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211 篇 会议

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学科分类号

208 篇 农学
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4 篇 工学
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3 篇 理学
- 3 篇 生物学
2 篇 医学
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主题

10 篇 细胞凋亡
8 篇 布鲁氏菌
7 篇 病理学诊断
6 篇 分离鉴定
6 篇 caspase-3
5 篇 雏鸡
5 篇 小鼠巨噬细胞
5 篇 pcr
5 篇 鼠伤寒沙门菌
4 篇 t-sod
4 篇 病理学观察
4 篇 病理学
4 篇 分离株
4 篇 囊膜蛋白
4 篇 dna
4 篇 elisa
4 篇 prrsv
4 篇 spf
4 篇 肝脏细胞
4 篇 大肠杆菌

机构

25 篇 石河子大学
24 篇 中国农业大学
16 篇 东北农业大学
11 篇 四川农业大学
10 篇 河南科技大学
9 篇 河南省动物疫病与...
9 篇 甘肃农业大学
9 篇 天津农学院
7 篇 西北农林科技大学
7 篇 山东农业大学
7 篇 山西农业大学
6 篇 内蒙古农业大学
6 篇 农业部动物临床诊...
5 篇 南京农业大学
5 篇 河南科技学院
5 篇 北京农业职业学院
4 篇 宁夏大学
4 篇 华中农业大学
3 篇 河北工程大学
3 篇 青岛农业大学

作者

22 篇 陈创夫
18 篇 龙塔
18 篇 程相朝
17 篇 李静
14 篇 张辉
13 篇 赵德明
13 篇 杨利峰
12 篇 廖成水
12 篇 李广兴
12 篇 周向梅
8 篇 郁川
8 篇 黄小丹
7 篇 刘志军
7 篇 童德文
7 篇 佘锐萍
7 篇 盛金良
6 篇 田文静
6 篇 杨贵君
6 篇 郑明学
6 篇 刘淑英

语言

204 篇 中文
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永生化猪胎盘滋养层细胞系的细胞鉴定

永生化猪胎盘滋养层细胞系的细胞鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：张洪玲黄勇赵晓民童德文西北农林科技大学动物医学院

【目的】滋养层细胞是构成胎盘屏障的重要组成部分,也是某些病原微生物的主要靶细胞。但是,原代滋养层细胞的增殖能力随着传代次数的增加而逐渐降低,限制了某些持续性研究的开展。本研究将携带有人端粒酶逆转录酶(human telomerase reve... 详细信息

【目的】滋养层细胞是构成胎盘屏障的重要组成部分,也是某些病原微生物的主要靶细胞。但是,原代滋养层细胞的增殖能力随着传代次数的增加而逐渐降低,限制了某些持续性研究的开展。本研究将携带有人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)基因的p CI-neo-h TERT质粒导入到原代猪胎盘滋养层细胞内(Porcine placental trophoblast cells,PTCs),建立永生化的猪胎盘滋养层细胞(h TERT-PTCs),为研究猪繁殖障碍相关疾病提供细胞模型。【方法】利用胶原酶消化法、密度梯度离心法、反复贴壁法和消化排除法分离得到猪胎盘滋养层细胞后,分别通过免疫细胞化学技术、Western blot和RT-PCR对h TERT基因转染前后的猪胎盘滋养层细胞的细胞特性进行鉴定,放射免疫技术检测细胞激素分泌功能,软琼脂克隆形成试验和裸鼠致瘤试验检测永生化的猪胎盘滋养层细胞是否具有肿瘤转化特性。【结果】原代PTCs表达胎盘滋养层细胞特异性标志分子-细胞角蛋白7(cytokeratin7,CK-7),细胞贴壁后呈梭形或不规则多边形,具有接触抑制的生长特点,体外培养至第10代以后,细胞生长速度逐渐减慢,并出现以空泡化为主要特征的衰老迹象。将h TERT基因转染到原代细胞内,经G418筛选后,转染h TERT基因的猪胎盘滋养层细胞具有良好的增殖活性,生长速度显著快于原代猪胎盘滋养层细胞,可以连续传50代以上。RT-PCR和TRAP-ELISA检测结果显示,h TERT基因在转染后猪胎盘滋养层细胞内能稳定表达,并且保持着相对较高的端粒酶活性。免疫荧光染色、Western blot和RT-PCR结果显示,原代和转染后第50代猪胎盘滋养层细胞均表达CK-7和上皮细胞特异性黏附分子E-钙粘素,不表达波形蛋白和非经典MHC-Ⅰ分子。放射免疫检测结果显示,转染后的猪胎盘滋养层细胞具有分泌绒毛膜促性腺激素β亚基(CG-β)和胎盘催乳素(PL)的功能,并且与原代细胞相比差异不显著(P>0.05)。软琼脂克隆形成试验和裸鼠致瘤性试验结果表明,转染后的猪胎盘滋养层细胞不具有肿瘤转化特征。【结论】研究结果表明,通过转染外源性的h TERT基因可以使猪胎盘滋养细胞获得永生化,永生化的猪胎盘滋养细胞能够保留与原代滋养层细胞基本一致的关键生物学特性和功能,并且没有获得肿瘤转化特性,符合细胞建系要求,可以作为研究母猪繁殖障碍性疾病致病机制的细胞模型。

关键词：猪胎盘滋养层细胞人端粒酶逆转录酶永生化

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E3泛素连接酶SOCS-1对布鲁氏菌胞内生存以及布鲁氏菌所引起的细胞凋亡的影响

E3泛素连接酶SOCS-1对布鲁氏菌胞内生存以及布鲁氏菌所引起的细胞...

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：车召堂易继海王震李天森王远志张辉陈创夫石河子大学

研究目的:布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的全球性人畜共患传染病,每年感染者超过50万,在发展中国家尤为显著。布鲁氏菌是兼性胞内寄生革兰氏阴性菌,其侵袭力强、感染途径广,人感染后易造成波浪热、关节炎、心内膜炎,目前尚无法... 详细信息

研究目的:布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的全球性人畜共患传染病,每年感染者超过50万,在发展中国家尤为显著。布鲁氏菌是兼性胞内寄生革兰氏阴性菌,其侵袭力强、感染途径广,人感染后易造成波浪热、关节炎、心内膜炎,目前尚无法根治;家畜感染后易造成母畜流产和公畜的睾丸炎,给畜牧业生产造成巨大的经济损失。布鲁氏菌具有独特的生物学活性,并且和宿主的免疫系统间存在复杂的相互作用,因此,对布鲁氏菌的胞内生存以及与宿主之间的分子互作机制的研究是有重要意义的。目前,人们对布鲁氏菌的感染致病机制并没有足够的认识。因此进一步明确布鲁氏菌感染后对宿主免疫系统的影响及其机制,将为我们寻找新型的布鲁氏菌控制策略提供新的方向和奠定理论基础。本实验以布鲁氏菌和小鼠巨噬细胞E3泛素连接酶SOCS-1基因为研究对象,构建干扰和过表达SOCS-1基因的小鼠巨噬细胞转染模型。以羊种布鲁氏菌16M侵染小鼠巨噬细胞,探究其对布鲁氏菌胞内生存和布鲁氏菌诱导的巨噬细胞凋亡的影响。材料方法:(1)羊种布鲁氏菌16M侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,实时荧光定量PCR检测在侵染发生0h、2h、4h、8h、12h和24h时SOCS-1基因相对表达量的变化。(2)在小鼠巨噬细胞RAW264.7中,构建两个基因的干扰模型PLL3.7-SOCS-1和过表达模型Plex-SOCS-1。羊种布鲁氏菌16M侵染干扰和过表达SOCS-1基因的小鼠巨噬细胞,分别进行CFU计数,细胞凋亡率流式细胞仪分析,以及实时荧光定量PCR检测凋亡相关因子Bax和Bcl-2、肿瘤坏死因子TNF-α的相对表达量变化。(3)构建小鼠巨噬细胞RAW264.7的SOCS-1两种E3泛素连接酶基因的干扰模型(PLL3.7-S1)和过表达模型(Plex-SOCS-1),羊种布鲁氏菌16M侵染巨噬细胞,在侵染发生的不同时间对JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT2、STAT3六个基因的转录水平进行实时荧光定量PCR检测,观察其表达量变化。结果:在布鲁氏菌侵染过程中,小鼠基因SOCS-1对布鲁氏菌的胞内生存有一定的抑制作用;且SOCS-1诱导了细胞凋亡;在布鲁氏菌侵染过程中,SOCS-1基因对调控JAK/STAT信号通路有负向调控作用。

关键词：布鲁氏菌小鼠巨噬细胞侵染过程 SOCS-1 胞内生存泛素连接酶细胞凋亡

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布鲁氏菌侵染巨噬细胞诱导自噬与MHCII关系的研究

布鲁氏菌侵染巨噬细胞诱导自噬与MHCII关系的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：袁莎江雅丽王震郭飞陈创夫石河子大学

研究目的:研究布鲁氏菌侵染巨噬细胞后引起自噬对MHCII分子的影响以及可能的影响因素。材料方法:(1)布鲁氏菌16M(16M)分别侵染经IFN-γ处理的正常巨噬细胞和稳定过表达Atg5、Atg7的巨噬细胞后,q RT-PCR检测胞内MHCII m RNA水平、激光共... 详细信息

研究目的:研究布鲁氏菌侵染巨噬细胞后引起自噬对MHCII分子的影响以及可能的影响因素。材料方法:(1)布鲁氏菌16M(16M)分别侵染经IFN-γ处理的正常巨噬细胞和稳定过表达Atg5、Atg7的巨噬细胞后,q RT-PCR检测胞内MHCII m RNA水平、激光共聚焦检测胞内自噬小体和溶酶体的融合率及用流式细胞仪检测细胞表面MHCII分子和OMP31平均荧光强度,研究布鲁氏菌诱导自噬与MHCII的关系。(2)16M侵染巨噬细胞后,ELISA方法检测细胞上清IL-6含量;16M分别侵染经IFN-γ、IL-6及两者共同处理的GFP-LC3标记的巨噬细胞,激光共聚焦观察GFP-LC3的阳性点数;IFN-γ、IL-6及两者共同处理作用于巨噬细胞,q RT-PCR检测自噬相关蛋白Atg5、Atg7的m RNA水平,研究布鲁氏菌诱自噬的可能影响因素。结果:(1)与未经IFN-γ处理组相比,16M侵染IFN-γ处理的巨噬细胞,MHCII分子m RNA水平极显著下降(p<0.01);侵染稳定表达Atg5、Atg7细胞后,细胞内MHCII类分子m RNA水平差异不显著(p>0.05),但自噬小体和溶酶体的融合率升高,细胞表面MHCII分子表达量显著升高(p<0.01)且对OMP31递呈能力显著升高(p<0.01)。(2)16M侵染巨噬细胞,IL-6细胞因子表达量相比对照组显著升高(p<0.01);侵染经IFN-γ处理的GFP-LC3标记的巨噬细胞,激光共聚焦检测GFP-LC3阳性点数最多,但侵染经IFN-γ和IL-6共同处理时,GFP-LC3阳性点数减少;IFN-γ、IL-6作用巨噬细胞,IFN-γ上调了Atg7,但对Atg5没影响,IL-6下调了Atg7和Atg5,IL-6与IFN-γ共同作用时,IL-6抑制IFN-γ诱导的Atg7和Atg5的表达。讨论:一些病毒和细菌在经过自噬-溶酶体途径被呈递到MHCⅡ分子上,自噬对抗原递呈的重要作用表现在增强MHC II分子的负载。自噬参与MHCII类抗原呈递的过程为:自噬体与吞噬体融合传递底物至溶酶体,提供MHCII类分子负载。我们的研究发现布鲁氏菌16M诱导的自噬在阻滞自噬-溶酶体的降解过程中,阻碍了MHC II的递呈过程,为布鲁氏菌感染宿主细胞后产生免疫抑制作用提供有利条件;感染细菌的巨噬细胞分泌的细胞因子IL-6,能够选择性的抑制巨噬细胞对IFN-γ的应。同时研究发现布鲁氏菌16M促进巨噬细胞分泌IL-6抑制IFN-γ诱导的典型自噬,推测布鲁氏菌可能通过IL-6干扰IFN-γ诱导的典型自噬从而诱发非典型自噬。

关键词：布鲁氏菌 IFN 激光共聚焦巨噬细胞 MHCII

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E3泛素连接酶Nrdp1对布鲁氏菌胞内生存以及布鲁氏菌所引起的细胞凋亡的影响

E3泛素连接酶Nrdp1对布鲁氏菌胞内生存以及布鲁氏菌所引起的细胞...

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：车召堂李爽王震李天森张辉陈创夫石河子大学

研究目的:以布鲁氏菌宿主细胞小鼠巨噬细胞E3泛素连接酶Nrdp1研究对象,构建干扰和过表达Nrdp1基因的小鼠巨噬细胞转染模型;羊种布鲁氏菌16M侵染小鼠巨噬细胞,探究其对布鲁氏菌胞内生存和布鲁氏菌诱导的巨噬细胞凋亡的影响。材料方法:在... 详细信息

研究目的:以布鲁氏菌宿主细胞小鼠巨噬细胞E3泛素连接酶Nrdp1研究对象,构建干扰和过表达Nrdp1基因的小鼠巨噬细胞转染模型;羊种布鲁氏菌16M侵染小鼠巨噬细胞,探究其对布鲁氏菌胞内生存和布鲁氏菌诱导的巨噬细胞凋亡的影响。材料方法:在小鼠巨噬细胞RAW264.7中,构建干扰模型PLL3.7-Nrdp1和过表达模型Plex-Nrdp1。用羊种布鲁氏菌16M侵染干扰和过表达Nrdp1基因的小鼠巨噬细胞,进行CFU计数,细胞凋亡率流式细胞仪分析,以及实时荧光定量PCR检测凋亡相关因子Bax和Bcl-2、肿瘤坏死因子TNF-α的相对表达量变化。构建小鼠巨噬细胞RAW264.7的Nrdp1干扰模型(PLL3.7-N1)和过表达模型(Plex-Nrdp1),羊种布鲁氏菌16M侵染巨噬细胞,在侵染发生的不同时间对JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT2、STAT3六个基因的转录水平进行实时荧光定量PCR检测,观察其表达量变化。结果:布鲁氏菌进入细胞之后,构建的Nrdp1干扰模型PLL3.7-N1干扰效果为66%,过表达模型Plex-Nrdp1使得基因表达量升高了228%。CFU实验显示,Plex-Nrdp1组log CFU值显著低于对照组。Plex-Nrdp1组Bax和Bcl-2表达量显著升高,Bax/Bcl-2比值差异显著升高;PLL3.7-N1组Bax表达量显著降低,Bcl-2表达量差异不显著,Bax/Bcl-2比值差异显著降低。Plex-Nrdp1与PLL3.7-N1两组的TNF-α表达量与对照组相比差异不显著。细胞凋亡率流式细胞仪检测结果显示,Plex-Nrdp1组细胞凋亡率与对照组相比显著升高,PLL3.7-N1组差异不显著;随着的侵染时间的变化,每组细胞凋亡率都是升高的。Plex-Nrdp1组细胞的JAK1、JAK2、STAT1、STAT2、STAT3表达量与对照组相比显著降低,JAK3表达量差异不显著;PLL3.7-N1组细胞JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT2、STAT3六个基因的表达量与对照组相比均差异不显著。小结与讨论:JAK/STAT通路参与细胞凋亡,凋亡相关基因Bcl-2和Bax既可以作为该信号通路的下游作用分子受其调节。我们研究发现,在布鲁氏菌侵染过程中,小鼠基因Nrdp1对布鲁氏菌的胞内生存有一定的抑制作用并且诱导了细胞凋亡。Nrdp1基因对调控JAK/STAT信号通路有负向调控作用。

关键词：布鲁氏菌小鼠巨噬细胞 PLL 胞内生存 Nrdp1 泛素连接酶细胞凋亡

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调节性T细胞在脓毒症后期免疫抑制形成中的调控作用

调节性T细胞在脓毒症后期免疫抑制形成中的调控作用

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：霍睿超黄勇童德文西北农林科技大学动物医学院

【目的】脓毒症(Sepsis)是由严重感染或创伤诱发机体炎症调控机制失控所导致的临床综合征,是重症感染患者和动物死亡的主要原因之一,而脓毒症后期免疫抑制相关的免疫病理学改变则被认为是导致疾病慢性化和存活动物生产性能下降的主要原... 详细信息

【目的】脓毒症(Sepsis)是由严重感染或创伤诱发机体炎症调控机制失控所导致的临床综合征,是重症感染患者和动物死亡的主要原因之一,而脓毒症后期免疫抑制相关的免疫病理学改变则被认为是导致疾病慢性化和存活动物生产性能下降的主要原因。本研究拟探讨调节性T细胞在脓毒症后期免疫抑制形成中的调控作用,为进一步认识脓毒症的发病机制奠定理论基础。【方法】本研究通过注射内毒素建立脓毒症免疫抑制小鼠模型,检测此模型小鼠在细菌内毒素脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)注射后不同时间机体的免疫状态,确定LPS注射后引起严重免疫抑制的时间,在此基础上研究脓毒症后期小鼠体内调节性T细胞(Tregs)在免疫抑制中形成的作用和调控Tregs水平对脓毒症小鼠盲肠结扎穿刺(Cecal ligation-perforation,CLP)诱导的慢性腹膜炎死亡率的影响。【结果】5 mg/kg LPS注射可诱导典型的LPS脓毒症小鼠模型,在LPS注射后24h,小鼠免疫状态表现为典型的免疫抑制或免疫麻痹。利用CD25抗体注射去除LPS诱导的脓毒症小鼠体内的Tregs细胞,检测Tregs细胞去除对脓毒症后期免疫抑制形成的影响。结果显示,与同型对照组LPS脓毒症小鼠相比,Tregs去除的LPS脓毒症小鼠,脾脏中的CD4+T细胞、CD8+T细胞以及NK细胞比例显著增加;CD69阳性的CD4与CD8 T细胞和CD69阳性的NK细胞比例显著增加;与同型对照组小鼠相比较,Tregs去除的小鼠在LPS作用24 h后,取脾脏淋巴细胞体外给予IL-12刺激,IFN-γ阳性T细胞和NK细胞的比例显著增加。以上结果说明,Tregs的去除可以明显逆转LPS诱导的CD4+T细胞、CD8+T细胞以及NK细胞比例下降,并且提高LPS脓毒症小鼠后期T细胞和NK细胞的活性和反应性。Tregs去除的脓毒症小鼠经CLP二次打击后,腹腔、血液和肺中的细菌数目明显减少。在CLP 14天后,同型对照抗体处理的脓毒症小鼠存活率约为40%,而Tregs去除抗体处理的脓毒症小鼠存活率为70%以上,提高了约30%。以上结果表明,Tregs细胞的去除增加了脓毒症小鼠对后续慢性感染的抵抗力从而提高了LPS脓毒症小鼠在二次慢性感染中的存活率。【结论】本研究建立了LPS诱导的脓毒症小鼠模型,下调体内Tregs的数目能够在一定程度上抑制或者阻止脓毒症后期免疫抑制表型的形成,提高脓毒症后期小鼠的免疫反应性和抗感染能力,继而提高二次慢性感染中小鼠的存活率,本研究工作为进一步认识Tregs在重症感染性脓毒症形成中的调控作用和机制提供了理论支持,为探索以通过调节Tregs来改善机体免疫状态为导向的免疫调控治疗方法提供了理论指导。

关键词：脓毒症调节性T细胞二次感染 T细胞自然杀伤细胞

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鸡柔嫩艾美耳球虫特异性抗体EtMIC4-N蛋白BAS-ELISA检测方法的建立

鸡柔嫩艾美耳球虫特异性抗体EtMIC4-N蛋白BAS-ELISA检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：刘新月王黎霞宋丽聪赵晨璐张建军安健北京农学院动物科学技术学院北京农业职业学院畜牧兽医系

鸡球虫病是由原生动物门艾美耳属的寄生虫感染鸡所引起的一种呈全球性分布的痢疾性疾病,可造成鸡只的生长发育受阻、生产性能下降甚至死亡等危害,是影响禽类养殖经济效益最大的疾病之一,每年造成的损失超过30亿美元。为了检测柔嫩艾美... 详细信息

鸡球虫病是由原生动物门艾美耳属的寄生虫感染鸡所引起的一种呈全球性分布的痢疾性疾病,可造成鸡只的生长发育受阻、生产性能下降甚至死亡等危害,是影响禽类养殖经济效益最大的疾病之一,每年造成的损失超过30亿美元。为了检测柔嫩艾美耳球虫感染鸡血清中特异性抗体水平,原核表达纯化Et MIC4-N蛋白,采用免疫印迹法确定其反应原性,再以纯化后的蛋白为包被抗原,以生物素标记的羊抗鸡Ig G为二抗,以HRP结合链霉亲和素为酶标抗体,建立了检测柔嫩艾美耳球虫抗体的BAS-ELISA方法。经检测,Et MIC4-N蛋白最佳包被浓度为7μg/m L,最适封闭液为1%BSA,最佳血清稀释度为1:80,二抗稀释度为1:10万,酶标抗体稀释度为1:10万,最适显色时间为15 min,组内和组间变异系数均小于10%。通过动物感染试验验证,结果表明建立的BAS-ELISA可以用于检测柔嫩艾美耳球虫特异性抗体的检测,并且具有简便,快速,灵敏,成本低等特点。Et MIC4蛋白是多种目前已知柔嫩艾美耳球虫微线体蛋白中的一种主要在柔嫩艾美耳球虫运动和入侵方面起着重要作用。本试验使用的为低温诱导原核表达的带麦芽糖标签的Et MIC4-N蛋白,由于携带麦芽糖标签,使相关蛋白的纯化和鉴定都十分方便,而采取低温诱导40h来表达蛋白,不仅可以增加重组蛋白的可溶性,避免二硫键的错配,还可以提高蛋白活性,提高其与特异性抗体的结合能力。试验通过Western-blot和ELISA方法又证明了该蛋白有良好的反应原性,重复性试验又表明所建立BAS-ELISA有很好的重复性。试验采用BAS-ELISA来检测柔嫩艾美耳球虫感染鸡中特异性抗体,BAS系统即生物素-亲合素系统,相较于抗原抗体结合,生物素与亲和素结合稳定性更强,故而使得本方法的特异性和稳定性增加,并且由于一个亲和素能结合4个生物素,所以该系统可以形成多级放大反应,使反应更灵敏,从而可以检测更微量的抗体。本试验证明了Et MIC4-N蛋白与柔嫩艾美耳球虫阳性血清反应,而与大肠杆菌和堆型艾美耳球虫阳性血清及阴性血清无反应,说明该检测方法的特异性,如果与临床球虫活苗免疫相结合,将为未来球虫病的活苗预防提供技术支持。

关键词：鸡柔嫩艾美耳球虫特异性抗体 Et MIC4-N蛋白 BAS-ELISA

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绵羊肺腺瘤病毒转化和肿瘤发生中参与的信号通路研究

绵羊肺腺瘤病毒转化和肿瘤发生中参与的信号通路研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：孙晓林杜方原刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业部动物临床诊疗技术重点实验室

通过应用Western-blot和免疫组化方法来评估磷酸化蛋白的信号脉冲和评估转化抑制剂的效应可以研究绵羊肺腺瘤病毒JSRV转化和肿瘤发生中参与的信号通路。据报道JSRV Env在细胞转化中主要有三种信号转导通路。第一种是磷脂酰肌醇3-激酶/... 详细信息

通过应用Western-blot和免疫组化方法来评估磷酸化蛋白的信号脉冲和评估转化抑制剂的效应可以研究绵羊肺腺瘤病毒JSRV转化和肿瘤发生中参与的信号通路。据报道JSRV Env在细胞转化中主要有三种信号转导通路。第一种是磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路,在细胞增殖、生存、致瘤转化和肿瘤的形成中,该通路被广泛认为起到决定性作用。第二种信号通路叫做细胞分裂素蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路。第三种信号通路是通过受体Hyal2参与而使JSRV Env引起转化的。该机制是在人支气管上皮细胞系BEAS-2B上进行研究的。本研究采用免疫组化技术对自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织针对前两条通路蛋白激酶的磷酸化进行检测,从而在组织水平上验证通路激活对于肿瘤形成的影响。免疫组化结果显示MAPK通路中的MEK、ERK1/2均有不同程度的磷酸化表达,并且磷酸化表达信号强度大于MEK、ERK1/2激酶的表达。说明绵羊肺腺瘤病毒确实激活了MAPK通路并引起了通路激酶磷酸化的级联反应,进而对肿瘤的生成与发展产生一定影响。而对于MAPK通路非常重要的p38MAPK激酶的磷酸化并不明显,这与国外报道的其在绵羊肿瘤中磷酸化不明显是一致的,原因可能是在肿瘤的发展过程中,磷酸化逐渐消减。同样,PI3K/Akt通路中的Akt也表现为强烈的磷酸化激活。而被激活的Akt又进一步磷酸化其底物雷帕霉素m TOR,这是一种重要的细胞生长调节因子,该通路可引起m TOR哺乳动物靶位点的激活。而在本研究的实验结果中发现m TOR确实表现为强磷酸化。说明Akt和m TOR激酶的磷酸化对绵羊肺腺瘤病毒的致瘤过程也起到一定作用。由于绵羊肺腺瘤病毒侵袭的靶细胞为人肺泡Ⅱ型上皮细胞和支气管纤毛上皮细胞(Clara细胞),但由于这两种细胞不易分离并及其容易失去其分化表型,所以大多转化实验研究选择鼠成纤维细胞系和肺上皮细胞系作为替代的受体细胞系。但由于病毒在不同的细胞中信号通路的激活可能会有所不同,所以选择合适的受体细胞系则显得尤为重要。本研究选择了NIH3T3细胞和A549细胞系作为转化研究的受体细胞系来评估信号通路蛋白磷酸化水平以及转化抑制剂效应,从而对JSRV Env激活这些通路的机制进一步深入研究。

关键词：绵羊肺腺瘤病毒磷酸化信号通路肿瘤发生

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不同种属实验动物的消化系统比较

不同种属实验动物的消化系统比较

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：王蕾周天胜朱琳张秀娟杨秀英苏州药明康德新药开发股份有限公司

消化系统是由消化道和消化腺组成,是人体重要的部分,也是临床前实验中,尤其是口服药物重要的靶点。在非临床药物安全性评价中,消化系统的组织病理学评价占有很重要的地位。不同种属动物的消化系统不仅在解剖结构上,在组织学结构上既具... 详细信息

消化系统是由消化道和消化腺组成,是人体重要的部分,也是临床前实验中,尤其是口服药物重要的靶点。在非临床药物安全性评价中,消化系统的组织病理学评价占有很重要的地位。不同种属动物的消化系统不仅在解剖结构上,在组织学结构上既具有很多共同性,也有许多差异。熟悉和掌握不同种属动物消化系统,是正确评价药物毒性的前提。为了形象阐述和比较不同种属动物消化系统,本文选取了常用实验动物大鼠,犬和非人灵长类三种动物的食管,胃,大小肠,颌下腺,利用常规染色和特殊染色技术比较了其组织学结构特点及腺体内分泌物的特性,为今后毒理病理学研究提供相关的基础性资料。方法:大鼠,犬和非人灵长类动物各一只,麻醉安乐死后,收集食管,胃,小肠(十二指肠,空肠和回肠),大肠(结肠,盲肠和结肠),颌下腺固定于10%福尔马林中性固定液中。按照标准的取材方式进行组织学取材,石蜡包埋,脱水,每种动物每个组织切片四张,分别进行H&E染色,PAS,AB和PAS-AB染色,光镜下观察各种属间消化系统的异同。结果:PAS染色用于鉴别中性糖元/粘多糖(阳性为红色),AB染色用于鉴别酸性粘多糖(阳性为绿蓝色),PAS-AB染色时,中性粘液物为红色,酸性粘液物为蓝绿色,而复合物为紫红色。三种动物的消化管,除胃以外,在解剖结构上无明显差异,组织学上均由粘膜,粘膜下肌层,肌层和外膜组成,具体结果如下:1)食管:大鼠食管的粘膜层上皮具有明显的角化,非人灵长类的粘膜层在三种动物中较厚;粘膜下层,犬具有明显的食管腺,而其它两种动物没有;所取段组织肌层均为骨骼肌。2)胃:解剖结构上大鼠胃由前胃,限制脊和腺胃组成,而犬和非人灵长类由幽门,胃体,胃底和贲门组成;三种动物胃上皮PAS染色阳性,但是AB染色仅犬和非灵长类呈阳性;大鼠的胃底腺和幽门腺AB染色阳性,而犬和非人灵长类PAS染色阳性。3)小肠:三种动物间无明显差别,有杯状细胞的部位,PAS,AB和PAS-AB染色均阳性,但是分布零散,提示小肠内杯状细胞没有大肠丰富。每段小肠间有差异,每段绒毛形状不同,从十二指肠到回肠绒毛变短;十二指肠粘膜下层具有十二指肠腺,且PAS阳性,AB阴性;空肠和回肠含有嗜酸性颗粒的潘氏细胞,但是犬没有。隐窝内PAS和AB染色均阳性。4)大肠:三种动物间无明显差别,有杯状细胞的部位,PAS,AB和PAS-AB染色均阳性,但是从盲肠,结肠到直肠,杯状细胞增多,阳性分布面积增大;肌层逐渐增厚;直肠外有纤维膜。5)颌下腺:大鼠和非人灵长类颌下腺均为混合性腺体,但是大鼠腺体内分泌物为中性,而非人灵长类腺体内分泌物为酸性和中性两种,PAS和AB染色均为阳性,犬颌下腺为粘液性腺体,腺体内分泌物为酸性和中性两种,PAS和AB染色均为阳性。

关键词：消化系统消化管消化腺 PAS染色 AB和PAS-AB染色

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山西省某舍饲羊场环境微生物的检测与分析

山西省某舍饲羊场环境微生物的检测与分析

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：唐芳高静靳玉舒李龙娇徐琳凯张慧珠张文娟熊云梅古少鹏山西农业大学动物科技学院

养殖场对环境的污染主要是畜禽养殖废弃物处理利用不当对大气、水源和土壤造成的污染。2014年3月至5月,我们从山西省某舍饲肉羊场采集环境样品(羊舍内外的空气、水体和土壤粪便),通过平板计数法和多管发酵法检测了样品中菌落总数、葡萄... 详细信息

养殖场对环境的污染主要是畜禽养殖废弃物处理利用不当对大气、水源和土壤造成的污染。2014年3月至5月,我们从山西省某舍饲肉羊场采集环境样品(羊舍内外的空气、水体和土壤粪便),通过平板计数法和多管发酵法检测了样品中菌落总数、葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌和大肠菌群等常见微生物的污染状况,以期为舍饲羊场的环境控制和疾病预防提供依据。(1)对菌落总数的检测结果显示:1舍外空气中细菌含量极少;舍内气载需氧菌含量符合比较理想的畜舍卫生环境。2革兰氏阳性菌含量多于革兰氏阴性菌;球菌和杆菌多于螺旋菌。340.50%的气载需氧菌分布在Andersen-6级微生物空气采样器的1、2级(气溶胶微粒直径大于4.7μm),对人畜的危害不大;38%的需氧菌分布在空气采样器的3、4级(气溶胶微粒直径2.1～4.7μm),可以进入人和动物的气管、支气管和细支气管;23%的需氧菌分布在采样器的5、6级(气溶胶微粒直径0.65～2.1μm),能够进入人和动物的肺泡,对人畜的生命安全构成潜在威胁。4羊场自来水水质有轻微污染;羊舍水槽水中有一定程度的细菌污染。5羊场土壤属于中度污染,而羊粪便中的菌落总数少于土壤。(2)葡萄球菌的检测结果显示:1舍内空气中的葡萄球菌数量明显多于舍外空气;在舍内水槽水中检测到少量葡萄球菌,舍外水源中未检测到葡萄球菌;舍内羊粪便中的葡萄球菌含量明显多于舍外土壤。237%的葡萄球菌分布在空气采样器的1、2级;超过50%的葡萄球菌分布在采样器的3、4级;大约12%的葡萄球菌分布在采样器的5、6级。羊场空气中的葡萄球菌含量超出了反刍动物理想环境卫生的要求,结合土壤样品和水样的检测结果,提示存在羊粪便污染羊场环境的可能性。空气中的致病性葡萄球菌可能通过微生物气溶胶的形式污染饮水槽或进入羊呼吸道引起感染,甚至污染羊场周围环境,影响人类健康。建议该羊场加强羊舍内的空气消毒。(3)仅在羊场土壤中检测到少量链球菌,应为土壤自带的细菌;在其他环境样品中则未检测到链球菌。(4)在空气样品中未检测到大肠菌群。羊场自来水中的大肠菌群含量符合国家标准,属于清洁级;羊舍水槽水中受大肠菌群污染。羊场土壤中的大肠菌群含量属于中度污染;而羊粪中大肠菌群含量远低于羊场环境土壤,说明羊粪不是羊场土壤中大肠菌群的主要污染来源。(5)在所有环境样品中均未检测到沙门氏菌。本研究表明,该羊场的环境卫生状况基本良好,应得益于其比较科学的生产工艺(如高床养殖和自动清粪等),但仍需加强空气和饮用水的消毒工作。

关键词：舍饲羊场环境微生物微生物气溶胶菌落总数葡萄球菌大肠菌群

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miR-193a影响BVDV胞内复制的分子机制研究

miR-193a影响BVDV胞内复制的分子机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：史梦婷孟露萍付强史慧君张辉任艳乔军陈创夫石河子大学

牛病毒性腹泻-粘膜病(BVD-MD)是一种广泛传播的传染性疾病,主要感染对象是以牛为主的家畜。由于BVDV对于动物群体以及人类都有着重大的影响,因此被列入到了世界动物卫生组织(OIE)国际贸易重点疾病的名单中。关于BVDV引起的持续性感染发... 详细信息

牛病毒性腹泻-粘膜病(BVD-MD)是一种广泛传播的传染性疾病,主要感染对象是以牛为主的家畜。由于BVDV对于动物群体以及人类都有着重大的影响,因此被列入到了世界动物卫生组织(OIE)国际贸易重点疾病的名单中。关于BVDV引起的持续性感染发生的分子机制尚未研究清楚,最关键的是BVDV与宿主细胞之间相互作用关系尚未系统性阐述。大量研究表明,当病毒入侵机体细胞,机体细胞会主动诱发凋亡,或凋亡被诱导,进而导致被感染细胞的死亡以及病毒的清除。本实验室前期的实验中使用solexa高通量测序检测了BVDV感染靶细胞MDBK后的差异表达谱显示:mi R-193a的表达量显著性升高,且通过生物信息学软件分析mi R-193a靶向凋亡通路中的相关基因Bax。所以本研究以mi R-193a为研究对象,探究mi R-193a作用于靶蛋白,影响凋亡和BVDV复制的分子机制,进而为阐述BVDV的持续性感染和BVDV防控新方法奠定理论基础。我们依据本实验室前期高通量测序结果,选择了显著性上调表达的mi R-193a进行后续实验;扩增mi R-193a前体及其抑制剂pre-mi R-193a-IN,并克隆至慢病毒pll3.7载体中;包装慢病毒,感染MDBK细胞;利用q RT-PCR检测过表达和抑制mi R-193a的作用效果;转染mi R-193a的模拟物和抑制剂进入MDBK细胞,q RT-PCR检测BVDV的复制水平;使用生物信息软件预测mi R-193a的靶基因,构建pmir GLO-Bax 3’UTR重组荧光载体,与pll3.7-mi R-193载体共转染至MDBK细胞,使用荧光分光光度计验证mi R-193a直接靶向靶基因;过表达和抑制mi R-193a后q RT-PCR检测Bax的转录水平,Western blot检测Bax蛋白表达量并使用流式细胞仪检测凋亡率。结果我们发现过表达pre-mi R-193a慢病毒处理后能显著性上调mi R-193a的表达;相反,过表达pre-mi R-193a-IN慢病毒处理后能显著性下调mi R-193a的表达;q RT-PCR检测转染mi R-193a模拟物后的BVDV复制水平显著性降低,即过表达mi R-193a能抑制BVDV的复制;双荧光素酶报告系统验证mi R-193a能直接靶向于Bax蛋白,并抑制Bax的表达;流式细胞仪检测结果表明转染pll3.7-pre-mi R-193a的MDBK细胞凋亡率显著性上升;Western blotting检测显示Bax表达下调,即mi R-193a能靶向凋亡相关基因Bax,并促进细胞凋亡。通过本实验研究我们得出结论 mi R-193a可作用于促凋亡基因Bax诱发细胞凋亡,细胞在凋亡发生时形成凋亡小体,吞噬细胞将凋亡小体吞噬,进而发挥溶酶体的融合和降解作用,最终将BVDV病毒降解并清除,mi R-193a就抑制了BVDV的复制。本研究为BVDV的防控及治疗开拓了新思路。

关键词：持续性感染模拟物凋亡小体细胞凋亡分子机制 miR-193a

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