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- 2 篇 教育学

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18 篇 猪
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9 篇 hplc
9 篇 肠球菌
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机构

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57 篇 南京农业大学
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39 篇 扬州大学
36 篇 东北农业大学
29 篇 新疆农业大学
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19 篇 青岛农业大学
19 篇 广西大学
17 篇 福建农林大学
17 篇 中国农业科学院兰...
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13 篇 沈阳农业大学
13 篇 华中农业大学
12 篇 内蒙古农业大学
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10 篇 河南农业大学
10 篇 中国农业科学院兰...

作者

49 篇 邓旭明
29 篇 刘雅红
29 篇 袁宗辉
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27 篇 沈建忠
27 篇 江善祥
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26 篇 孙坚
26 篇 卜仕金
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22 篇 秦哲
22 篇 曾振灵
22 篇 李世宏
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18 篇 肖希龙
17 篇 郝智慧

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p53通路与氧化应激交叉对话在喹乙醇诱导肝损伤中的作用

p53通路与氧化应激交叉对话在喹乙醇诱导肝损伤中的作用

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：李道稳肖希龙汤树生天津农学院动物科学与动物医学学院中国农业大学动物医学院

[目的]喹乙醇因具有良好的抗菌促生长的作用,被广泛用于饲料添加剂。但其具有明显的蓄积毒性和DNA损伤等副作用,对大多数动物有明显的致畸作用,对人也有潜在的致畸、致突变和致癌危害,因此喹乙醇已被许多国家禁用。本研究旨在探讨喹乙... 详细信息

[目的]喹乙醇因具有良好的抗菌促生长的作用,被广泛用于饲料添加剂。但其具有明显的蓄积毒性和DNA损伤等副作用,对大多数动物有明显的致畸作用,对人也有潜在的致畸、致突变和致癌危害,因此喹乙醇已被许多国家禁用。本研究旨在探讨喹乙醇诱导的肝损伤中p53与氧化应激的相互作用及在体内体外的毒性分子机制。[方法]本研究选用p53基因敲除小鼠(C57BL/6),p53基因缺失细胞系(HCT116)。将小鼠分为4组(n=10)设对照组、p53缺失组,喹乙醇400mg/kg组,p53缺失组+喹乙醇400 mg/kg组,所有小鼠连续灌胃28天,麻醉处死后收集小鼠血液及肝脏组织。试剂盒检测氧化应激标志物(MDA、CAT和SOD),Western blot检测信号通路标志性蛋白变化。噻唑蓝(MTT)法检测细胞成活率;AnnexinV-PI和Hoechst 33342染色检测细胞凋亡;荧光探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色检测活性氧(ROS)的产生,罗丹明(Rhodamin 123)染色检测线粒体膜电位,荧光显微镜观察分析。[结果]研究结果表明,喹乙醇通过引起氧化应激和激活p53通路诱导肝损伤。同时,N-乙酰半胱氨酸(NAC)在体内和体外显著降低了喹乙醇诱导的氧化应激、ROS的产生和p53蛋白的表达。p53敲除可明显降低喹乙醇诱导的肝损伤和氧化应激,同时抑制HCT116和HepG2细胞凋亡。此外,p53敲除缓解线粒体膜电位(MMP)降低和抑制线粒体凋亡通路。喹乙醇诱导MAPK、Nrf2/HO-1和AKT信号通路显著激活,而在p53缺失小鼠和p53缺失细胞中MAPK、Nrf2/HO-1和AKT信号通路明显抑制,而LC3和Beclin1的表达进一步增加。[结论]我们的研究结果提供了一个结论,p53在喹乙醇诱导的肝损伤与氧化应激主要发挥了促凋亡的作用,这在很大程度上依赖于抑制ROS的产生和Nrf2/HO-1通路,并通过激活LC3和Beclin1上调自噬途径的,从而抑制喹乙醇诱导MAPK和AKT信号通路。

关键词：喹乙醇 p53 肝损伤氧化应激交叉对话

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苯扎溴铵对肠球菌耐药性及群体感应系统的影响

苯扎溴铵对肠球菌耐药性及群体感应系统的影响

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：吴丽云李晓东汪艳秋洪娟刘灿欧正阳俞道进福建农林大学动物科学学院福建省兽医中药与动物保健重点实验室

目的:苯扎溴铵在医疗卫生等行业中被广泛使用,导致了细菌的抗性。本研究了苯扎溴铵对不同生长时期肠球菌菌毛基因和黏附因子表达的影响;同时探索了微生态模型中苯扎溴铵条件下的肠球菌耐药性及各群体感应系统间的相互关系。方法:（1）设... 详细信息

目的:苯扎溴铵在医疗卫生等行业中被广泛使用,导致了细菌的抗性。本研究了苯扎溴铵对不同生长时期肠球菌菌毛基因和黏附因子表达的影响;同时探索了微生态模型中苯扎溴铵条件下的肠球菌耐药性及各群体感应系统间的相互关系。方法:（1）设立5个苯扎溴铵浓度组（1000,500,100,10,0ng/mL）,分别用对培养至对数中期（3.5 h）、对数后期（5 h）及稳定期（7h）的肠球菌对猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）进行黏附,并用qPCR法测肠球菌的菌毛相关基因和黏附因子的mRNA相对表达情况。（3）建立水域微生态模型。设置苯扎溴铵终浓度分别为2000 ng/mL、200 ng/mL、20 ng/mL、2 ng/mL和0 ng/mL的梯度。定期检测水样中肠球菌的药敏表型、耐药基因和抗性基因,同时检测其fsr群体感应系统和cyl群体感应系统相关基因的mRNA相对表达量。结果:（1）黏附实验结果显示,肠球菌各生长时期对宿主细胞的黏附作用具有差异性,对数期的黏附能力强于稳定期,低浓度组的黏附性强于高浓度组;低浓度（10 ng/mL）苯扎溴铵对菌毛生成相关基因ebpA、ebpB、ebpC和srtA基因的上调作用主要体现在对数中期,而ebpR影响较大的是较高浓度组的稳定期;gelE基因的表达主要在后期,且较低苯扎溴铵浓度可以显著提高其表达;对数中期随着苯扎溴铵浓度的增加（100～1000 ng/mL）,ace的mRNA表达随苯扎溴铵浓度的增加而增加,对数后期则相反。（2）微生态系统中,第7天时肠球菌对8种药物的MIC值明显增加,并对VAN、CHL、BB、CIP、ERY和TET产生耐药性,tetL和ermB等耐药基因于1 d时检出。fsrABC基因几乎不表达,但下游的gelE和sprE的表达明显上调;cylL和cylL的表达量远高于其他cyl相关组分基因;前21天两者表达量相当,28 d后者显著高于前者;其他cyl基因后期均被抑制。结论:（1）苯扎溴铵能显著提高肠球菌在生长对数中期的黏附能力。低浓度苯扎溴铵对宿主细胞的黏附能力与菌毛生成量有关,高浓度主要通过刺激黏附基因ace的高表达影响其黏附。（2）亚抑菌浓度下苯扎溴铵诱导肠球菌耐药性,其对fsr群体感应系统相关基因fsrABC基因表现为完全抑制作用。

关键词：苯扎溴铵肠球菌群体感应系统耐药性

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安普霉素对猪源大肠杆菌野生型折点的确定及体外药效学研究

安普霉素对猪源大肠杆菌野生型折点的确定及体外药效学研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：程平李佳瑞杨雨齐肖天石张秀英东北农业大学动物医学学院

[目的意义]:抗菌药物敏感性判定标准（折点）是检测细菌对抗菌药物敏感性,确定耐药水平及耐药率的重要技术标准,目前世界上较权威的制定折点的机构主要有美国临床实验室标准化研究所（CLSI）和欧洲抗菌药物敏感性试验委员会（EUCAST）,... 详细信息

[目的意义]:抗菌药物敏感性判定标准（折点）是检测细菌对抗菌药物敏感性,确定耐药水平及耐药率的重要技术标准,目前世界上较权威的制定折点的机构主要有美国临床实验室标准化研究所（CLSI）和欧洲抗菌药物敏感性试验委员会（EUCAST）,我们国家尚未建立制定折点的机构。安普霉素是畜禽专用抗菌药,在治疗和预防大肠杆菌所引发的疾病中发挥了重要作用,但目前国内外均未建立安普霉素对大肠杆菌的敏感性折点,缺乏判定的统一尺度。本研究参考CLSI建立折点的标准流程与方法,建立安普霉素对猪源大肠杆菌的野生型折点(CO),并分析了了大肠杆菌对安普霉素耐药与钝化酶之间的相关性,从而为耐安普霉素大肠杆菌的监测与防控提供理论指导。[方法]本研究通过采集我国主要省市规模化养猪场的猪肛门拭子,经实验室培养、分离、纯化和鉴定,获得猪源大肠杆菌临床分离株;采用微量稀释法测定安普霉素对猪源大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,经统计分析,确定安普霉素对猪源大肠杆菌的CO;采用体外药效学试验方法研究安普霉素对猪源大肠杆菌的最小杀菌浓度（MBC）、最小防突变浓度（MPC）和突变选择窗（MSW）。在测得的MIC （0.5～256 g/mL）范围内挑选出310株不同MIC值的猪源大肠杆菌临床分离株,采用PCR方法检测介导安普霉素耐药性的基因aac（3）-Ⅳ、npmA和apmA。[结果与结论]:共分离得到1222株猪源大肠杆菌临床分离株;通过绘制安普霉素对菌株的MIC值分布直方图,运用统计学方法确定了猪源大肠杆菌对安普霉素的CO为32μg/mL。MIC和MIC分别为16μg/mL和64μg/mL。体外药效学试验表明,安普霉素对猪源大肠杆菌为杀菌型抗菌药（MBC=1～4MIC）,突变选择窗较宽。在挑选出310株不同MIC值的猪源大肠杆菌临床分离株中,只检测出aac（3）-Ⅳ钝化酶基因,且主要存在于MIC≥64μg/mL的耐药菌株中,表明aac（3）-Ⅳ钝化酶基因是介导大肠杆菌对安普霉素耐药的主要原因之一。

关键词：安普霉素大肠杆菌 MIC COWT 钝化酶

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穿心莲内酯对小鼠气性坏疽发挥治疗作用及其机制

穿心莲内酯对小鼠气性坏疽发挥治疗作用及其机制

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：李萌邓旭明王建锋吉林大学动物医学学院

[目的]通过肌肉注射不同剂量的产气荚膜梭菌制备小鼠腿部坏疽模型,研究穿心莲内酯对气性坏疽的体内治疗效果,观测穿心莲内酯对α毒素和θ毒素的作用及其分子机制。[方法]在体外实验中,通过溶血试验检测穿心莲内酯对α毒素和θ毒素两种... 详细信息

[目的]通过肌肉注射不同剂量的产气荚膜梭菌制备小鼠腿部坏疽模型,研究穿心莲内酯对气性坏疽的体内治疗效果,观测穿心莲内酯对α毒素和θ毒素的作用及其分子机制。[方法]在体外实验中,通过溶血试验检测穿心莲内酯对α毒素和θ毒素两种毒素的溶血活性的抑制作用;将穿心莲内酯与抗生素联合使用,测量最小抑菌浓度;通过将不同浓度穿心莲内酯(0、0.25、0.5、1、2μg/ml)分别与α毒素和θ毒素进行预处理后,联合刺激Caco-2细胞,通过LDH试剂检测穿心莲内酯对细胞的保护作用并确定穿心莲内酯对细胞有无毒性作用;蛋白免疫印迹法(western blot)检测穿心莲内酯对θ毒素寡聚的影响。在体内试验中,通过肌肉注射不同剂量的产气荚膜梭菌ATCC13124建立小鼠坏疽模型,而后皮下注射穿心莲内酯进行治疗,在48 h后取腿部肌肉制作H&E切片以及检测腿部肌肉中细菌ATCC13124的菌落定殖量;在72 h期间内,每隔8 h观察一次小鼠死亡情况,检测穿心莲内酯对气性坏疽小鼠的治疗效果。[结果]在本研究中,溶血试验以及最小抑菌浓度测定实验发现,穿心莲内酯可以在较低浓度下同时抑制α和θ毒素的溶血活性,且低剂量的穿心莲内酯与抗生素联合使用条件下,即可有效降低抗生素的最小抑菌浓度四倍。Western blot实验显示,穿心莲内酯能够对θ毒素的寡聚产生影响,据此推测穿心莲内酯是通过抑制θ毒素的寡聚化来影响毒素的溶血活性从而在疾病的治疗中发挥作用。用Caco-2细胞进行的LDH测定结果表明穿心莲内酯可以保护Caco-2细胞免受两种蛋白质造成的损害。在研究穿心莲内酯对气性坏疽的体内治疗效果的实践中,菌落定殖及病理切片结果表明穿心莲内酯可以减少产气荚膜梭菌对气性坏疽侵袭部位的损伤,并显着减少产气荚膜梭菌对腿部肌肉的定植。[结论]穿心莲内酯可以抑制产气荚膜梭菌中α毒素和θ毒素两种毒素的溶血活性,从而影响产气荚膜梭菌的感染,对气性坏疽有一定的治疗缓解作用。这表明穿心莲内酯可能具有治疗产气荚膜梭菌引起的气性坏疽的有效药物,为临床治疗梭菌气性坏疽提供了一些新的思路。

关键词：穿心莲内酯气性坏疽 α毒素 θ毒素溶血活性

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基于代谢组学研究AEE对氧化损伤血管内皮的作用

基于代谢组学研究AEE对氧化损伤血管内皮的作用

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：黄美州杨亚军刘希望秦哲李世宏李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室

[目的]物质代谢是生命体普遍存在的生物学过程,体内物质代谢的变化与细胞、组织、器官和机体生理状态密切相关。通过代谢组学技术研究药物的作用机制也成为近些年的一个热点,寻找药物作用后的差异代谢物,结合生物信息学技术揭示药物可... 详细信息

[目的]物质代谢是生命体普遍存在的生物学过程,体内物质代谢的变化与细胞、组织、器官和机体生理状态密切相关。通过代谢组学技术研究药物的作用机制也成为近些年的一个热点,寻找药物作用后的差异代谢物,结合生物信息学技术揭示药物可能干预的机体或细胞的代谢通路。本文基于代谢组学方法研究AEE对氧化损伤血管内皮的作用,揭示AEE抗动脉粥样硬化的可能分子机制。[方法]利用超高效液相与飞行时间质谱联用技术（UPLC/QTOF-MS）对细胞内容物及细胞培养上清液中的代谢物进行检测,同时采用多元统计分析方法对不同处理组内的代谢物进行分析。[结果]细胞培养上清液和细胞内容物样品总离子色谱图（TIC）显示,所建立的方法分离效果好,灵敏度高。经主成分分析（PCA）结果显示,不同处理组样品被显著的分开,表明AEE处理HUVECs细胞24 h后,细胞培养上清液和细胞内容物的代谢物发生了明显的改变。为了探究HO对HUVECs代谢的影响及其AEE能否改善HO对HUVECs代谢的影响,不同处理组HUVECs培养上清液中的代谢物也被检测和分析。结果显示:在正或负离子模式下,正常组、HO处理组和AEE处理组细胞培养上清液的代谢谱显著地被分离。正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）的结果与PCA的结果相一致。细胞内容物的代谢物的分析结果表明:不同的处理组内细胞内容物中的代谢物在不同处理组内的发生了显著地变化。细胞和细胞培养上清液中共发现11个差异代谢物（其中细胞培养上清液中3个,细胞中8个）,这些差异代谢物分别涉及到细胞的能量代谢,氨基酸代谢和辅因子和维生素的代谢,在细胞的抗氧化、能量供应,损伤修复调控中发挥着重要作用,AEE预处理HUVECs后,HO诱导的这些差异代谢物的变化向生理水平转变。[结论]AEE能够有效改善氧化损伤血管内皮的代谢紊乱。

关键词：阿司匹林丁香酚(AEE) 氧化损伤代谢组学内皮细胞

来源：评论

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反相高效液相色谱法测定盐酸沙拉沙星包合物含量

反相高效液相色谱法测定盐酸沙拉沙星包合物含量

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：姜兴粲李冰邱燕华程富胜魏晓娟王玮玮张吉利张继瑜中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室

[目的]建立测定β--环糊精包合物中盐酸沙拉沙星含量的反高效液相色谱分析方法。[方法]样品经0.1mol/L的氢氧化钠溶解,用紫外分光光度计在200nm-800nm范围内扫描,并在高效液相色谱仪上逐步验证;考察乙腈-磷酸水溶液体系（PH2.0）和乙腈... 详细信息

[目的]建立测定β--环糊精包合物中盐酸沙拉沙星含量的反高效液相色谱分析方法。[方法]样品经0.1mol/L的氢氧化钠溶解,用紫外分光光度计在200nm-800nm范围内扫描,并在高效液相色谱仪上逐步验证;考察乙腈-磷酸水溶液体系（PH2.0）和乙腈-2%四丁基溴化铵体系（PH2.5）,对比两种流动相体系。试验对比Agilent 150mm和250mm色谱柱,对比目标化合物的保留时间并分别在柱温20、30、40℃时分析标准品溶液的保留时间、响应值等参数。[结果]乙腈-磷酸水溶液体系（PH2.0）拖尾严重,峰型较差,出峰时间较早;乙腈--2%四丁基溴化铵PH=2.5（13:87,v/v）体系的峰型良好,出峰时间适中;Agilent 250mm的色谱柱的出峰时间较晚;波长280nm时,供试品的响应值最大;30℃柱温时,供试品的对称因子最好。所以选用Agilent ZORBAX SB-C18（4.6×150mm5-Micron）色谱柱,以乙腈--2%四丁基溴化铵（13:87,体积比）等度洗脱,检测波长280nm,柱温30℃,外标法定量。目标化合物在9.94～99.40mg/L范围内呈良好的线性,相关系数R为0.9999,包合物中盐酸沙拉沙星的检出限（S/N≥3）为0.004μg/mL,定量限（S/N≥10）为0.066μg/mL。连续测定低（29.82μg/mL）、中（59.64μg/mL）、高（89.46μg/mL）三个质量浓度的峰面积精密度（RSD,n=5）分别是0.18%、0.04%、0.09%;中等浓度（59.64μg/mL）的日内精密度（RSD,n=7）是0.1%,日间精密度（RSD,n=5）是0.73%,定量重复性≤1%;连续测定低（29.82μg/mL）、中（59.64μg/mL）、高（89.46μg/mL）3个质量浓度的保留时间精密度（RSD,n=5）分别是0.46%,0.24%,0.16%;中等浓度（59.64μg/mL）的保留时间日内精密度（RSD,n=7）是0.33%,保留时间的日间精密度（RSD,n=5）是0.82%,定性重复性≤1%;低（29.82μg/mL）、中（59.64μg/mL）、高（89.46μg/mL）三个质量浓度的方法回收率的均值分别为99.6%、99.6%、99.2%,相对标准偏差（RSD,n=5）分别为0.10%、0.05%、0.44%。[结论]该方法的色谱分离效果好,专属性强,干扰少,准确度高,可用于β-环糊精包合物制剂中盐酸沙拉沙星含量的测定。

关键词：反相高效液相盐酸沙拉沙星包合物含量测定

来源：评论

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多西环素口服液在肉鸡体内残留消除规律研究

多西环素口服液在肉鸡体内残留消除规律研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：张艺馨刘芮萌于泓潇李思鸿程平李富磊张秀英东北农业大学动物医学学院

[目的]确定多西环素口服液在肉鸡体内的残留消除规律,制定多西环素口服液在肉鸡体内的休药期。[方法]按每0.2mL/kgbw临床推荐剂量给42只AA肉鸡（体重在1.5-2kg）灌服多西环素口服液,连续灌胃给药5天。分别于给药后6h、1d、3d、5d、6d、7... 详细信息

[目的]确定多西环素口服液在肉鸡体内的残留消除规律,制定多西环素口服液在肉鸡体内的休药期。[方法]按每0.2mL/kgbw临床推荐剂量给42只AA肉鸡（体重在1.5-2kg）灌服多西环素口服液,连续灌胃给药5天。分别于给药后6h、1d、3d、5d、6d、7d、8d时随机选取6只鸡剖杀,分别采取足够量的肌肉、肝脏、肾脏和皮脂。采集的组织样品不进行其它任何洗涤或处理,研磨粉碎后于-80℃保存,供多西环素残留的测定。鸡可食性组织中多西环素残留量的测定采用农业部1025号公告-12-2008《鸡肉、猪肉中四环素类药物残留检测液相色谱-串联质谱法》方法检测。将各时间点测得的鸡可食性组织中多西环素的残留量用WT1.4软件拟合计算休药期。[结果]方法学研究结果表明,鸡可食性组织中多西环素添加浓度在5-600 ng/mL范围内线性良好,R>0.99。检测限为5μg/kg,定量限为10μg/kg。空白肌肉组织添加水平在5、100和400μg/kg时,平均回收率在74.22%-81.48%之间。空白肝脏组织添加水平在5、100和400μg/kg时,平均回收率在71.86%-80.83%之间。空白肾脏组织添加水平在10、100和600μg/kg时,平均回收率在72.97%-79.66%之间。空白皮脂组织添加水平在5、100和40μg/kg时,平均回收率在68.78%-71.32%之间。上述空白组织添加样品的日内和日间变异系数均在10%以内。采集的不同时间点各组织中多西环素的含量测定结果表明,停药后6h多西环素在肾脏中残留量最高,平均残留量为5673.38±3452.95μg/kg,其次是肝脏和皮脂,平均残留量分别为4421.42±2239.50μg/kg和4409.36±4377.22μg/kg,肌肉中残留量则较低,平均残留浓度为311.78±196.56μg/kg。停药后第5d时,除皮脂外,其余组织中多西环素的残留量均低于农业部规定的MRLs （肌肉为100μg/kg,肝脏为300μg/kg,肾脏为600μg/kg,皮脂为300μg/kg）。根据我国农业部235号公告规定的多西环素在肉鸡可食性组织中的MRLs,采用休药期软件WT1.4计算,多西环素口服液按推荐剂量给药,停药后多西环素的鸡的肌肉、肝脏、肾脏和皮脂的休药期分别为4.08d、5.73d、4.76d、12.52d。[结论]肝脏是多西环素在鸡体内的残留靶组织,并且多西环素为脂溶性药物,因此会蓄积在皮脂中消除较慢。多西环素口服液按推荐给药方案给药,建议休药期可暂定为13d。

关键词：肉鸡多西环素口服液休药期残留消除

来源：评论

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基于碳点-磷酸钙纳米复合物的“绿色”荧光免疫分析法检测牛奶中氯霉素残留研究

基于碳点-磷酸钙纳米复合物的“绿色”荧光免疫分析法检测牛奶中...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：董保磊李红芳于雪芝温凯王战辉沈建忠中国农业大学动物医学院

[目的]与传统半导体量子点和有机染料相比,荧光碳点具有生物相容性好、光学性能优异和成本低廉等优势,在生物分析及生物传感领域应用越来越广泛。但碳点因缺少表面配体等原因导致其与抗体等生物识别材料的偶联效率较低。且裸露的碳点因... 详细信息

[目的]与传统半导体量子点和有机染料相比,荧光碳点具有生物相容性好、光学性能优异和成本低廉等优势,在生物分析及生物传感领域应用越来越广泛。但碳点因缺少表面配体等原因导致其与抗体等生物识别材料的偶联效率较低。且裸露的碳点因粒径小,在标记过程中易发生聚集淬灭,也难以进行分离纯化。本研究拟合成绿色环保的碳点无机纳米复合物,提高碳点与抗体的偶联效率。通过构建新型的荧光免疫分析方法,以期实现牛奶中氯霉素的高灵敏、快速检测。[方法]以柠檬酸等为原料,通过水热法一步合成荧光碳点;通过荧光光谱,透射电镜等方式对其进行表征,确定碳点合成成功。通过配体辅助的自组装的方式,合成碳点-磷酸钙纳米复合物,并对其进行详细的表征测试。通过化学偶联和物理吸附的方式将氯霉素的抗体与碳点-磷酸钙纳米复合物进行偶联,构建荧光免疫探针,并评估两种方法的偶联效率。通过水热法合成氨基功能化的磁性纳米颗粒,并将其与氯霉素半抗原进行偶联,纯化。构建基于磁性纳米颗粒和荧光免疫探针的磁性荧光免疫分析方法,用于检测牛奶中的氯霉素残留。通过牛奶样本的添加回收实验来评价该方法的灵敏度和准确性。[结果]成功合成并鉴定了碳点-磷酸钙纳米复合物,其荧光性能良好,纳米分散性优异,水溶液中稳定性较好。实现了碳点-磷酸钙纳米复合物与抗体分子的有效偶联;成功构建了基于磁分离技术的氯霉素检测的磁性荧光免疫分析新方法。该方法的检测限(LOD)为0.03μg/kg;可在30min内完成检测,添加回收率74.3%-92.5%,变异系数小于11.3%。[结论]本研究合成的碳点磷酸钙纳米复合物不仅保留了碳点的优异荧光性能,且提高了碳点与抗体分子的偶联效率。基于磁性纳米颗粒和磁分离技术有效缩短了检测时间。建立的牛奶样本中氯霉素检测的磁性荧光免疫分析方法,实现了对氯霉素的高灵敏、快速检测。

关键词：荧光碳点无机纳米材料荧光免疫分析氯霉素

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基于活性-结构的解热镇痛药物先导化合物的研究

基于活性-结构的解热镇痛药物先导化合物的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：陆启荣潘源虎陈冬梅陶燕飞程古月刘振利袁宗辉王旭国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)、农业部兽药残留检测重点实验室农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学动物医学院

[目的]畜禽的炎症、疼痛与发热给畜牧业带来了巨大的损失,但目前中国兽医药典批准使用的非甾体类抗炎药很少,且均存在一定程度的胃肠道毒性以及部分的心血管风险。因此本研究拟从扎托布洛芬(ZPF)及其主要代谢物与COX-1和COX-2酶活性以及... 详细信息

[目的]畜禽的炎症、疼痛与发热给畜牧业带来了巨大的损失,但目前中国兽医药典批准使用的非甾体类抗炎药很少,且均存在一定程度的胃肠道毒性以及部分的心血管风险。因此本研究拟从扎托布洛芬(ZPF)及其主要代谢物与COX-1和COX-2酶活性以及与COX-2相互作用的活性位点的角度,诠释ZPF和代谢物活性差异的原因,以期能够从活性位点的角度提高非甾体抗炎药的活性并减少毒副作用,进而设计新型先导化合物,为高效、低毒兽用解热镇痛药的开发奠定坚实基础。[方法]本实验以ZPF为研究对象,合成并鉴定其主要代谢物M-2,M-3和M-5。应用COX-1和COX-2抑制筛选试剂盒对ZPF及其主要代谢物进行活性抑制实验;SYBYL软件研究ZPF及其主要代谢物对COX-2关键性活性位点的分析,依据SIFT和Polyphen网站对活性位点的突变位点进行分析并构建其COX-2的野生型,突变型真核表达载体。利用中国仓鼠卵巢细胞(CHO)建立COX-2野生型和突变型抑制剂筛选模型,以花生四烯酸为底物,PGE2放免试剂盒测定COX-2野生型和突变型产生的PGE2的活性,进一步确定其主要的活性位点,并应用SYBYL软件设计并模拟新型的解热镇痛先导化合物。[结果]结果显示,以ZPF为原料,成功合成出其主要代谢物M-2,M-3和M-5。ZPF及其主要代谢物对COX-2抑制活性大小为ZPF>M-2>M-5>M-3,COX-1抑制活性大小为ZPF>M-5>M-3>M-2。SYBYL联合SIFT和Polyphen分析出ZPF及主要代谢物对COX-2的关键性活性位点为ARG120,TYR355和SER530。CHO模型进一步证明TYR355和SER530为COX-2的关键性位点。综合分析显示母核的硫氧化与SER530形成的氢键有助于进一步抑制COX-2的酶活性,而羰基还原形成的羟基与SER530形成的氢键,丧失了抑制COX-2的酶活性功能。推测在硫氧化的对位更换成比其极性弱的基团有助于提高活性,并应用SYBYL进行了先导化合物设计。[结论]综上所述,TYR355和SER530为ZPF和M-2抑制COX-2的关键性位点,M-2母核的硫氧化以及其对位更换成极性弱的基团有助于提高COX-2抑制活性,因此新型解热镇痛先导化合物的研发可基于SYBYL软件并依据关键活性位点进行设计。

关键词：扎托布洛芬代谢物活性位点结构先导化合物

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大苞藤黄中neobractatin提取工艺优化及其体外抗炎活性的评价

大苞藤黄中neobractatin提取工艺优化及其体外抗炎活性的评价

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：祖媛媛刘恬麟张宇张德显田春莲刘明春牛生吏沈阳农业大学畜牧兽医学院教育部人畜共患病重点实验室

[目的]随着现代工业的发展和生态环境的持续污染恶化,炎症相关疾病的发病率越来越高,给畜牧业带来较大的经济损失。目前国内外兽医临床上常用的是化学合成类抗炎药,如甾体激素类等,在长期的临床应用中发现此类抗炎药存在严重的副作用、... 详细信息

[目的]随着现代工业的发展和生态环境的持续污染恶化,炎症相关疾病的发病率越来越高,给畜牧业带来较大的经济损失。目前国内外兽医临床上常用的是化学合成类抗炎药,如甾体激素类等,在长期的临床应用中发现此类抗炎药存在严重的副作用、不良反应和兽药残留,因此寻找更加安全、有效、广谱的抗炎药物成为必然趋势。目前研究热点是利用我国丰富的植物资源从中寻找有效成分或进行活性结构官能团的结构修饰来开发新的高效低毒的抗炎药物。大苞藤黄(Garcinia bracteata ***)为藤黄科藤黄属植物,主要有效成分为笼状咕吨酮类并具有明显的抗肿瘤活性。临床研究表明药物的抗肿瘤活性与抗炎活性有着紧密联系,因此本试验以大苞藤黄中笼状咕吨酮类成分neobractatin为研究对象,采用LPS刺激小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)建立炎症模型,探究neobractatin的体外抗炎作用。[方法]本研究运用响应面工艺法、超声提取法以及高效液相色谱法(HPLC)建立大苞藤黄叶中笼状咕吨酮成分neobractatin含量测定的方法;通过LPS刺激小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7) 18h建立炎症模型;采用ELISA试剂盒检测neobractatin (0.4μM、0.8μM和1.6μM)作用后,RAW264.7炎症细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10及PGE2的含量,运用MTT法和Griess法检测neobractatin对RAW264.7细胞的细胞毒性及neobractatin作用后炎症细胞上清液中NO的含量。并进一步研究neobractatin对炎症因子和炎症介质分泌的影响;通过应用荧光定量PCR法和免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测neobractatin对炎症细胞中炎症介质iNOS、COX-2基因与蛋白表达量的影响。[结果]试验结果表明,neobractatin最佳提取工艺为:液料比30mL/g,提取温度30℃,提取时间90min;在此工艺条件下neobractatin实际收率为2.24mg/g,与模型预测结果(2.36mg/g)基本相符。在抗炎活性测试中,neobractatin极显著降低了LPS诱导的小鼠单核-巨噬细胞(RAW264.7)分泌的NO、TNF-α、IL-6及IL-1β的含量,明显降低了PGE2的含量,同时极显著升高了IL-10的含量;在基因水平上及在蛋白水平上,neobractatin显著降低了iNOS、COX-2的表达量。研究发现neobractatin可通过降低LPS刺激RAW264.7细胞中炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)和炎症介质(NO、PGE2)的含量并表现出抗炎作用;同时还通过极显著降低iNOS、COX-2基因与蛋白表达水平而进一步发挥抗炎作用。[结论]综上所述,本文以neobractatin为抗炎先导化合物,进一步研究了大苞藤黄中neobractatin的工艺优化及其体外抗炎活性的作用及作用机制,旨在为neobractatin作为新型抗炎药物的开发提供了理论依据,将为笼状咕吨酮类成分作为高效低毒的绿色抗炎新兽药的深入开发与应用奠定理论基础。

关键词：大苞藤黄笼状呫吨酮类化合物 neobractatin 提取工艺抗炎活性

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