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17 篇 福建农林大学
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13 篇 华中农业大学
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10 篇 中国农业科学院兰...

作者

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27 篇 杨亚军
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26 篇 孙坚
26 篇 卜仕金
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22 篇 秦哲
22 篇 曾振灵
22 篇 李世宏
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17 篇 王战辉

语言

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PP5/JNK/c-Jun通路介导马度米星铵对C2C12骨骼肌细胞的毒性

PP5/JNK/c-Jun通路介导马度米星铵对C2C12骨骼肌细胞的毒性

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陈新黄世乐江善祥南京农业大学动物医学院兽医药理与毒理实验室 Department of Biochemistry and Molecular Biology Louisiana State University Health Sciences CenterShreveportLouisianaUnitedStates of America

本研究旨在探讨PP5/JNK/c-Jun通路在马度米星铵(maduramicin ammonium)所致C2C12骨骼肌细胞毒性中的作用。不同浓度马度米星铵(1～1μg/mL)处理C2C12细胞24h,Westernblot检测MAPK通路相关蛋白和蛋白磷酸酶的表达量;腺病毒干扰表达显性失... 详细信息

本研究旨在探讨PP5/JNK/c-Jun通路在马度米星铵(maduramicin ammonium)所致C2C12骨骼肌细胞毒性中的作用。不同浓度马度米星铵(1～1μg/mL)处理C2C12细胞24h,Westernblot检测MAPK通路相关蛋白和蛋白磷酸酶的表达量;腺病毒干扰表达显性失活c-Jun或过表达PP5,0.5μg/mL和1μg/mL马度米星铵处理C2C12细胞24h或48h,Western blot检测相关蛋白的表达量,显微镜下观察细胞形态的变化并拍照,One solution法检测细胞活性;JNK抑制剂SP600125预处理1 h,0.5μg/mL和1μg/mL马度米星铵处理C2C12细胞48 h,显微镜下观察细胞形态的变化并拍照,One solution法检测细胞活性。结果表明,马度米星铵处理24h后,C2C12细胞中p-JNK、p-c-Jun蛋白水平升高,PP5蛋白水平降低;腺病毒干扰表达显性失活c-Jun可削弱马度米星铵对C2C12细胞的细胞毒性;过表达PP5可削弱马度米星铵对JNK和c-Jun蛋白磷酸化的激活及细胞毒性;SP600125预处理可削弱马度米星铵的细胞毒性。结果提示,马度米星铵抑制C2C12细胞PP5蛋白表达,使JNK和c-Jun磷酸化水平升高,PP5/JNK/c-Jun通路介导马度米星铵对C2C12骨骼肌细胞的毒性。

关键词：马度米星铵 PP5 JNK c-Jun 毒性

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广州流溪河沉积物反硝化细菌群落结构与环境因子相关性研究

广州流溪河沉积物反硝化细菌群落结构与环境因子相关性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：丁雪瑶王勉之孙静孙永学华南农业大学兽医学院国家兽药安全评价(环境评估)实验室(华南农大)

(目的)本文研究了广州流溪河底泥沉积物中反硝化细菌群落结构、narG和nirS基因丰度与环境因子间的相关性,为其生态系统中氮素循环研究提供了基础依据。（方法）经对流溪河流域从上至下游10个位点进行沉积物采样,进行环境因子（温度、pH... 详细信息

(目的)本文研究了广州流溪河底泥沉积物中反硝化细菌群落结构、narG和nirS基因丰度与环境因子间的相关性,为其生态系统中氮素循环研究提供了基础依据。（方法）经对流溪河流域从上至下游10个位点进行沉积物采样,进行环境因子（温度、pH、氨态氮、硝态氮、亚硝态氮、总氮、COD）理化数据测定,对narG基因和nirS基因构建文库分析并采用RT-PCR法进行了丰度研究,通过主坐标分析和冗余度分析等多变量统计分析方法研究了反硝化细菌群落结构、基因丰度与环境因子间相关性。（结果）结果显示:作为反消化作用母体物质,10个采样位点的硝态氮（NO-N）含量变化不大,而亚硝态氮（NO-N）浓度均很低;不同位点沉积物中反硝化菌群落结构表现出差异性;反硝化细菌nirS基因拷贝数范围为7.89×10～3.34×10～4 copies/g,narG基因拷贝数为5.97×10～2 copies/g.64×10～4 copies/g,nirS基因丰度变化范围为0.01%.1%,narG基因丰度变化范围为0.01%.5%;构建系统发育树发现,沉积物样品中大多数nirS基因克隆与目前已知可培养的反硝化细菌的亲缘关系较远,大部分为未被认知的微生物类群,其中已知的nirS型反硝化菌属于变形菌Alphaproteobacteria、Betaproteobacteria、Gammaproteobacteria,其中大部分属于Betaproteobacteria。（结论）研究表明:亚硝态氮（NO-N）生化因子对反硝化细菌群落结构起着决定性的作用,与环境因子的相关性大小依次表现为NO-N>TN>NH-N>COD>NO-N>pH>Temp;河流沉积物中总细菌16S rDNA基因丰度与环境因子之间无显著相关性,而nirS基因型反硝化细菌数量与NH-N和TN因子浓度之间差异极显著（P<0.01）,与NO-N因子差异显著（P<0.05）,narG基因型反硝化菌数量与NO-N因子浓度差异显著（P<0.05）,但与其它环境因子差异不显著（P>0.05）。

关键词： narG nirS 反硝化细菌群落结构丰度多样性环境因子

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替米考星肠溶颗粒预混剂在猪体内残留消除研究

替米考星肠溶颗粒预混剂在猪体内残留消除研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：韩孝欣吴兴天刘芳张明珠卜仕金扬州大学兽医学院

【目的】通过对替米考星肠溶颗粒预混剂在猪体内残留消除研究,了解替米考星在猪体内组织分布规律,为制定休药期提供依据。【方法】猪可食性组织中替米考星残留采用乙腈提取液提取,C18柱净化。流动相为乙腈-四氢呋喃-二丁胺盐缓冲液-水（... 详细信息

【目的】通过对替米考星肠溶颗粒预混剂在猪体内残留消除研究,了解替米考星在猪体内组织分布规律,为制定休药期提供依据。【方法】猪可食性组织中替米考星残留采用乙腈提取液提取,C18柱净化。流动相为乙腈-四氢呋喃-二丁胺盐缓冲液-水（12:5:5:78）。脂肪、肌肉、肝脏和肾脏中替米考星的检测限为0.025μg/g,定量限均为0.050μg/g。空白肌肉和脂肪组织制得添加替米考星浓度为050μg/g0.05、0.1和1μg/g时,空白肝脏和肾脏组织制得添加替米考星浓度为0.05、0.5和5rtg/g时,平均回收率均为80%00%;批间和批内变异系数均5%。替米考星肠溶颗粒按推荐浓度（0.4g/kg饲料,以替米考星计）添加在饲料中让猪自由采食,连用15天。停药后分别于第1d、4d、7d、12 d和16d时各随机选取5头猪宰杀并采集其可食性组织。猪可食性组织中替米考星的残留量采用经验证的猪可食性组织中替米考星残留量的高效液相色谱检测方法测定,将替米考星在猪各组织中残留量检测的实测数据采用WT1.4计算软件拟合计算休药期。【结果】残留消除研究表明,替米考星在肾中的残留最高,其次是肝脏,而肌肉和脂肪组织中较低。替米考星肠溶颗粒预混剂按推荐给药药方案混饲给药后,替米考星在猪肝脏、脂肪、肌肉和肾脏的休药期分别为为8.73天、2.79天、8.31天和7.13天。【结论】替米考星肠溶颗粒预混剂按推荐给药方案使用建议休药期可暂定为9天。

关键词：猪替米考星残留消除休药期

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宠物源肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行性分布及其分子传播机制研究

宠物源肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行性分布及其分子传播机...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：邹梦婷孙坚廖晓萍刘雅红华南农业大学兽医学院/广东省兽药研制与安全评价重点实验室

【目的】:研究2008-2012年间从广东省宠物医院分离的肠杆菌中氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶基因的流行分布情况及其分子传播机制。【方法】使用MALDI TOF质谱鉴定2008-2012年收集的381株肠杆菌,按照美国临床实验室标准委员... 详细信息

【目的】:研究2008-2012年间从广东省宠物医院分离的肠杆菌中氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶基因的流行分布情况及其分子传播机制。【方法】使用MALDI TOF质谱鉴定2008-2012年收集的381株肠杆菌,按照美国临床实验室标准委员会(CLSI)推荐的琼脂稀释法测定所有菌株对常用的14种抗菌药的敏感性,对显示阿米卡星耐药的菌株采用PCR方法检测16S rRNA甲基化酶RmtA、RmtB、RmtC、RmtD、RmtE、RmtF、RmtG、RmtH、ArmA及npmA基因,采用脉冲场凝胶电泳方法(PFGE)分析携带16Sr RNA甲基化酶基因的阳性菌株垂直传播情况,通过接合转移、S1-PFGE以及southern杂交等实验分析携带16S rRNA甲基化酶基因阳性菌株的水平传播情况。【结果】381株宠物源肠杆菌中包括大肠杆菌343株,肺炎克雷伯菌30株,奇异变形杆菌6株,阴沟肠杆菌2株。98株(25.7%)对阿米卡星耐药的菌株中,大肠杆菌83株,肺炎克雷伯菌12株,奇异变形杆菌2株,阴沟肠杆菌1株。仅检测到rmtB和annA两种基因,72株rmtB阳性,检测率为18.9%,6株armA阳性,检测率为1.5%,另外有2株同时携带rmtB、annA两种基因。PFGE分型表明阳性菌株之间亲缘关系较远,无克隆传播现象。S1-PFGE及southern杂交实验表明rmtB基因位于多种大小质粒上。【结论】16S rRNA甲基化酶基因广泛存在于我国宠物源肠杆菌中,含有16S rRNA甲基化酶基因的可接合质粒可能在人与宠物之间水平传播,我们应该加强对宠物源细菌耐药性的监测。

关键词：宠物源 rmtB armA 肠杆菌传播机制

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动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行传播机制研究

动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行传播机制研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张文慧任思琪林香燕曾振灵蒋红霞华南农业大学兽医学院

【目的】研究动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行及传播分子特征。【方法】2014年2-9月,从河南,山东,湖北,广东四省共采集3850份猪和鸡直肠拭子和粪便拭子,共分离鉴定得到159株沙门氏菌,其中包括猪源90株,鸡源69株。采用泰国沙门菌菌... 详细信息

【目的】研究动物源沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的流行及传播分子特征。【方法】2014年2-9月,从河南,山东,湖北,广东四省共采集3850份猪和鸡直肠拭子和粪便拭子,共分离鉴定得到159株沙门氏菌,其中包括猪源90株,鸡源69株。采用泰国沙门菌菌属诊断血清对分离到的沙门菌进行血清型鉴定,采用琼脂稀释法测定菌株对抗生素的敏感性,用PCR扩增ESBIs耐药基因。脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株克隆关系。接合转移/转化、质粒复制子分型、S1..PFGE和Southern杂交对bla基因的质粒进行分析。【结果】159株沙门菌的血清型鉴定表明主要的血清型是鼠伤寒（91株）和印第安纳（57株）,检测到肠炎沙门菌1株,剩余10株没有鉴定出血清型。药物敏感性试验表明沙门菌多重耐药现象比较严重,对头孢类的耐药率由头孢曲松的86.5%到头孢他定的31%不等。成功分型150株菌的PFGE得到47种不同的谱型,同一地区或不同地区的同一血清型的沙门菌图谱相似度很高,存在克隆传播。产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶沙门氏菌共有45株,包括bla3个亚型,其中以bla最为流行（35,77.8%）;其次是blacrx.1M-27（8,17.7%）,检测到产CMY--2沙门菌3株,其中有一株同时产CTX-27和CMY-2酶。没有检测到bla,bla,bla等基因。45株产CTX-M沙门菌,有36株发生了bla基因的转移,质粒分析表明,产CTX沙门菌质粒复制子类型主要为P型,N型和H12型,质粒大小有50kb到220kb不等,以135kb为主。【结论】产CTX-M沙门菌株的克隆传播和质粒介导的水平传播导致沙门菌中CTX-M型ESBLs酶的广泛传播,同时使沙门菌的多重耐药日益严重,应引起广泛关注。

关键词： ESBLs 沙门菌 CTX-M

来源：评论

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食品动物源沙门菌中fOSA3流行分布及其传播特征

食品动物源沙门菌中fOSA3流行分布及其传播特征

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张文慧谷茜茜蒋红霞曾振灵华南农业大学兽医学院

【目的】研究食品动物源沙门菌中磷霉素耐药基因fosA的流行与传播特征。【方法】从实验室保存的288株沙门菌中用PCR扩增磷霉素耐药基因fosA,fosA,fosC,阳性菌株用琼脂稀释法测定菌株对抗生素的敏感性,PCR检测其他相关耐药基因,脉冲场凝... 详细信息

【目的】研究食品动物源沙门菌中磷霉素耐药基因fosA的流行与传播特征。【方法】从实验室保存的288株沙门菌中用PCR扩增磷霉素耐药基因fosA,fosA,fosC,阳性菌株用琼脂稀释法测定菌株对抗生素的敏感性,PCR检测其他相关耐药基因,脉冲场凝胶电泳（PFGE）和多位点序列分型（MLST）分析菌株间的克隆关系。接合转移/转化、复制子分型、S1-PFGE和杂交进行质粒分析。【结果】从288株沙门菌中筛选得到5株（1.7%）fosA阳性菌,没有检测到fosA,fosC。5株阳性菌均为多重耐药菌株,对磷霉素,环丙沙星,恩诺沙星,萘啶酸,氯霉素,头孢噻呋,头孢噻肟,头孢曲松等都耐药,对头孢他啶,头孢西丁,阿米卡星敏感。5株菌中都扩到了bla基因,均为bla(其中bla有4株,bla有1株)。5株菌有3株是来自同一地方鼠伤寒沙门菌,2株为来自不同地方的印第安纳沙门菌。PFGE结果显示3株鼠伤寒沙门菌图谱相同,另外2株印第安纳沙门菌虽分离自不同地方,但图谱也极为相似,说明存在菌株间的克隆传播。MLST分型结果表明5株菌全部为ST17型。5株菌全部成功接合转移,对质粒分析结果显示fosA和bla基因位于同一IncN或IncA/C质粒上,大小约为130kb。【结论】本研究对动物源沙门菌磷霉素耐药基因进行研究,并首次在不同地方的鸡直肠拭子分离得到的5株ST17沙门菌中发现了fosA基因;fosA阳性菌株不仅存在克隆传播,而且fosA与bla基因可以通过IncN型或IncA/C型的可接合性质粒协同进行传播扩散。磷霉素作为人医临床用药,其耐药性可以随头孢类药物的选择压力而在动物源沙门菌中传播,因此应当广泛密切的关注磷霉素耐药基因的传播趋势。

关键词：沙门菌 fosA3 blaCTX-M

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VDAC1在喹烯酮诱导HepG2细胞线粒体凋亡通路中的作用

VDAC1在喹烯酮诱导HepG2细胞线粒体凋亡通路中的作用

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：杨夏云周延代重山李道稳赵科娜汤树生肖希龙中国农业大学动物医学院兽医药理与毒理组

【目的】本实验室前期研究发现喹烯酮能引起线粒体结构改变,功能失调,造成线粒体膜电位下降,导致Cytc从线粒体内释放至胞浆,但其确切的分子机制尚不清楚。电压依赖性阴离子通道蛋白VDAC1是位于线粒体外膜上的主要蛋白,起着联接线粒体内... 详细信息

【目的】本实验室前期研究发现喹烯酮能引起线粒体结构改变,功能失调,造成线粒体膜电位下降,导致Cytc从线粒体内释放至胞浆,但其确切的分子机制尚不清楚。电压依赖性阴离子通道蛋白VDAC1是位于线粒体外膜上的主要蛋白,起着联接线粒体内外物质与信息交换的桥梁作用。因此,本实验旨在以人HepG2细胞为模型,探讨VDAC1在喹烯酮所致线粒体毒性中的作用。【方法】通过体外培养HepG2细胞,给予不同浓度的喹烯酮(2.5、5、7.5、10μg/mL)作用24 h后,Western Blot检测VDAC1单体和多聚体的变化情况。并进一步使用VDAC抑制剂DIDS(500mM)检测VDAC1在喹烯酮所致HepG2细胞毒性(MTT法)中的作用,流式细胞术检测线粒体膜电位、细胞内ROS生成水平的变化,WesternBlot检测线粒体凋亡通路相关蛋白的变化。通过DIDS及高表达VDAC1,进一步检测喹烯酮对VDAC1多聚体形成的影响。【结果】与对照组相比,喹烯酮可诱导HepG2细胞线粒体外膜蛋白VDAC1单体和多聚体的表达量呈剂量依赖性增加,同时可导致细胞线粒体膜电位下降、ROS生成增多及线粒体凋亡通路相关蛋白Cytc释放至胞浆,caspase-9、caspase-3及PARP显著激活(p<0.05)。与喹烯酮模型组相比,DIDS可明显抑制喹烯酮所致VDAC1单体的表达和多聚体的形成及其引起的线粒体膜电位下降及ROS生成,并进一步抑制Cytc释放至胞浆及caspase-9、caspase-3、PARP的激活,可显著提高细胞存活率(p<0.05)。与此相对应的是,高表达VDAC1后给药组与喹烯酮模型组相比,前者VDAC1多聚体的生成显著高于后者(p<0.05),同时Cytc从线粒体释放到胞浆的量增加。【结论】喹烯酮能使HepG2细胞的线粒体外膜蛋白VDAC1形成多聚体通道,可能促进线粒体内物质Cytc、ROS释放至胞浆,导致细胞线粒体途径凋亡。

关键词：喹烯酮 VDAC1多聚体线粒体凋亡

来源：评论

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恩诺沙星和氟苯尼考治疗对oqxAB的传播以及肠道内微生物的影响

恩诺沙星和氟苯尼考治疗对oqxAB的传播以及肠道内微生物的影响

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陈奕刘雅红华南农业大学兽医学院

(目的)多耐药细菌的发生率逐年增加,减弱了当前可用的抗菌剂疗效,增加了治疗费用和临床失败率。本实验通过口服攻毒携带编码多耐药外排泵基因oqxAB的质粒(pHXY0908)的鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 14028-pHXY0908),研究该基因及携带该基因的质... 详细信息

(目的)多耐药细菌的发生率逐年增加,减弱了当前可用的抗菌剂疗效,增加了治疗费用和临床失败率。本实验通过口服攻毒携带编码多耐药外排泵基因oqxAB的质粒(pHXY0908)的鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 14028-pHXY0908),研究该基因及携带该基因的质粒在鸡的胃肠道内大肠杆菌中的扩散转移情况,以期为治疗耐药菌的散播提供参考数据。(方法)小鸡人工感染沙门氏菌后分为三组,其中两组为给药组,分别给予推荐剂量的恩诺沙星和氟苯尼考进行治疗,连续5天。第三组为感染不给药组,作为对照。通过PCR,接合转移,PFGE,RFLP以及qPCR等实验来检测携带oqxAB的质粒的大肠杆菌分离情况以及菌株的亲缘关系,以及给药之后肠道菌群的变化。(结果)从给药组和对照组小鸡分离得到的大肠杆菌均获得了含有oqxAB的质粒,其中氟苯尼考给药组,oqxAB阳性的大肠杆菌总的分离率和出现的频率显著高于对照组。将粪便中分离得到的携带oqxAB的质粒的大肠杆菌作为供体菌,在体外再进行接合转移,发现新获得的结合子耐药表型与攻毒的菌株相似,且携带的oqxAB阳性质粒与攻毒的沙门氏菌含有的质粒(pHXY0908)限制性酶切图谱一致。PFGE分析表明oqxAB阳性的大肠杆菌呈现多种谱型,其中三种谱型占主导。MLST分析表明它们均属于ST533型。通过荧光定量PCR分析粪便DNA发现给予抗生素能够维持高水平的oqxAB基因排泄量,且这种效果能够持续到治疗结束后12天。给药后肠道菌群变化迅速,其中乳酸杆菌和大肠杆菌变化较明显。(结论)本研究首次表明了oqxAB基因可以在胃肠道微生物之间进行传播,给予临床治疗剂量的恩诺沙星和氟苯尼考能够增加对促进oqxAB的转移,扩大耐药基因库。同时特殊的ST型可能与oqxAB在体内的扩散密切相关。

关键词： oqxAB 鼠伤寒沙门氏菌 PFLR PFGE qPCR

来源：评论

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冻干马抗H7N9精制抗体F（ab′）2的急性毒性和溶血性试验

冻干马抗H7N9精制抗体F（ab′）2的急性毒性和溶血性试验

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：吴永魁李乾学董晓琳赵永坤军事医学科学院军事兽医研究所

【目的】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）是H7N9禽流感治疗性中和抗体,为评价其临床用药的安全性,进行了小鼠急性毒性试验和对兔红细胞的溶血性试验。【方法】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）单次腹腔注射分别给予昆明种小鼠和BALB/... 详细信息

【目的】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）是H7N9禽流感治疗性中和抗体,为评价其临床用药的安全性,进行了小鼠急性毒性试验和对兔红细胞的溶血性试验。【方法】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）单次腹腔注射分别给予昆明种小鼠和BALB/c小鼠,给药容量为0.2mL/10g体重,给药剂量为300mg/kg,对照组腹腔注射等容量的生理盐水。每组10只小鼠,雌雄各半,药后连续观察14d,考察其对小鼠的急性毒性;采用体外试管法,浓度为15.0mg/mL的冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）按不同容量（0.1mL.5mL）加入已有不同容量（2.0mL.4mL）生理盐水和2.5mL的2%红细胞混悬液的玻璃试管中,同时以氯化钠注射液和注射用水分别作为阴性和阳性对照品,考察其对兔红细胞溶血及凝集的影响。【结果】小鼠给药后和连续14d观察,各组动物临床表现、采食量、生长发育、营养状况、对外界刺激反应均无异常改变,各组动物无死亡,大体解剖未见异常;冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）无溶血作用,不引起红细胞凝聚,氯化钠注射液阴性对照无溶血无凝聚,注射用水阳性对照全部溶血。【结论】在本试验条件下,马抗H7N9精制抗体F（ab'）对小鼠生长发育无影响,无急性中毒表现;浓度为15.0mg/mL冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）体外对兔红细胞无溶血作用,不引起红细胞凝聚。

关键词：马抗H7N9精制抗体F(ab′)2 急性毒性溶血性

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链霉素荧光标记物的合成与鉴定

链霉素荧光标记物的合成与鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：米铁军李引乾王战辉张素霞沈建忠西北农林科技大学动物医学院中国农业大学动物医学院

【目的】链霉素（Streptomycin,STR）是一种氨基糖苷类抗生素,其在兽医临床可用于治疗革兰氏阴性敏感菌引起的各种感染。因其潜在的毒性和在食品动物体内残留,我国农业部已规定了链霉素在动物性食品中的最高残留限量（MRLs）,其中在牛奶... 详细信息

【目的】链霉素（Streptomycin,STR）是一种氨基糖苷类抗生素,其在兽医临床可用于治疗革兰氏阴性敏感菌引起的各种感染。因其潜在的毒性和在食品动物体内残留,我国农业部已规定了链霉素在动物性食品中的最高残留限量（MRLs）,其中在牛奶为200μ/L,肌肉、脂肪和肝脏为600μg/kg,肾脏为1000μg/kg。为了建立相关的快速荧光免疫检测方法,本研究合成了2种不同结构的链霉素荧光标记物,并通过质谱和免疫学技术进行了鉴定。【方法】将2 mg链霉素溶于0.5 mL50%乙醇水,再加入50 uL三乙胺,4mgFITC荧光素（或5mgDTAF）,振荡至固体成分完全溶解。室温避光反应至少24h。取50uL反应液用薄层色谱方法纯化,刮下最底层（Rf=0.01）的黄色条带,用1 mL50%甲醇氨水提取并过滤后,氮吹除去滤液中的氨水,得到亮黄色的溶液即为合成的荧光标记物STR-FITC和STR-DTAF。【结果】将合成的荧光标记物分别稀释至浓度为0.1 mg/mL,经质谱检测显示STR-FITC和STR-DTAF对应的分子离子峰质荷比（m/z）分别为974[M+2H]和1083[M+CHO],与其理论上计算的分子量相一致,表明本研究成功合成了这两种荧光标记物。将所得的两种荧光标记物稀释至浓度为10 nM,分别与过量的链霉素特异性抗体混合,比较加入抗体前后荧光偏振（FP）值的变化。结果显示,STR-FITC与抗体混合后,FP值明显升高（可达210 mP）;而使用STR-DTAF时,FP值上升幅度较小（仅为130 mP）。而抗体分别与荧光素FITC和DTAF作用时,FP值变化不大。【结论】链霉素特异性抗体可同时与这两种荧光标记物结合,且对STR-FITC的亲和力更高,从而为进一步建立检测链霉素的荧光免疫分析方法奠定了基础。

关键词：链霉素荧光标记物合成质谱鉴定免疫分析

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