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机构

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39 篇 扬州大学
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17 篇 青岛农业大学
17 篇 福建农林大学
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13 篇 华中农业大学
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10 篇 河南农业大学
10 篇 中国农业科学院兰...

作者

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29 篇 刘雅红
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27 篇 杨亚军
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27 篇 江善祥
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26 篇 卜仕金
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22 篇 秦哲
22 篇 曾振灵
22 篇 李世宏
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18 篇 肖希龙
17 篇 王战辉

语言

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新型细胞死亡methuosis介导马度米星铵诱发鸡心肌细胞毒性

新型细胞死亡methuosis介导马度米星铵诱发鸡心肌细胞毒性

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：高修歌季春雷郑亚妮左儒楠张静静彭麟季辉江善祥南京农业大学动物医学院

[目的]马度米星铵因安全范围极窄、过量使用及药物相互作用常引起肉鸡中毒,心肌是其毒性损伤的靶组织之一,经典和非经典的细胞死亡共同介导马度米星铵的心肌毒性,然而其机制尚不明确。本研究旨在探讨一种新型细胞死亡methuosis介导马度... 详细信息

[目的]马度米星铵因安全范围极窄、过量使用及药物相互作用常引起肉鸡中毒,心肌是其毒性损伤的靶组织之一,经典和非经典的细胞死亡共同介导马度米星铵的心肌毒性,然而其机制尚不明确。本研究旨在探讨一种新型细胞死亡methuosis介导马度米星铵引起鸡心肌毒性的作用及机制。[方法]采用鸡原代心肌细胞为体外模型,以马度米星铵（0,0.05,0.5,5μg/mL）处理细胞12～72h后,应用相差显微镜、激光共聚焦扫描显微镜及透射电子显微镜分别观察细胞质空泡的宏观和微观结构;以Dextran 488-FITC、ER Tracker、Mito Tracker、Lyso Tracker等荧光探针染色马度米星铵处理12 h的心肌细胞,激光共聚焦显微镜分析胞浆内空泡与胞浆内细胞器的关系;以凋亡抑制剂z-VAD-fmk、自噬抑制剂3-MA/CQ、质子泵抑制剂Bafilomycin A1等预孵育鸡心肌细胞1 h,经不同浓度马度米星铵处理12～24h后,光学显微镜或透射电子显微镜观察空泡变化,CCK-8法测定细胞活性变化,Western blot分析LC3-Ⅰ/Ⅱ、p62、H-Ras、K-Ras、Rac 1等蛋白的表达变化。[结果]结果显示,马度米星铵可引起鸡心肌细胞出现浓度和时间依赖的细胞质空泡化现象,胞浆内大量的空泡特征不同于细胞凋亡、自噬等的典型形态学特征;这种空泡来源于细胞巨胞饮,而不是线粒体、内质网或溶酶体的肿胀;z-VAD-fmk和3-MA/CQ不能抑制马度米星铵引起的鸡心肌细胞空泡化,且不能保护心肌细胞活性,而Bafilomycin A1可以显著抑制胞浆内空泡的产生且可以显著保护细胞活性;马度米星铵可以影响LC3-Ⅰ/Ⅱ和p62蛋白的表达,但抑制表达后并不能改善马度米星铵引起的细胞损伤;马度米星铵处理后,K-Ras和Rac 1的基因及蛋白表达量均显著变化。[结论]以上研究表明,马度米星铵可引起不同于凋亡及自噬的methuosis,这种细胞死亡方式的产生依赖于空泡型H-ATP酶的活化且与Ras-Rac1信号通路有关。

关键词：细胞质空泡化 Methuosis 马度米星铵非凋亡性细胞死亡心脏毒性鸡心肌细胞

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黄芩苷通过恢复线粒体动态变化缓解鸡毒支原体感染所致的氧化应激及凋亡

黄芩苷通过恢复线粒体动态变化缓解鸡毒支原体感染所致的氧化应激...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者： Muhammad Ishfaq 张薇吴志勇王剑胡婉莹李继昌东北农业大学动物医学学院

[目的]鸡毒支原体可以诱发鸡呼吸道产生严重的炎症反应,并且该病原体可以逃避机体免疫从而引发慢性感染。前期研究表明黄酮类化合物黄芩苷具有强大的抗炎和抗氧化应激活性。然而,黄芩苷是否可以预防鸡毒支原体诱导的免疫功能障碍还未可... 详细信息

[目的]鸡毒支原体可以诱发鸡呼吸道产生严重的炎症反应,并且该病原体可以逃避机体免疫从而引发慢性感染。前期研究表明黄酮类化合物黄芩苷具有强大的抗炎和抗氧化应激活性。然而,黄芩苷是否可以预防鸡毒支原体诱导的免疫功能障碍还未可知。本试验从线粒体动态变化方面探究了黄芩苷对鸡毒支原体感染的保护作用。[方法]120只一日龄白来航鸡分为4组:(A)正常对照组;(B)鸡毒支原体感染模型组;(C)黄芩苷单独处理组(450mg/kg);(D)鸡毒支原体感染+黄芩苷(450mg/kg)处理组。收集鸡脾脏,通过ELISA试剂盒检测氧化应激相关指标、细胞因子;病理切片检测脾脏病变情况;TUNEL法检测凋亡情况;RT-PCR和Western blot检测线粒体动态相关基因,NF-κB和Nrf2/HO-1信号通路基因的表达情况。[结果]病理组织学检查结果显示,鸡毒支原体感染模型组出现异常的形态变化,包括细胞增生、淋巴细胞耗尽、脾脏红白髓不明显;氧化应激相关指标显著提高。相较于鸡毒支原体感染模型组,鸡毒支原体感染+黄芩苷(450 mg/kg)处理组氧化应激相关指标显著降低,病理切片结果也显示异常的形态变化有了一定程度的改善。TUNEL结果表明黄芩苷显著降低了鸡毒支原体感染所致的凋亡,线粒体凋亡相关的基因及蛋白表达结果进一步证明了这一点。此外,鸡毒支原体感染造成了线粒体动态相关基因表达的异常并破坏了线粒体内外膜的平衡,而鸡毒支原体感染+黄芩苷(450 mg/kg)处理组中,这些线粒体动态相关基因表达水平趋于正常对照组,线粒体内外膜的平衡得以恢复。进一步发现,黄芩苷的抗鸡毒支原体作用与Nrf2/HO-1通路的激活及NF-κB通路的抑制相关。[结论]黄芩苷通过恢复线粒体动态变化缓解鸡毒支原体感染所致的氧化应激及凋亡,该研究为进一步研究鸡毒支原体致病机理奠定了基础。

关键词：鸡毒支原体黄芩苷凋亡氧化应激线粒体

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醋氨酚诱导小鼠急性肝损伤中JNK信号通路与GSTA1的作用研究

醋氨酚诱导小鼠急性肝损伤中JNK信号通路与GSTA1的作用研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：史晨曦刘芳萍东北农业大学动物医学学院

[目的]本文旨在醋氨酚(APAP)诱导的小鼠急性肝损伤模型中,通过给予JNK抑制剂SP600125(SP),确定JNK信号通路和GSTA1在APAP诱导的肝损伤中的作用,为进一步研究药物性肝损伤机制奠定基础。[方法]本试验采用不同剂量APAP给予小鼠,通过检测... 详细信息

[目的]本文旨在醋氨酚(APAP)诱导的小鼠急性肝损伤模型中,通过给予JNK抑制剂SP600125(SP),确定JNK信号通路和GSTA1在APAP诱导的肝损伤中的作用,为进一步研究药物性肝损伤机制奠定基础。[方法]本试验采用不同剂量APAP给予小鼠,通过检测血清转氨酶(ALT、AST)活性,确定可造成不同程度肝损伤的APAP剂量。随后进行JNK信号通路和GSTA1在肝损伤中的作用研究。试验分为五组:对照组、低剂量APAP组、高剂量APAP组、低剂量APAP+SP组、高剂量APAP+SP组,检测血清ALT、AST和肝氧化应激指标(MDA、SOD、GSH、GSH-Px)的水平;检测小鼠血清及肝组织中GSTA1含量;应用H&E染色法对肝脏进行病理组织学检查;采用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;采用Western blot方法测定肝组织中p-JNK、JNK、p-c-Jun、c-Jun、p-c-Fos、c-Fos、p-ASK1、ASK1、p-MKK4、MKK4及GSTA1蛋白的相对表达量。[结果]不同剂量APAP组中p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、p-c-Fos/c-Fos、p-MKK4/MKK4、p-ASK1/ASK1比值均高于对照组,差异极显著(p<0.01);JNK抑制剂作用小鼠后,与高剂量APAP组相比,高剂量APAP+SP组血清ALT和AST活性极显著下降(p<0.01),肝组织中MDA含量显著降低(p<0.05),GSH、SOD和GSH-Px水平极显著升高(p<0.01),p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、p-MKK4/MKK4、p-ASK1/ASK1比值极显著降低(p<0.01),血清和肝脏中GSTA1含量极显著变化(p<0.01);与低剂量APAP组相比,低剂量APAP+SP组肝组织中MDA含量显著降低(p<0.05),SOD、GSH、GSH-Px水平显著升高,血清和肝脏中GSTA1含量和表达极显著变化(p<0.01)。病理组织学检查结果显示,APAP组肝索紊乱,有炎性细胞浸润;给予JNK抑制剂后,肝索排列规则,炎性细胞数量骤减。凋亡结果表明,随着APAP剂量的增加,细胞发生凋亡的趋势越明显;给予JNK抑制剂后,细胞凋亡现象明显减少。[结论]以上结果表明,在APAP诱导的急性肝损伤中,JNK信号通路被激活,应用JNK抑制剂可以降低JNK信号通路相关蛋白的磷酸化,增加肝脏中GSTA1的表达量,减轻APAP引起的肝组织损伤和肝细胞凋亡。

关键词： GSTA1 JNK信号通路药物性肝损伤醋氨酚

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白藜芦醇对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎机制研究

白藜芦醇对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：童文芝殷中琼四川农业大学动物医学院天然药物研究中心

[目的]白藜芦醇(Resveratrol,RSV)是一种具有多种生物活性的天然多酚类物质,前期体内研究表明,白藜芦醇通过影响大鼠肝、肺组织内TLR4/NF-κBp65/MAPKs通路的信号级联作用,调控相关基因IKBα、P38、JNK等的转录与表达,最终调节炎症因子... 详细信息

[目的]白藜芦醇(Resveratrol,RSV)是一种具有多种生物活性的天然多酚类物质,前期体内研究表明,白藜芦醇通过影响大鼠肝、肺组织内TLR4/NF-κBp65/MAPKs通路的信号级联作用,调控相关基因IKBα、P38、JNK等的转录与表达,最终调节炎症因子释放与表达发挥抗炎活性。本文在细胞水平,研究白藜芦醇对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症TLR4-NF-κB/MAPKs/IRF3通路信号转导的影响,阐明白藜芦醇发挥抗炎作用与炎症因子分泌之间的关系,揭示白藜芦醇对LPS诱导RAW264.7细胞炎症损伤的保护作用机制。[方法]培养RAW264.7细胞,分别采用CCK-8法、ELISA法检测不同浓度LPS、白藜芦醇对RAW264.7细胞活性及炎性介质TNF-α、IL-6分泌的影响,确定合适的造模方法及白藜芦醇使用浓度;运用Western blot实验技术和RT-PCR技术,检测不同浓度白藜芦醇处理后通路相关蛋白IkBα、p65、P38、JNK、ERK1/2、IRF3、TLR4的表达情况及基因TLR4、MyD88和TRAM转录情况;检测经通路抑制剂BAY11-7082、SB203580、SP600125和白藜芦醇处理后,通路中相关蛋白IkBα、p65、P38、JNK表达情况;运用RT-PCR、ELISA实验技术检测RAW264.7细胞中相关炎症因子IL-8、IL-6、IL-10、IFN-β、TNF-αmRNA的表达及分泌情况。[结果]采用加入500ng/ml LPS与RAW264.7细胞共同作用12h的方法制造细胞炎症模型;白藜芦醇可降低因LPS诱导刺激的NF-κB/MAPKs/IRF3信号通路下游相关蛋白IκBα、p65、P38、JNK、ERK1/2、IRF3磷酸化水平的升高;白藜芦醇可下调TLR4蛋白的表达,抑制TLR4、MyD88和TRAM mRNA的转录;白藜芦醇与NF-κB、MAPKs信号通路抑制剂均显著下调炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-βmRNA的表达,上调抗炎因子IL-10 mRNA的表达;白藜芦醇与NF-κB、MAPKs信号通路抑制剂均可显著抑制LPS刺激引起的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β分泌,明显提高抗炎因子IL-10的释放。[结论]白藜芦醇通过影响TLR4、MyD88、TRAM mRNA转录和TLR4蛋白质的翻译抑制TLR4信号通路的激活,进一步通过TLR4-NF-κB/MAPKs/IRF3信号级联作用,抑制通路中相关蛋白IkBα、p65、P38、JNK、ERK1/2、IRF3磷酸化水平,最终调控炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β和IL-10的释放发挥炎症损伤保护作用。

关键词：白藜芦醇炎症脂多糖信号通路

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醋氨酚致肝细胞损伤中抑制JNK后对GSTA1表达的调节作用

醋氨酚致肝细胞损伤中抑制JNK后对GSTA1表达的调节作用

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：常轶聪刘芳萍东北农业大学动物医学学院

[目的]本文旨在醋氨酚(APAP)诱导的不同程度肝细胞损伤模型中,通过JNK抑制剂SP600125(SP)抑制JNK活化的情况下对谷胱甘肽S转移酶A1 (GSTA1)的影响,确定JNK对GSTA1的调节作用,为进一步认识药物性肝损伤的机制及保护机制奠定理论基础。[方... 详细信息

[目的]本文旨在醋氨酚(APAP)诱导的不同程度肝细胞损伤模型中,通过JNK抑制剂SP600125(SP)抑制JNK活化的情况下对谷胱甘肽S转移酶A1 (GSTA1)的影响,确定JNK对GSTA1的调节作用,为进一步认识药物性肝损伤的机制及保护机制奠定理论基础。[方法]将肝细胞分为六组,即对照组、APAP模型组、SP低浓度+APAP组、SP中浓度+APAP组、SP高浓度+APAP组、SP高浓度组。通过检测上清液中转氨酶(ALT、AST)活性,确定SP的最适作用浓度。随后,将肝细胞分为五组,即对照组、APAP低浓度组、SP+APAP低浓度组、APAP高浓度组、SP+APAP高浓度组。检测上清液中ALT、AST活性,细胞中肝氧化应激指标SOD、GSH-Px活性和MDA、GSH含量;采用Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡;应用Western Blot方法检测细胞中JNK、p-JNK、JNK下游蛋白及其磷酸化水平(c-jun、p-c-jun、c-fos、p-c-fos)、JNK上游蛋白及其磷酸化水平(ASK1、p-ASK1、MKK4、p-MKK4)和GSTA1蛋白的相对表达。[结果]与对照组相比,APAP低浓度组的各指标均出现显著性变化(p<0.05),APAP高浓度组出现极显著性变化(p<0.01),APAP低高浓度组GSTA1蛋白表达量均呈极显著降低(p<0.01),凋亡细胞明显增多,JNK及其上下游磷酸化程度均呈极显著升高(p<0.01)。与APAP低高浓度组相比,SP+APAP低浓度组ALT和AST活性均显著降低(p<0.05),细胞中MDA、SOD、GSH和GSH-Px水平均显著改变(p<0.05),SP+APAP高浓度组ALT和AST活性均极显著降低(p<0.01),细胞中MDA、SOD、GSH和GSH-Px水平均极显著改变(p<0.01);SP+APAP低浓度组和SP+APAP高浓度组GSTA1蛋白表达均极显著升高(p<0.01);凋亡细胞均明显减少;JNK及其下游蛋白磷酸化程度均极显著降低(p<0.01);JNK上游蛋白磷酸化程度无明显变化。[结论]以上结果表明,SP可以减轻APAP诱导的不同程度的肝细胞损伤和氧化应激,并且JNK活化被SP抑制时,下游底物c-jun的磷酸化程度降低,肝细胞中GSTA1的表达量提高。确定JNK信号通路在APAP诱导的肝细胞损伤中被激活,JNK信号通路参与调节药物性肝细胞损伤中GSTA1的表达。

关键词： JNK信号通路 GSTA1 药物性肝损伤醋氨酚肝细胞

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抗磺胺间二甲氧嘧啶单域抗体的抗体库的构建及初步鉴定

抗磺胺间二甲氧嘧啶单域抗体的抗体库的构建及初步鉴定

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：张齐贺东阳米克热木·沙衣布扎提张小莺新疆农业大学动物医学学院 University of Guelph

[目的]运用噬菌体展示技术构建驼源抗磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)特异性单域抗体的抗体库并进行初步鉴定。[方法]以磺胺间二甲氧嘧啶-牛血清白蛋白(SDM-BSA)为免疫原对双峰驼进行免疫,酶联免疫吸附实验(ELISA)监测抗血清效价,从免疫骆驼外周... 详细信息

[目的]运用噬菌体展示技术构建驼源抗磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)特异性单域抗体的抗体库并进行初步鉴定。[方法]以磺胺间二甲氧嘧啶-牛血清白蛋白(SDM-BSA)为免疫原对双峰驼进行免疫,酶联免疫吸附实验(ELISA)监测抗血清效价,从免疫骆驼外周血分离出具有免疫应答信息的淋巴细胞,提取总RNA后经逆转录制备cDNA,以cDNA为模板,进行两轮巢式PCR,获得目的基因片段,将其克隆至噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7超感染后回收全部重组噬菌体,构建噬菌体抗体库。以磺胺间二甲氧嘧啶-卵清白蛋白(SDM-OVA)作为抗原进行亲和筛选,经过4轮筛选,富集特异性结合SDM噬菌体抗体。ELISA鉴定每一轮筛选后的总噬菌体,Phage ELISA筛选阳性克隆,进行DNA测序,然后将抗体序列与NCBI数据库中抗体序列进行比对分析,确定其骨架区和可变区。以阳性克隆作为模板,扩增目的基因片段,克隆到表达载体pET-28a上,构建表达载体。重组载体转化BL21 (DE3)表达菌并通过优化实现单域抗体的大量表达。SDS-PAGE鉴定抗体表达结果,然后再用ELISA鉴定与SDM的结合活性。[结果]构建了库容为1.08×10～8的抗SDM的噬菌体抗体库,基因插入率为97.14%(34/35),用SDM-OVA作为抗原筛选抗体,获得了4株与SDM特异性结合的阳性克隆,分别是V1、V3、V6、V8。阳性克隆进行DNA测序后在NCBI数据库中进行分析比对,结果显示4株克隆序列各不相同。4株阳性克隆载体构建成功,并在BL21细胞表达。表达的细胞上清经ELISA鉴定,4个抗体均得到表达,V3、V8具有较好的结合活性。SDS-PAGE鉴定,抗体在上清中大量表达。[结论]成功构建了抗SDM噬菌体抗体库,筛选到4株与SDM特异性结合的抗体。抗体序列通过BL21细胞进行全抗体表达,抗体表达量高,抗体活性需要进一步验证。本研究对抗SDM单域抗体噬菌体库的建立和筛选进行了各方面的探索,为后续磺胺类药物残留检测试剂盒的研发提供参考和借鉴。

关键词：磺胺间二甲氧嘧啶(SDM) 噬菌体展示技术单域抗体

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envZ/ompR二元调节系统参与嗜水气单胞菌耐粘菌素耐机制的研究

envZ/ompR二元调节系统参与嗜水气单胞菌耐粘菌素耐机制的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：刘俊琦肖纲孙志良湖南农业大学动物医学院湖南省兽药工程技术研究中心

[目的]笔者已证实一种全新基因型ST516的嗜水气单胞菌WCX23对冷血动物和哺乳动物具有非常高的致病力,在当前缺乏疫苗预防的养殖背景下,药物治疗已成为防治该致病菌的主要措施。MIC test strip表明该菌对粘菌素敏感,然而目前国内外关于... 详细信息

[目的]笔者已证实一种全新基因型ST516的嗜水气单胞菌WCX23对冷血动物和哺乳动物具有非常高的致病力,在当前缺乏疫苗预防的养殖背景下,药物治疗已成为防治该致病菌的主要措施。MIC test strip表明该菌对粘菌素敏感,然而目前国内外关于嗜水气单胞菌耐粘菌素的耐药机制研究甚少。本研究旨在探索,在药物选择压力下嗜水气单胞菌获得高水平粘菌素耐药的机制,从而打破该领域研究空白,为日后嗜水气单胞菌耐药机制的研究和药物防控奠定了重要的研究基础。[方法]体外诱导具有粘菌素抗性的耐药菌;透射电镜观察细菌结构变化;WCX23全基因测序和23-C-23重测序分析;WCX23和23-C-23转录组学研究;MCR基因的鉴定;envZ/ompR基因的敲除和回补。[结果]运用体外药物诱导方法,将粘菌素敏感性的WCX23 (colistin MIC=1μg/mL)诱导为粘菌素高水平耐药菌23-C-23 (colistin MIC=256μg/mL)。透射电镜表明细菌结构未发生明显变化。WCX23和23-C-23携带了mcr-3-like基因,但该基因不具有粘菌素抗性特性。转录组分析显示23-C-23较WCX23有4823个基因出现差异表达,其中100个基因表达差异显著,arnDTEF操纵子上调明显。细菌丙酮酸代谢和甘油酯代谢下调显著,细菌生长代谢较慢,该结果表明耐药菌存在较严重的生物学代价,以适应外界药物不利的生长环境。测序分析表明23-C-23菌株与亲本菌株相比,共有3个基因发生突变:mlaF出现非同义突变(D173A);aceE出现翻译提前终止(Q93X);hypothetical protein出现蛋白翻译异常延伸(X48H),然而这些突变并不能引起细菌的高耐药。对耐药菌23-C-23的envZ/ompR基因进行敲除,结果显示敲除菌株的耐药性明显减低(colistin MIC=8μg/mL),随后对敲除菌株进行envZ/ompR回补,回补菌的colistin MIC值又升至256μg/mL。[结论]嗜水气单胞菌在药物的环境中,通过降低脂类代谢以适应不利于其生长的环境。此外研究表明耐药菌细胞结构并未发生改变,基因突变也未引起耐药性的升高,细菌中不存在mcr基因,这些结果暗示着嗜水气单胞菌可能存在全新的耐药机制。本研究首次证实了envZ/ompR二元调节系统不仅参与嗜水气单胞菌耐粘菌素,而且在耐药过程中起着重要作用。

关键词：嗜水气单胞菌粘菌素 envZ/ompR

来源：评论

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携带optrA/vanG的耐利奈唑胺/万古霉素猪链球菌的基因元件分析

携带optrA/vanG的耐利奈唑胺/万古霉素猪链球菌的基因元件分析

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：黄金虎杜凡姝吕茜段锻王丽平南京农业大学动物医学院

[目的]利奈唑胺和万古霉素是治疗多重耐药革兰阳性菌感染的最后防线药物。同时对利奈唑胺和万古霉素耐药的革兰阳性菌的出现对公众健康构成严重威胁。本研究旨在检测猪链球菌中利奈唑胺耐药基因和万古霉素耐药基因的流行情况,重点研究... 详细信息

[目的]利奈唑胺和万古霉素是治疗多重耐药革兰阳性菌感染的最后防线药物。同时对利奈唑胺和万古霉素耐药的革兰阳性菌的出现对公众健康构成严重威胁。本研究旨在检测猪链球菌中利奈唑胺耐药基因和万古霉素耐药基因的流行情况,重点研究了同时携带optrA和vanG的利奈唑胺和万古霉素耐药猪链球菌中的基因元件。[方法]采用PCR方法检测了猪链球菌中与利奈唑胺和万古霉素耐药相关的基因vanA-vanG、cfr,、cfr（B）、cfr（C）、optrA和poxtA的流行情况;微量肉汤稀释法测定了optrA和vanG阳性猪链球菌对18种抗菌药物的敏感性;WGS测定菌株的全序列;滤膜接合试验测定optrA和vanG的可转移性;反向PCR方法检测optrA环状中间体;万古霉素耐药表型试验及vanG转录试验验证vanG的可诱导性;斑马鱼实验确定菌株的毒力。[结果]本研究在2个猪场检测到3株猪链球菌同时携带optrA和vanG,并且该菌株对青霉素、恩诺沙星、麻保沙星、庆大霉素、链霉素、卡那霉素、四环素、红霉素、替米考辛、林可霉素、克林霉素、氯霉素和氟苯尼考共13种抗菌药物耐药。对其中1株菌YSJ17进行全基因组测序并分析了其携带的可移动元件,结果显示该菌株存在一个ICE元件ICESsuYSJ17和前噬菌体元件ΦSsuYSJ17-3,其中ICESsuYSJ17上携带vanG、erm（B）、tet（O/W/32/O）以及aadE-apt-sat4-aphA3簇,而ΦSsuYSJ17-3上携带erm（B）、aphA3、aac（6'）-aph（2"）、cat以及optrA,另外ΦSsuYSJ17-3中还存在一个新型转座元件IS1216E-araC-optrA-hp-cat-IS1216E,可以从染色体上切除出来。万古霉素耐药表型试验及vanG转录试验证实vanG操纵子具有可诱导性。斑马鱼试验证实菌株YSJ17具有中等毒力。[结论]本研究首次报道同时携带optrA和vanG的利奈唑胺和万古霉素耐药猪链球菌。由于猪链球菌已被认为是主要链球菌病原体耐药基因传播的储存库,因此猪链球菌中optrA和vanG有向其他链球菌传播的潜在风险,应加强监测。

关键词： optrA vanG 猪链球菌噁唑烷酮耐药万古霉素耐药

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肠道菌群通过IL-17A/GM-CSF信号抵抗鸡毒支原体感染的研究

肠道菌群通过IL-17A/GM-CSF信号抵抗鸡毒支原体感染的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：王剑 Ishfaq Muhammad 吴志勇李继昌东北农业大学动物医学学院

[目的]鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是引起鸡慢性呼吸道疾病的病原体,该病发展缓慢,病程较长,给养殖户带来巨大经济损失。肠道菌群被认为是机体健康的"晴雨表",肠道菌群如何抵抗肠道感染已有大量研究,然而肠道菌... 详细信息

[目的]鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是引起鸡慢性呼吸道疾病的病原体,该病发展缓慢,病程较长,给养殖户带来巨大经济损失。肠道菌群被认为是机体健康的"晴雨表",肠道菌群如何抵抗肠道感染已有大量研究,然而肠道菌群如何防御肠外感染的研究则相对有限。本研究主要探索肠道菌群对于MG感染的影响及机制。[方法]将60只鸡随机分为MG感染组(A组)、消除肠道菌群+MG感染组(B组)和消除肠道菌群+粪菌移植+MG感染组(C组),每组20只。A组左侧气囊接种MG;B组首先通过饲喂21 d含有4种抗生素的饮水消除肠道菌群,然后左侧气囊接种MG。C组首先通过饲喂21 d含有4种抗生素的饮水消除肠道菌群,然后接受正常鸡的肠道菌群移植,再左侧气囊接种MG。饲喂抗生素饮水21 d后和粪菌移植后收集粪便,进行16S rDNA测序;在MG接种后24h和48 h收集肺脏,通过实时荧光定量PCR法检测肺脏MG定值量;同时通过ELISA法检测炎性相关因子(IL-17A、GM-CSF、CXCL1和CXCL2)含量;使用IL-17A或GM-CSF重组蛋白、中和抗体增加或降低肺部炎性相关因子(IL-17A、GM-CSF、CXCL1和CXCL2)含量,进一步评价肠道菌群对于MG感染的影响及机制。[结果] 16S rDNA测序结果表明饲喂21 d含有4种抗生素的饮水后,肠道菌群多样性及丰度显著降低;对消除肠道菌群的鸡进行粪菌移植后,肠道菌群组成趋向于恢复正常。相较于A组,B组肺脏MG定值量显著增高,炎性相关因子IL-17A、GM-CSF、CXCL1和CXCL2显著降低(p<0.01);相较于B组,C组肺脏MG定值量显著降低(p<0.01),炎性相关因子IL-17A、GM-CSF、CXCL1和CXCL2显著增高(p<0.01)。B组通过使用重组蛋白增加IL-17A或GM-CSF含量后,肺脏MG定值量显著降低(p<0.01);C组通过使用中和抗体降低IL-17A或GM-CSF含量后肺脏MG定值量显著增高(p<0.01),而增加或降低CXCL1、CXCL2对肺MG定值量无影响(p>0.05)。[结论]消除肠道菌群可促进MG在感染鸡肺脏的定值,肠道菌群可通过IL-17A/GM-CSF信号抵抗鸡毒支原体感染。

关键词：肠道菌群鸡毒支原体 IL-17A GM-CSF

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双氯芬酸钠注射液治疗奶牛临床型乳房炎临床试验

双氯芬酸钠注射液治疗奶牛临床型乳房炎临床试验

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：李世宏孔晓军秦哲杨亚军刘希望李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室

[目的]目前奶牛临床型乳房炎的治疗主要还是以抗生素为主,但是抗生素残留、细菌耐药性等问题也日渐凸出。应用抗生素类药配合抗炎药以控制炎症,可迅速缓解患牛临床症状,同时减少抗生素使用量成为治疗奶牛乳房炎的新思路和新策略。双氯... 详细信息

[目的]目前奶牛临床型乳房炎的治疗主要还是以抗生素为主,但是抗生素残留、细菌耐药性等问题也日渐凸出。应用抗生素类药配合抗炎药以控制炎症,可迅速缓解患牛临床症状,同时减少抗生素使用量成为治疗奶牛乳房炎的新思路和新策略。双氯芬酸钠注射液是由郑州百瑞动物药业有限公司联合中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所等研制的用于辅助治疗奶牛临床型乳房炎的新制剂。中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所于2017年3月1日至2017年4月30日在甘肃荷斯坦奶牛繁育示范中心进行了双氯芬酸钠注射液防治奶牛临床型乳房炎临床扩大试验以确定其疗效。[方法]将挑选的试验奶牛40头分为试验组和对照组,每组20头。试验组给予双氯芬酸钠注射液和注射用头孢噻呋钠;对照组仅用注射用头孢噻呋钠。2组试验奶牛在相同条件下饲喂,日粮完全一样。在给药前和给药后的24小时,记录各试验组奶牛的食欲、乳房、乳汁、直肠体温等临床症状。分别于用药前、第3次给药后24 h无菌采集单个患病乳区奶样约50 mL于灭菌奶样管中,标明牛号、乳区和时间,置冰盒送达实验室,检测牛奶体细胞计数。各试验组分别于用药前、用药后第1d和第3d分别测定试验奶牛直肠体温。[结果]给药前,各组试验奶牛均表现明显的临床型乳房炎症状,停药后至转至健康群期间,试验奶牛乳汁和乳房逐渐恢复正常。双氯芬酸钠注射液具有明显的快速降温解热作用。对患临床型乳房炎试验奶牛给予双氯芬酸钠注射液配合用头孢噻呋钠使用较单独使用头孢噻呋钠更能显著降低试验牛乳中的SCC,从而降低炎性细胞消除炎症,促进试验病牛快速恢复。双氯芬酸钠注射液配合使用注射用头孢噻呋钠辅助治疗奶牛临床型乳房炎较仅使用注射用头孢噻呋钠疗效更加显著。[结论]抗炎药物双氯芬酸钠注射液配合抗生素辅助治疗奶牛临床型乳房炎,其疗效优于单独使用抗生素治疗,且其疗程也大大缩短。总之,双氯芬酸钠注射液配合注射用头孢噻呋钠辅助治疗奶牛临床型乳房炎,具有快速解热、疗程短及给药方便等特点,从而减少抗生素的用量而降低细菌耐药性和药物残留,值得应用与推广研究。

关键词：双氯芬酸钠治疗奶牛乳房炎

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