【目的】已报道PmrA/PmrB二元调控系统在革兰氏阴性菌对多粘菌素B耐药过程中起重要作用,基于此认识,本试验拟探讨PmrA/PmrB二元调控系统介导大肠杆菌对多粘菌素E耐药的可能性,从而更好地理解细菌耐药性的发生机制和传播规律。[方法]首先对临床分离的52株禽致病性大肠杆菌对多黏菌素E的敏感性进行检测,然后采用step-wise方法对多黏菌素敏感菌株进行耐药性诱导,通过PCR扩增PmrA/PmrB后采用Mega软件进行突变位点分析,最后采用real time RT-PCR技术检测其mRNA表达水平的变化,拟阐明PmrA/PmrB二元调控系统对禽致病性大肠杆菌耐药性产生的贡献。【结果】MIC结果显示,52株大肠杆菌中,88.46%(44/52)对多粘菌素E敏感,中介及耐药菌株均为5.8%(3/52)。突变位点分析表明诱导成功的5株耐药菌(9R、36R、53R、91R,107R)pmrA未发生突变,而PmrB均有不同程度的突变。其中9R,36R和53R各在G56A(R19Q),T500C(L167P),T265A(Y89N)发生点突变,91R,107R在239位和478位各插入长为30 bp和128 bp的序列,除36R外,其余耐药菌株突变位点均未见报道。RT-PCR结果显示发生点突变的三株耐药菌PmrA/PmrB表达量均极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)上升;发生插入突变的两株耐药菌PmrA/PmrB表达量虽有上升趋势,但变化不显著(P>0.05)。【结论】pmrA和pmrB在大肠杆菌对多粘菌素E的耐药中起重要作用,其中pmrB的点突变伴随pmrA/pmrB的高表达以及pmrB的插入突变是导致禽致病性大肠杆菌对多粘菌素E高度耐药的主要原因。
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