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744 篇 会议

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4 篇 管理学
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- 1 篇 管理科学与工程(可...
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2 篇 教育学
- 2 篇 教育学

主题

45 篇 耐药性
37 篇 大肠杆菌
23 篇 氟苯尼考
19 篇 氧化应激
18 篇 耐药基因
18 篇 猪
16 篇 残留
15 篇 药代动力学
12 篇 药动学
12 篇 残留检测
11 篇 金黄色葡萄球菌
11 篇 黏菌素
11 篇 多重耐药
10 篇 mic
10 篇 生物被膜
9 篇 nf-κb
9 篇 副猪嗜血杆菌
9 篇 hplc
9 篇 肠球菌
9 篇 头孢喹肟

机构

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96 篇 华南农业大学
57 篇 南京农业大学
43 篇 吉林大学
39 篇 扬州大学
36 篇 东北农业大学
29 篇 新疆农业大学
23 篇 四川农业大学
18 篇 广西大学
17 篇 青岛农业大学
17 篇 福建农林大学
17 篇 中国农业科学院兰...
14 篇 湖南农业大学
13 篇 沈阳农业大学
13 篇 华中农业大学
12 篇 内蒙古农业大学
10 篇 北京食品营养与人...
10 篇 西北农林科技大学
10 篇 河南农业大学
10 篇 中国农业科学院兰...

作者

49 篇 邓旭明
29 篇 刘雅红
29 篇 袁宗辉
28 篇 李剑勇
27 篇 杨亚军
27 篇 沈建忠
27 篇 江善祥
26 篇 廖晓萍
26 篇 孙坚
26 篇 卜仕金
25 篇 刘希望
23 篇 王丽平
22 篇 汤树生
22 篇 秦哲
22 篇 曾振灵
22 篇 李世宏
21 篇 汪洋
19 篇 季辉
18 篇 肖希龙
17 篇 王战辉

语言

739 篇 中文
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宠物源肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行性分布及其分子传播机制研究

宠物源肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行性分布及其分子传播机...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：邹梦婷孙坚廖晓萍刘雅红华南农业大学兽医学院/广东省兽药研制与安全评价重点实验室

【目的】:研究2008-2012年间从广东省宠物医院分离的肠杆菌中氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶基因的流行分布情况及其分子传播机制。【方法】使用MALDI TOF质谱鉴定2008-2012年收集的381株肠杆菌,按照美国临床实验室标准委员... 详细信息

【目的】:研究2008-2012年间从广东省宠物医院分离的肠杆菌中氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶基因的流行分布情况及其分子传播机制。【方法】使用MALDI TOF质谱鉴定2008-2012年收集的381株肠杆菌,按照美国临床实验室标准委员会(CLSI)推荐的琼脂稀释法测定所有菌株对常用的14种抗菌药的敏感性,对显示阿米卡星耐药的菌株采用PCR方法检测16S rRNA甲基化酶RmtA、RmtB、RmtC、RmtD、RmtE、RmtF、RmtG、RmtH、ArmA及npmA基因,采用脉冲场凝胶电泳方法(PFGE)分析携带16Sr RNA甲基化酶基因的阳性菌株垂直传播情况,通过接合转移、S1-PFGE以及southern杂交等实验分析携带16S rRNA甲基化酶基因阳性菌株的水平传播情况。【结果】381株宠物源肠杆菌中包括大肠杆菌343株,肺炎克雷伯菌30株,奇异变形杆菌6株,阴沟肠杆菌2株。98株(25.7%)对阿米卡星耐药的菌株中,大肠杆菌83株,肺炎克雷伯菌12株,奇异变形杆菌2株,阴沟肠杆菌1株。仅检测到rmtB和annA两种基因,72株rmtB阳性,检测率为18.9%,6株armA阳性,检测率为1.5%,另外有2株同时携带rmtB、annA两种基因。PFGE分型表明阳性菌株之间亲缘关系较远,无克隆传播现象。S1-PFGE及southern杂交实验表明rmtB基因位于多种大小质粒上。【结论】16S rRNA甲基化酶基因广泛存在于我国宠物源肠杆菌中,含有16S rRNA甲基化酶基因的可接合质粒可能在人与宠物之间水平传播,我们应该加强对宠物源细菌耐药性的监测。

关键词：宠物源 rmtB armA 肠杆菌传播机制

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动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行传播机制研究

动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行传播机制研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张文慧任思琪林香燕曾振灵蒋红霞华南农业大学兽医学院

【目的】研究动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行及传播分子特征。【方法】2014年2-9月,从河南,山东,湖北,广东四省共采集3850份猪和鸡直肠拭子和粪便拭子,共分离鉴定得到159株沙门氏菌,其中包括猪源90株,鸡源69株。采用泰国沙门菌菌... 详细信息

【目的】研究动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行及传播分子特征。【方法】2014年2-9月,从河南,山东,湖北,广东四省共采集3850份猪和鸡直肠拭子和粪便拭子,共分离鉴定得到159株沙门氏菌,其中包括猪源90株,鸡源69株。采用泰国沙门菌菌属诊断血清对分离到的沙门菌进行血清型鉴定,采用琼脂稀释法测定菌株对抗生素的敏感性,用PCR扩增ESBIs耐药基因。脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株克隆关系。接合转移/转化、质粒复制子分型、S1..PFGE和Southern杂交对bla基因的质粒进行分析。【结果】159株沙门菌的血清型鉴定表明主要的血清型是鼠伤寒（91株）和印第安纳（57株）,检测到肠炎沙门菌1株,剩余10株没有鉴定出血清型。药物敏感性试验表明沙门菌多重耐药现象比较严重,对头孢类的耐药率由头孢曲松的86.5%到头孢他定的31%不等。成功分型150株菌的PFGE得到47种不同的谱型,同一地区或不同地区的同一血清型的沙门菌图谱相似度很高,存在克隆传播。产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶沙门氏菌共有45株,包括bla3个亚型,其中以bla最为流行（35,77.8%）;其次是blacrx.1M-27（8,17.7%）,检测到产CMY--2沙门菌3株,其中有一株同时产CTX-27和CMY-2酶。没有检测到bla,bla,bla等基因。45株产CTX-M沙门菌,有36株发生了bla基因的转移,质粒分析表明,产CTX沙门菌质粒复制子类型主要为P型,N型和H12型,质粒大小有50kb到220kb不等,以135kb为主。【结论】产CTX-M沙门菌株的克隆传播和质粒介导的水平传播导致沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的广泛传播,同时使沙门菌的多重耐药日益严重,应引起广泛关注。

关键词： ESBLs 沙门菌 CTX-M

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食品动物源沙门菌中fOSA3流行分布及其传播特征

食品动物源沙门菌中fOSA3流行分布及其传播特征

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张文慧谷茜茜蒋红霞曾振灵华南农业大学兽医学院

【目的】研究食品动物源沙门菌中磷霉素耐药基因fosA的流行与传播特征。【方法】从实验室保存的288株沙门菌中用PCR扩增磷霉素耐药基因fosA,fosA,fosC,阳性菌株用琼脂稀释法测定菌株对抗生素的敏感性,PCR检测其他相关耐药基因,脉冲场凝... 详细信息

【目的】研究食品动物源沙门菌中磷霉素耐药基因fosA的流行与传播特征。【方法】从实验室保存的288株沙门菌中用PCR扩增磷霉素耐药基因fosA,fosA,fosC,阳性菌株用琼脂稀释法测定菌株对抗生素的敏感性,PCR检测其他相关耐药基因,脉冲场凝胶电泳（PFGE）和多位点序列分型（MLST）分析菌株间的克隆关系。接合转移/转化、复制子分型、S1-PFGE和杂交进行质粒分析。【结果】从288株沙门菌中筛选得到5株（1.7%）fosA阳性菌,没有检测到fosA,fosC。5株阳性菌均为多重耐药菌株,对磷霉素,环丙沙星,恩诺沙星,萘啶酸,氯霉素,头孢噻呋,头孢噻肟,头孢曲松等都耐药,对头孢他啶,头孢西丁,阿米卡星敏感。5株菌中都扩到了bla基因,均为bla(其中bla有4株,bla有1株)。5株菌有3株是来自同一地方鼠伤寒沙门菌,2株为来自不同地方的印第安纳沙门菌。PFGE结果显示3株鼠伤寒沙门菌图谱相同,另外2株印第安纳沙门菌虽分离自不同地方,但图谱也极为相似,说明存在菌株间的克隆传播。MLST分型结果表明5株菌全部为ST17型。5株菌全部成功接合转移,对质粒分析结果显示fosA和bla基因位于同一IncN或IncA/C质粒上,大小约为130kb。【结论】本研究对动物源沙门菌磷霉素耐药基因进行研究,并首次在不同地方的鸡直肠拭子分离得到的5株ST17沙门菌中发现了fosA基因;fosA阳性菌株不仅存在克隆传播,而且fosA与bla基因可以通过IncN型或IncA/C型的可接合性质粒协同进行传播扩散。磷霉素作为人医临床用药,其耐药性可以随头孢类药物的选择压力而在动物源沙门菌中传播,因此应当广泛密切的关注磷霉素耐药基因的传播趋势。

关键词：沙门菌 fosA3 blaCTX-M

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恩诺沙星和氟苯尼考治疗对oqxAB的传播以及肠道内微生物的影响

恩诺沙星和氟苯尼考治疗对oqxAB的传播以及肠道内微生物的影响

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陈奕刘雅红华南农业大学兽医学院

(目的)多耐药细菌的发生率逐年增加,减弱了当前可用的抗菌剂疗效,增加了治疗费用和临床失败率。本实验通过口服攻毒携带编码多耐药外排泵基因oqxAB的质粒(pHXY0908)的鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 14028-pHXY0908),研究该基因及携带该基因的质... 详细信息

(目的)多耐药细菌的发生率逐年增加,减弱了当前可用的抗菌剂疗效,增加了治疗费用和临床失败率。本实验通过口服攻毒携带编码多耐药外排泵基因oqxAB的质粒(pHXY0908)的鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 14028-pHXY0908),研究该基因及携带该基因的质粒在鸡的胃肠道内大肠杆菌中的扩散转移情况,以期为治疗耐药菌的散播提供参考数据。(方法)小鸡人工感染沙门氏菌后分为三组,其中两组为给药组,分别给予推荐剂量的恩诺沙星和氟苯尼考进行治疗,连续5天。第三组为感染不给药组,作为对照。通过PCR,接合转移,PFGE,RFLP以及qPCR等实验来检测携带oqxAB的质粒的大肠杆菌分离情况以及菌株的亲缘关系,以及给药之后肠道菌群的变化。(结果)从给药组和对照组小鸡分离得到的大肠杆菌均获得了含有oqxAB的质粒,其中氟苯尼考给药组,oqxAB阳性的大肠杆菌总的分离率和出现的频率显著高于对照组。将粪便中分离得到的携带oqxAB的质粒的大肠杆菌作为供体菌,在体外再进行接合转移,发现新获得的结合子耐药表型与攻毒的菌株相似,且携带的oqxAB阳性质粒与攻毒的沙门氏菌含有的质粒(pHXY0908)限制性酶切图谱一致。PFGE分析表明oqxAB阳性的大肠杆菌呈现多种谱型,其中三种谱型占主导。MLST分析表明它们均属于ST533型。通过荧光定量PCR分析粪便DNA发现给予抗生素能够维持高水平的oqxAB基因排泄量,且这种效果能够持续到治疗结束后12天。给药后肠道菌群变化迅速,其中乳酸杆菌和大肠杆菌变化较明显。(结论)本研究首次表明了oqxAB基因可以在胃肠道微生物之间进行传播,给予临床治疗剂量的恩诺沙星和氟苯尼考能够增加对促进oqxAB的转移,扩大耐药基因库。同时特殊的ST型可能与oqxAB在体内的扩散密切相关。

关键词： oqxAB 鼠伤寒沙门氏菌 PFLR PFGE qPCR

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UPLC-MS/MS法检测黄鳝中氯霉素类药物残留

UPLC-MS/MS法检测黄鳝中氯霉素类药物残留

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张伟郭大伟彭麟季辉阮祥春高修歌郑亚妮李娇娇仇亚伟江善祥南京农业大学动物医学院

(目的)本研究旨在建立黄鳝中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法。（方法）准确称取2.00 g黄鳝肌肉样品,加入无水硫酸钠、氯化钠后加入10 mL碱性乙酸乙酯作为提取溶剂。重复提取一次后合并两... 详细信息

(目的)本研究旨在建立黄鳝中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法。（方法）准确称取2.00 g黄鳝肌肉样品,加入无水硫酸钠、氯化钠后加入10 mL碱性乙酸乙酯作为提取溶剂。重复提取一次后合并两次提取液,于45℃水浴中氮吹至干。4 mL5%甲醇溶液复溶,再加4 mL正己烷（5%甲醇溶液饱和）除脂。重复除脂一次,弃去上层有机相,下层水相过0.22μm滤膜,进样检测。其中流动相为乙腈和水,梯度洗脱。药物的监测模式采用负离子多反应监测。氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的监测母离子分子量分别为m/z 321、354和356,m/z 152、257,m/z 185、290和m/z 336、185的子离子分别用于三种药物的定性和定量分析。内标采用d-氯霉素、d-甲砜霉素和d-氟苯尼考。（结果）结果显示,氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考在0.5～50μg·L添加水平内线性良好,检测限为0.1μg·kg,定量限为0.3μg·kg。氯霉素在0.3、0.45和0.6μg·kg添加水平回收率为92.83%11.26%;甲砜霉素在25、50和75μ***-1添加水平回收率为86.76%07.30%;氟苯尼考在50、100和150μg·kg添加水平回收率为96.21%04.14%。本方法对三种药物的平均提取回收率在86.76%11.26%范围内,日内精密度为2.16%3.66%,日间精密度为1.42%.06%。（结论）本方法精密度高,重现性好,操作简单快速。同时该方法有效填补了黄鳝中氯霉素类药物的多残留检测的空白,为黄鳝中残留监测提供可靠方法依据。

关键词： UPLC-MS/MS 氯霉素甲砜霉素氟苯尼考黄鳝

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冻干马抗H7N9精制抗体F（ab′）2的急性毒性和溶血性试验

冻干马抗H7N9精制抗体F（ab′）2的急性毒性和溶血性试验

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：吴永魁李乾学董晓琳赵永坤军事医学科学院军事兽医研究所

【目的】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）是H7N9禽流感治疗性中和抗体,为评价其临床用药的安全性,进行了小鼠急性毒性试验和对兔红细胞的溶血性试验。【方法】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）单次腹腔注射分别给予昆明种小鼠和BALB/... 详细信息

【目的】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）是H7N9禽流感治疗性中和抗体,为评价其临床用药的安全性,进行了小鼠急性毒性试验和对兔红细胞的溶血性试验。【方法】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）单次腹腔注射分别给予昆明种小鼠和BALB/c小鼠,给药容量为0.2mL/10g体重,给药剂量为300mg/kg,对照组腹腔注射等容量的生理盐水。每组10只小鼠,雌雄各半,药后连续观察14d,考察其对小鼠的急性毒性;采用体外试管法,浓度为15.0mg/mL的冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）按不同容量（0.1mL.5mL）加入已有不同容量（2.0mL.4mL）生理盐水和2.5mL的2%红细胞混悬液的玻璃试管中,同时以氯化钠注射液和注射用水分别作为阴性和阳性对照品,考察其对兔红细胞溶血及凝集的影响。【结果】小鼠给药后和连续14d观察,各组动物临床表现、采食量、生长发育、营养状况、对外界刺激反应均无异常改变,各组动物无死亡,大体解剖未见异常;冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）无溶血作用,不引起红细胞凝聚,氯化钠注射液阴性对照无溶血无凝聚,注射用水阳性对照全部溶血。【结论】在本试验条件下,马抗H7N9精制抗体F（ab'）对小鼠生长发育无影响,无急性中毒表现;浓度为15.0mg/mL冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）体外对兔红细胞无溶血作用,不引起红细胞凝聚。

关键词：马抗H7N9精制抗体F(ab′)2 急性毒性溶血性

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金霉素-蒙脱石载药控释系统及其肠道模拟环境中释药的评价

金霉素-蒙脱石载药控释系统及其肠道模拟环境中释药的评价

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张一鸣王勉之孙静孙永学华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全性评价重点实验室

(目的)本研究旨在制备一种金霉素缓释微球,提高金霉素在肠道的利用率,改善金霉素对断奶仔猪腹泻的防治效果。（方法）在微球制备工艺研究中,以98%盐酸金霉素为原料,蒙脱石和海藻酸钠为辅料,根据海藻酸钠与Ca的交联特性,采用锐孔液滴法... 详细信息

(目的)本研究旨在制备一种金霉素缓释微球,提高金霉素在肠道的利用率,改善金霉素对断奶仔猪腹泻的防治效果。（方法）在微球制备工艺研究中,以98%盐酸金霉素为原料,蒙脱石和海藻酸钠为辅料,根据海藻酸钠与Ca的交联特性,采用锐孔液滴法制备金霉素-蒙脱石缓释微球,并以正交实验设计对工艺进行优化。在体外释放研究中,以模拟胃肠液为释放介质,按照转篮法进行缓释微球和饲用金霉素的体外释放试验,采用高效液相色谱法（HPLC）测定金霉素累积释药量。在体内释放率研究中,选用6头健康断奶仔猪,按2周期2交叉设计原则,口服10%金霉素-蒙脱石缓释微球和20%饲用金霉素,给药剂量为10mg/kg b.w。给药后不同时间点采集仔猪血液和收集粪便,并对样品中金霉素含量进行HPLC法测定。（结果）研究结果:表明,最佳工艺制备的微球形态规整,粒径均匀,载药量为10%左右,包封率为82.58%。体外释放研究结果表明,相对于饲用金霉素,金霉素缓释微球在低pH值难以释放,高pn值时缓慢释放。血浆含量检测结果表明,在稳态水平下,金霉素缓释微球的血药浓度均在0.50～1.20μg/ml范围之间,饲用金霉素的血药浓度均在0.40-.40μg/ml之间,金霉素缓释微球的血药浓度波动较小。粪便检测结果表明,摄入金霉素缓释微球组和饲用金霉素组仔猪的金霉素原形粪便排出的总量分别是摄入量的38.69%和25.72%,两种制剂金霉素在仔猪肠道中的释放量及原形药物经粪便的排泄量比较呈极显著差异（P<0.01）。（结论）本研究制备的金霉素-蒙脱石缓释微球,具有良好的缓释性能,口服多次给药,血药浓度很快达到稳态,相比于饲用金霉素,其在肠道中的金霉素含量能够维持较高水平,对仔猪腹泻可产生更好的防治效果。

关键词：金霉素蒙脱石海藻酸钠缓释微球

来源：评论

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养殖场中不同生产阶段的猪与饲养员肠道微生物组成及相关性研究

养殖场中不同生产阶段的猪与饲养员肠道微生物组成及相关性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：黄婷孙坚廖晓萍刘雅红华南农业大学兽医学院/广东省兽药研制与安全评价重点实验室

(目的)肠道微生物是动物重要的"微生物器官",与免疫、营养、代谢等诸多生理功能紧密相关。随着近年来研究肠道微生物的方法不断进步,尤其是基于16S rDNA的分子生物学技术的迅速应用,科研工作者发现物肠道微生物多样性是受到... 详细信息

(目的)肠道微生物是动物重要的"微生物器官",与免疫、营养、代谢等诸多生理功能紧密相关。随着近年来研究肠道微生物的方法不断进步,尤其是基于16S rDNA的分子生物学技术的迅速应用,科研工作者发现物肠道微生物多样性是受到遗传、生理阶段、生活、饮食等影响。但是,在生产养殖中,不同生理阶段的猪以及与其长期接触的饲养员的肠道微生物多样性及相关性等方面仍然不甚明了,因此本研究拟开展猪与饲养员中肠道微生物菌群的多样性,以期获得它们之间的相关性。(方法)本实验室采集了育肥猪、哺乳母猪、种猪三种不同生产阶段的猪以及长期与其接触的饲养员的粪便样品,每组样品取六个平行样,利用试剂盒提取总DNA,进行16S rDNA测序,分析每个样品的微生物多样性,并进一步比较分析各个样品的微生物多样性结果,以此探讨不同生产阶段的猪和相关饲养员的肠道微生物多样性的相关性。(结果)研究结果初步显示,从多样性角度来看,不同生产阶段的猪和人的微生物组成是有明显差异的,猪肠道菌群种属丰富度高于饲养员肠道菌群;在饲养员中高丰度的主要有拟杆菌和厚壁杆菌,在猪中高丰度的主要有肠球菌、链球菌以及密螺旋体等,这些也是猪中常见的致病菌;同时在不同生产阶段的猪中发现了甲烷短杆菌——一种动物肠道中能量代谢的重要细菌以及琥珀酸弧菌在猪肠道中也比较多;猪与人之间的微生物差异也与之前文章报道吻合。(结论)人畜肠道微生物多样性之间存着紧密而有复杂的联系,深入研究两者之间的相关性是非常有必要的。

关键词：肠道微生物 16S rDNA 多样性

来源：评论

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氯霉素单链抗体表达载体的构建及两种纯化方法比较

氯霉素单链抗体表达载体的构建及两种纯化方法比较

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：谢三磊谢洁裴星瑶王旗陈敏江海洋中国农业大学动物医学院基础兽医系

【目的】从分泌氯霉素类单克隆抗体的杂交瘤细胞(2E4)中,克隆出2E4杂交瘤细胞重链和轻链可变区基因,构建抗氯霉素类药物单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。【方法】从2E4杂交瘤细胞中提取总RNA,鉴定其大小和纯度... 详细信息

【目的】从分泌氯霉素类单克隆抗体的杂交瘤细胞(2E4)中,克隆出2E4杂交瘤细胞重链和轻链可变区基因,构建抗氯霉素类药物单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。【方法】从2E4杂交瘤细胞中提取总RNA,鉴定其大小和纯度后,采取RT-PCR扩增出336 bp的VH基因和357 bp的VL基因;通过在引物上设计linker序列,引入(Gly4Ser)3柔性短肽,拼接出完整scFV基因序列。再次设计引物在单链抗体C端添加C-myc标签和6×His标签便于后续免疫学检测和蛋白纯化。将测序结果正确的scFv基因克隆在表达载体pJB33,转入感受态细胞*** RV308进行可溶性表达鉴定。使用可溶性表达蛋白周质腔提取和包涵体纯化两种方法对得到的单链抗体进行纯化,采用SDS-PAGE、Western blot和ELISA分析两种纯化方法单链抗体表达水平、特异性及与抗原结合活性。【结果】结果显示,本实验成功从分泌抗氯霉素的单克隆抗体杂交瘤细胞2E4中PCR扩增出抗体的重链和轻链可变区基因,成功构建抗氯霉素单链抗体,单链抗体基因全长819 bp,编码约273个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot结果表明,氯霉素scFv基因在大肠杆菌中表达出30KD左右的抗体,但包涵体纯化方法得到的抗体纯度较高。间接ELISA结果表明,周质腔提取和包涵体纯化得到的单链抗体与氯霉素结合活性相差不大。【结论】成功制备出抗氯霉素药物单链抗体,周质腔提取方法能在较短时间内得到活性较好氯霉素单链抗体,包涵体纯化方法得到纯度较高、活性较好的单链抗体。为进一步研究氯霉素残留检测奠定实验基础。

关键词：氯霉素单链抗体可溶性表达纯化

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TCDCA对四氯化碳所致大鼠肝损伤的保护作用

TCDCA对四氯化碳所致大鼠肝损伤的保护作用

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：何秀玲关红刘明强李培锋内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

[目的]研究牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对四氯化碳所致大鼠肝损伤的保护作用.[方法]40只大鼠随机分为5组,每组8只,正常组(10g/kg·b·w)和模型组(10g/kg·b·w)、联苯双酯滴丸组(0.2g/kg·b·w)、TCDCA高剂量组(0.2g... 详细信息

[目的]研究牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对四氯化碳所致大鼠肝损伤的保护作用.[方法]40只大鼠随机分为5组,每组8只,正常组(10g/kg·b·w)和模型组(10g/kg·b·w)、联苯双酯滴丸组(0.2g/kg·b·w)、TCDCA高剂量组(0.2g/kg·b·w C组)和低剂量组(0.1g/kg·b·w D组).除正常对照组外,其他各组大鼠均灌胃50％ CC14液体石蜡油1 mL/kg,一次性给药,正常组同法灌胃1mL/kg的液体石蜡油.正常组和模型组灌胃给等量的蒸馏水,其余各组每日1次按要求共7d灌胃给药.末次给药2h后,大鼠心脏采血,常规分离血清备用;采用分光光度法测定血清中谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、总抗氧化能力、总蛋白、血清总胆红素的含量.[结果]连续给药7d,与模型组比较,TCDCA能显著降低CC14所致大鼠急性肝损血清中AST、AKP、T-Bil含量,显著升高CC14所致大鼠急性肝损伤血清中蛋白质含量和总抗氧化能力.[结论]TCDCA有明显的保肝作用.

关键词：牛磺鹅去氧胆酸肝损伤保肝作用

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