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6 篇 耐药基因
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5 篇 抗菌活性

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10 篇 中国农业科学院兰...
9 篇 吉林农业大学
9 篇 河南农业大学
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比较基因组学鉴定猪链球菌新型多重耐药基因嵌合元件

比较基因组学鉴定猪链球菌新型多重耐药基因嵌合元件

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：黄金虎梁园王丽平南京农业大学动物医学院

(目的)本研究旨在分析猪链球菌的基本遗传特征,鉴定介导多重耐药猪链球菌的可转移遗传元件,为研究其水平转移规律和进化路径提供参考。(方法)通过对临床分离的猪链球菌进行全基因组测序,采用比较基因组学方法,分析其基因组成,鉴定基因... 详细信息

(目的)本研究旨在分析猪链球菌的基本遗传特征,鉴定介导多重耐药猪链球菌的可转移遗传元件,为研究其水平转移规律和进化路径提供参考。(方法)通过对临床分离的猪链球菌进行全基因组测序,采用比较基因组学方法,分析其基因组成,鉴定基因组上的可转移遗传元件,分析其与耐药基因水平传播的关系。(结果)猪链球菌临床败血症病猪分离株YY060816基因组草图由73个contig组成,大小为2,088,157 bp,GC含量为41.1%。在2,097个预测的基因中,2,055个预测编码蛋白;其中1,500个(71.53%)可进行COG功能分类;在356个(17%)移动基因中,绝大部分来源于质粒(69.7%)和原噬菌体(27.5%),基因组合有一个由tet(O)-carrying ICESsu05ZYH33(89K)-like ICE和mef(A)-carryingΦm46.1-like prophage组成的嵌合基因组岛,该基因组岛整合入rum的3'端特异性整合位点CACATAGAAGTTGT;比较菌株SC070731和YY060816的127K表明,该基因组岛可能是由89K-like ICEs部分整合入原噬菌体部分的左侧或右侧的att位点嵌合合成,并可能保持其环化和切除能力;MIC结果显示127K基因组岛介导了包括四环素类和大环内酯类在内的多重耐药。(结论)猪链球菌YY060816基因组中17%的基因为移动基因,提示基因的转移在该类细菌中极为常见;127K是由tet(O)-carrying ICESsu05ZYH33(89K)-like ICE和mef(A)-carryingΦm46.l-like prophage嵌合而成的新型多药耐药嵌合元件,介导了猪链球菌对包括四环素类和大环内酯类在内的药物的多重耐药性。

关键词：猪链球菌多重耐药比较基因组学嵌合元件 ICEs 原噬菌体

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莱克多巴胺在猪可食性组织中残留的定量确证方法研究

莱克多巴胺在猪可食性组织中残留的定量确证方法研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陶燕飞朱方伟陈冬梅谢书宇王旭潘元虎刘振利袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

莱克多巴胺作为克仑特罗的主要替代品在很多国家使用情况不同,我国以及欧盟等都将其列为违禁药物,而美国以及加拿大等则允许其作为促生长剂使用。因为各国之间贸易往来而莱克多巴胺使用的差异存在贸易争端。目前,对于莱克多巴胺在猪中... 详细信息

莱克多巴胺作为克仑特罗的主要替代品在很多国家使用情况不同,我国以及欧盟等都将其列为违禁药物,而美国以及加拿大等则允许其作为促生长剂使用。因为各国之间贸易往来而莱克多巴胺使用的差异存在贸易争端。目前,对于莱克多巴胺在猪中残留消除规律的评估也被再次提及。本研究在建立β-受体兴奋剂类药物多残留定量确证方法的同时,对莱克多巴胺在猪可食性组织中的定量确证方法进行单独研究,目的是为研究莱克多巴胺在猪中的残留消除规律提供手段,并可作为检测工具监测其在畜牧生产中是否有滥用的现象,保障食品安全。各组织样品经过酶解、提取和净化,高效液相色谱-串联质谱ESI正离子和负离子模式同时进行检测,采用C色谱柱（150mm×2.1nm,粒径5μm,或相当者）,流动相为0.1%甲酸+5mmol/L乙酸铵溶液+甲醇（%）,喷雾电压为4000V,离子传输管温度为330℃,鞘气压力为40arb,辅助气压力为6arb。实验结果表明该方法测定可食性组织中的莱克多巴胺残留量准确可靠,各组织中,莱克多巴胺检测限为0.25μg/kg,定量限为0.5μg/kg,在猪各组织中分别添加莱克多巴胺0.5μg/kg、1μg/kg和2μg/kg获得平均回收率为96.4%8.9%,变异系数≤2.6%。该法分析时间短,有机试剂用量少,前处理简单,回收率高,可用于猪各组织中莱克多巴胺残留定量测定。

关键词：莱克多巴胺可食性组织残留检测固相萃取液相色谱串联质

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多重耐药基因cfr在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中耐药特性及遗传背景研究

多重耐药基因cfr在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中耐药特性及遗传背...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：李德喜樊润吴聪明张素霞中国农业大学动物医学院

【目的】了解多重耐药基因cfr在11株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药情况,并分析cfr基因的遗传背景及新的传播方式。【方法】根据CLSI标准,对cfr阳性菌株进行头孢西丁等15种药物敏感性检测,并根据药物敏感性结果进行耐药基因检测。同时... 详细信息

【目的】了解多重耐药基因cfr在11株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药情况,并分析cfr基因的遗传背景及新的传播方式。【方法】根据CLSI标准,对cfr阳性菌株进行头孢西丁等15种药物敏感性检测,并根据药物敏感性结果进行耐药基因检测。同时用S1-PFGE方法对cfr阳性菌株进行定位,用全基因组测序获得耐药基因cfr等的遗传背景。【结果】所有的11株菌株均含有cfr,fexA和mecA,并呈现对头孢西丁等,氟苯尼考,氯霉素,克林霉素,泰妙菌素等耐药。其它耐药基因tet（L）,vga（A）***,spw,lsa（E）,lnu（B）,erm（33）,和spc的检出率为不一,从9.09%（1/1 1）到72.72（8/11）,分别表现对四环素,沃尼妙林,大观霉素,林可霉素等耐药。S1-nuclease PFGE和Southern blot分析显示在10株菌株中,cfr基因定位于5-kb质粒上,1株定位于染色体上。遗传背景分析中发现,9株细菌获得的cfr遗传背景和质粒pSS-02一致,IS21-558参与cfr的传播。另外1株定位于质粒的菌株,遗传背景和质粒pSCFS7-like一致,exA上游含有bm基因,和完整的IS21-558相比,pSCFS7-1ike中IS21-558被截取大部分序列,定位于染色体的菌株,从获得的26737 bp的片段分析可知,cfr上下游分别为位于相同方向ISEnfa4和IS256,该片段ISEnfa4-cfr-IS256插入到位于J1区基因hp1上游。基因hp1是typeIVb SCCmec的组成部分。该SCCmec包括ccrA1ccrB1和classD型IS431-mecA-ΔmecR。【结论】首次在MRSA中发现cfr基因插入SCCmec上游J1区。由于cfr基因可以导致利奈唑胺的耐药,cfr基因和mecA基因相连,可能影响利奈唑胺等的治疗,需要加强监测监控。

关键词： Cfr 耐药基因基因定位遗传背景插入序列

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PmrA/PmrB介导大肠杆菌对多粘菌素E的耐药机制

PmrA/PmrB介导大肠杆菌对多粘菌素E的耐药机制

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：葛琳何方王丽平南京农业大学动物医学院

【目的】已报道PmrA/PmrB二元调控系统在革兰氏阴性菌对多粘菌素B耐药过程中起重要作用,基于此认识,本试验拟探讨PmrA/PmrB二元调控系统介导大肠杆菌对多粘菌素E耐药的可能性,从而更好地理解细菌耐药性的发生机制和传播规律。[方法]首... 详细信息

【目的】已报道PmrA/PmrB二元调控系统在革兰氏阴性菌对多粘菌素B耐药过程中起重要作用,基于此认识,本试验拟探讨PmrA/PmrB二元调控系统介导大肠杆菌对多粘菌素E耐药的可能性,从而更好地理解细菌耐药性的发生机制和传播规律。[方法]首先对临床分离的52株禽致病性大肠杆菌对多黏菌素E的敏感性进行检测,然后采用step-wise方法对多黏菌素敏感菌株进行耐药性诱导,通过PCR扩增PmrA/PmrB后采用Mega软件进行突变位点分析,最后采用real time RT-PCR技术检测其mRNA表达水平的变化,拟阐明PmrA/PmrB二元调控系统对禽致病性大肠杆菌耐药性产生的贡献。【结果】MIC结果显示,52株大肠杆菌中,88.46%(44/52)对多粘菌素E敏感,中介及耐药菌株均为5.8%(3/52)。突变位点分析表明诱导成功的5株耐药菌(9R、36R、53R、91R,107R)pmrA未发生突变,而PmrB均有不同程度的突变。其中9R,36R和53R各在G56A(R19Q),T500C(L167P),T265A(Y89N)发生点突变,91R,107R在239位和478位各插入长为30 bp和128 bp的序列,除36R外,其余耐药菌株突变位点均未见报道。RT-PCR结果显示发生点突变的三株耐药菌PmrA/PmrB表达量均极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)上升;发生插入突变的两株耐药菌PmrA/PmrB表达量虽有上升趋势,但变化不显著(P>0.05)。【结论】pmrA和pmrB在大肠杆菌对多粘菌素E的耐药中起重要作用,其中pmrB的点突变伴随pmrA/pmrB的高表达以及pmrB的插入突变是导致禽致病性大肠杆菌对多粘菌素E高度耐药的主要原因。

关键词：多粘菌素E 大肠杆菌 PmrA/PmrB 突变 real time RT-PCR

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槲皮素通过激活MAPK/Nrf2信号通路上调HO-1表达改善喹烯酮致L02细胞的氧化应激及遗传毒性

槲皮素通过激活MAPK/Nrf2信号通路上调HO-1表达改善喹烯酮致L02细...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：代重山李道稳汤树生周延赵科娜肖希龙中国农业大学动物医学院

【目的】本文旨在探究MAPK信号通路及Nrf2信号通路在喹烯酮细胞毒性中的作用及槲皮素的保护作用。【方法】以人正常肝细胞L02细胞为研究对象,在喹烯酮暴露L02细胞前预处理不同浓度槲皮素2 h,检测DNA损伤及氧化应激损伤情况,并进一步通... 详细信息

【目的】本文旨在探究MAPK信号通路及Nrf2信号通路在喹烯酮细胞毒性中的作用及槲皮素的保护作用。【方法】以人正常肝细胞L02细胞为研究对象,在喹烯酮暴露L02细胞前预处理不同浓度槲皮素2 h,检测DNA损伤及氧化应激损伤情况,并进一步通过使用MAPKs家族抑制剂SB203580(p38抑制剂)、PD98059(ERK抑制剂)、SP60025(JNK抑制剂)单独或联合槲皮素预处理,检测对喹烯酮诱导的L02细胞的凋亡的影响。【结果】结果证实,不同浓度(0,2,4,8,12μg/mL)喹烯酮处理24h后,线粒体功能失调(线粒体膜电位下降)、细胞凋亡呈剂量依赖性增加趋势,同时可导致磷酸化(p)-JNK,p-p38,p-ERK,Nrf2,HO-1表现出先增加后降低的动态变化趋势,但均显著高于对照组;预处理槲皮素(15、30μM)后,可明显改善喹烯酮(4、8、12μg/mL)诱导的细胞凋亡及线粒体膜电位的下降,并可明显降低喹烯酮诱导的氧化应激、DNA损伤及微核率,且较喹烯酮处理组相比,槲皮素预处理进一步可在不同程度上激活(p)-JNK,p-p38,p-ERK,nrf2,HO-1表达;预处理SB203580、PD98059、SP60025可在不同程度上加剧喹烯酮诱导的凋亡,同时明显抑制了槲皮素诱导的Nrf2、HO-1的激活,从而抑制了槲皮素的保护作用。【结论】MAPKs及Nrf2信号通路在喹烯酮诱导的氧化应激及DNA损伤过程中扮演者保护角色,槲皮素可通过激活MAPK/Nrf2信号通路上调HO-1表达改善喹烯酮致L02细胞的氧化应激及遗传毒性。

关键词：槲皮素喹烯酮氧化应激遗传毒性 MAPKs信号通路 Nrf2/HO-1信号通路

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牛奶中基于核酸适配体的磺胺二甲基嘧啶化学发光检测方法建立

牛奶中基于核酸适配体的磺胺二甲基嘧啶化学发光检测方法建立

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：刘梅轩倪姮佳温凯李成龙王战辉张素霞中国农业大学动物医学院

【目的】通过指数式扩增配体的系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）筛选出能够特异性识别磺胺二甲基嘧啶（sulfamethazine,SM）的核酸适配体,并建立基于该核酸适配体的化学发光分析方法... 详细信息

【目的】通过指数式扩增配体的系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）筛选出能够特异性识别磺胺二甲基嘧啶（sulfamethazine,SM）的核酸适配体,并建立基于该核酸适配体的化学发光分析方法用于牛奶中SM的检测。【方法】分别将SM和磺胺甲基嘧啶（sulfamerazine,SMR）与磁珠（Magnetic beads,MBs）偶联,并以SMR-MBs作为反筛工具,建立了磁珠辅助-指数式扩增配体的系统进化（Mag-SELEX）筛选体系。采用平衡超滤法测定筛选得到的核酸适配体的解离常数（K）,并通过竞争法测定亲和力较高的核酸适配体的特异性。将亲和力高、特异性好的核酸适配体用于检测方法的建立。以生物素化的核酸适配体为识别工具,使用混合酸酐法合成辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）标记半抗原SM-GA-HRP,利用链霉亲和素-生物素系统建立了用于检测SM的直接竞争化学发光分析方法。牛奶样本离心取上清稀释10倍。【结果】经过9轮筛选,得到能特异性识别SM的SA07核酸适配体（TTAGCTTATGCGTTGGCCGGGATAAGGATCCA GCCGTTGTAGATTTGCGTTCTAACTCTC）,其解离常数为79 nM。在牛奶样品中方法的检测限为0.92ng/mL,线性范围为1.85-21.57 ng/mL,并且该方法对其他27种磺胺类药物的交叉反应率均较低,回收率为88.0-98.2%,变异系数为10.0-23.4%。【结论】本研究成功筛选得到了对SM具有高特异性与亲和力的核酸适配体,以其作为识别工具建立了牛奶中检测SM2的直接竞争化学发光检测方法,该方法特异性良好,回收率与变异系数均满足残留检测要求。

关键词：核酸适配体磺胺二甲基嘧啶化学发光

来源：评论

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宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌的毒力基因检测及耐药性分析

宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌的毒力基因检测及耐药性分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：杨慧君李晓娜王艺晖王桂琴宁夏大学农学院

【目的】为了了解宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌毒力基因的分布情况以及耐药性情况。【方法】从宁夏不同地区规模化奶牛场采集临床型和隐性乳房炎乳样,用科码嘉金黄色葡萄球菌显色培养基进行初步的筛选,并结合16S rDNA、nuc基因的PCR测序... 详细信息

【目的】为了了解宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌毒力基因的分布情况以及耐药性情况。【方法】从宁夏不同地区规模化奶牛场采集临床型和隐性乳房炎乳样,用科码嘉金黄色葡萄球菌显色培养基进行初步的筛选,并结合16S rDNA、nuc基因的PCR测序结果鉴定金黄色葡萄球菌。采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,对分离鉴定出的金黄色葡萄球菌菌株进行了12种抗菌药物(红霉素、环丙沙星、林可霉素、万古霉素、多西环素、四环素、青霉素、替米考星、诺氟沙星、头孢唑林、氨苄西林、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧苄啶)的敏感性试验,测定其最小抑菌浓度(MIC);运用PCR.扩增技术对金黄色葡萄球菌的毒力基因(hla、hlb、Clfa)进行检测。【结果】从乳样中共分离鉴定出的154株金黄色葡萄球菌。药敏结果显示,154株金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类的抗生素氨苄西林和青霉素的耐药率都超过了80%;对磺胺类药物复方新诺明的耐药率为67%;对四环素类抗生素较敏感,多西环素的敏感率高达92%;对大环内酯类的红霉素和替米考星敏感率为68%和76%;氟喹诺酮类的敏感率在80%以上。毒力基因检测结果显示,154株金黄色葡萄球菌携带毒力基因hla、hlb和clfa的检出率分别为97.4%(150/154)、97.4%(150/154)、96.75%(149/154)。【结论】宁夏地区乳房炎乳样中分离出的金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类的抗生素和磺胺类药物的耐药率较高,而对四环素类和氟喹诺酮类药物则比较敏感,检出毒力基因hla、hlb、ClFa的频率很高。

关键词：金黄色葡萄球菌毒力基因耐药性

来源：评论

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以溶血素和凝固酶缺失的金葡菌为新的参考菌株研究Sortase A在通过血液感染金葡菌的小鼠模型中的作用

以溶血素和凝固酶缺失的金葡菌为新的参考菌株研究Sortase A在通...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王琳邓旭明王大成吉林大学人兽共患病研究所/吉林大学动物医学学院吉林大学动物科学学院

分选酶A(Sortase A,SrtA)是一种半胱氨酸转肽酶,能够将携带LPXTG基序分选信号的表面蛋白锚定到细胞壁被膜上,从而介导细菌粘附到宿主组织,侵入宿主细胞,以及逃避免疫,是金黄色葡萄球菌(金葡菌)的重要毒力因子。正因如此,SrtA成为治疗金... 详细信息

分选酶A(Sortase A,SrtA)是一种半胱氨酸转肽酶,能够将携带LPXTG基序分选信号的表面蛋白锚定到细胞壁被膜上,从而介导细菌粘附到宿主组织,侵入宿主细胞,以及逃避免疫,是金黄色葡萄球菌(金葡菌)的重要毒力因子。正因如此,SrtA成为治疗金葡菌感染的发展的一个重要靶标。在这项研究中,我们采用了新的参考菌株金黄色葡萄球菌Newman D2C来探讨SrtA在血液感染小鼠模型中的作用,这种菌株不能产生凝固酶和溶血素,因此我们可以排除这两种金葡菌中重要毒力因子的干扰。本实验中,我们通过基因重组的方法成功构建了金葡菌SrtA基因敲除菌株△SrtA,并且通过免疫荧光的方法,证明金葡菌△SrtA不能将表面蛋白A(SpA)锚定到细菌细胞壁肽聚糖上。另外通过纤连蛋白和纤维蛋白原黏附实验,证实△SrtA缺失减少了金葡菌对纤维蛋白原和纤连蛋白的黏附能力。为了考察SrtA对金葡菌致病力的影响,以及今后能够筛选出有效的SrtA抑制剂,我们构建了小鼠(BALB/c雌鼠,6-8周)通过血液感染金葡菌的模型。结果表明,在感染早期,SrtA缺失可以通过减少宿主的炎性细胞因子(IFN-γ,IL-6,TNFα,IL-1β,IL-6,IL-12p70 and IL-17A)释放从而减少小鼠心脏、肝脏和肾脏的载菌量。小鼠的非致死性感染的第六天后,通过肉眼和病理组织切片观察,只有肾脏形成了脓肿,而△SrtA没有出现肾脏脓肿的现象。致死性感染的结果显示,相对Newman D2C而言,SrtA缺失使老鼠的存活率显著增加(100%)。以上这些结果表明,在金葡菌通过血液感染小鼠的模型中,SrtA是小鼠死亡和肾脓肿形成的决定性因素。因此可以说,我们建立了一种方便有效的以SrtA为靶标的抑制剂筛选的体外及体内小鼠模型,为金葡菌感染治疗开拓新的途径。

关键词：金黄色葡萄球菌,Sortase A 小鼠血液感染肾脓肿

来源：评论

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携带blaCTX-M-65Incl1质粒pEC012全序列分析

携带blaCTX-M-65Incl1质粒pEC012全序列分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：潘玉善黄慧钟杏好苑丽胡功政河南农业大学牧医工程学院

【目的】获得多重耐药禽源大肠杆菌InCI1质粒pEC012的全序列,并分析携带bla,rmtB,fosA3等多重耐药区的结构特征,为阐明E coli多重耐药的分子机制提供理论依据。【方法】经药物敏感性试验、多位点序列分型、耐药基因检测等方法对1株鸡源... 详细信息

【目的】获得多重耐药禽源大肠杆菌InCI1质粒pEC012的全序列,并分析携带bla,rmtB,fosA3等多重耐药区的结构特征,为阐明E coli多重耐药的分子机制提供理论依据。【方法】经药物敏感性试验、多位点序列分型、耐药基因检测等方法对1株鸡源大肠埃希菌EC012进行研究,利用接合和电转试验、质粒复制子分型,质粒多位点序列等方法对其携带的pEC012质粒进行研究,同时利用Illumina方法对该质粒进行全序列测定。【结果】药敏试验结果显示这株鸡源大肠埃希菌呈现多重耐药的表型;耐药基因检测结果显示,此株菌携带有blacrx-M-65,rmtB,fosA3基因;多位点序列分型和遗传进化分型表明属于D-ST117;质粒分型试验表明携带抗性基因的质粒属于Inci1 ST71;全序列测定表明,pEC012质粒全长为139,622 bp,携带有bla,bla,rmtB,fosA3,floR,aac（3）-Ⅳ,oqxAB等多个耐药基因,由IS26构成的多个复合型转座子组成一个复杂的多重耐药区（MRR）,特别是IS26-fosA3-orfl-orf2-Δorf3-IS26、IS26-fip-ΔISEcp1-bla-IS903D-iroN-IS26、IS26-tnpR-bla-rmtB-IS26的重组方式,进一步解释了携带bla,rmtB,fosA3多重耐药区的重组机制。首次发现了一个新的插入序列元件ISEc57（https://***//）。【结论】在IncI1ST71型质粒中发现了一个复杂的多重耐药区,其携带有bla;rmtB;fosA3;floR,oqxAB等多个耐药基因,由IS26构成的复合型转座子在多重耐药区的形成中发挥了重要作用。

关键词：多重耐药 blacTx-M-65 rmtB fosA3 floR ISEc57

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新型接合型转座子Tn6247的鉴定及分析

新型接合型转座子Tn6247的鉴定及分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王晓明王亚宾胡功政李新生张素梅潘玉善商艳红杜向党河南农业大学牧医工程学院

近年来,由于抗生素的频繁使用,多药耐药肠球菌的出现逐渐增多,肠球菌现已发展成为院内感染的主要病原菌之一。其中,转座子在多药耐药肠球菌的形成中发挥着重要作用。转座子是一种可移动的遗传元件,可携带耐药基因甚至毒力基因的移动,从... 详细信息

近年来,由于抗生素的频繁使用,多药耐药肠球菌的出现逐渐增多,肠球菌现已发展成为院内感染的主要病原菌之一。其中,转座子在多药耐药肠球菌的形成中发挥着重要作用。转座子是一种可移动的遗传元件,可携带耐药基因甚至毒力基因的移动,从而造成病原菌的耐药性、致病性的水平转移和快速传播,加速了病原菌的适应性进化。因此,研究肠球菌转座子介导的耐药基因水平转移具有重要的临床意义。本研究在已分离鉴定的34株猪源肠球菌的基础上,进行肠球菌四环素耐药基因tet（M）的检测、质粒接合、PFGE、Southern杂交、全基因组测序等,来探讨四环素耐药基因tet（M）与转座子的关系。结果显示:四环素耐药基因tet（M）在猪源肠球菌中的检测率为21%（12/57）。接合试验表明,tet（M）基因可发生接合转移,其在屎、粪肠球菌中的接合效率分别为3.5×10、5.0×10。tet（M）-tndX扩增获得一个比预期大5.2Kb的片段,进一步的全基因组测序获得一个23.9kb的新型接合型转座子,命名为Tn6247。该转座子与Tn5397相比,在耐药区插入了一个5.2kb的片段,含有tetL-pre/mob-repU-IS1216E,但在orf14处缺少了intronⅡ片段。Tn6247完全插入在肠球菌的fic基因上,其靶序列是GAAGGAAATG。野生菌株、受体菌株及接合菌株的Sma1-PFGE及Southem杂交试验显示,Tn6247发生了水平转移。进一步的野生菌株S1-PFGE及Southern杂交试验显示,Tn6247位于一个约194kb的"巨型"质粒上。综上所述,本研究鉴定了一个新型接合转座子,Tn6247,位于质粒上且可随质粒进行转移。

关键词：肠球菌 tet(M) 接合型转座子质粒

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