【目的】通过指数式扩增配体的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选出能够特异性识别磺胺二甲基嘧啶(sulfamethazine,SM)的核酸适配体,并建立基于该核酸适配体的化学发光分析方法...
详细信息
【目的】通过指数式扩增配体的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选出能够特异性识别磺胺二甲基嘧啶(sulfamethazine,SM)的核酸适配体,并建立基于该核酸适配体的化学发光分析方法用于牛奶中SM的检测。【方法】分别将SM和磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine,SMR)与磁珠(Magnetic beads,MBs)偶联,并以SMR-MBs作为反筛工具,建立了磁珠辅助-指数式扩增配体的系统进化(Mag-SELEX)筛选体系。采用平衡超滤法测定筛选得到的核酸适配体的解离常数(K),并通过竞争法测定亲和力较高的核酸适配体的特异性。将亲和力高、特异性好的核酸适配体用于检测方法的建立。以生物素化的核酸适配体为识别工具,使用混合酸酐法合成辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记半抗原SM-GA-HRP,利用链霉亲和素-生物素系统建立了用于检测SM的直接竞争化学发光分析方法。牛奶样本离心取上清稀释10倍。【结果】经过9轮筛选,得到能特异性识别SM的SA07核酸适配体(TTAGCTTATGCGTTGGCCGGGATAAGGATCCA GCCGTTGTAGATTTGCGTTCTAACTCTC),其解离常数为79 nM。在牛奶样品中方法的检测限为0.92ng/mL,线性范围为1.85-21.57 ng/mL,并且该方法对其他27种磺胺类药物的交叉反应率均较低,回收率为88.0-98.2%,变异系数为10.0-23.4%。【结论】本研究成功筛选得到了对SM具有高特异性与亲和力的核酸适配体,以其作为识别工具建立了牛奶中检测SM2的直接竞争化学发光检测方法,该方法特异性良好,回收率与变异系数均满足残留检测要求。
暂无评论