快速检测鸡肉中沙门氏菌与金黄色葡萄球菌和肠球菌的三重SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,并进行反应体系的优化、敏感性分析、特异性验证、重复性试验,并用临床组织样本对该方法的特异性进行检测。结果显示研究以临床分离的禽源沙门氏菌,金黄色葡萄球菌和肠球菌为实验株,基于三重SYBR Green I荧光染色的LC-PCR技术,能扩增出特异性的目的片段,无引物二聚体;检测3种致病菌灵敏度达101cfu/m L;重复性熔解曲线趋于一致,且三种菌的Tm值可区分。从不同鸡肉中采集样本的DNA作为模板,经普通PCR方法进行检测,结果显示沙门氏菌扩增出大小约279 bp,金黄色葡萄球菌扩增出大小约395 bp,肠球菌扩增出大小约445 bp。经3重SYBR Green I荧光定量PCR方法进行检测,特异性扩增曲线,走向一致,熔解曲线趋于一致。且CT值与菌落相对应。说明该方法敏感性高、特异性强、重复性好,可用于禽源致病性沙门氏菌,金黄色葡萄球菌与肠球菌的快速和定量检测。

关键词：肠球菌金黄色葡萄球菌 PCR 沙门氏菌重定量

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鸡胚盲肠上皮细胞传代条件的筛选与优化

鸡胚盲肠上皮细胞传代条件的筛选与优化

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作者：白瑞席柔郑明学张黎张雪松李瑞琪康慧鑫白冰郝思源山西农业大学动物科技学院

研究目的:鸡盲肠上皮细胞是柔嫩艾美耳球虫(***)的宿主细胞,通过探索和优化鸡胚盲肠上皮细胞传代条件,以期建立鸡胚盲肠上皮细胞系为***对机体的损伤机制及抗球虫药的研究提供体外细胞模型。材料与方法:本试验通过对鸡胚盲肠上皮原代细... 详细信息

研究目的:鸡盲肠上皮细胞是柔嫩艾美耳球虫(***)的宿主细胞,通过探索和优化鸡胚盲肠上皮细胞传代条件,以期建立鸡胚盲肠上皮细胞系为***对机体的损伤机制及抗球虫药的研究提供体外细胞模型。材料与方法:本试验通过对鸡胚盲肠上皮原代细胞分离消化酶的筛选、不同日龄鸡胚的选择、传代消化酶和营养因素的筛选,对连续传10以内代的细胞采用MTT法测定细胞活力,运用免疫组化染色、光镜、电镜及染色体核型分析等方法鉴定培养盲肠上皮细胞的纯度和特性。结果:(1)嗜热菌蛋白酶组(T组)、I型胶原酶(C组)、I型胶原酶+透明质酸酶组(H组)的鸡胚盲肠上皮第三代细胞增殖率依次降低;T组细胞贴壁率除第1天外其他时间段均极显著(P<0.01)高于C组、H组;细胞活力第1天至5天极显著(P<0.01)高于C组,各时间段均极显著(P<0.01)高于H组。(2)14日龄鸡胚(T14组)、15日龄鸡胚(T15组)、16日龄鸡胚(T16组)、17日龄鸡胚(T17组)盲肠上皮细胞增殖率依次为由高到低;T14组与T15组细胞贴壁率除第2天和8天外其他不同时间段均显著高于(P<0.05)T16组、T17组,T15组细胞贴壁率于第4天至7天显著(P<0.05)或极显著高于(P<0.01)T14组;T14、T15、T16组第2天至3天细胞活力极显著高于(P<0.01)T17组,T15组细胞活力于第6天、第8天极显著高于(P<0.01)T16、T14组;(3)通过对盲肠上皮细胞形态学观察,原代和10代以内的鸡胚盲肠上皮细胞呈"铺路石"样。电镜下细胞表面微绒毛、细胞间紧密连接、桥粒,胞内有分泌泡等结构清晰。CK-18蛋白、E-cad蛋白呈阳性;鸡胚盲肠上皮细胞染色体核型为2n=78。结论与讨论:表明50mg/L嗜热菌蛋白酶可作为盲肠上皮细胞分离的消化酶。14～15日龄为鸡胚盲肠上皮细胞分离最适鸡胚日龄。经鉴定传代培养的细胞为盲肠上皮细胞,且原代和传10代以内的鸡胚盲肠上皮细胞纯度可达82.2%以上,该细胞传至6代未发生转化。

关键词：鸡胚盲肠上皮细胞传代培养筛选优化鉴定

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鹅源H9N2亚型流感病毒的分离鉴定、序列及致病性分析

鹅源H9N2亚型流感病毒的分离鉴定、序列及致病性分析

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作者：朱睿杨雪琴徐丹雯范佳文石火英扬州大学兽医学院江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD) 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

本研究对2011-2012年间分离自扬州市活禽市场的3株鹅源H9N2亚型流感病毒,A/Goose/Jiangsu/YZ527/2011（H9N2,缩写Gs/JS/YZ527/11）、A/Goose/Jiangsu/SQ119/2012（H9N2,缩写Gs/JS/SQ119/12）和A/Goose/Jiangsu/JD564/2012（H9N2,缩写Gs/JS/JD564/12）,进行了全基因组的序列测定和分子特征分析;通过SPF鸡胚中的EID50试验,评估与疫苗株F/98的毒力差异;同时对分离株进行了SPF鸡和鹅的致病性研究。结果发现,Gs/JS/SQ119/12株的PB2基因属于ST/163-like分支,Gs/JS/YZ527/11和Gs/JS/JD564/12株的PB2均属于F/98-like分支,Gs/JS/YZ527/11和Gs/JS/SQ119/12的M基因属于G1-like分支,而Gs/JS/JD564/12的M基因属于F/98-like分支,尽管三株分离株的NA基因都属于F/98-like分支,但与F/98株的NA基因同源性并不高,反而与Ck/SD/BD/10的NA基因高度同源。另外,三株分离株的PB1、PA、NS和NP基因均属于F/98-like分支,即鹅源H9N2病毒Gs/JS/YZ527/11株由G1-like分支和F/98-like分支重组,Gs/JS/SQ119/12株是由ST/163-like分支、G1-like分支和F/98-like分支三个分支重组而成,Gs/JS/JD564/12株是疫苗株F/98的同源株;此外,Gs/JS/YZ527/11和Gs/JS/SQ119/12株的内部基因与H7N9亚型禽流感病毒内部基因高度同源。Gs/JS/YZ527/11和Gs/JS/SQ119/12分离株的NS基因在227位为精氨酸,该位点与提高流感病毒的致病力有关。Gs/JS/YZ527/11,Gs/JS/SQ119/12和Gs/JS/JD564/12的EID50分别为10,10,and 10,特别是Gs/JS/SQ119/12株的EID是Ck/SH/F/98(EID为10)的21倍。在动物感染实验中,鹅源H9N2病毒Gs/JS/SQ119/12和Gs/JS/YZ527/11株对鸡和鹅均具有明显的致病性和血清学反应,而鹅源Gs/JS/JD564/12株对鸡和鹅的致病作用不稳定,只能使部分鸡和鹅的血清转阳,虽然Ck/SH/F/98株可以稳定的感染SPF鸡并产生病毒阳性的血清抗体,但鹅对鸡源F/98株没有形态病理学和血清学反应。经氨基酸序列比对分析,鹅源Gs/JS/JD564/12株和鸡源F/98株除了NA蛋白外,其余7个基因氨基酸同源性极高,结合鸡、鹅的感染实验结果,我们推测,NA蛋白可能对流感病毒适应新宿主的过程发挥重要作用。

关键词：流感病毒 EID 感染实验分离株分离鉴定

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圆圈病毒3型对鸡和小鼠致病性研究

圆圈病毒3型对鸡和小鼠致病性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会

作者：袁世玉李根严天行郑高颖薛靖雯成子强山东农业大学动物科技学院分子病理实验室

(目的)圆圈病毒3型(Gyrovirus 3,Gy V3)首次从儿童腹泻粪便物中检到并从鸡体中分离鉴定,其对禽类及哺乳动物的感染性和致病性尚不清楚。(方法)为明确Gy V3的致病性及发病规律,将腺胃原代细胞培养的Gy V3通过腹腔注射接种鸡及小鼠,经大... 详细信息

(目的)圆圈病毒3型(Gyrovirus 3,Gy V3)首次从儿童腹泻粪便物中检到并从鸡体中分离鉴定,其对禽类及哺乳动物的感染性和致病性尚不清楚。(方法)为明确Gy V3的致病性及发病规律,将腺胃原代细胞培养的Gy V3通过腹腔注射接种鸡及小鼠,经大体剖检、血液学和病理组织学观察病变情况,并通过绝对荧光定量PCR检测病毒在鸡体内的动态分布过程。(结果)动物回归实验结果显示:接毒鸡感染率为95%;接毒鸡表现消瘦、腺胃肿大、腺胃乳头肿胀等典型的传染性腺胃炎症状,此外还能引起鸡的贫血和免疫抑制症状;绝对荧光定量PCR结果显示病毒含量最高的组织为肾上腺和骨髓;接毒小鼠表现为贫血及肠炎症状。(结论)本研究明确了Gy V3在鸡体内靶器官为肾上腺和骨髓,证实Gy V3为人畜共患病原,为Gy V3的免疫防控及公共卫生提供理论依据。

关键词：鸡传染性腺胃炎 GyV3 致病性绝对荧光定量PCR

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蓖麻油致小鼠腹泻模型的建立及评价

蓖麻油致小鼠腹泻模型的建立及评价

引用

作者：李吉达周后敏赵玥王洋赵继丰遵义医学院公共卫生学院人畜共患病研究所

目的:以蓖麻油为诱导剂,建立小鼠腹泻模型;通过腹泻指标的监测及肠道病理组织学的观察对腹泻模型进行评价,旨在阐明蓖麻油致小鼠腹泻机制的同时为基于该模型的治疗性研究提供理论依据。方法:将小鼠随机分成空白对照组、模型组,以灌胃的... 详细信息

目的:以蓖麻油为诱导剂,建立小鼠腹泻模型;通过腹泻指标的监测及肠道病理组织学的观察对腹泻模型进行评价,旨在阐明蓖麻油致小鼠腹泻机制的同时为基于该模型的治疗性研究提供理论依据。方法:将小鼠随机分成空白对照组、模型组,以灌胃的方式给予模型组蓖麻油,空白对照组给予等量梯度生理盐水。观察并记录小鼠体重、饮水量、摄食量、精神状态等一般体况;依据布里斯托对粪便的分级标准观察小鼠粪便形态,分别计算每组小鼠的稀便率、稀便级、腹泻评分及腹泻指数;通过SPASS软件分析各组实验动物腹泻评分与腹泻指数的差异性,对比观察小鼠的腹泻程度。分别在小鼠腹泻0h、2h、4h、8h时采取各组小鼠十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠组织进行病理组织学观察。结果:模型组的小鼠活动量减少、毛发粗糙、精神萎靡、摄食量与饮水量减少、体重下降明显;依据布里斯托对小鼠粪便的分级标准,模型组在给予蓖麻油灌胃后均出现腹泻样排便,且属于重度腹泻;模型组的腹泻评分与腹泻指数存在显著性统计学差异(P<0.05),建模成功;腹泻开始时间及持续时间具有显著的剂量依赖性,腹泻评分及腹泻指数在不同剂量模型组间无显著性差异。病理组织学观察结果表明蓖麻油致小鼠腹泻模型对肠道的损伤主要集中在十二指肠、空肠与回肠;病变主要表现为肠绒毛坏死、脱落,杯状细胞显著增多,固有层水肿及炎性细胞浸润,肌肉层玻璃样变化等,其中以肠绒毛与杯状细胞的变化最为典型;肠道的损伤及恢复在时间上与给药剂量呈负相关:模型C组在腹泻开始4h后病变最为严重,模型C组在腹泻开始2h后病变最为严重。讨论:杯状细胞是一种特定的分泌细胞,肠道中主要分布在肠绒毛粘膜。肠道杯状细胞分泌的黏蛋白MUC2与水、无机盐等形成了肠黏膜表面的凝胶样黏液层,使肠上皮细胞免受肠腔内容物及病原生物的损害。肠道发生炎症时,会伴随杯状细胞数目的增多和MCU分泌的增加,使得杯状细胞过度耗损,从而导致MCU的合成和分泌减少。本研究发现蓖麻油致小鼠腹泻模型中小鼠十二指肠0h时段杯状细胞增多,可能是蓖麻油经胃分解成蓖麻油酸进入十二指肠、空肠破坏黏液屏障,杯状细胞增多分泌大量的黏蛋白以修复黏液屏障。但伴随着肠绒毛大量坏死、脱落,杯状细胞生成量减少,随着内层黏液消耗殆尽抗菌屏障被破坏,肠道菌群稳态被破坏。6-8h时段时模型组小鼠的肠粘膜缓慢的得到恢复,肠绒毛开始缓慢生长,杯状细胞再次出现以重塑黏液屏障。由此可见,杯状细胞在炎性肠病恢复过程中发挥着极其重要的意义。

关键词：蓖麻油腹泻腹泻模型评价

来源：评论

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广东省猪群首次检测到天然重组塞尼卡病毒

广东省猪群首次检测到天然重组塞尼卡病毒

引用

作者：刘健新李慧子鲁荣宁章勇华南农业大学兽医学院

塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)引起的原发性水泡病在世界上主要的养猪国家呈现不断爆发的趋势,对流行毒株的监测具有重要意义。在本研究中,我们在广东省的屠宰猪中分离获得了2株天然重组塞尼卡病毒CH-GDFS-2018和CH-GDJY-2018,并对其... 详细信息

塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)引起的原发性水泡病在世界上主要的养猪国家呈现不断爆发的趋势,对流行毒株的监测具有重要意义。在本研究中,我们在广东省的屠宰猪中分离获得了2株天然重组塞尼卡病毒CH-GDFS-2018和CH-GDJY-2018,并对其进行了遗传演化、系统发育和重组分析。遗传演化分析表明,CH-GDFS-2018和KS15-01与US-15-39812IA,CH-GDJY-2018和SVA/CHN/07/2017亲缘关系近。系统发育分析表明,这两个毒株与我国2017年的流行毒株处于同一进化分支上且均属于US-like病毒。重组分析表明,CH-GDFS-2018的基因组是由USA-IA46008/2015-Passage 1的2个片段(1-1367nt和2018-7267nt)和CH-GDYD-2017的1个片段(1368-2017nt)重组而成,而CH-GDJY-2018的基因组则由SVA-CHN-07-2017的2个片段(1-4370nt和6033-7271nt)和GD01-2017的1个片段(4371-6032nt)重组而成。虽然塞尼卡病毒天然重组的意义未知,但重组病毒的发现为更好的制定塞尼卡病毒的防控策略提供了基础数据。

关键词：流行毒株广东省

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MDV和REV体外共感染状态下宿主细胞的蛋白组学分析

MDV和REV体外共感染状态下宿主细胞的蛋白组学分析

引用

作者：杜旭升周静周德方成子强山东农业大学动物科技学院

马立克病病毒(MDV)和网状内皮增生病毒(REV)分别引起马立克病(MD)和网状内皮增生(RE)。同时感染MDV和REV在鸡群中很常见,给家禽业造成严重损失。然而,对这种共感染的实验研究还很缺乏。本研究以MDV (Md5)和REV (SNV)两种经典菌株为攻毒... 详细信息

马立克病病毒(MDV)和网状内皮增生病毒(REV)分别引起马立克病(MD)和网状内皮增生(RE)。同时感染MDV和REV在鸡群中很常见,给家禽业造成严重损失。然而,对这种共感染的实验研究还很缺乏。本研究以MDV (Md5)和REV (SNV)两种经典菌株为攻毒株,研究共感染宿主细胞蛋白的变化。体外实验显示,与mdv接毒组和REV接毒组相比,共感染组病毒复制率均升高。我们采用等压标记串联质量标记(TMT)大规模定量蛋白质组学技术,对蛋白质表达的变化进行了研究。两个对比组分别鉴定出362个蛋白和1023个蛋白。通过对差异蛋白进行GO分析,KEGG分析和蛋白功能聚类分析。并对共感染组较单独感染组共上调55个蛋白和共下调38个蛋白进行STING分析。结果表明,MDV和REV共感染显著增加了疾病的严重程度,抑制了宿主的免疫反应

关键词：马立克氏病病毒禽网状内皮增生症病毒共感染蛋白组学

来源：评论

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布鲁氏菌分泌蛋白BspG的亚细胞定位分析

布鲁氏菌分泌蛋白BspG的亚细胞定位分析

引用

作者：马忠臣王勇胡尊楠陈创夫石河子大学动物科技学院

胞内寄生菌布鲁氏菌感染动物机体引起布鲁氏菌病(简称布病)。感染此疾病会造成公畜睾丸炎,母畜流产、死胎,人类关节炎及波浪热等。布鲁氏菌的致病作用主要依靠其毒力因子,包括膜蛋白、脂多糖、分泌蛋白等,具有抵抗宿主杀伤机制和致病的... 详细信息

胞内寄生菌布鲁氏菌感染动物机体引起布鲁氏菌病(简称布病)。感染此疾病会造成公畜睾丸炎,母畜流产、死胎,人类关节炎及波浪热等。布鲁氏菌的致病作用主要依靠其毒力因子,包括膜蛋白、脂多糖、分泌蛋白等,具有抵抗宿主杀伤机制和致病的作用。布鲁氏菌分泌蛋白Bsp G(基因大小为651bp)可被分泌进入宿主细胞核及核周围,但其功能目前还不十分清楚。研究思路及目的:本研究主要包括三部分内容,p Ds Red2-Bsp G真核表达载体的构建、Bsp G蛋白的亚细胞定位以及Bsp G基因的RT-PCR分析。通过载体构建及亚细胞定位初步分析了Bsp G蛋白可能进入到宿主细胞中的位置,通过RT-PCR分析确定Bsp G基因是否转录,间接分析Bsp G蛋白的表达。这将对分泌蛋白Bsp G的功能及布鲁氏菌胞内生存机制的研究奠定一定的实验基础。材料方法:通过查找基因序列、设计引物、分别以16M株和2308株布鲁氏菌为模板进行扩增,再进行片段回收、连接至p MD19-T载体,经过提质粒、双酶切验证后连接至p Ds Red2真核载体,酶切验证,然后经过质粒大提后转染入HEK293T肾源细胞,进行激光共聚焦显微镜观察,接下来进行RT-PCR鉴定Bsp G的转录。结果及结论:结果表明,成功构建了p MD19-T-Bsp G质粒和p Ds Red2-Bsp G重组真核质粒;RT-PCR成功扩出Bsp G基因,证明了质粒成功转入细胞并转录;激光共聚焦结果显示,Bsp G蛋白进入宿主细胞与细胞核共定位,存在于细胞核及核周围。这为Bsp G的进入细胞核的分子机制及其功能研究奠定了基础。讨论:布鲁氏菌16M株和2308株的Bsp G,核酸序列上存在三个核苷酸的差异,分别是第54、181、365位核苷酸;所对应的第61、122位氨基酸也不相同。氨基酸的差异可能会引起蛋白质空间结构上的差异,进而导致蛋白质功能的不同以及入核后的定位。T4SS作为毒力因子,其分泌的蛋白在布鲁氏菌感染机体与抗细胞凋亡中有重要作用,如Bsp A、Bsp B、Bsp F等,Bsp G的作用也可能与Bsp A等有相似之处。亚细胞定位分析,两种模板表达的Bsp G均定位于宿主细胞核及核周围。我们猜测,在进入宿主细胞核后,Bsp G可能会与核内遗传物质发生作用,通过与核酸序列互作来影响宿主细胞的遗传与增殖,而在核周围的Bsp G可能会与胞质内的蛋白质发生作用,影响蛋白质的正常功能,这都将可能通过降低宿主细胞免疫活性、抑制细胞凋亡等满足布鲁氏菌长期的胞内生存与繁殖。最后,可以初步确定Bsp G被分泌到宿主细胞核及核周围,但其在感染动物机体过程中的作用以及布鲁氏菌胞内生存机制还有待进一步的研究。

关键词：布鲁氏菌宿主细胞亚细胞定位细胞核分泌蛋白

来源：评论

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梅迪维斯纳病毒Gag蛋白原核表达与间接ELISA检测方法的建立

梅迪维斯纳病毒Gag蛋白原核表达与间接ELISA检测方法的建立

引用

作者：张彦红肖盛中李岩杨艳姜蒙蒙蒙亚琦盛金良石河子大学动物科技学院

Gag蛋白是梅迪维斯纳病毒(MVV)的主要结构蛋白,也是诊断梅迪维斯纳病的主要靶蛋白。为建立MVV抗体间接ELISA检测方法,利用大肠杆菌将含Gag基因的质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中,最终获得高效表达的Gag蛋白,进一步进行ELISA条件的优化... 详细信息

Gag蛋白是梅迪维斯纳病毒(MVV)的主要结构蛋白,也是诊断梅迪维斯纳病的主要靶蛋白。为建立MVV抗体间接ELISA检测方法,利用大肠杆菌将含Gag基因的质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中,最终获得高效表达的Gag蛋白,进一步进行ELISA条件的优化。所建立的方法敏感性试验显示在阳性血清1:3200倍稀释时仍能检出,其组内与组间变异系数均低于10%,具有良好的重复性。对162份临床血清样品进行检测,同时用购自法国IDVET公司的间接ELISA进行比较,符合率达到89.65%。应用该方法对新疆地区1个种羊场和1个育肥羊场的294份羊血清样品进行了检测,结果显示MVV抗体阳性率分别为10.50%、1.77%,表明种羊场中MVV感染率高于育肥羊场,同时本研究可进一步为MVV抗体检测试剂盒的开发提供支持。

关键词：梅迪维斯纳病毒 Gag蛋白间接ELISA

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检测牛冠状病毒抗体的诊断方法的建立与初步应用

检测牛冠状病毒抗体的诊断方法的建立与初步应用

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作者：陆亚冬刘贤侠陈创夫石河子大学动物科技学院

目的为了对牛冠状病毒抗体进行初步诊断,为规模化牛场犊牛冠状病毒的抗体的筛查提供一种便捷、高效、实用的诊断方法。方法根据Gen Bank登录的牛冠状病毒N基因序列,设计特异性引物,对Mebus分离株N基因进行扩增,克隆到p MD 19-T载体后进... 详细信息

目的为了对牛冠状病毒抗体进行初步诊断,为规模化牛场犊牛冠状病毒的抗体的筛查提供一种便捷、高效、实用的诊断方法。方法根据Gen Bank登录的牛冠状病毒N基因序列,设计特异性引物,对Mebus分离株N基因进行扩增,克隆到p MD 19-T载体后进行测序,将测序正确的基因片段经Eco RI和Hind III双酶切后连接到PET-28a和PET-32a载体中,构建重组表达载体PET-28a-N和PET-32a-N,然后亚克隆入BL21(DE3)表达载体,用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。经亲和层析纯化好的牛冠状病毒重组N蛋白包被酶标板,进行间接ELISA实验,经各个环节的优化,确定好反应条件,初步建立了牛冠状病毒间接ELISA诊断方法,同时将原核表达牛冠状病毒核衣壳蛋白N,经亲和层析纯化后作为检测抗原,利用柠檬酸钠还原氯金酸的方法,制备20nm粒径的胶体金颗粒,通过肉眼观察,可见金溶液为酒红色,透明均匀。优化金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcus aureus protein A,SPA)为胶体金标记的最佳条件,制备牛冠状病毒免疫胶体金试纸条。结果成功克隆了牛冠状病毒N基因,片段大小为1400bp,通过SDS-PAGE分析证实表达的重组蛋白PET-28a-N-DE3相对分子质量为54KDa;重组蛋白BCV-32a-NDE3相对分子质量为70KD,Western blot分析表明该重组蛋白BCV-32a-N-DE3和BCV-28a-N-DE3和可以与牛冠状病毒阳性血清发生特异性反应。用建立好的间接ELISA的方法与进口的比利时瑞尔检测牛冠状病毒抗体的试剂盒同时对采集的新疆北疆部分地区:石河子、沙湾、奎屯、昌吉等10多个规模化牛场的腹泻犊牛血清26份和部分健康犊牛血清进行检测,符合率达到88.46%,同时将优化好的试纸条对临床采集的26份血清进行了检测,并与免疫印迹、ELISA作比较,验证牛冠状病毒免疫层析试纸条的可行性,结果是免疫层析试纸条检测线最佳N蛋白浓度为1.5mg/m L,质控线最佳划线浓度为10mg/m L,26份血清样本检测结果为牛冠状病毒免疫胶体金试纸条为38.4%(10/26)、WB34.6%(9/26)、ELISA46.1%(12/26),且试纸条与WB的符合率,高于WB与ELISA的符合率。结论获得的牛冠状病毒N蛋白具有很好地免疫反应性,为牛冠状病毒诊断试剂研发奠定基础。说明此方法适合用于规模化牛场致犊牛腹泻病原和血清抗体的初步检测,同时牛冠状病毒胶体金试纸条的诊断方法的建立,可用于规模化牛场对牛冠状病毒抗体的初步检测,也可为其他病毒检测试纸条提供借鉴。

关键词：牛冠状病毒间接ELISA 免疫层析试纸条

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