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文献类型

211 篇 会议

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学科分类号

208 篇 农学
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- 3 篇 作物学
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4 篇 工学
- 3 篇 生物工程
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3 篇 理学
- 3 篇 生物学
2 篇 医学
- 2 篇 临床医学

主题

10 篇 细胞凋亡
8 篇 布鲁氏菌
7 篇 病理学诊断
6 篇 分离鉴定
6 篇 caspase-3
5 篇 雏鸡
5 篇 小鼠巨噬细胞
5 篇 pcr
5 篇 鼠伤寒沙门菌
4 篇 t-sod
4 篇 病理学观察
4 篇 病理学
4 篇 分离株
4 篇 囊膜蛋白
4 篇 dna
4 篇 elisa
4 篇 prrsv
4 篇 spf
4 篇 肝脏细胞
4 篇 大肠杆菌

机构

25 篇 石河子大学
24 篇 中国农业大学
16 篇 东北农业大学
11 篇 四川农业大学
10 篇 河南科技大学
9 篇 河南省动物疫病与...
9 篇 甘肃农业大学
9 篇 天津农学院
7 篇 西北农林科技大学
7 篇 山东农业大学
7 篇 山西农业大学
6 篇 内蒙古农业大学
6 篇 农业部动物临床诊...
5 篇 南京农业大学
5 篇 河南科技学院
5 篇 北京农业职业学院
4 篇 宁夏大学
4 篇 华中农业大学
3 篇 河北工程大学
3 篇 青岛农业大学

作者

22 篇 陈创夫
18 篇 龙塔
18 篇 程相朝
17 篇 李静
14 篇 张辉
13 篇 赵德明
13 篇 杨利峰
12 篇 廖成水
12 篇 李广兴
12 篇 周向梅
8 篇 郁川
8 篇 黄小丹
7 篇 刘志军
7 篇 童德文
7 篇 佘锐萍
7 篇 盛金良
6 篇 田文静
6 篇 杨贵君
6 篇 郑明学
6 篇 刘淑英

语言

204 篇 中文
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排序：

结核分支杆菌Rv2031c慢病毒载体的构建及其对RAW264.7细胞凋亡的影响

结核分支杆菌Rv2031c慢病毒载体的构建及其对RAW264.7细胞凋亡的...

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：史梦婷孟露萍包海洋付强史慧君张辉任艳乔军陈创夫石河子大学

研究结核分支杆菌Rv2031c基因对小鼠巨噬细胞对RAW264.7细胞凋亡的影响。根据Gen Bank数据库中结核分支杆菌Rv2031c的序列设计引物,以结核分支杆菌国际标准株H37Rv株灭活的菌液上清液为模版,扩增Rv2031c基因;克隆至慢病毒表达载体plex-E... 详细信息

研究结核分支杆菌Rv2031c基因对小鼠巨噬细胞对RAW264.7细胞凋亡的影响。根据Gen Bank数据库中结核分支杆菌Rv2031c的序列设计引物,以结核分支杆菌国际标准株H37Rv株灭活的菌液上清液为模版,扩增Rv2031c基因;克隆至慢病毒表达载体plex-EGFP中,经酶切和测序鉴定后,获得plex-Rv2031c-EGFP重组慢病毒载体;将重组慢病毒质粒分别与辅助质粒共转染至293T细胞中,转染48h后收集慢病毒,并侵染RAW264.7细胞;侵染48h时收集细胞,用流式细胞术检测各试验组巨噬细胞的凋亡率;提取细胞总RNA并反转录成c DNA,PCR检测Rv2031c基因在细胞中的表达情况;同时,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白,Western blot检测Rv2031c蛋白表达水平。结果表明,成功构建了Rv2031c的慢病毒表达载plex-Rv2031c-EGFP;构建了过表达Rv2031c的慢病毒Rv2031c-lv;感染Rv2031c-lv的RAW264.7细胞的凋亡率为41.8%,而对照组EGFP-lv感染的RAW264.7细胞其凋亡率为30.0%;PCR结果表明Rv2031c在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达;Western blot结果显示Rv2031c蛋白在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达。该研究成功构建了结核分支杆菌Rv2031c的慢病毒表达载体并验证了其对RAW264.7细胞凋亡的影响,为结核分支杆菌在机体内潜伏期感染的药物研究奠定了基础。

关键词：结核分支杆菌细胞凋亡 Rv2031c RAW264.7 慢病毒载体

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线粒体凋亡通路与鸡柔嫩艾美耳球虫宿主细胞凋亡的关系

线粒体凋亡通路与鸡柔嫩艾美耳球虫宿主细胞凋亡的关系

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：李姗徐欢成崔小珍白瑞郑明学山西农业大学

研究目的:探讨线粒体凋亡通路是否参与鸡柔嫩艾美耳球虫(***)介导的鸡胚盲肠上皮细胞凋亡过程,为进一步研究鸡球虫病的损伤机制及防治措施提供理论基础和依据。材料方法:体外培养贴壁率达90%的鸡胚盲肠原代上皮细胞分为不接种***组、接... 详细信息

研究目的:探讨线粒体凋亡通路是否参与鸡柔嫩艾美耳球虫(***)介导的鸡胚盲肠上皮细胞凋亡过程,为进一步研究鸡球虫病的损伤机制及防治措施提供理论基础和依据。材料方法:体外培养贴壁率达90%的鸡胚盲肠原代上皮细胞分为不接种***组、接种组、Z-LEHD-FMK(caspase-9抑制剂)处理并接种组、Cs A(线粒体通透性转换孔抑制剂)处理并接种组。于接种***后24 h、48 h、72 h、96 h、120 h取样,采用Annexin V-FITC/PI荧光标记流式细胞术、原位末端标记技术和酶联免疫测定技术检测鸡胚盲肠上皮细胞的DNA损伤情况、宿主细胞早期凋亡凋亡率、晚期凋亡和坏死率以及相关凋亡蛋白caspase-9和caspase-3酶活性的动态变化,每组5个重复,试验平行重复3次。试验结果:接种***子孢子后24 h-120 h,子孢子接种组宿主细胞DNA损伤率、早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率、caspase-9和caspase-3酶活性均极显著(P<0.01)高于不接种子孢子组,且随着时间延长逐渐升高;与子孢子感染组相比,Z-LEHD-FMK和Cs A能极显著(P<0.01)降低***宿主细胞的DNA损伤率、宿主细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率,并极显著(P<0.01)抑制caspase-9和caspase-3酶活性的表达。除了接种***子孢子后24 h,Z-LEHD-FMK和Cs A处理组的晚期凋亡和坏死率低于子孢子接种组,但差异不显著(P>0.05)。结论与讨论:本试验中caspase-9抑制剂和线粒体通透性转换孔(m PTP)抑制剂均可极显著降低宿主细胞DNA损伤率、宿主细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率以及caspase-9和caspase-3酶的活性,表明线粒体凋亡通路参与了***介导的鸡胚盲肠上皮细胞凋亡过程。

关键词：鸡柔嫩艾美耳球虫 DNA 损伤率宿主细胞线粒体凋亡通路

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氯化镍下调抗氧化酶的mRNA表达水平导致雏鸡肾脏氧化损伤的研究

氯化镍下调抗氧化酶的mRNA表达水平导致雏鸡肾脏氧化损伤的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十次学术研讨会

作者：郭红瑞吴邦元彭西方静左之才邓俊良王讯邓婕银霜李剑唐堃四川省环境公害与动物疾病重点实验室四川省环境公害与动物疾病重点实验室四川农业大学动物医学院雅安625014

本研究旨在探究氯化镍(NiCl2)诱导雏鸡肾脏氧化损伤的机制.选用1日龄肉鸡健雏280只,随机分为4组,每组70只,分别饲喂对照日粮和添加300mg/kg,600mg/kg,900mg/kg氯化镍的日粮,试验周期6周.14、28和42日龄时每组随机抽取5只肉鸡,取出肾脏,... 详细信息

本研究旨在探究氯化镍(NiCl2)诱导雏鸡肾脏氧化损伤的机制.选用1日龄肉鸡健雏280只,随机分为4组,每组70只,分别饲喂对照日粮和添加300mg/kg,600mg/kg,900mg/kg氯化镍的日粮,试验周期6周.14、28和42日龄时每组随机抽取5只肉鸡,取出肾脏,应用生化,荧光定量PCR和ELISA方法观测氯化镍对雏鸡肾脏抗氧化系统的影响.结果表明,饲喂氯化镍日粮后雏鸡肾脏中丙二醛(MDA),一氧化氮(NO),8羟基脱氧鸟苷(8-OhdG)显著增加(P＜0.05或P＜0.01),抑制羟自由基的能力显著降低(P＜0.05或P＜0.01).肾脏中总抗氧化能力(T-AOC),铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD),锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD),过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),谷胱甘肽还原酶(GR),谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的活性和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量显著降低(P＜0.05或P＜0.01),诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性显著升高(P＜0.05或P＜0.01).同时,iNOSmRNA水平显著升高,CuZn-SOD、Mn-SOD、CAT、GSH-Px、GR、GST的mRNA水平显著降低(P＜0.05或P＜0.01).上述结果表明,日粮中氯化镍含量超过300mg/kg导致肾脏的氧化损伤,其机制是肾脏抗氧化酶的基因表达和活性降低,引起自由基、脂质过氧化物聚集和DNA损伤所致.

关键词：雏鸡氯化镍饲料抗氧化酶肾脏组织氧化损伤

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一例生长猪圆环病毒病的病理学诊断报告

一例生长猪圆环病毒病的病理学诊断报告

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：吕林刘思当山东农业大学动物科技学院

(目的)仔猪慢性传染性疾病的综合诊断。(方法)尸体剖检、病理组织学观察及RT-PCR方法检测。2014年12月18日,泰安市一规模化育肥猪场发生急性传染性疾病,该猪场从散户购进15-20公斤仔猪100头育肥,购进仔猪的免疫程序不详,购进仔猪进场后... 详细信息

(目的)仔猪慢性传染性疾病的综合诊断。(方法)尸体剖检、病理组织学观察及RT-PCR方法检测。2014年12月18日,泰安市一规模化育肥猪场发生急性传染性疾病,该猪场从散户购进15-20公斤仔猪100头育肥,购进仔猪的免疫程序不详,购进仔猪进场后只进行了FMD、CSF疫苗免疫,仔猪长到20-40公斤之后,猪场开始出现猪只死亡,送检时已死亡10多头,死亡率在10%以上。患猪主要表现严重的呼吸道症状,体温39-40℃,采食量下降,个别病猪有腹泻现象,被毛粗乱,精神沉郁。剖检可见腹股沟淋巴结显著肿大,肝脏肿大,表面有大量白色斑点,脾脏充血肿胀,肠系膜淋巴结充血显著肿胀,肾表面散在白色斑点,回盲瓣有溃疡,肺脏显著肿胀充满胸腔,双侧尖叶、心叶均呈肉样实变,隔叶肿胀稍显硬实。并且肺脏充满整个胸腔,压迫腹腔,大脑没有明显病变。取肺脏、肝脏、淋巴结、大脑10%福尔马林溶液固定,石蜡切片,HE染色,镜检发现:肺间质淋巴细胞、巨噬细胞浸润增生,结缔组织增生,肺泡壁增厚,肺泡内有脱落的肺泡壁上皮细胞、淋巴细胞及嗜中性粒细胞,呈间质性肺炎并发卡他性化脓性肺炎病变。淋巴结中淋巴细胞坏死,巨噬细胞浸润增生,结缔组织增生,呈坏死性肉芽肿病变。肝组织散在灶状坏死,坏死灶内巨噬细胞、淋巴细胞浸润增生,肝小叶之间结缔组织增生,淋巴细胞浸润增生,呈坏死性间质性肝炎病变。肾小球周围及肾小管之间见大量淋巴细胞、巨噬细胞浸润增生,呈急性间质性肾炎病变。脑组织胶质细胞增生,未见其他病毒性脑炎病变。采取肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结、肺脏、脾脏、大脑研磨提取DNA/RNA,利用RT-PCR方法检测,圆环病毒阳性。(结论)据临床表现、剖检病变(淋巴结肿大、间质性肝炎、白斑肾、间质性肺炎)、病理组织学检查及病原学检查,诊断为猪圆环病毒病,同时存在支原体和细菌继发感染引起的肺炎。

关键词：猪圆环病毒病结缔组织增生病理学诊断巨噬细胞浸润

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成年健康比格犬免疫学指标的比较分析

成年健康比格犬免疫学指标的比较分析

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：刘宏王冰王森杨宗统黄凯项路娟孙红梅王丽娜丛蓓蓓尹燕博青岛农业大学动物科技学院青岛大学医学院青岛博隆实验动物有限公司

目的通过对健康成年比格犬三个品系:大体型(Charles River)、中体型(Cavens)、小体型(自繁)外周血T淋巴细胞免疫表型及单核细胞分布调查,建立各品系健康比格犬外周血T淋巴细胞免疫表型及单核细胞正常参考范围。为筛选动物模型提供准确... 详细信息

目的通过对健康成年比格犬三个品系:大体型(Charles River)、中体型(Cavens)、小体型(自繁)外周血T淋巴细胞免疫表型及单核细胞分布调查,建立各品系健康比格犬外周血T淋巴细胞免疫表型及单核细胞正常参考范围。为筛选动物模型提供准确、可靠的依据。方法选择健康成年比格犬三个品系各20只,血样用三色特异性T淋巴细胞亚群及单色单核细胞荧光抗体进行荧光标记,FACS Callibur流式细胞仪检测样品,SPSS17.0软件分析结果。结果三个品系的雌性和雄性比较单核细胞占白细胞的百分率有差异,表现为雌性高于雄性。大体型与中体型比格犬间的单核细胞占白细胞百分率、T细胞占淋巴细胞百分率、CD4+占T淋巴细胞百分率、CD8+占T淋巴细胞百分率、CD4+与CD8+的比值,表现为大体型高于中体型比格犬。大体型与小体型比格犬间的单核细胞占白细胞百分率、CD4+占T淋巴细胞百分率、CD8+占T淋巴细胞百分率、CD4+与CD8+的比值、淋巴细胞占白细胞百分率,表现为大体型高于小体型比格犬。T细胞占淋巴细胞百分率,表现为小体型高于大体型比格犬。中体型与小体型比格犬间的CD4+与CD8+的比值,表现为中体型高于小体型比格犬。单核细胞占白细胞百分率、CD8+占白细胞百分率、T细胞占白细胞百分率,表现为小体型高于中体型比格犬。结论大体型健康成年比格犬单核细胞的分布存在性别的差异。三个品系健康成年比格犬之间存在差异,建立了各个品系的淋巴细胞免疫表型及单核细胞的正常参考值范围。

关键词： T淋巴细胞单核细胞正常参考值流式细胞仪动物模型

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育成鸡肉芽肿型鸡白痢的综合诊断

育成鸡肉芽肿型鸡白痢的综合诊断

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：牛玉娟刘思当山东农业大学动物科技学院

(目的)诊断综合分析某鸡场发生的沙门氏菌病,病原分离的同时对本病做了详细的病理观察与病理诊断,以供参考。(方法)山东某地区养殖场饲养的一批育成鸡(约13000只)发生沙门氏菌病,发病率、死亡率分别为40%和60%,养殖户起初怀疑是马立克... 详细信息

(目的)诊断综合分析某鸡场发生的沙门氏菌病,病原分离的同时对本病做了详细的病理观察与病理诊断,以供参考。(方法)山东某地区养殖场饲养的一批育成鸡(约13000只)发生沙门氏菌病,发病率、死亡率分别为40%和60%,养殖户起初怀疑是马立克氏病等肿瘤性疾病,于是来我们实验室进行就诊。发病鸡只消瘦,精神萎靡,将病、死鸡进行剖检观察,剖检发现心冠脂肪萎缩、水肿,心外膜表面有大小不一的黄白色结节。脾脏肿大,暗红色,被膜下均匀散在灰白色病灶。肺脏暗红色淤血,被膜下及切面分布着大小不一、质地坚硬的黄白色结节。胰腺和肾脏表面也见米粒大小的黄白色结节。肝脏肿大呈青铜色,表面布满灰白色点状病灶,胆囊充盈。肌胃表面及切面肌肉层内存在黄豆粒大小的黄白色结节。十二指肠和直肠黏膜面散在灰白色结节。剖检时取各器官组织于10%福尔马林溶液固定,常规石蜡切片,HE染色,镜检发现心肌纤维局灶坏死消失,坏死灶及周围纤维间巨噬细胞、淋巴细胞灶状浸润。脾脏内白髓处淋巴细胞坏死,坏死的淋巴细胞核崩解、破碎或浓缩深染,脾脏正常组织结构几乎完全消失,呈丝网状、条索状或片状的均质红染的结构。肺脏的肺房、三级和二级支气管等正常结构遭到破坏,出现以淋巴细胞、巨噬细胞浸润增生为主的肉芽肿性病变。胰腺和肾脏,正常组织结构破坏,大量巨噬细胞、淋巴细胞浸润增生。肝细胞灶状坏死,坏死区网状内皮细胞(巨噬细胞)、淋巴细胞和异嗜性粒细胞浸润增生。肌胃平滑肌细胞灶状坏死消失,巨噬细胞、淋巴细胞浸润、增生。肠黏膜上皮细胞坏死脱落,肠腺上皮细胞坏死,固有层、黏膜下层及肌层大量巨噬细胞、淋巴细胞浸润增生。肝脏切面涂片,可见到大量革兰氏阴性杆菌。前增菌后DHL培养基上长出圆形、突起、表面光滑,中央呈黑色的菌落。麦康凯培养基平板上生长呈无色透明的菌落。(结果)通过PCR将病料进行ALV、MDV、REV的鉴定,均未检测出阳性条带。(结果)通过流行病学调查、剖检与组织病理学检查和细菌检测,综合判断该病例为沙门氏菌导致的慢性鸡白痢,并非马立克氏等肿瘤性疾病。

关键词：鸡白痢育成鸡综合诊断肉芽肿

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单酰基甘油酰基转移酶2是一种四聚体酶可以特异性的与二酰基甘油酰基转移酶1形成异源二聚体

单酰基甘油酰基转移酶2是一种四聚体酶可以特异性的与二酰基甘油...

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：许丹张军史裕光童德文西北农林科技大学动物医学院动物病理学实验室

【目的】单酰基甘油酰基转移酶2(Monoacylglycerol acyltransferases,MGAT2)和二酰基甘油酰基转移酶1(Diacylglycerol acyltransferases,DGAT1)是介导小肠脂质吸收并催化甘油三酯合成的两个连续步骤中的两个重要的酰基转移酶,在脂肪进... 详细信息

【目的】单酰基甘油酰基转移酶2(Monoacylglycerol acyltransferases,MGAT2)和二酰基甘油酰基转移酶1(Diacylglycerol acyltransferases,DGAT1)是介导小肠脂质吸收并催化甘油三酯合成的两个连续步骤中的两个重要的酰基转移酶,在脂肪进入小肠绒毛细胞被吸收的过程中发挥着重要的作用。本研究旨在探讨MGAT2和DGAT1相互作用关系。【方法】通过非变性SDS-PAGE的方法检测MAGT2自聚体的形成,通过在COS-7中共表达MGAT2、DGAT1和DGAT2检测其相互作用关系,并通过构建序列删除质粒研究DGAT1和MGAT2相互作用的位点,探讨其功能。【结果】研究表明,MGAT2酶可以形成同源二聚体和同源四聚体。在SDS-PAGE胶上,除了可以检测到依据其氨基酸序列形成38 k Da的MGAT2单体外,还可以在不使用还原剂和热变性的情况下检测到76 k Da的MGAT2二聚体。并且这个76 k Da的MGAT2二聚体条带随着蛋白交联剂的加入而变亮。同时,在SDS-PAE胶的152 k Da处的MGAT2四聚体条带也可以随着蛋白交联剂的加入而成剂量变化。同样的,DGAT1也可以在非变性条件下形成同源自聚体。与此相反,MGAT2与DGAT2共同表达于COS-7细胞中时,并不与其形成异源二聚体,尽管这二者在序列上有高度的同源性。再次通过删除DGAT1序列表明其N端的35～80个氨基酸可以和MGAT2序列相互作用。最后,共表达MGAT2和DGAT1在COS-7细胞中可以显著地提高细胞的脂质合成能力,表明形成二聚体的功能显著性。【结论】MGAT2和DGAT1可能是甘油三酯酶复合体的一部分。本研究为脂肪吸收过程中的关键酶之间的相互作用提供了直接的分子依据。

关键词：糖尿病二酰基甘油酰基转移酶脂质吸收脂肪代谢代谢

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绵羊肌肉生长抑制素原核表及其纳米抗体文库的构建与鉴定

绵羊肌肉生长抑制素原核表及其纳米抗体文库的构建与鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：李尤简张国奇郭吉星陈新凯豆哓霞陈创夫盛金良石河子大学

研究目的:本研究以抑制绵羊肌肉生长抑制素(MSTN)的功能为出发点,通过制备MSTN纳米抗体,探究一条有效促进动物肌肉生长的新途径。材料方法:(1)绵羊MSTN的诱导表达,确定ELISA包被抗原用量。利用IPTG在大肠杆菌中诱导表达MSTN成熟肽蛋白... 详细信息

研究目的:本研究以抑制绵羊肌肉生长抑制素(MSTN)的功能为出发点,通过制备MSTN纳米抗体,探究一条有效促进动物肌肉生长的新途径。材料方法:(1)绵羊MSTN的诱导表达,确定ELISA包被抗原用量。利用IPTG在大肠杆菌中诱导表达MSTN成熟肽蛋白并纯化,通过ELISA和Western blot方法检测抗原反应原性,优化亲和淘选包被抗原蛋白的浓度。(2)绵羊MSTN纳米抗体的淘选和鉴定。扩繁M13K07噬菌体侵染原始文库,构建噬菌体展示抗体文库,噬菌体文库容经滴度测定达到1.8×1012pfu/m L。利用重组MSTN蛋白抗原对噬菌体抗体库进行富集、筛选,经过4轮亲和淘选(Panning),获得了一株亲和力高、特异性强的阳性克隆,测序后经BLAST比对分析证实该克隆序列为骆驼单域重链抗体序列。(3)MSTN纳米抗体在大肠杆菌中诱导表达与鉴定。利用PCR克隆出目的抗体基因序列,构建两种原核表达载体,转化大肠杆菌后经IPTG诱导表达,表达产物经HIS镍柱纯化重组抗体,经ELISA和Western blot验证其与MSTN抗原结合的亲和活性和特异性。结果:纳米抗体文库容量为挑取部分克隆进行测序分析所获得的纳米抗体文库具有良好的多态性,为进一步筛选绵羊的高特异性纳米抗体片段奠定了基础。讨论:目前我国养羊业存在的普遍问题是绵羊生长周期长产肉率低,肌肉在胴体中的比率低等这些问题接影响了畜牧业的经济效益。本实验室长期致力于探得到特异抗体基因的技术寻找一种安全有效的促动物生长制剂。肌肉生长抑制素属于转化生长超家族成员,对肌肉生长起负调控作现有的研究表明,通过制备肌肉生长抑制素的拮抗来阻断其分子作用通路,可以有效的促进动物肌肉。此前本实验室已制备出多克隆抗体并经过肌肉细胞毒性分析,证实了多克隆抗体对肌肉细胞无毒性作用,为肌肉生长抑制素。抗体作为异源性物质进行动物体效果验证提供了安全保障。

关键词：肌肉生长抑制素 ELISA Western 大肠杆菌纳米抗体

来源：评论

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PCV2Cap-WPRE重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

PCV2Cap-WPRE重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：李德龙童德文西北农林科技大学动物医学院

【目的】PCV2(porcine circovirus 2)是引起猪圆环病毒相关性疾病(PCVAD)的主要病原,是养猪业重点防控疫病的病原之一。在众多防控PCV2的措施中,疫苗接种是最重要的措施之一。PCV2 Cap蛋白腺病毒载体疫苗已经有研究,但是免疫原性较差,... 详细信息

【目的】PCV2(porcine circovirus 2)是引起猪圆环病毒相关性疾病(PCVAD)的主要病原,是养猪业重点防控疫病的病原之一。在众多防控PCV2的措施中,疫苗接种是最重要的措施之一。PCV2 Cap蛋白腺病毒载体疫苗已经有研究,但是免疫原性较差,本研究拟通过增加旱獭肝炎病毒转录后调控元件WPRE以期提高其免疫原性。【方法】本研究构建表达PCV2 Cap蛋白的腺病毒载体,并加入WPRE对其进行优化,RT-PCR和western blot检测Cap蛋白在重组腺病毒感染的HEK293A细胞中表达水平,进一步通过小鼠免疫试验检测重组腺病毒r Ad-Cap和r Ad-Cap-WPRE的免疫原性。【结果】以p UC57-A-C-W为模板,用特异性引物进行PCR扩增,成功得到两个目的基因,分别为579bp和1164bp。目的基因与穿梭载体p Shuttle-CMV连接后,转化入DH5α,得到重组质粒,经PCR和双酶切鉴定为阳性,并测序,结果正确,分别命名为p Shuttle-CMV-Cap和p Shuttle-CMV-Cap-WPRE。电转化入BJ5183进行同源重组,成功构建重组腺病毒载体p Adeasy-ps-Cap和p Adeasy-ps-Cap-WPRE。将重组腺病毒载体Pme I线性化后转染进入HEK293A细胞,出现细胞病变时收集细胞,RT-PCR检测成功扩增出大小为579 bp和1164 bp片段的目的基因。两种重组腺病毒感染细胞24h后,收集细胞,做western blot分析,结果均能检测到Cap蛋白,并且r Ad-Cap-WPRE比r Ad-Cap感染细胞Cap蛋白的表达水平高。将重组腺病毒免疫小鼠,进行i ELISA和淋巴细胞增殖实验,结果表明r Ad-Cap-WPRE免疫组的抗体水平和淋巴细胞增殖水平比r Ad-Cap免疫组要高。【结论】成功构建腺病毒穿梭质粒p Shuttle-CMV-Cap和p Shuttle-CMV-Cap-WPRE;成功构建重组腺病毒载体p Adeasy-ps-Cap和p Adeasy-ps-Cap-WPRE;在HEK293A细胞中成功包装,得到重组腺病毒r Ad-Cap和r Ad-Cap-WPRE;在体外,WPRE元件可以提高腺病毒表达Cap蛋白水平;在体内,WPRE可以增强PCV2 Cap腺病毒表达载体的免疫原性。

关键词： WPRE Cap蛋白腺病毒载体猪圆环病毒2型

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兔须癣毛癣菌SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

兔须癣毛癣菌SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：刘月邢鑫刘彦威刘娜刘利强刘建钗张永英河北工程大学农学院邯郸动物医学重点实验室

为建立兔须癣毛癣菌快速检测方法,参照Gen Bank已发表的须癣毛癣菌r DNA基因内转录间区序列(KP099602),采用Primer Express2.0软件设计一对特异性引物,上游引物为(5'-GCA AAG AAG CCT GGA AGA AG-3',),下游引物为(5'-GGA GA... 详细信息

为建立兔须癣毛癣菌快速检测方法,参照Gen Bank已发表的须癣毛癣菌r DNA基因内转录间区序列(KP099602),采用Primer Express2.0软件设计一对特异性引物,上游引物为(5'-GCA AAG AAG CCT GGA AGA AG-3',),下游引物为(5'-GGA GAC CAT CTG TGA GAG TT-3,)。提取基因组DNA,PCR反应体系为:Mix 12.5μL,上下游引物各0.5μL,模板DNA 1.0μL,加双蒸水补足25μL;PCR反应条件为:94℃预变性3min;94℃10s,60℃30s,72℃30s,72℃延伸10min,于4℃终止反应,建立了检测须癣毛癣菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并用该方法对临床分离须癣毛癣菌和病料检测。结果显示以循环阈值(Ct)为纵坐标,以拷贝数的对数值为横坐标,建立标准曲线。标准品在1.0×10～1.0×109拷贝/μL浓度范围内呈良好的线性关系,回归曲线斜率为-2.700,截距为39.056,相关系数R2=0.9936。该方法最低可检测到10拷贝/μL。溶解曲线测试结果为单一波峰,产物Tm值均一,为84.48～88.65℃。样品检查显示须癣毛癣菌出现特异性扩增曲线,为阳性。而犬小孢子菌、絮状表皮癣、红毛癣菌、白色念珠菌和烟曲霉未出现特异性曲线,为阴性,表明试验中所建立的反应体系具有很好的特异性,与其他病原真菌基因组DNA之间无交叉反应。敏感性试验发现该方法能检出10拷贝/μL的须癣毛癣菌DNA,而常规PCR只能检出1000拷贝/μL的DNA,即SYBR Green I实时荧光定量PCR的敏感性是常规PCR的100倍。各浓度梯度,Ct变异系数在0.38～2.08%。同一浓度3个平行定量PCR扩增曲线基本一致,提示该定量PCR方法稳定,重复性较好。这些表明该方特异、敏感、稳定可应用于须癣毛癣菌的检测。

关键词：须癣毛癣菌 DNA 基因组初步应用 PCR 检测方法 SYBRGreen

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