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范例一：(K=图书馆学 OR K=情报学) AND A=范并思 AND Y=1982-2016
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767 篇 会议

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628 篇 农学
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- 13 篇 农业资源与环境
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68 篇 医学
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- 18 篇 中药学(可授医学、...
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- 1 篇 计算机科学与技术...
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- 20 篇 应用经济学
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2 篇 教育学
- 2 篇 教育学

主题

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37 篇 大肠杆菌
23 篇 氟苯尼考
20 篇 氧化应激
18 篇 耐药基因
18 篇 猪
17 篇 残留
15 篇 药代动力学
13 篇 药动学
12 篇 残留检测
11 篇 金黄色葡萄球菌
11 篇 黏菌素
11 篇 多重耐药
10 篇 mic
10 篇 生物被膜
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9 篇 副猪嗜血杆菌
9 篇 hplc
9 篇 肠球菌
9 篇 头孢喹肟

机构

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97 篇 华南农业大学
57 篇 南京农业大学
43 篇 吉林大学
39 篇 扬州大学
36 篇 东北农业大学
29 篇 新疆农业大学
23 篇 四川农业大学
19 篇 青岛农业大学
19 篇 广西大学
17 篇 福建农林大学
17 篇 中国农业科学院兰...
14 篇 湖南农业大学
13 篇 沈阳农业大学
13 篇 华中农业大学
12 篇 内蒙古农业大学
10 篇 北京食品营养与人...
10 篇 西北农林科技大学
10 篇 河南农业大学
10 篇 中国农业科学院兰...

作者

49 篇 邓旭明
29 篇 刘雅红
29 篇 袁宗辉
28 篇 李剑勇
27 篇 杨亚军
27 篇 沈建忠
27 篇 江善祥
26 篇 廖晓萍
26 篇 孙坚
26 篇 卜仕金
25 篇 刘希望
23 篇 王丽平
22 篇 汤树生
22 篇 秦哲
22 篇 曾振灵
22 篇 李世宏
21 篇 汪洋
19 篇 季辉
18 篇 肖希龙
17 篇 郝智慧

语言

762 篇 中文
5 篇 英文

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广州流溪河沉积物反硝化细菌群落结构与环境因子相关性研究

广州流溪河沉积物反硝化细菌群落结构与环境因子相关性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：丁雪瑶王勉之孙静孙永学华南农业大学兽医学院国家兽药安全评价(环境评估)实验室(华南农大)

(目的)本文研究了广州流溪河底泥沉积物中反硝化细菌群落结构、narG和nirS基因丰度与环境因子间的相关性,为其生态系统中氮素循环研究提供了基础依据。（方法）经对流溪河流域从上至下游10个位点进行沉积物采样,进行环境因子（温度、pH... 详细信息

(目的)本文研究了广州流溪河底泥沉积物中反硝化细菌群落结构、narG和nirS基因丰度与环境因子间的相关性,为其生态系统中氮素循环研究提供了基础依据。（方法）经对流溪河流域从上至下游10个位点进行沉积物采样,进行环境因子（温度、pH、氨态氮、硝态氮、亚硝态氮、总氮、COD）理化数据测定,对narG基因和nirS基因构建文库分析并采用RT-PCR法进行了丰度研究,通过主坐标分析和冗余度分析等多变量统计分析方法研究了反硝化细菌群落结构、基因丰度与环境因子间相关性。（结果）结果显示:作为反消化作用母体物质,10个采样位点的硝态氮（NO-N）含量变化不大,而亚硝态氮（NO-N）浓度均很低;不同位点沉积物中反硝化菌群落结构表现出差异性;反硝化细菌nirS基因拷贝数范围为7.89×10～3.34×10～4 copies/g,narG基因拷贝数为5.97×10～2 copies/g.64×10～4 copies/g,nirS基因丰度变化范围为0.01%.1%,narG基因丰度变化范围为0.01%.5%;构建系统发育树发现,沉积物样品中大多数nirS基因克隆与目前已知可培养的反硝化细菌的亲缘关系较远,大部分为未被认知的微生物类群,其中已知的nirS型反硝化菌属于变形菌Alphaproteobacteria、Betaproteobacteria、Gammaproteobacteria,其中大部分属于Betaproteobacteria。（结论）研究表明:亚硝态氮（NO-N）生化因子对反硝化细菌群落结构起着决定性的作用,与环境因子的相关性大小依次表现为NO-N>TN>NH-N>COD>NO-N>pH>Temp;河流沉积物中总细菌16S rDNA基因丰度与环境因子之间无显著相关性,而nirS基因型反硝化细菌数量与NH-N和TN因子浓度之间差异极显著（P<0.01）,与NO-N因子差异显著（P<0.05）,narG基因型反硝化菌数量与NO-N因子浓度差异显著（P<0.05）,但与其它环境因子差异不显著（P>0.05）。

关键词： narG nirS 反硝化细菌群落结构丰度多样性环境因子

来源：评论

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食品动物源沙门菌中fOSA3流行分布及其传播特征

食品动物源沙门菌中fOSA3流行分布及其传播特征

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张文慧谷茜茜蒋红霞曾振灵华南农业大学兽医学院

【目的】研究食品动物源沙门菌中磷霉素耐药基因fosA的流行与传播特征。【方法】从实验室保存的288株沙门菌中用PCR扩增磷霉素耐药基因fosA,fosA,fosC,阳性菌株用琼脂稀释法测定菌株对抗生素的敏感性,PCR检测其他相关耐药基因,脉冲场凝... 详细信息

【目的】研究食品动物源沙门菌中磷霉素耐药基因fosA的流行与传播特征。【方法】从实验室保存的288株沙门菌中用PCR扩增磷霉素耐药基因fosA,fosA,fosC,阳性菌株用琼脂稀释法测定菌株对抗生素的敏感性,PCR检测其他相关耐药基因,脉冲场凝胶电泳（PFGE）和多位点序列分型（MLST）分析菌株间的克隆关系。接合转移/转化、复制子分型、S1-PFGE和杂交进行质粒分析。【结果】从288株沙门菌中筛选得到5株（1.7%）fosA阳性菌,没有检测到fosA,fosC。5株阳性菌均为多重耐药菌株,对磷霉素,环丙沙星,恩诺沙星,萘啶酸,氯霉素,头孢噻呋,头孢噻肟,头孢曲松等都耐药,对头孢他啶,头孢西丁,阿米卡星敏感。5株菌中都扩到了bla基因,均为bla(其中bla有4株,bla有1株)。5株菌有3株是来自同一地方鼠伤寒沙门菌,2株为来自不同地方的印第安纳沙门菌。PFGE结果显示3株鼠伤寒沙门菌图谱相同,另外2株印第安纳沙门菌虽分离自不同地方,但图谱也极为相似,说明存在菌株间的克隆传播。MLST分型结果表明5株菌全部为ST17型。5株菌全部成功接合转移,对质粒分析结果显示fosA和bla基因位于同一IncN或IncA/C质粒上,大小约为130kb。【结论】本研究对动物源沙门菌磷霉素耐药基因进行研究,并首次在不同地方的鸡直肠拭子分离得到的5株ST17沙门菌中发现了fosA基因;fosA阳性菌株不仅存在克隆传播,而且fosA与bla基因可以通过IncN型或IncA/C型的可接合性质粒协同进行传播扩散。磷霉素作为人医临床用药,其耐药性可以随头孢类药物的选择压力而在动物源沙门菌中传播,因此应当广泛密切的关注磷霉素耐药基因的传播趋势。

关键词：沙门菌 fosA3 blaCTX-M

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恩诺沙星和氟苯尼考治疗对oqxAB的传播以及肠道内微生物的影响

恩诺沙星和氟苯尼考治疗对oqxAB的传播以及肠道内微生物的影响

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陈奕刘雅红华南农业大学兽医学院

(目的)多耐药细菌的发生率逐年增加,减弱了当前可用的抗菌剂疗效,增加了治疗费用和临床失败率。本实验通过口服攻毒携带编码多耐药外排泵基因oqxAB的质粒(pHXY0908)的鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 14028-pHXY0908),研究该基因及携带该基因的质... 详细信息

(目的)多耐药细菌的发生率逐年增加,减弱了当前可用的抗菌剂疗效,增加了治疗费用和临床失败率。本实验通过口服攻毒携带编码多耐药外排泵基因oqxAB的质粒(pHXY0908)的鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 14028-pHXY0908),研究该基因及携带该基因的质粒在鸡的胃肠道内大肠杆菌中的扩散转移情况,以期为治疗耐药菌的散播提供参考数据。(方法)小鸡人工感染沙门氏菌后分为三组,其中两组为给药组,分别给予推荐剂量的恩诺沙星和氟苯尼考进行治疗,连续5天。第三组为感染不给药组,作为对照。通过PCR,接合转移,PFGE,RFLP以及qPCR等实验来检测携带oqxAB的质粒的大肠杆菌分离情况以及菌株的亲缘关系,以及给药之后肠道菌群的变化。(结果)从给药组和对照组小鸡分离得到的大肠杆菌均获得了含有oqxAB的质粒,其中氟苯尼考给药组,oqxAB阳性的大肠杆菌总的分离率和出现的频率显著高于对照组。将粪便中分离得到的携带oqxAB的质粒的大肠杆菌作为供体菌,在体外再进行接合转移,发现新获得的结合子耐药表型与攻毒的菌株相似,且携带的oqxAB阳性质粒与攻毒的沙门氏菌含有的质粒(pHXY0908)限制性酶切图谱一致。PFGE分析表明oqxAB阳性的大肠杆菌呈现多种谱型,其中三种谱型占主导。MLST分析表明它们均属于ST533型。通过荧光定量PCR分析粪便DNA发现给予抗生素能够维持高水平的oqxAB基因排泄量,且这种效果能够持续到治疗结束后12天。给药后肠道菌群变化迅速,其中乳酸杆菌和大肠杆菌变化较明显。(结论)本研究首次表明了oqxAB基因可以在胃肠道微生物之间进行传播,给予临床治疗剂量的恩诺沙星和氟苯尼考能够增加对促进oqxAB的转移,扩大耐药基因库。同时特殊的ST型可能与oqxAB在体内的扩散密切相关。

关键词： oqxAB 鼠伤寒沙门氏菌 PFLR PFGE qPCR

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抛锚式教学在兽医药理学教学中的应用探索

抛锚式教学在兽医药理学教学中的应用探索

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：姜中其楼程富马晓丹浙江大学动物科学学院

目的抛锚式教学也称基于问题的教学、情境性教学,是指教师在教学时为学生提供一个学习情景,使教学建立在生动的事件或问题情景的基础上(确定这类真实事件或问题的过程被形象地比喻为"抛锚"),通过师生间互动交流与探讨,使学生... 详细信息

目的抛锚式教学也称基于问题的教学、情境性教学,是指教师在教学时为学生提供一个学习情景,使教学建立在生动的事件或问题情景的基础上(确定这类真实事件或问题的过程被形象地比喻为"抛锚"),通过师生间互动交流与探讨,使学生亲身体验从识别学习目标、提出学习目标到实现学习目标的教学过程。实施改革的目的在于更好调动学生的学习动机,发展学生的迁移能力,提高学生观察分析和解决问题的能力。方法采用真实和虚拟方式,设情景主题,提出相关的若干问题(鼓励学生提出更多问题)并通过资料查阅理解先独立学习,再小组协作学习,应用云盘较大空间特点,上传各位同学及小组作业(包括文字doc、音频和视频材料)全班分享交流和讨论。具体做法是在课前1周教师已将要讨论的情景和问题(部分)上传到平台,让学生课外学习,查阅资料,每位学生都对案例进行思考,独立完成情景包含的问题及回答并整理成文字,然后小组在一起讨论分析各自的观点,分析整理,上传云盘分享。最后精选一组在课堂展示,进一步讨论和提问,在课堂上,学生和教师将对本案例的疑问都提出来,并且一起运用所学的知识来解决。最后老师简要点评。结果:建立了10个情景主题及若干问题,准备了相应的点评要点和问题及参考答案,经五个环节的学习讨论分享和交流,取得了较好的教学效果。这种教学方法调动了全体同学的学习积极性和主动性,不但培养查阅资料开展探究式学习的良好习惯,而且培养他们积极思考和表达能力和批判性思维能力和勇气。同学们提出的问题十分丰富多彩,也促进了教学相长。但同时也看到,要改革过程中也需对一些因素进行认真分析,如在总评成绩中的比例、评价体系的完善,师生之间的更好沟通等。结论基于问题的抛锚式教学有利于提高学习的自动性和自觉性,提高理解力和观察分析和解决问题能力,使学生明白所学知识的现实意义,有利于培养学生的问题意识,更好适行业发展要求。

关键词：抛锚式教学兽医药理学教学改革基于问题情景建构

来源：评论

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同一病鸭中两株产NDM-5的非同源大肠杆菌耐药分子特征研究

同一病鸭中两株产NDM-5的非同源大肠杆菌耐药分子特征研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：杨润时孙坚陈冲方亮星夏菁廖晓萍刘雅红华南农业大学兽医学院/广东省兽药研制与安全评价重点实验室

【目的】本实验针对2015年从广东省某动物医院采集的同一个鸭源肛拭子中分离的两株携带bla耐药基因的大肠杆菌的菌株特征以及耐药机制进行研究。【方法】采用PCR与测序方法对bla耐药基因的亚型进行测定。采用琼脂稀释法以及PCR方法测定... 详细信息

【目的】本实验针对2015年从广东省某动物医院采集的同一个鸭源肛拭子中分离的两株携带bla耐药基因的大肠杆菌的菌株特征以及耐药机制进行研究。【方法】采用PCR与测序方法对bla耐药基因的亚型进行测定。采用琼脂稀释法以及PCR方法测定这两株菌对17种抗菌药物的耐药表型以及其他的30种常见的耐药基因携带情况。随后,通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）以及多位点序列分型（MIST）实验分析两株菌的亲缘关系。最后,采用接合转移实验,S1-PFGE,Southern杂交,质粒的复制子分型（PBRT）及PCR定位（***）等方法研究两株菌株携带bla质粒的特征。【结果】两株大肠杆菌FS13-1和FS13-2携带的bla基因均为bla。MIC测定表明这两株菌对替加环素敏感,对粘菌素表现为中介耐药,其中FS13-1对氨曲南表现为低水平耐药,而FS13对氨曲南和阿米卡星敏感,对其余受试的药物均表现耐药。常见的耐药基因筛查发现两株菌均携带blacrx,***3,DHA,CMY-2,aac（6'）-Ib,且FS13-1还携带rmtB和bla。MLST测定发现FS13-1和FS13-2分别为ST156和ST648。PFGE分析进一步表明这两株菌遗传背景不同,不是克隆菌株。接合实验表明这两株菌携带的bla均能转移到受体菌中。复制子分型以及S1-PFGE、Southern杂交证明bla均位于8kb的IncX3型质粒上。bla基因侧翼序列分析表明两株菌中bla的基因环境相同,均为tSAba125-IS5-bla-ble-trpF-dsbC-IS26。【结论】本研究首次在食品动物源中检测到bla,并且在同一鸭源肛拭子中检测到两株携带该基因的大肠杆菌,尽管他们的遗传背景不同,但是bla均位于8kb的IncX3型可接合性质粒上,且基因环境相同。大肠杆菌中携带bla基因可通过质粒以及其他可移动元件在菌株间进行散播,警示相关部门应重视并加强对携带bla菌株的监测。

关键词：食品动物大肠杆菌 blaNDM IncX3

来源：评论

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金霉素-蒙脱石载药控释系统及其肠道模拟环境中释药的评价

金霉素-蒙脱石载药控释系统及其肠道模拟环境中释药的评价

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张一鸣王勉之孙静孙永学华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全性评价重点实验室

(目的)本研究旨在制备一种金霉素缓释微球,提高金霉素在肠道的利用率,改善金霉素对断奶仔猪腹泻的防治效果。（方法）在微球制备工艺研究中,以98%盐酸金霉素为原料,蒙脱石和海藻酸钠为辅料,根据海藻酸钠与Ca的交联特性,采用锐孔液滴法... 详细信息

(目的)本研究旨在制备一种金霉素缓释微球,提高金霉素在肠道的利用率,改善金霉素对断奶仔猪腹泻的防治效果。（方法）在微球制备工艺研究中,以98%盐酸金霉素为原料,蒙脱石和海藻酸钠为辅料,根据海藻酸钠与Ca的交联特性,采用锐孔液滴法制备金霉素-蒙脱石缓释微球,并以正交实验设计对工艺进行优化。在体外释放研究中,以模拟胃肠液为释放介质,按照转篮法进行缓释微球和饲用金霉素的体外释放试验,采用高效液相色谱法（HPLC）测定金霉素累积释药量。在体内释放率研究中,选用6头健康断奶仔猪,按2周期2交叉设计原则,口服10%金霉素-蒙脱石缓释微球和20%饲用金霉素,给药剂量为10mg/kg b.w。给药后不同时间点采集仔猪血液和收集粪便,并对样品中金霉素含量进行HPLC法测定。（结果）研究结果:表明,最佳工艺制备的微球形态规整,粒径均匀,载药量为10%左右,包封率为82.58%。体外释放研究结果表明,相对于饲用金霉素,金霉素缓释微球在低pH值难以释放,高pn值时缓慢释放。血浆含量检测结果表明,在稳态水平下,金霉素缓释微球的血药浓度均在0.50～1.20μg/ml范围之间,饲用金霉素的血药浓度均在0.40-.40μg/ml之间,金霉素缓释微球的血药浓度波动较小。粪便检测结果表明,摄入金霉素缓释微球组和饲用金霉素组仔猪的金霉素原形粪便排出的总量分别是摄入量的38.69%和25.72%,两种制剂金霉素在仔猪肠道中的释放量及原形药物经粪便的排泄量比较呈极显著差异（P<0.01）。（结论）本研究制备的金霉素-蒙脱石缓释微球,具有良好的缓释性能,口服多次给药,血药浓度很快达到稳态,相比于饲用金霉素,其在肠道中的金霉素含量能够维持较高水平,对仔猪腹泻可产生更好的防治效果。

关键词：金霉素蒙脱石海藻酸钠缓释微球

来源：评论

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养殖场中不同生产阶段的猪与饲养员肠道微生物组成及相关性研究

养殖场中不同生产阶段的猪与饲养员肠道微生物组成及相关性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：黄婷孙坚廖晓萍刘雅红华南农业大学兽医学院/广东省兽药研制与安全评价重点实验室

(目的)肠道微生物是动物重要的"微生物器官",与免疫、营养、代谢等诸多生理功能紧密相关。随着近年来研究肠道微生物的方法不断进步,尤其是基于16S rDNA的分子生物学技术的迅速应用,科研工作者发现物肠道微生物多样性是受到... 详细信息

(目的)肠道微生物是动物重要的"微生物器官",与免疫、营养、代谢等诸多生理功能紧密相关。随着近年来研究肠道微生物的方法不断进步,尤其是基于16S rDNA的分子生物学技术的迅速应用,科研工作者发现物肠道微生物多样性是受到遗传、生理阶段、生活、饮食等影响。但是,在生产养殖中,不同生理阶段的猪以及与其长期接触的饲养员的肠道微生物多样性及相关性等方面仍然不甚明了,因此本研究拟开展猪与饲养员中肠道微生物菌群的多样性,以期获得它们之间的相关性。(方法)本实验室采集了育肥猪、哺乳母猪、种猪三种不同生产阶段的猪以及长期与其接触的饲养员的粪便样品,每组样品取六个平行样,利用试剂盒提取总DNA,进行16S rDNA测序,分析每个样品的微生物多样性,并进一步比较分析各个样品的微生物多样性结果,以此探讨不同生产阶段的猪和相关饲养员的肠道微生物多样性的相关性。(结果)研究结果初步显示,从多样性角度来看,不同生产阶段的猪和人的微生物组成是有明显差异的,猪肠道菌群种属丰富度高于饲养员肠道菌群;在饲养员中高丰度的主要有拟杆菌和厚壁杆菌,在猪中高丰度的主要有肠球菌、链球菌以及密螺旋体等,这些也是猪中常见的致病菌;同时在不同生产阶段的猪中发现了甲烷短杆菌——一种动物肠道中能量代谢的重要细菌以及琥珀酸弧菌在猪肠道中也比较多;猪与人之间的微生物差异也与之前文章报道吻合。(结论)人畜肠道微生物多样性之间存着紧密而有复杂的联系,深入研究两者之间的相关性是非常有必要的。

关键词：肠道微生物 16S rDNA 多样性

来源：评论

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链霉素荧光标记物的合成与鉴定

链霉素荧光标记物的合成与鉴定

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：米铁军李引乾王战辉张素霞沈建忠西北农林科技大学动物医学院中国农业大学动物医学院

【目的】链霉素（Streptomycin,STR）是一种氨基糖苷类抗生素,其在兽医临床可用于治疗革兰氏阴性敏感菌引起的各种感染。因其潜在的毒性和在食品动物体内残留,我国农业部已规定了链霉素在动物性食品中的最高残留限量（MRLs）,其中在牛奶... 详细信息

【目的】链霉素（Streptomycin,STR）是一种氨基糖苷类抗生素,其在兽医临床可用于治疗革兰氏阴性敏感菌引起的各种感染。因其潜在的毒性和在食品动物体内残留,我国农业部已规定了链霉素在动物性食品中的最高残留限量（MRLs）,其中在牛奶为200μ/L,肌肉、脂肪和肝脏为600μg/kg,肾脏为1000μg/kg。为了建立相关的快速荧光免疫检测方法,本研究合成了2种不同结构的链霉素荧光标记物,并通过质谱和免疫学技术进行了鉴定。【方法】将2 mg链霉素溶于0.5 mL50%乙醇水,再加入50 uL三乙胺,4mgFITC荧光素（或5mgDTAF）,振荡至固体成分完全溶解。室温避光反应至少24h。取50uL反应液用薄层色谱方法纯化,刮下最底层（Rf=0.01）的黄色条带,用1 mL50%甲醇氨水提取并过滤后,氮吹除去滤液中的氨水,得到亮黄色的溶液即为合成的荧光标记物STR-FITC和STR-DTAF。【结果】将合成的荧光标记物分别稀释至浓度为0.1 mg/mL,经质谱检测显示STR-FITC和STR-DTAF对应的分子离子峰质荷比（m/z）分别为974[M+2H]和1083[M+CHO],与其理论上计算的分子量相一致,表明本研究成功合成了这两种荧光标记物。将所得的两种荧光标记物稀释至浓度为10 nM,分别与过量的链霉素特异性抗体混合,比较加入抗体前后荧光偏振（FP）值的变化。结果显示,STR-FITC与抗体混合后,FP值明显升高（可达210 mP）;而使用STR-DTAF时,FP值上升幅度较小（仅为130 mP）。而抗体分别与荧光素FITC和DTAF作用时,FP值变化不大。【结论】链霉素特异性抗体可同时与这两种荧光标记物结合,且对STR-FITC的亲和力更高,从而为进一步建立检测链霉素的荧光免疫分析方法奠定了基础。

关键词：链霉素荧光标记物合成质谱鉴定免疫分析

来源：评论

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氯霉素单链抗体表达载体的构建及两种纯化方法比较

氯霉素单链抗体表达载体的构建及两种纯化方法比较

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：谢三磊谢洁裴星瑶王旗陈敏江海洋中国农业大学动物医学院基础兽医系

【目的】从分泌氯霉素类单克隆抗体的杂交瘤细胞(2E4)中,克隆出2E4杂交瘤细胞重链和轻链可变区基因,构建抗氯霉素类药物单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。【方法】从2E4杂交瘤细胞中提取总RNA,鉴定其大小和纯度... 详细信息

【目的】从分泌氯霉素类单克隆抗体的杂交瘤细胞(2E4)中,克隆出2E4杂交瘤细胞重链和轻链可变区基因,构建抗氯霉素类药物单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。【方法】从2E4杂交瘤细胞中提取总RNA,鉴定其大小和纯度后,采取RT-PCR扩增出336 bp的VH基因和357 bp的VL基因;通过在引物上设计linker序列,引入(Gly4Ser)3柔性短肽,拼接出完整scFV基因序列。再次设计引物在单链抗体C端添加C-myc标签和6×His标签便于后续免疫学检测和蛋白纯化。将测序结果正确的scFv基因克隆在表达载体pJB33,转入感受态细胞*** RV308进行可溶性表达鉴定。使用可溶性表达蛋白周质腔提取和包涵体纯化两种方法对得到的单链抗体进行纯化,采用SDS-PAGE、Western blot和ELISA分析两种纯化方法单链抗体表达水平、特异性及与抗原结合活性。【结果】结果显示,本实验成功从分泌抗氯霉素的单克隆抗体杂交瘤细胞2E4中PCR扩增出抗体的重链和轻链可变区基因,成功构建抗氯霉素单链抗体,单链抗体基因全长819 bp,编码约273个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot结果表明,氯霉素scFv基因在大肠杆菌中表达出30KD左右的抗体,但包涵体纯化方法得到的抗体纯度较高。间接ELISA结果表明,周质腔提取和包涵体纯化得到的单链抗体与氯霉素结合活性相差不大。【结论】成功制备出抗氯霉素药物单链抗体,周质腔提取方法能在较短时间内得到活性较好氯霉素单链抗体,包涵体纯化方法得到纯度较高、活性较好的单链抗体。为进一步研究氯霉素残留检测奠定实验基础。

关键词：氯霉素单链抗体可溶性表达纯化

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冻干马抗H7N9精制抗体F（ab′）2的急性毒性和溶血性试验

冻干马抗H7N9精制抗体F（ab′）2的急性毒性和溶血性试验

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：吴永魁李乾学董晓琳赵永坤军事医学科学院军事兽医研究所

【目的】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）是H7N9禽流感治疗性中和抗体,为评价其临床用药的安全性,进行了小鼠急性毒性试验和对兔红细胞的溶血性试验。【方法】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）单次腹腔注射分别给予昆明种小鼠和BALB/... 详细信息

【目的】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）是H7N9禽流感治疗性中和抗体,为评价其临床用药的安全性,进行了小鼠急性毒性试验和对兔红细胞的溶血性试验。【方法】冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）单次腹腔注射分别给予昆明种小鼠和BALB/c小鼠,给药容量为0.2mL/10g体重,给药剂量为300mg/kg,对照组腹腔注射等容量的生理盐水。每组10只小鼠,雌雄各半,药后连续观察14d,考察其对小鼠的急性毒性;采用体外试管法,浓度为15.0mg/mL的冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）按不同容量（0.1mL.5mL）加入已有不同容量（2.0mL.4mL）生理盐水和2.5mL的2%红细胞混悬液的玻璃试管中,同时以氯化钠注射液和注射用水分别作为阴性和阳性对照品,考察其对兔红细胞溶血及凝集的影响。【结果】小鼠给药后和连续14d观察,各组动物临床表现、采食量、生长发育、营养状况、对外界刺激反应均无异常改变,各组动物无死亡,大体解剖未见异常;冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）无溶血作用,不引起红细胞凝聚,氯化钠注射液阴性对照无溶血无凝聚,注射用水阳性对照全部溶血。【结论】在本试验条件下,马抗H7N9精制抗体F（ab'）对小鼠生长发育无影响,无急性中毒表现;浓度为15.0mg/mL冻干马抗H7N9精制抗体F（ab'）体外对兔红细胞无溶血作用,不引起红细胞凝聚。

关键词：马抗H7N9精制抗体F(ab′)2 急性毒性溶血性

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