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211 篇 会议

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208 篇 农学
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3 篇 理学
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2 篇 医学
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主题

10 篇 细胞凋亡
8 篇 布鲁氏菌
7 篇 病理学诊断
6 篇 分离鉴定
6 篇 caspase-3
5 篇 雏鸡
5 篇 小鼠巨噬细胞
5 篇 pcr
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4 篇 大肠杆菌

机构

25 篇 石河子大学
24 篇 中国农业大学
16 篇 东北农业大学
11 篇 四川农业大学
10 篇 河南科技大学
9 篇 河南省动物疫病与...
9 篇 甘肃农业大学
9 篇 天津农学院
7 篇 西北农林科技大学
7 篇 山东农业大学
7 篇 山西农业大学
6 篇 内蒙古农业大学
6 篇 农业部动物临床诊...
5 篇 南京农业大学
5 篇 河南科技学院
5 篇 北京农业职业学院
4 篇 宁夏大学
4 篇 华中农业大学
3 篇 河北工程大学
3 篇 青岛农业大学

作者

22 篇 陈创夫
18 篇 龙塔
18 篇 程相朝
17 篇 李静
14 篇 张辉
13 篇 赵德明
13 篇 杨利峰
12 篇 廖成水
12 篇 李广兴
12 篇 周向梅
8 篇 郁川
8 篇 黄小丹
7 篇 刘志军
7 篇 童德文
7 篇 佘锐萍
7 篇 盛金良
6 篇 田文静
6 篇 杨贵君
6 篇 郑明学
6 篇 刘淑英

语言

204 篇 中文
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排序：

兔须癣毛癣菌SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

兔须癣毛癣菌SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：刘月邢鑫刘彦威刘娜刘利强刘建钗张永英河北工程大学农学院邯郸动物医学重点实验室

为建立兔须癣毛癣菌快速检测方法,参照Gen Bank已发表的须癣毛癣菌r DNA基因内转录间区序列(KP099602),采用Primer Express2.0软件设计一对特异性引物,上游引物为(5'-GCA AAG AAG CCT GGA AGA AG-3',),下游引物为(5'-GGA GA... 详细信息

为建立兔须癣毛癣菌快速检测方法,参照Gen Bank已发表的须癣毛癣菌r DNA基因内转录间区序列(KP099602),采用Primer Express2.0软件设计一对特异性引物,上游引物为(5'-GCA AAG AAG CCT GGA AGA AG-3',),下游引物为(5'-GGA GAC CAT CTG TGA GAG TT-3,)。提取基因组DNA,PCR反应体系为:Mix 12.5μL,上下游引物各0.5μL,模板DNA 1.0μL,加双蒸水补足25μL;PCR反应条件为:94℃预变性3min;94℃10s,60℃30s,72℃30s,72℃延伸10min,于4℃终止反应,建立了检测须癣毛癣菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并用该方法对临床分离须癣毛癣菌和病料检测。结果显示以循环阈值(Ct)为纵坐标,以拷贝数的对数值为横坐标,建立标准曲线。标准品在1.0×10～1.0×109拷贝/μL浓度范围内呈良好的线性关系,回归曲线斜率为-2.700,截距为39.056,相关系数R2=0.9936。该方法最低可检测到10拷贝/μL。溶解曲线测试结果为单一波峰,产物Tm值均一,为84.48～88.65℃。样品检查显示须癣毛癣菌出现特异性扩增曲线,为阳性。而犬小孢子菌、絮状表皮癣、红毛癣菌、白色念珠菌和烟曲霉未出现特异性曲线,为阴性,表明试验中所建立的反应体系具有很好的特异性,与其他病原真菌基因组DNA之间无交叉反应。敏感性试验发现该方法能检出10拷贝/μL的须癣毛癣菌DNA,而常规PCR只能检出1000拷贝/μL的DNA,即SYBR Green I实时荧光定量PCR的敏感性是常规PCR的100倍。各浓度梯度,Ct变异系数在0.38～2.08%。同一浓度3个平行定量PCR扩增曲线基本一致,提示该定量PCR方法稳定,重复性较好。这些表明该方特异、敏感、稳定可应用于须癣毛癣菌的检测。

关键词：须癣毛癣菌 DNA 基因组初步应用 PCR 检测方法 SYBRGreen

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玉屏风多糖体外抗NDV作用的研究

玉屏风多糖体外抗NDV作用的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：戴超月余佩肩苏世聪张贝莹蒋焱平苏智欣刘雨桐郭彦佛山科学技术学院生命科学学院

[目的]血清药理学技术是一种新兴的药理学实验方法,其在体外细胞学水平上进行中药药理作用机制的分析,既可防止中药制剂本身的理化性质对试验的干扰,又能反映中药在胃肠道消化吸收、再经生物转化、最后产生药理效应的真实过程。本项目... 详细信息

[目的]血清药理学技术是一种新兴的药理学实验方法,其在体外细胞学水平上进行中药药理作用机制的分析,既可防止中药制剂本身的理化性质对试验的干扰,又能反映中药在胃肠道消化吸收、再经生物转化、最后产生药理效应的真实过程。本项目引入血清药理学理念,在国内外首次进行玉屏风多糖(Yupingfeng polysaccharides,YPF-P)含药血清的体外抗病毒研究,以新城疫病毒(Newcastli disease virus,NDV)感染鸡胚和鸡胚成纤维细胞,探索YPF-P含药血清的抗病毒机制。[方法]采用水提醇沉法提取YPF-P,经大孔树脂纯化,真空冷冻干燥。1.含药血清的制备和细胞毒性检测:对SPF兔采用最佳剂量YPF-P灌服给药,于5d采集全血,制备含药血清;培养原代SPF鸡成纤维细胞,分别加入不同浓度的YPF-P和YPF-P含药血清,进行细胞毒性实验,观察细胞病变,检测细胞活性。***-P和YPF-P含药血清抗NDV作用的检测:采用3种不同给药方式检测抗NDV作用,分别观察YPF-P和YPF-P含药血清对病毒的阻断、抑制和杀灭作用;培养原代SPF鸡成纤维细胞,于接种NDV病毒前、后和同时,分别进行细胞毒性实验,观察细胞病变,MTT法检测细胞活性。[结果]YPF-P多糖提纯率为88.9%;NDV鸡胚半数致死浓度为1:107;与正常对照组相比,不同浓度的YPF-P(0.625、1.25、2.5、5、10mg/ml)和YPF-P含药血清(1,3,5,7d)的鸡胚成纤维细胞活性均显著增强(P<0.05或0.01),细胞生长良好;鸡胚成纤维细胞培养12h、24h后,YPF-P抑制病毒作用明显,与NDV对照组相比P<0.01;YPF-P含药血清组细胞活性较正常和阳性对照组为低(P<0.01),但三种给药方式相比,含药血清组细胞活性均显著高于NDV对照组(P<0.01)。[讨论]YPF-P和含药血清均对细胞无毒副作用,且可显著增强细胞活性;YPF-P能够阻断NDV的吸附和进入,对鸡胚成纤维细胞有较好的保护作用;YPF-P含药血清不但可阻断NDV,还可较好的抑制病毒,干扰NDV的合成和释放,其体外抗NDV效应高于YPF-P。

关键词： NDV 含药血清玉屏风多糖鸡胚成纤维细胞

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PhoP/Q二元调控系统的原核表达及对APEC致病性的影响

PhoP/Q二元调控系统的原核表达及对APEC致病性的影响

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：祁克宗涂健王曼安徽农业大学

禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)能够引起禽类高死亡率,给养禽业的发展造成重大危害。存在于APEC中的Pho P/Q二元调控系统在该菌毒力基因表达、参与上皮细胞侵袭和抵御抗菌肽(Antimicrobial Peptides,AMPs)... 详细信息

禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)能够引起禽类高死亡率,给养禽业的发展造成重大危害。存在于APEC中的Pho P/Q二元调控系统在该菌毒力基因表达、参与上皮细胞侵袭和抵御抗菌肽(Antimicrobial Peptides,AMPs)抗感染等环节中可能发挥关键的调控作用,本论文即证明上述观点,具体研究内容如下:(1)构建表达禽致病性大肠杆菌Pho P/Q蛋白的工程菌根据NCBI中报道的APEC基因pho P/Q编码区序列,利用Premier 5.0分别设计pho P和phoQ引物,把扩增得到的基因片段克隆到PMD19-T-Vector simple载体上,经酶切和测序验证后将PMD19-T-phoP/Q和p ET32a进行双酶切后连接并转化致大肠杆菌BL21(DE3)。(2)禽致病性大肠杆菌Pho P/Q蛋白的表达、纯化及鉴定将测序正确的*** BL21(DE3)/p ET32a-pho P/Q接种于LB液体培养基,经IPTG诱导表达出His-Pho P/Q重组蛋白。选择30℃经0.5 mmol/L IPTG诱导过夜后离心取菌体沉淀,冰浴超声破碎取上清过Ni-NTA亲和层析柱纯化Pho P蛋白,将Pho P重组蛋白进行SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS质谱分析。经37℃0.5 mmol/L IPTG诱导过夜后取LB上清进行纯化并验证得到Pho Q蛋白的胞外功能区,为后续实验做准备。(3)凝胶迁移实验(EMSA)筛选Pho P蛋白调控的宿主菌DNA选择文献报导的大肠杆菌致病相关基因,在Genebank上查找基因序列。利用凝胶迁移实验(EMSA)验证Pho P蛋白能够结合的基因启动子,最终筛选出Pho P调控的宿主菌外膜蛋白、内毒素等相关靶基因分别为iss血清毒力基因、mgt A镁离子转运相关基因、chu A外膜血红蛋白受体基因、usp A应激反应蛋白、slyB外膜脂蛋白基因、hlyF溶血基因。以上结果表明,Pho P/Q二元调控系统对***的毒力有着关键的调控作用。本研究为进一步探究Pho P/Q二元调控系统对***的调控作用提供了理论参考。

关键词：禽致病性大肠杆菌 PhoP/Q蛋白宿主菌DNA 凝胶迁移致病性

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BVDV纳米抗体的筛选、表达及抗病毒效果的研究

BVDV纳米抗体的筛选、表达及抗病毒效果的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：张国奇黄美玲吴鹏盛金良陈创夫石河子大学

研究目的:为获得高表达且特异性强的纳米抗体,我们利用噬菌体展示技术,构建抗BVDV纳米抗体基因文库,并从中筛选出特异结合BVDV的纳米抗体进而对其进行表达和抗病毒能力的功能验证,为防治BVDV奠定基础。材料与方法:(1)BVDV纳米抗体基因... 详细信息

研究目的:为获得高表达且特异性强的纳米抗体,我们利用噬菌体展示技术,构建抗BVDV纳米抗体基因文库,并从中筛选出特异结合BVDV的纳米抗体进而对其进行表达和抗病毒能力的功能验证,为防治BVDV奠定基础。材料与方法:(1)BVDV纳米抗体基因文库的库容量和多样性鉴定。本实验对已构建的文库库容量进行鉴定,采用菌液PCR对抗体文库的重组率进行检测、多样性分析。(2)BVDV纳米抗体文库的筛选和克隆鉴定。利用M13K07辅助噬菌体对基因文库拯救得到噬菌体展示文库,测定其滴度。以BVDV全病毒作为目标抗原,将其结合于固相上,加入噬菌体展示文库,经三轮"吸附-洗脱-扩增"亲和筛选后,随机挑取单克隆进行ELISA检测。(3)BVDV纳米抗体的原核表达和功能验证。根据测序的VHH-A6基因序列,设计引物,采用PCR扩增技术克隆VHH-A6基因,构建p ET-28a(+)-VHH-A6原核表达载体,经SDS-PAGE检测目的蛋白,Ni柱纯化高纯度的目的蛋白,在细胞水平验证VHH-A6纳米抗体对BVDV复制的阻断影响。结果:(1)基因文库库容达到1.22×106、重组率约83.3%、氨基酸序列同源性为63.51%,说明文库在保存过程中其库容量没有受到环境的影响,多样性丰富。(2)拯救的噬菌体展示文库滴度约1.2×1013 cfu/m L,三轮筛选使噬菌体文库中的特异性单克隆得到有效的富集,ELISA检测得到1株阳性克隆,命名为VHH-A6。(3)成功获得VHH-A6基因,构建了原核表达载体,得到高纯度的目的蛋白。利用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)测定MDBK细胞内的病毒拷贝数,结果发现100μg/m L的VHH-A6纳米抗体对BVDV的复制有一定阻断效果。讨论:本研究通过对BVDV纳米抗体文库进行三轮亲和筛选,从中筛选获得与BVDV特异性结合的纳米抗体VHH-A6片段,对其进行原核表达并纯化,细胞水平验证VHH-A6对BVDV的复制有一定的阻断效果,为进一步探讨纳米抗体干扰病毒复制机理奠定基础。

关键词：基因文库功能验证特异性细胞水平 VHH 纳米抗体抗病毒效果

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一例猪瘟病毒的分离与鉴定

一例猪瘟病毒的分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：银梅孔令芸唐海蓉李鹏王选年河南科技学院动物科学学院新乡学院生命科学与技术系生物技术研究中心

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病。猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV株)免疫猪群在血清学上无法与自然感染猪群进行区分。文献报道CSFV的E0、E2和NS5B基因分群结果是一致的,初步认为3个基因在系统发生分析中... 详细信息

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病。猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV株)免疫猪群在血清学上无法与自然感染猪群进行区分。文献报道CSFV的E0、E2和NS5B基因分群结果是一致的,初步认为3个基因在系统发生分析中具有高度的一致性。而Wu H X等对C-株全基因组测序后发现CSFV C-株在基因组的3’-UTR区域较石门株多了1个富含T的短片段差异序列,提出这个分子标记是CSFV强毒适应兔体致弱而产生的遗传标记,利用这一特点可以区分猪瘟强毒与疫苗毒。2013年11月新乡地区一猪场发生疑似猪瘟病,采集疑似猪瘟病猪淋巴组织,用PK-15细胞分离培养病毒,将分离的病毒液接种至长成70%的单层PK-15细胞,培养48h后取出,免疫组织化学染色,观察。根据Gen Bank收录的CSFV C株基因序列设计了扩增基因的特异性引物,C-株疫苗株和石门株扩增片段大小分别为279bp和266bp。引物序列为:上游引物TGGTGTTAAGGAGGCTGAGAG;下游引物CCTTAGTCCAACTGTGGACGT。提取病毒总RNA,并扩增CSFV NS5B,将PCR产物进行凝胶电泳进行鉴定。将PCR产物进行序列测定,并用DNAstar软件将分离株核苷酸序列与经典强毒株shimen、Alfort、Brescia和弱毒疫苗株HCLV、KC和India 6株参考株全基因序列进行比较分析。构建CSFV毒株间遗传关系的系统进化树并分析。结果表明接种分离病毒样品的细胞有明显的棕黄色着染现象,而正常对照细胞无染色现象;从病毒液中提取的RNA经反转录及PCR扩增后出现了预期大小的目的片段,证实采集的病料中含有猪瘟病毒。测序结果,NS5B片段的测出序列与shimen株的同源性为99.6%,与Alfort株的同源性为97.3%,与Brescia株的同源性为97.3%,与HCLV株的同源性为97.8%,与KC株的同源性为95.1%,与India株的同源性为96.9%。说明该猪瘟病毒与shimen株同源性最高,且无明显差异。最终证实该分离毒株是shimen株。本研究方法具有检出率高、精确等优点,对于CSFV新毒株的发现以及猪瘟的分子流行病学的研究具有重要意义。

关键词：猪瘟病毒分离与鉴定

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非编码小RNA(RyhB)调控禽致病性大肠杆菌毒力的分析

非编码小RNA(RyhB)调控禽致病性大肠杆菌毒力的分析

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：涂健祁克宗尹磊安徽农业大学

禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的一种人畜共患传染病,给养禽业的发展带来了严重的危害,并可威胁公共卫生安全,因其致病机理复杂、血清型多、分布广泛,对其有效防控难度较大。细菌非编... 详细信息

禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的一种人畜共患传染病,给养禽业的发展带来了严重的危害,并可威胁公共卫生安全,因其致病机理复杂、血清型多、分布广泛,对其有效防控难度较大。细菌非编码小RNA(small non-coding regulatory RNA,s RNA)作为细菌基因组中非编码蛋白质的基因片段,其在转录后却可调节细菌多个基因的表达,影响多种细菌毒力。目前s RNA与APEC毒力相关的靶m RNA以及对APEC毒力的影响尚未见报道,本实验选择APEC非编码小RNA(Ryh B)为研究对象开展下列研究:实验一、APEC的Ryh B缺失株及回复株的构建本实验应用Red同源重组技术,运用overlap的方法,扩增出Ryh B同源重组片段。将所得片段电转入含PKD46的出发株,将PCP20质粒电转入阳性菌株经PCR验证,同步将Ryh B基因扩增片段和p STV28双酶切后连接并转化至DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆。将回复质粒p STV28-Ryh B电导入△Ryh B,经CM抗性筛选获得回复株并经PCR验证。实验二、APEC的Ryh B缺失株及回复株生物学特性的评价本实验分别从生长曲线、运动性培养基、活性氧的抑制和禽β-防御素6的抗性实验来研究APEC Ryh B缺失后的生物学特性差异。结果显示,APEC的Ryh B缺失以及回复株对其生长性能和对活性氧的耐压性没有显著影响;但△Ryh B能显著降低AE17的运动性能和对禽β-防御素6的抗性,△Ryh B-comp得运动性能和抗性有所回复。实验三、APEC的Ryh B缺失株及回复株对毒力与致病性的分析RT-PCR检测毒力基因的转录水平、DF-1细胞的黏附力、LD50来探索APEC Ryh B的缺失对其毒力的影响。Real-time PCR显示,△Ryh B的bcf A、fyu A、tsh、luxS、fim C、omp A毒力基因的转录水平均极显著下降(P<0.01);△Ryh B的iss、ibe A毒力基因表达水平上调。DF-1细胞黏附和LD50的结果显示,△Ryh B黏附细胞能力和毒力较AE17均显著降低,△Ryh B-comp较△Ryh B黏附能力和毒力显著上升。根据以上结果推测Ryh B对APEC的毒力具有重要的调节作用,为进一步研究Ryh B对APEC的致病调控机制提供理论参考。

关键词：禽致病性大肠杆菌非编码小RNA(Ryh B) 基因敲除细菌毒力

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鮰爱德华氏菌外膜微孔蛋白N基因PCR快速检测方法的建立

鮰爱德华氏菌外膜微孔蛋白N基因PCR快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十次学术研讨会

作者：潘延乐汪开毓阳磊吉莉莉耿毅陈德芳四川农业大学鱼病研究中心四川雅安 625014 四川农业大学动物疫病与人健康四川省重点实验室四川雅安 625014 宜宾市翠屏区水务局四川宜宾 644000 四川农业大学水产养殖系四川雅安 625014

本实验通过对GPY菌株的外膜ompN基因进行扩增后发现该基因的存在，且序列对比分析显示，该基因与已经报道的鮰爱德华氏菌(CP001600.2)的同源性达99％，利用Primer5.0软件设计了一对特异性引物，从患病斑点叉尾鮰体内分离得到的鮰爱德华... 详细信息

本实验通过对GPY菌株的外膜ompN基因进行扩增后发现该基因的存在，且序列对比分析显示，该基因与已经报道的鮰爱德华氏菌(CP001600.2)的同源性达99％，利用Primer5.0软件设计了一对特异性引物，从患病斑点叉尾鮰体内分离得到的鮰爱德华氏菌为阳性株，成功扩增出了一个长度381bp左右的基因片段。在所选15种常见鱼类病原菌中只有鮰爱德华氏菌扩增出了381bp的基因片段，揭示该方法在15种菌中具有较高特异性，可用于鮰爱德华氏菌的鉴定。建立的PCR诊断方法对鮰爱德华氏菌DNA的最低检出量为9.35×10~3ng/μL，灵敏度较高。同时用此方法对人工感染的病料组织总DNA、菌液基因组DNA、菌落及菌液进行检测，结果均为阳性，与细菌16SrRNA分离鉴定的结果一致。证实本试验建立的PCR快速检测方法不仅特异性高，敏感性好，缩短了检测时间，简化了操作步骤，而且成本低，同时对采样和病料的保存也降低了要求。应用该PCR方法进行临床检测时，可以根据实际情况选择不同的检测材料，并根据病情的实际情况进行合理选材，相互验证试验结果的准确性。为进一步验证所建立的方法的准确性，本研究还对临床分离到的7株细菌进行了PCR、16S rRNA基因测序2种方法的比较。结果显示该PCR方法诊断结果与基于细菌16SrRNA基因序列进行的分类结果一致。表明所建立的PCR方法可以用于鮰爱德华氏菌的鉴定和分子流行病学调查，丰富了鮰爱德华氏菌的检测手段，为***的快速鉴定提供了新的方法，为后续研究奠定了理论基础。

关键词：兽医学鮰爱德华氏菌感染外膜微孔蛋白N基因聚合酶链式反应疾病诊断

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核酸恒温扩增技术检测结核分枝杆菌的比较研究

核酸恒温扩增技术检测结核分枝杆菌的比较研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：王慧党杨敏曹旭东陈创夫石河子大学

结核病是由结核杆菌引起的一种人畜共患传染病,结核杆菌是人和动物结核病的主要病原。人类的结核病可以通过呼吸或飞沫传给人或其他动物,动物结核病除了通过呼吸或飞沫外,还可以通过一些动物产品如肉、奶、蛋等畜产品进行传播。目前,最... 详细信息

结核病是由结核杆菌引起的一种人畜共患传染病,结核杆菌是人和动物结核病的主要病原。人类的结核病可以通过呼吸或飞沫传给人或其他动物,动物结核病除了通过呼吸或飞沫外,还可以通过一些动物产品如肉、奶、蛋等畜产品进行传播。目前,最为常见的动物结核就是牛结核病,它不仅给畜牧业带来严重的影响,并且给人类的健康安全也造成了很大的威胁。近年来,人结核病的发病率明显上升,特别是儿童肠结核的发病率明显增加。因此,建立快速、准确、灵敏、价格低廉的结核病实验室诊断方法对结核病控制有着极为重要的意义。目的:建立一种快速、准确、价格低廉易于临床推广的,并可以运用于畜产品中结核杆菌检测的方法。方法:通过优化环介导恒温扩增检测技术与RNA恒温扩增技术的反应条件与体系,建立起两种可以用于牛乳中结核分枝杆菌检测的核酸扩增方法。本实验通过对牛奶中结核杆菌的DNA和RNA的提取方法以及对每种方法的反应体系、反应温度、反应时间进行优化,并对牛乳中结核杆菌检测的灵敏度、特异性、重复性进行检测,确定这两种方法对牛乳中结核杆菌的最低检测浓度(灵敏度)。同时还将环介导扩增技术与RNA恒温扩增技术同结核罗氏培养技术、抗酸染色镜检、PCR技术进行比较,评价与分析各种检测方法对牛乳中结核杆菌的检测结果,以确定最佳检测方法,为临床应用提供参考依据。结果:环介导恒温扩增技术和RNA恒温扩增技术的灵敏度、特异性、重复性都比较高,对牛乳中结核杆菌的最低检测浓度分别为3×101 CFU/m L和3×100 CFU/m L。RNA恒温扩增实时检测技术的灵敏度要明显高于环介导恒温扩增技术,并且是它的10倍。牛乳中结核杆菌的DNA与RNA的提取方法分别为改良后的CTAB/NACL法与改良后的手工提取RNA法。结核培养技术、抗酸镜检、PCR技术对牛乳中结核杆菌的检测的最低浓度分别为3×105 CFU/m L、3×108 CFU/m L、3×104 CFU/m L。结论:建立的环介导恒温检测技术与RNA恒温扩增技术可用于牛乳中结核杆菌的检测,这两种方法操作简单,对实验仪器要求不高,易于在产品检验与检疫中应用。与结核培养技术、抗酸镜检、PCR技术相比,对牛乳中的结核杆菌的检测浓度更低,灵敏度更高,RNA恒温扩增技术的灵敏度要比环介导恒温检测技术高10倍。

关键词：环介导恒温扩增技术结核杆菌 RNA DNA 提取方法结核分枝杆菌结核病 CFU 两种方法核酸恒温扩增比较研究

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绵羊Toll样受体7基因多态性

绵羊Toll样受体7基因多态性

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：梁田杨霞杨素芳张勋吴鹏肖媛媛陈新凯宋佳伟盛金良石河子大学动物科技学院

研究目的:Toll样受体7是TLRs家族的重要成员之一,能通过识别单链RNA激活天然免疫系统,同时通过诱导浆细胞树突状细胞(p DC)分泌Ι型干扰素(IFN-α)来调控获得性免疫反应。一些关于TLR7的研究认为在免疫反应中TLR7能够识别单链RNA病毒,... 详细信息

研究目的:Toll样受体7是TLRs家族的重要成员之一,能通过识别单链RNA激活天然免疫系统,同时通过诱导浆细胞树突状细胞(p DC)分泌Ι型干扰素(IFN-α)来调控获得性免疫反应。一些关于TLR7的研究认为在免疫反应中TLR7能够识别单链RNA病毒,包括水泡口腔咽喉病毒和流感病毒[1]。有研究显示,TLR7单核苷酸多态性与丙型肝炎病毒感染引起的炎症反应密切相关。研究显示,TLR7的遗传变异影响丙型肝炎病毒感染后的免疫反应[2]。本研究探讨绵羊TLR7胞外结构域的区域的遗传变异,这些研究结果可以用来进一步研究遗传易感性羊感染与TLR7基因变异的关系。材料方法:新疆维吾尔自治区昌吉市羊场随机采集200份萨福克羊血液样本和玛纳斯市羊场随机采集400份萨福克羊血液样本,提取其DNA,根据文章报道的12对引物[3],采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法检测萨福克羊Toll样受体7基因外显子核酸序列的单核苷酸多态性。结果表明12对引物扩增产物中,第2、5、6、7对引物具有多态性。其中第2对和第7对引物存在错义突变,第5,6对引物扩增产物存在同义突变。经SSCP分析,第2对引物扩增产物有三种带型。有三个基因型,分别是AA,AB,BB型和第7对引物有两种基因型,分别是AA型,GG型。经序列比对分析存在A343G、A350G、A1244G的错义突变,和G864A和T1185C的同义突变。其中343位核苷酸的突变导致了赖氨酸突变为谷氨酸。350位核苷酸的突变导致天冬氨酸突变为丝氨酸。115位氨基酸的替换导致氨基酸从带正电荷变为带负电荷,415位氨基酸替换使它带正电荷。这3个错义突变都位于TLR7胞外区的富含亮氨酸重复区。讨论:在本篇文章中,我们发现TLR7胞外区是保守的,只有5个点突变。发现的115和415位的氨基酸突变都是在绵羊TLR7的LRR区外的基序上,也导致了氨基酸极性和带电荷量的改变,这种替换可能会影响TLR7的结构或功能,从而改变对疾病的易感性。

关键词： Toll样受体7 多态性胞外区突变

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PCV2 Cap蛋白激活NF-κB、PI3K/Akt和MAPKs信号途径调控巨噬细胞IL-10生成

PCV2 Cap蛋白激活NF-κB、PI3K/Akt和MAPKs信号途径调控巨噬细胞I...

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：杜谦黄勇童德文西北农林科技大学动物医学院

【目的】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,其广泛流行给世界养猪业带来了巨大的损失。PCV2感染能导致病猪脾脏、淋巴结、肺脏及血液中IL-10表达上调。此外,PCV2感染体外培养的外周血淋巴细胞和树突状细... 详细信息

【目的】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,其广泛流行给世界养猪业带来了巨大的损失。PCV2感染能导致病猪脾脏、淋巴结、肺脏及血液中IL-10表达上调。此外,PCV2感染体外培养的外周血淋巴细胞和树突状细胞等也可导致IL-10生成。但PCV2途径调控细胞IL-10表达的分子机制目前仍不清楚。【材料方法】本研究以PCV2感染体外培养的猪肺泡巨噬细胞,ELISA、real time-PCR和启动子活性检测等检测IL-10表达的动力学变化;Western blotting检测巨噬细胞中IL-10表达调控相关信号传导途径中关键蛋白的表达情况;Ch IP检测不同核转录因子与IL-10启动子的结合情况;分别以PCV2主要组分蛋白作用猪肺泡巨噬细胞,检测PCV2调控IL-10表达的关键组分以及相关信号途径。【结果】ELISA结果显示PCV2感染猪肺泡巨噬细胞显著上调IL-10表达,且IL-10启动子活性增强。动力学研究表明,PCV2感染细胞后24h内,细胞培养上清中IL-10持续表达,IL-10 m RNA于感染后30 min至3h,以及感染后12 h两次上调。Western blotting结果显示,PCV2感染后IκB磷酸化显著增加,且细胞核内NF-κB p50亚基表达量显著上调;同时巨噬细胞内与IL-10表达相关的信号分子PI3K/Akt、p38 MAPK和ERK等均于不同时间点显著磷酸化。Ch IP试验检测各活化信号途径中核转录因子与IL-10启动子的结合,结果表明p50、AP1、CREB、Sp1等均与IL-10启动子结合活性增加。分别以PCV2 Rep、Cap和ORF3作用细胞,ELISA、western blotting及启动子活性检测显示Rep和Cap能上调IL-10表达,而在PCV2感染猪肺泡巨噬细胞中只能检测到Cap的表达。同时,western blotting检测表明,PCV2 Cap能激活PI3K/Akt、p38 MAPK和ERK等信号途径。【结论】上述结果表明,PCV2感染猪肺泡巨噬细胞能激活NF-κB、PI3K/Akt、p38 MAPK和ERK信号途径,并通过其相关的核转录因子显著上调IL-10表达,且PCV2主要通过Cap发挥上调IL-10表达的作用。

关键词：猪肺泡巨噬细胞核转录因子 ELISA 启动子活性 PCV2 Cap IL-10 MAPKs 信号途径 PI3K/Akt

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