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5 篇 最小抑菌浓度
5 篇 抗菌活性

机构

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14 篇 东北农业大学
14 篇 扬州大学
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10 篇 中国农业科学院兰...
9 篇 吉林农业大学
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6 篇 动物医学学院吉林...
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作者

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14 篇 汤树生
14 篇 李剑勇
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14 篇 肖希龙
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12 篇 刘雅红
12 篇 王战辉
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11 篇 秦哲
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抗球虫中药常山口服液的急性和亚急性毒理学试验研究

抗球虫中药常山口服液的急性和亚急性毒理学试验研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王玲郭志廷林春全张晓松杨珍梁剑平中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃农业大学动物医学院

【目的】针对抗球虫中药常山口服液的急性毒性和亚急性毒性进行试验研究,验证常山口服液临床用药的安全性,对该药的毒性做出正确评价,为今后系统的研究其药理作用以及临床安全用药提供实验依据。【方法】按照农业部《新兽药一般毒理试... 详细信息

【目的】针对抗球虫中药常山口服液的急性毒性和亚急性毒性进行试验研究,验证常山口服液临床用药的安全性,对该药的毒性做出正确评价,为今后系统的研究其药理作用以及临床安全用药提供实验依据。【方法】按照农业部《新兽药一般毒理试验技术要求》（2010版）中兽药急性毒性和亚急性毒性实验指导原则的要求,对常山口服液进行经口急性毒性实验及亚急性毒性试验。采用与临床应用相同的给药途径对小鼠进行灌胃给药,测定常山口服液对小鼠的急性毒性和最大耐受性,预试验初步确定用药剂量,正式试验取60只昆明系小白鼠,雌雄各半,灌胃给药后,连续观察7D,记录小白鼠的急性毒性反应过程,并运用改良寇氏法公式计算半数致死量(LD)及LD的95%可信限。在小白鼠急性毒性试验的基础上,进行大鼠亚急性毒性试验,通过随机分组,灌胃给药、观察对比,将100只大鼠随机分成4个给药组和1个空白对照组,给药组依据大鼠体重分别按照1.2 G/KG,0.6 G/KG,0.3 G/KG,0.15 G/KG的剂量连续给药30天,所有大鼠分为3次（10D、20D、30D）扑杀,观察各组大鼠的生长发育、血液学、血液生化学、脏器指数、组织病理学变化,确定常山口服液对大鼠的亚急性毒性反应。【结果】急性毒性试验结果表明,给药组部分小白鼠出现中毒反应并死亡,剖检主要脏器未见异常病理变化,经口灌胃LD为2.0961 G/kG体重,LD的95%可信限为1.7414～2.5429 G/KG体重。亚急性毒性试验结果表明,常山口服液低剂量组大鼠的临床症状、体重、采食量、重要脏器系数、血常规指标、血液生化指标等各项指标与对照组比较均无显著性差异（P>0.05）,对主要脏器、的病理组织学检查与对照组比较亦未见明显病理改变;特高剂量、高剂量和中剂量组对大鼠的上述部分指标有一定影响,需要进行进一步的研究;与对照组相比,常山口服液可显著降低特高剂量组、高剂量组和中剂量组的平均日采食量和日增重（P<0.01）,降低特高剂量组、高剂量组和中剂量组的饲料利用率。【结论】在本实验条件下,常山口服液对受试动物未见明显的急性毒性和长期毒性作用,表明该药具有良好的安全性,毒性总体上很低,在临床合理剂量及合理用药的条件下,用药安全性较高,适于开展系统开发利用,尤其适用于畜禽寄生虫病的治疗领域。

关键词：常山口服液急性毒性试验亚急性毒性试验抗球虫药

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复方氟苯尼考注射液在猪的残留消除试验

复方氟苯尼考注射液在猪的残留消除试验

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：吴天兴张明珠贺生中施景灏卜仕金扬州大学兽医学院江苏农牧科技职业学院中国农业科学院家禽研究所

【目的】通过对复方氟苯尼考注射液在猪体内残留消除研究,了解其活性成分氟苯尼考和氟尼辛在猪体内组织分布规律,为制定休药期提供依据。【方法】25头体重不低于50kg的健康商品猪,按推荐剂量(40mg/kgbw,以氟苯尼考计)一次性肌内注射于... 详细信息

【目的】通过对复方氟苯尼考注射液在猪体内残留消除研究,了解其活性成分氟苯尼考和氟尼辛在猪体内组织分布规律,为制定休药期提供依据。【方法】25头体重不低于50kg的健康商品猪,按推荐剂量(40mg/kgbw,以氟苯尼考计)一次性肌内注射于猪一侧颈部肌肉中,分别于停药后第1d、6d、11d、16d和21d时各随机宰杀5头猪,采集猪可食性组织样品供氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的检测。猪可食性组织中氟苯尼考和氟尼辛的标示残留物分别采用经验证的猪可食性组织中氟苯尼考和氟尼辛标示残留物残留量的高效液相色谱检测方法测定,将氟苯尼考和氟尼辛的标示残留物在猪各组织中残留量检测的实测数据采用WT1.4计算软件拟合或实测数据法估算休药期。【结果】残留检测结果表明,除注射部位肌肉外,停药后肾脏中氟苯尼考平均残留量最高,之后依次是肝脏、皮脂和肌肉组织;代谢物氟苯尼考胺消除迅速,其在猪肝脏中残留量最高,之后依次是肾脏、肌肉和皮脂。采用WT1.4软件估算休药期,得出猪各组织休药期为:肌肉5.95d,皮肤+脂肪7.21d,肝脏4.62d,肾脏10.02d。在停药后第1天,氟尼辛在肌肉、皮脂、肾脏、肝脏及注射部位的残留量最高,其在猪各组织内浓度的高低顺序为:注射部位肌肉>肾脏>皮脂>肝脏>肌肉。氟尼辛在肌肉中残留量最少,停药后1天非注射部位的氟尼辛残留量均低于EMEA或FDA规定的限量标准,停药后第11天注射部位的氟尼辛残留量均低于检测限;停药后第6天5头猪中有2头猪皮脂中氟尼辛残留量仍高于EMEA规定的限量标准,1头猪肝脏中氟尼辛残留量高于FDA规定的限量标准,但低于EMEA的限量标准。至停药后第11天所有猪可食性组织中氟尼辛残留量均低于检测限。结合EMEA和FDA对氟尼辛在猪相关可食性组织中残留限量的规定,根据采用实测数据猪按推荐给药方案肌内注射后另一活性氟尼辛休的药期暂定为11天。【结论】综合复方氟苯尼考注射液中有关活性组分在猪体内残留消除研究,建议复方氟苯尼考注射液按推荐给药方案肌内注射后,休药期暂定为11天。

关键词：猪氟苯尼考氟尼辛残留消除休药期

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黄芩苷对肠出血性大肠杆菌Ⅱ型志贺毒素的抑制作用和靶点确证

黄芩苷对肠出血性大肠杆菌Ⅱ型志贺毒素的抑制作用和靶点确证

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：董靖张勇张雨邓旭明吉林大学动物医学学院中国水产科学研究院长江水产研究所

致病性大肠杆菌是医学和兽医学临床感染中最常见的病原菌之一,其中肠出血性大肠杆菌O157:H7是典型代表菌株,常引起人和动物的感染与流行。自20世纪80年代发现该菌株以后,在日本等多个国家和地区都有不同规模的流行和爆发。据统计,全球... 详细信息

致病性大肠杆菌是医学和兽医学临床感染中最常见的病原菌之一,其中肠出血性大肠杆菌O157:H7是典型代表菌株,常引起人和动物的感染与流行。自20世纪80年代发现该菌株以后,在日本等多个国家和地区都有不同规模的流行和爆发。据统计,全球每年因感染产毒大肠杆菌至少可导致6.5亿人发病,并引起约80万名5岁以下儿童死亡。O157感染通常能够引起出血性肠炎、溶血性尿毒综合征和血小板减小性紫癜等疾病。由于其致病力强、感染剂量低、潜伏期长,使得对O157感染成为全球性的公共卫生问题,严重威胁人类的健康。尽管抗生素是治疗细菌性感染的主要途径,但使用抗生素治疗肠出血性大肠杆菌感染会加重罹患溶血性尿毒综合征的风险。因此,研发具有全新机制的抗耐药性大肠杆菌O157感染的药物十分迫切。志贺样毒素是肠出血性大肠杆菌O157:H7致病过程中最关键的毒力因子。志贺样毒素分为Ⅰ型志贺毒素和Ⅱ型志贺毒素两种。其中,Ⅱ型志贺毒素(Stx2)毒性较强,是出血性肠炎和溶血性尿毒综合征发生的基础。因此Stx2可以作为设计和筛选抗耐药性大肠杆菌感染药物的靶标。本研究以Stx2为靶标,通过细胞毒性试验、体外蛋白质翻译试验、动物模型治疗试验和点突变试验评价了黄芩苷对Stx2的抑制作用和作用靶点。结果发现,黄芩苷对Stx2引起的Hela细胞病变和体外蛋白质翻译抑制具有显著的恢复作用。黄芩苷治疗课题提高急性溶血性尿毒综合征模型小鼠的存活率和体重,降低血浆尿素氮、肌酐的含量从而改善小鼠肾功能,降低肾组织中IL-1β,IL-4,IL-6、TNF-α和IFN-γ的分泌量,减轻中毒引起的炎症反应。为了探索其作用机制,我们比对分析了与Stx2同一家族的蓖麻毒素和黄芩苷的复合物晶体结构,发现其潜在的作用位点为R179、Q180、S183、E184和V218,结合点突变试验和突变体蛋白体外蛋白质翻译试验发现R179、E184和V218三个位点为主要结合位点。综上所述,黄芩苷可以直接作用于Stx2而使其失去活性,并对Stx2建立的小鼠急性溶血性尿毒综合征模型有治疗作用,为进一步研究抗肠出血性大肠杆菌感染的药物奠定基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌 Ⅱ型志贺毒素黄芩苷

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沙门氏菌RND外排泵系统及其它外排泵系统间的相互影响机制

沙门氏菌RND外排泵系统及其它外排泵系统间的相互影响机制

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：杨磊任思琪张传珍蒋红霞华南农业大学兽医学院

[目的]在革兰氏阴性菌中,活化的外派泵系统如acrAB-tolC是引起细菌多重耐药性的重要机制之一。在沙门氏菌中共有五种RND系统:AcrAB、AcrD、AcrEF、MdtABC和MdsABC,另外还存在其它家族的外排泵系统,如MacAB、MdtK、EmrAB和MdfA。沙门氏... 详细信息

[目的]在革兰氏阴性菌中,活化的外派泵系统如acrAB-tolC是引起细菌多重耐药性的重要机制之一。在沙门氏菌中共有五种RND系统:AcrAB、AcrD、AcrEF、MdtABC和MdsABC,另外还存在其它家族的外排泵系统,如MacAB、MdtK、EmrAB和MdfA。沙门氏菌外排泵的调控比较复杂,其转录调控是多层次的。在大肠和沙门氏菌中,acrAB的调节机制研究得最详细。acrA和acrB基因位于同一个操纵子上并被共同调节。在局部水平,acrABB被阻遏因子抑制。在全局水平,acrAB-tolC的表达会受到AraC/XylS家族的转录调控因子MarA、SoxS、Rob和RamA的影响。AcrAB-TolC作为革兰氏阴性菌最重要的外排泵,除受上述调控因子的调控外,它与其它的RND外排泵及非RND外派泵或许在功能存在着某种紧密的联系。本文主要探讨沙门氏菌acrAB外排泵与其它RND外排泵及非RND外排泵间是否存在着相互影响的关系。[方法]对近十年来国内外报道的关于沙门氏菌外排泵AcrAB-TolC与其它外排泵系统间相互影响的文献进行归纳总结,论述外排泵系统在功能上的相互影响的机制。[结论](1)在大肠杆菌中,当敲除外排泵acrB或者失活acrAB时,细菌的外排作用受阻,一些细胞代谢产物会在菌体内蓄积,进而会促进一些全局性转录调控因子的表达,反馈性地促进acrAB系统的表达。因此,我们推测在沙门氏菌中,当外排泵acrAB-tolC失活时,同样存在着类似的acrAB对自身进行反馈性地调节的机制。(2)沙门氏菌中RND外排泵系统间存在着紧密的,相互调节的机制,一旦一种RND外排泵失活后,细菌其它的RND外排泵能感知这种变化,并使其进行补偿性表达增加,细菌在表型上表现为对某些抗菌药的敏感性增加,而对另一些抗菌药的敏感性降低。RND外派泵系统间的相互调节也是通过全局性调控因子进行调节。此外,缺失任何一种acr基因都会引起细菌致病力显著降低。(3)在已知的9种沙门氏菌药物外排泵系统中,缺失除acrAB外的任何一种外派泵系统都不会对细菌的耐药性产生显著的影响。但是,当连续缺失沙门氏菌中的9中外排泵后,沙门氏菌缺失菌对某些化合物的敏感性甚至要高于acrAB缺失株的敏感性。而且,缺失这9种外排泵后,沙门氏菌对小鼠的毒性消失。但是,在沙门氏菌中,RND、MFS、MATE和ABC家族外派泵系统间是否也存在相互的影响,缺失其中一种是否会改变其它外排泵的表达量还有待进一步研究。

关键词：沙门氏菌 RND外排泵系统基因敲除调节机制

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黄芩苷对蓖麻毒素活性的抑制作用和机制研究

黄芩苷对蓖麻毒素活性的抑制作用和机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：董靖张勇张雨邓旭明吉林大学动物医学学院中国水产科学研究院长江水产研究所

蓖麻毒素是从植物蓖麻种子中提取的最强的植物毒素之一,属于Ⅱ型核糖体失活蛋白家族,因其强毒性被美国疾病预防控制中心定义为Ⅱ类生物威胁毒素。真核动物细胞对蓖麻毒素敏感,在极低剂量下即可导致动物和人中毒甚至死亡。蓖麻毒素由AB... 详细信息

蓖麻毒素是从植物蓖麻种子中提取的最强的植物毒素之一,属于Ⅱ型核糖体失活蛋白家族,因其强毒性被美国疾病预防控制中心定义为Ⅱ类生物威胁毒素。真核动物细胞对蓖麻毒素敏感,在极低剂量下即可导致动物和人中毒甚至死亡。蓖麻毒素由AB两个亚基组成,其中A亚基具有N-糖苷酶活性,能从4324位腺嘌呤处切断真核细胞核糖体28S rRNA,导致蛋白质翻译停止而引起细胞死亡。蓖麻毒素提取工艺简单、毒性强等特性极易被用作生物恐怖武器,威胁公众的安全。因此亟待研究以抗蓖麻毒素为代表的抗Ⅱ型核糖体失活蛋白的小分子抑制剂和中和性抗体。尽管目前已研发出多种针对蓖麻毒素的中和性抗体,但由于其局限性严重限制了抗体在临床中的应用。因此,小分子抑制剂成为目前研发的热点。目前已报道的针对活性中心和毒素细胞内转运的小分子抑制剂在动物模型中仅具有预防作用,而其对于中毒后的治疗作用尚不明确。本研究以天然提取的蓖麻毒素为靶标,通过细胞毒性试验、体外蛋白质翻译试验、动物模型治疗试验、结构生物学试验评价受试化合物对蓖麻毒素活性的抑制作用和作用机制。结果发现,从中药黄芩中提取的黄酮类化合物黄芩苷对蓖麻毒素引起的Hela细胞损伤具有显著的保护作用,对蓖麻毒素引起的体外蛋白质翻译抑制具有显著的恢复作用。黄芩苷可以提高蓖麻毒素中毒小鼠的存活率和体重,提高中毒小鼠的血糖水平,降低肝组织中IL-1β,IL-6和TNF-α的分泌量,减轻中毒引起的炎症反应。为了进一步阐明黄芩苷抑制蓖麻毒素活性的作用机制,应用X射线衍射技术解析了分辨率2.2A蓖麻毒素A亚基和黄芩苷复合物晶体结构。通过结构分析发现黄芩苷能促进蓖麻毒素A亚基形成不规则多聚体,影响了活性中心的暴露而失去活性,并得到了其主要结合位点。进一步应用分析超速离心技术和体外蛋白质翻译试验研究了突变体蛋白与黄芩苷的作用,结果发现野生型蓖麻毒素A亚基加入黄芩苷后形成大量多聚体,而结合位点突变的蛋白形成多聚体的量显著下降。结合体外蛋白质翻译试验确证了结构分析所得到的结合位点。综上所述,黄芩苷可以直接作用于蓖麻毒素A亚基并诱导其形成无活性的多聚体从而抑制蓖麻毒素活性的发挥,黄芩苷对小鼠蓖麻毒素中毒具有显著的治疗作用,为进一步研究抗蓖麻毒素中毒药物提供依据。

关键词：蓖麻毒素黄芩苷多聚体中毒

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大蒜素对副猪嗜血杆菌的抑制作用及机理的研究

大蒜素对副猪嗜血杆菌的抑制作用及机理的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：林晶马宗兵杨德智汪燕秋马玉芳黄一帆俞道进福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室

【目的】***病(格拉泽氏病)的广泛流行,已给养殖业造成严重的经济损失。随着H parasuis对传统抗生素耐药性的增强,开发新型的治疗药物以及选择可持续性的防治策略已经显得尤为必要。本研究集中探讨大蒜素对***的抑菌效果以及抑菌的分子... 详细信息

【目的】***病(格拉泽氏病)的广泛流行,已给养殖业造成严重的经济损失。随着H parasuis对传统抗生素耐药性的增强,开发新型的治疗药物以及选择可持续性的防治策略已经显得尤为必要。本研究集中探讨大蒜素对***的抑菌效果以及抑菌的分子机理,评价大蒜素的毒力抑制作用。为兽医临床防治***提供理论基础。【方法】临床无菌采集病料进行***的分离鉴定和培养;采用试管结晶紫染色法和微孔板结晶紫法对***临床分离株的生物被膜形成能力进行定性和定量分析;筛选具有强生物被膜形成能力的强毒力菌株;参照CLSI所介绍的药敏方法检测大蒜素对H parasuis的最小抑菌浓度(MIC);通过生长曲线分析梯度浓度的大蒜素对H parasuis生长的影响;检测大蒜素对H parasuis的生物被膜形成的影响;通过荧光定量PCR分析大蒜素对H parasuis部分基因表达水平的影响。【结果】在华南和东南地区共分离得到H parasuis 32株,通过生物被膜形成能力分析,成功筛选到具有强生物被膜形成能力的V型强毒力菌株HPS-46。通过药物敏感性试验发现大蒜素对***最小抑菌浓度(MIC)范围在16-32μg/mL;其中大蒜素对HPS-46菌株的MIC为32μg/mL。通过大蒜素对***生长曲线影响的分析发现大蒜素对体外培养的HPS-46有明显的抑制作用,实验结果表明亚抑菌浓度的大蒜素可将HPS-46到达稳定期的时间推迟1倍的时间。进一步的研究发现8μg/mL和16μg/mL的大蒜素能够显著抑制HPS-46生物被膜的形成。荧光定量PCR分析发现,经过8μg/mL和16μg/mL的大蒜素处理的***,溶血毒素的主亚基hhdA的表达显著下降;黏附侵袭相关的基因ompP-5、ompP-2、pilA和侵袭性酶prtC的表达水平明显下降;由群体感应系统调控的潜在毒力因子mviN的表达下调;超氧化物歧化酶的基因sodC表达水平上升,而抗生素外排泵相关基因norM表达水平下降。这说明大蒜素对H parasuis有明显的抑制效果,并且可影响溶血毒素、黏附侵袭、氧化代谢以及抗生素外排泵等相关基因的表达。【结论】本次课题共分离到临床菌株32株,优化了H parasuis分离培养及鉴定的方法,大蒜素对Hparasuis具有强力抑菌作用,大蒜素对***的MIC为16-32μg/mL,亚抑菌浓度即可明显抑制***的生长。大蒜素对***生物被膜的形成具有显著的抑制作用。大蒜素具备抑制***毒力的潜质。大蒜素对毒素基因(hhdA)、黏附侵袭相关基因(ompP-5,ompP-2,prtC)、生长代谢相关基因(sodCmviN)的表达有抑制作用。大蒜素可以抑制抗生素外排泵norM基因的表达。

关键词：生物被膜最小抑菌浓度溶血毒素黏附侵袭抗生素外排泵副猪嗜血杆菌

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喹烯酮对肾上腺毒性的基因组研究

喹烯酮对肾上腺毒性的基因组研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王旭白毅杰程古月郝海红刘振利袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学动物医学院

喹烯酮是人工合成、含有喹噁啉-l,4-二氧化物基本结构的化学合成抗菌药物,在提高饲料转化率、促进动物生长方面具有相当好的活性。高剂量喹烯酮对肾上腺具有损伤作用。为阐述喹烯酮对肾上腺的毒性机制,以人肾上腺皮质癌细胞NCI-H295R细... 详细信息

喹烯酮是人工合成、含有喹噁啉-l,4-二氧化物基本结构的化学合成抗菌药物,在提高饲料转化率、促进动物生长方面具有相当好的活性。高剂量喹烯酮对肾上腺具有损伤作用。为阐述喹烯酮对肾上腺的毒性机制,以人肾上腺皮质癌细胞NCI-H295R细胞系为细胞模型进行基因组学研究。结果显示,10μM喹烯酮处理组与空白组相比有349个差异表达基因,其中上调基因有210个(名称和功能己知的基因有150个),下调基因有139个(己知基因有98个);20μM喹烯酮处理组与空白组相比有4583个差异表达基因,上调的有2835个(名称和功能已知的基因有1931个),下调的有1748个(已知基因有1095个)。将这些差异基因按生物学进程分为6类:与细胞内物质和能量合成代谢相关、与转运相关、与细胞应激相关、与信号转导相关、与细胞发育过程相关及与转录调控相关。分析相关基因功能,与无机离子、氨基酸、神经递质、糖类、嘌呤和脂肪酸等物质转运相关的基因的表达量发生改变,提示喹烯酮干扰了细胞内正常的生命活动。参与类固醇激素合成和代谢的基因表达量也发生了改变,特别是与胆固醇合成相关的一些基因的表达量均上调,而负责将胆固醇外排出细胞的脂质转运体也发生上调表达;同时,胆固醇合成原料乙酰辅酶A提供者-脂肪酸在一种高度上调表达的SREBF1的作用下合成甘油三酯的进程加剧,三者协同作用影响醛固酮合成原料-胆固醇的浓度;控制类固醇激素合成方向的基因CYP17A1表达量上调,导致醛固酮合成受阻;另外调控CYP11B2转录的一种重要转录因子NR4A2的表达量下调,抑制其转录;同时与氧化应激相关的一些基因表达量下调,提示QCT可能通过抑制Nrf2/Keap1/ARE通路的下游基因NQO1、HMOX1、G6PD和SRXN1等的表达,加剧药物造成的氧化应激现象,进而造成ROS的大量蓄积,引起肾上腺皮质细胞毒性。综上所述,本研究首次运用基因组技术发现ABCG1、SREBF1等与调控胆固醇浓度的相关基因及CYP1 7A1、NR4A2、G6PD等与醛固酮合成相关基因是喹烯酮下调醛固酮合成和分泌的重要分子靶点。

关键词：喹烯酮 H295R细胞毒性醛固酮基因组肾上腺

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猪源致病性大肠杆菌生物被膜建模、氟喹诺酮类药物和木糖醇对生物膜的体外作用研究

猪源致病性大肠杆菌生物被膜建模、氟喹诺酮类药物和木糖醇对生物...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：虞惠贞姜中其浙江大学动物科学学院

【目的】大肠杆菌可引起仔猪腹泻、增重减缓甚至生长抑制,常给养猪业常造成重大经济损失。当形成生物被膜时,生物被膜为细菌提供保护性环境,将提高其耐药性。本试验在构建仔猪大肠杆菌生物被膜模型基础上,开展浮游大肠杆菌与生物被膜菌... 详细信息

【目的】大肠杆菌可引起仔猪腹泻、增重减缓甚至生长抑制,常给养猪业常造成重大经济损失。当形成生物被膜时,生物被膜为细菌提供保护性环境,将提高其耐药性。本试验在构建仔猪大肠杆菌生物被膜模型基础上,开展浮游大肠杆菌与生物被膜菌的耐药对比并考察木糖醇对生物被膜的抗粘附作用及其与氟喹诺酮类药物联用时对生物膜的体外抑制作用,旨在为仔猪大肠杆菌耐药性研究及临床上更合理地治疗生物被膜大肠杆菌感染提供依据。【方法与结果】(1)采用卡尔加里生物被膜发生装置定量法和12孔细胞培养板内置载体片定性法,比较不同培养基、不同培养时间和不同浓度葡萄糖、不同材质(聚氯乙烯、硅胶破片和普通盖玻片)的载体片对大肠杆菌生物膜形成的影响,通过光学显微镜比较三种载体上生物膜形态,结果表明,在LB培养基,37℃,PVC材料作为载体片,培养6天后可得成熟的大肠杆菌生物被膜。(2)采用MBEC生物被膜发生装置,应用结晶紫染色法对120株临床分离的致仔猪腹泻的大肠杆菌生物被膜形成能力进行了筛选,发现猪源致病性大肠杆菌生物被膜形成率高达83.3%。(3)采用CLSI标准,用96孔板微量稀释法测定临床分离大肠杆菌生物被膜菌、浮游菌和脱膜菌对氟喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖苷类等19种抗菌药物的敏感性,结果显示,19种抗菌药物对已形成生物被膜的分离株的MBIC和MBEC均比相应的浮游菌的MIC以及MBC高2-32倍。(4)通过分离菌落形成单位计数法和激光扫描共聚焦显微镜的观察,结果表明,与阳性对照相比,经0.5%、2.5%、5%木糖醇处理后的菌落数均表现出显著差异性(P<0.05)。(5)通过0.5%、2.5%、5%的木糖醇处理,检测氟喹若酮类药物对大肠杆菌生物膜的MBIC和MBEC,结果提示:与无木糖醇处理组相比,经过0.5%、2.5%、5%木糖醇处理后,环丙沙星和恩诺沙星对大肠杆菌的MBIC以及MBEC均显著降低(P<0.05);不同浓度木糖醇对仔猪大肠杆菌成熟生物被膜的破坏试验中,与无木糖醇处理组相比,经过0.5%、2.5%、5%木糖醇处理后,环丙沙星和恩诺沙星的MBIC以及MBEC也显著下降(P<0.05)。结论猪源致病性大肠杆菌临床分离株形成生物被膜后耐药性显著增高,氟喹诺酮类药物单独使用或与木糖醇联合应用可干扰该菌生物被膜的形成和破坏已经形成的生物被膜,二者具有协同作用。

关键词：仔猪病原性大肠杆菌生物被膜耐药性抗菌药物木糖醇

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马波沙星在牛感染多杀性巴氏杆菌组织笼模型中的药动/药效学初步研究

马波沙星在牛感染多杀性巴氏杆菌组织笼模型中的药动/药效学初步...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：曾长福孙美珍卢燕曾庆龄刘伟曾振灵华南农业大学兽医学院/国家兽药残留基准实验室广东广州510642

本研究在皮下埋置组织笼模型的基础上,进行了马波沙星在犊黄牛的药物动力学及对多杀性巴氏杆菌药效学研究,从而优化给药方案,以期更好的指导马波沙星兽医临床上的应用.本文研究的主要内容及结果如下：选用5头健康犊黄牛,按2 mg/kg b.w... 详细信息

本研究在皮下埋置组织笼模型的基础上,进行了马波沙星在犊黄牛的药物动力学及对多杀性巴氏杆菌药效学研究,从而优化给药方案,以期更好的指导马波沙星兽医临床上的应用.本文研究的主要内容及结果如下：选用5头健康犊黄牛,按2 mg/kg b.w以单次肌内注射给药后,采用反相高效液相色谱法测定血清中马波沙星的浓度,用WinNonlin药动学软件处理血清中药物浓度—时间曲线.马波沙星在黄牛血清中的药时曲线数据符合一级吸收二室模型,其主要药动学参数为：t1/2Ka为0.253 h,Tmax为0.898 h,Cmax为1.983μg/mL,AUC为14.093 h·μg/mL,t1/2β为8.044 h,Vd/F为1.164 L/kg,CL/F为0.152 L/h/kg.选用5头健康犊黄牛,按2 mg/kg b.w以单次肌内注射给药后,按预定时间点收集血清.将终浓度为107 CFU/mL多杀性巴氏杆菌与预定时间点收集的血清混合在37℃孵育1h,采用离心除药法将药物稀释后,测定马波沙星对多杀性巴氏杆菌在血清中半体内抗菌后效应(PAE),通过非线性回归分析,可知当血清中马波沙星浓度在2MIC、4MIC、8MIC时,其PAE的值分别为1.90 h、2.65 h、3.50 h.选用18头健康的犊黄牛,随机分成8个剂量试验组,每组2头(每头牛植入2个组织笼,共4个组织笼),另选2头健康的犊黄牛作为空白对照组.向每个组织笼内注射对数期的多杀性巴氏杆菌CVCC1669(组织液细菌终浓度为5 105 CFU/mL),孵育大约24h后,治疗组分别以单剂量、肌内注射一系列浓度的马波沙星注射液,对照组给予生理盐水处理.按预定时间点分别测定组织液中马波沙星浓度和细菌含量.应用非线性回归分析,可知马波沙星对多杀性巴氏杆菌的抗菌效果和AUC24h/MIC或AUC24h/MPC相关性最好(R2=0.8514).运用WinNonlin软件提供的Sigmoid模型对马波沙星对多杀性巴氏杆菌的抗菌效应与AUC24h/MIC或者AUC24h/MPC进行数据拟合,可知,下降1个Log值所需要的AUC24h/MIC、AUC24h/MPC分别为18.60 h和4.67 h.下降3个Log所需要的AUC24h/MIC、AUC24h/MPC分别为50.65 h和12.89 h.

关键词：马波沙星多杀性巴氏杆菌组织笼模型抗菌药后效药动/药效黄牛

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喹赛多作用靶蛋白的筛选与鉴定

喹赛多作用靶蛋白的筛选与鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：戴梦红涂名邵羊阳王旭刘振利王玉莲袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点开放实验室华中农业大学

【目的】筛选和鉴定喹赛多促生长作用的靶蛋白,分析靶蛋白的功能,并研究与靶蛋白相关基因的表达变化,以阐明喹赛多可能的促生长作用机制。【方法】在保留喹赛多母环结构的基础上,将其改造成为喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧,利用实时荧光定量PC... 详细信息

【目的】筛选和鉴定喹赛多促生长作用的靶蛋白,分析靶蛋白的功能,并研究与靶蛋白相关基因的表达变化,以阐明喹赛多可能的促生长作用机制。【方法】在保留喹赛多母环结构的基础上,将其改造成为喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测L-02细胞中EGF mRNA的表达水平,以验证结构改造物的生物活性。将喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧与富含氨基的树脂基质ToyopearlAF-Amino-650M偶联,并利用高效液相色谱(HPLC)检测偶联效率。将固定化配体喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧-亲和基质与L-02细胞各亚细胞组分蛋白裂解液分别进行连续亲和层析(SAC)实验,通过生物质谱技术鉴定差异蛋白,并利用WesternBlot技术验证质谱结果的可靠性。利用RT-qPCR方法检测喹赛多孵育L02细胞后hnRNPA2/B1 mRNA、原癌基因c-mycmRNA、细胞增殖抗原Ki-67蛋白的基因mki-67mRNA及细胞周期基因p21、ccnd2mRNA的表达变化。【结果】与喹赛多作用类似,2μM喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧孵育L-02细胞1 h后,即可显著(p<0.05)上调EGFmRNA的表达水平,而且将喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧作为配体与树脂基质进行偶联的效率能够达到75%以上。通过偶联得到的固定化配体捕获到5个差异蛋白,并成功鉴定3个,分别是核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)、核内不均一核糖核蛋白U(hnRNP U)以及核内不均一核糖核蛋白H(hnRNP H),均为细胞核蛋白。Western Blot结果显示,随着蛋白裂解液与固定化配体孵育次数的增加,hnRNP A2/B1蛋白丰度逐渐减小,因此说明hnRNP A2/B1蛋白是喹噁啉-2-甲醛-1,4-二氧的特异性结合蛋白。2μM喹赛多孵育L-02细胞1 h后,hnRNPA2/B1与mki-67基因分别出现显著性(p<0.05)下调与上调表达。10μM喹赛多作用细胞0.5 h后即可检测到mki-67 mRNA的表达水平上调显著(p<0.05),但是细胞周期蛋白D2相关基因ccnd2 mRNA在1 h时出现显著性(p<0.05)上调表达。因此我们推测喹赛多与hnRNP A2/B1蛋白结合后,通过调控细胞增殖与细胞周期等相关基因的表达,促进细胞生长。【结论】喹赛多能进入细胞核内与靶蛋白hnRNPA2/B1结合,调节下游基因的表达,从而促进细胞生长。

关键词：喹赛多结合蛋白连续亲和层析质谱分析技术

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