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- 2 篇 教育学

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19 篇 广西大学
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10 篇 中国农业科学院兰...

作者

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高效液相色谱-串联质谱法测定动物可食性组织中镰刀菌毒素

高效液相色谱-串联质谱法测定动物可食性组织中镰刀菌毒素

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：陈冬梅陶燕飞潘源虎谢书宇黄玲利王玉莲袁宗辉农业部兽药残留检测重点实验室/国家兽药残留基准实验室(HZAU)华中农业大学动物医学院

【目的】镰刀菌毒素类在自然界分布极为广泛,它不但可以引起人畜急、慢性中毒,还具有致癌、致畸、致突变的潜在危害,对人类的健康造成严重危害。因此对这些真菌毒素进行残留监控十分必要。但是现有的检测镰刀菌毒素类的检测方法并不完善... 详细信息

【目的】镰刀菌毒素类在自然界分布极为广泛,它不但可以引起人畜急、慢性中毒,还具有致癌、致畸、致突变的潜在危害,对人类的健康造成严重危害。因此对这些真菌毒素进行残留监控十分必要。但是现有的检测镰刀菌毒素类的检测方法并不完善,还存在一些问题,如检测的毒素种类少,只检测毒素毒素原型,对于代谢物关注极少;检测的样品种类单一,动物可食性组织的检测较少;样品前处理复杂、价格昂贵。针对以上问题,本方法旨在建立简便、快速,测定多种动物可食性组织中多种镰刀菌毒素的多残留方法。【方法】采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）建立猪牛羊肌肉、肝脏中19种镰刀菌毒素的多残留检测方法。组织样品采用β-葡萄糖醛苷酶水解,乙腈和水提取,正己烷脱脂,Bond Elut Mycotoxin柱净化。采用MRM监测模式,正负离子同时扫描。采用C18色谱柱,乙腈和水溶液为流动相,梯度洗脱方式进行色谱分离。【结果】19种镰刀菌毒素在不同样品中最低定量限为0.37μg/kg.41μg/kg,在添加不同定量限浓度水平上,平均回收率介于64.8%05.0%之间,变异系数≤18.6%。【结论】本方法采用采用乙腈和水萃取提取动物可食性组织中19种镰刀菌毒素,样品前处理简单,方法回收率高,有机试剂用量少。采用Bond Elut Mycotoxin固相萃取柱进行样品净化,操作简单,同文献报道的免疫亲和柱相比,降低了检测成本,避免了样品基质干扰。本方法首次采用高效液相色谱-串联质谱同时测定了19种镰刀菌毒素,检测限低,特异性好,方法性能参数满足兽药残留监控要求。本方法弥补了真菌毒素在动物性食品中定量确证检测方法的空白,为保障人类和动物健康具有十分重要的意义。

关键词：镰刀菌毒素高效液相色谱-串联质谱固相萃取动物可食性组织

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金葡菌分选酶蛋白SrtA与阿普托名衍生物抑制剂相互作用研究

金葡菌分选酶蛋白SrtA与阿普托名衍生物抑制剂相互作用研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：牛效迪邓旭明吉林大学动物医学学院

分选酶几乎存在在所有的革兰氏阳性菌中,使其成为极具吸引力的药物治疗靶点。[14]随着对SrtA三维结构及其活性位点的逐渐明确,目前研究主要集中在分选酶抑制动力学特性上,并筛选相应的抑制剂作为抗菌药物的基础。很多方法已经被用来寻... 详细信息

分选酶几乎存在在所有的革兰氏阳性菌中,使其成为极具吸引力的药物治疗靶点。[14]随着对SrtA三维结构及其活性位点的逐渐明确,目前研究主要集中在分选酶抑制动力学特性上,并筛选相应的抑制剂作为抗菌药物的基础。很多方法已经被用来寻找分选酶抑制剂,其中包括筛选自然产物,搜索小型化合物库以及通过合成合理设计的类肽物和小分子抑制剂等。近年来分选酶抑制剂的筛选研究进展缓慢,特别是抑制剂与分选酶的相互作用机制尚不明确。首先是由于分选酶作为新的抗感染靶点的重要性刚刚被认识;更重要的是分选酶抑制剂的筛选方法尚不完善,不利于抑制剂的高通量筛选和分选酶性质的深入研究。因此在本文中,通过分子动力学模拟的方法研究了SrtA与四种阿普托名衍生物抑制剂相互作用,采用分子对接方法将四种抑制剂对接到金黄色葡萄球菌分选酶SrtA的活性结合位点中,然后在常规分子动力学优化的稳定构型基础上,对其构象进行了分析。并采用MM.-PBSA方法,进行了结合自由能分解及总的结合自由能的计算。结果表明:复合物SrtA-IAP体系中结合自由能值明显高于其他抑制剂,这主要是由于抑制剂分子结构不同引起的,该计算结果变化趋势与实验结果完全一致。根据能量分解计算,在复合物SrtA-1AP体系中,抑制剂N-1上的甲基及C-9位置上的羟基对稳定配体与蛋白间结合起到了主要作用。初步确定了SrtA的活性结合位点,以及抑制剂的药效团,为今后以SrtA为靶标的抗菌药物的研发奠定理论基础。

关键词：阿普托名衍生物抑制剂金葡菌分选酶

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抗肺炎链球菌感染的相关药靶研究

抗肺炎链球菌感染的相关药靶研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：宋萌李洪恩邓旭明吉林大学动物医学学院

肺炎链球菌溶血素(Pneumolysin,PLY)是肺炎链球菌的一个重要毒力因子,它与肺炎链球菌感染导致的高死亡率及急性致死性肺炎有很大关系。神经氨酸酶A(Neuramidinase A,NanA)是肺炎链球菌的另一重要毒力因子,它可以促进细菌对宿主细胞的粘... 详细信息

肺炎链球菌溶血素(Pneumolysin,PLY)是肺炎链球菌的一个重要毒力因子,它与肺炎链球菌感染导致的高死亡率及急性致死性肺炎有很大关系。神经氨酸酶A(Neuramidinase A,NanA)是肺炎链球菌的另一重要毒力因子,它可以促进细菌对宿主细胞的粘附作用,与动物血脑屏障上皮细胞的相互作用可促使肺炎链球菌进入中枢神经系统,引发脑膜炎。另外,研究发现,NanA与肺炎链球菌生物被膜的形成有直接的关系。而NanA是由转肽酶A(SortaseA,SrtA)通过C端的LPETG序列锚定在细胞壁上的。本研究旨在发现既可抑制PLY溶血活性又可抑制SrtA转肽酶活性的小分子药物。通过PLY中和试验,我们发现β-Sitosterol具有抑制PLY溶血活性的作用。通过SrtA活性抑制试验,我们发现α-D-Methylglucoside可明显抑制SrtA的活性。然后,我们进一步研究了同时含有谷甾醇基团和葡萄糖苷基团的小分子药物β-Sitosterol-3-O-glucopyranoside(SOG),结果发现,它既具有溶血抑制活性又具有SrtA活性抑制作用。通过生物膜形成抑制试验,我们发现SOG可明显抑制生物膜的形成。MIC试验表明SOG并没有抑菌活性。在体内,唾液酸是NanA催化宿主细胞表面糖蛋白末端唾液酸残基得到的产物。有研究报道,唾液酸可促进生物被膜的形成。本研究发现,唾液酸可明显回补SOG对生物膜形成的抑制作用。此结果表明,SOG对SrtA活性的抑制作用导致NanA的活性受到影响。通过Western-blot,我们发现在培养液中加入SOG后,在培养物上清液中检测到NanA,表明NanA在细胞壁上的锚定受到影响。动物实验研究发现,SOG可明显降低肺炎链球菌的致死率,减少肺炎链球菌在小鼠肺与血液内的定殖数,并且缓解肺炎链球菌引起的肺组织病理变化。综上所述,SOG可作为抗肺炎链球菌毒力药物研发的重要候选药物,并且,本研究为肺炎链球菌抗毒力研究打下坚实的基础。

关键词：溶血素 SortaseA NanA 生物膜

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香叶木素抑制金黄色葡萄球菌α溶血素的表达

香叶木素抑制金黄色葡萄球菌α溶血素的表达

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：刘水李文华张虹邓旭明吉林大学动物医学学院

金黄色葡萄球菌(金葡菌)是一种重要的革兰氏阳性致病菌,可引起多种疾病。随着细菌耐药性的发展,多重耐药金葡菌(例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,MRSA)不断出现,但新抗生素的研发却进展缓慢,因此,对于耐药金葡菌的治疗可选择的药物越发有... 详细信息

金黄色葡萄球菌(金葡菌)是一种重要的革兰氏阳性致病菌,可引起多种疾病。随着细菌耐药性的发展,多重耐药金葡菌(例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,MRSA)不断出现,但新抗生素的研发却进展缓慢,因此,对于耐药金葡菌的治疗可选择的药物越发有限,开发新的抗感染药物并寻找新的抗感染策略就显得尤为紧迫。金葡菌在致病过程中分泌大量的外毒素和表面蛋白,其中α溶血素Hla)是金葡菌在对数生长后期分泌的主要外毒素之一,在其致病过程中必不可少。该毒素由hla基因编码,在对数生长后期分泌。Hla单体能够结合到如红细胞、上皮细胞等靶细胞的细胞膜上组装成七聚体,形成一个稳定的跨膜孔,引起细胞内容物泄露,最终导致膜损伤和细胞死亡。鉴于Hla在金葡菌致病过程中的重要作用,现以将其作为抗毒力策略中对抗金葡菌感染的重要靶标,针对Hla的抗毒力药物研发也因此日益受到人们的关注。本研究中,我们发现香叶木素(Diosmetin)这一主要存在于柑橘类水果中的天然黄酮类化合物虽然几乎不具有抑制金葡菌生长的作用,但是却可以呈剂量依赖式地降低金葡菌USA300培养物上清中Hla的表达量,从而降低培养物上清的溶血活性。在细胞毒性试验中将金葡菌与人肺腺癌上皮细胞A549共培养,并在该共培养体系中加入不同浓度的香叶木素以抑制Hla的分泌。结果表明,香叶木素通过降低金葡菌Hla的表达量,从而很大程度上减缓了Hla介导的A549细胞损伤,从而对A549细胞提供了显著的保护作用。以上实验说明,香叶木素这一天然化合物具有降低金葡菌Hla表达量的作用,且可有效降低Hla对人肺腺癌上皮细胞A549的损伤,可能是一种潜在的治疗金黄色葡萄球菌感染的药物。

关键词：金黄色葡萄球菌 Hla 香叶木素抗毒力策略

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以溶血素和凝固酶缺失的金葡菌为新的参考菌株研究Sortase A在通过血液感染金葡菌的小鼠模型中的作用

以溶血素和凝固酶缺失的金葡菌为新的参考菌株研究Sortase A在通...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王琳邓旭明王大成吉林大学人兽共患病研究所/吉林大学动物医学学院吉林大学动物科学学院

分选酶A(Sortase A,SrtA)是一种半胱氨酸转肽酶,能够将携带LPXTG基序分选信号的表面蛋白锚定到细胞壁被膜上,从而介导细菌粘附到宿主组织,侵入宿主细胞,以及逃避免疫,是金黄色葡萄球菌(金葡菌)的重要毒力因子。正因如此,SrtA成为治疗金... 详细信息

分选酶A(Sortase A,SrtA)是一种半胱氨酸转肽酶,能够将携带LPXTG基序分选信号的表面蛋白锚定到细胞壁被膜上,从而介导细菌粘附到宿主组织,侵入宿主细胞,以及逃避免疫,是金黄色葡萄球菌(金葡菌)的重要毒力因子。正因如此,SrtA成为治疗金葡菌感染的发展的一个重要靶标。在这项研究中,我们采用了新的参考菌株金黄色葡萄球菌Newman D2C来探讨SrtA在血液感染小鼠模型中的作用,这种菌株不能产生凝固酶和溶血素,因此我们可以排除这两种金葡菌中重要毒力因子的干扰。本实验中,我们通过基因重组的方法成功构建了金葡菌SrtA基因敲除菌株△SrtA,并且通过免疫荧光的方法,证明金葡菌△SrtA不能将表面蛋白A(SpA)锚定到细菌细胞壁肽聚糖上。另外通过纤连蛋白和纤维蛋白原黏附实验,证实△SrtA缺失减少了金葡菌对纤维蛋白原和纤连蛋白的黏附能力。为了考察SrtA对金葡菌致病力的影响,以及今后能够筛选出有效的SrtA抑制剂,我们构建了小鼠(BALB/c雌鼠,6-8周)通过血液感染金葡菌的模型。结果表明,在感染早期,SrtA缺失可以通过减少宿主的炎性细胞因子(IFN-γ,IL-6,TNFα,IL-1β,IL-6,IL-12p70 and IL-17A)释放从而减少小鼠心脏、肝脏和肾脏的载菌量。小鼠的非致死性感染的第六天后,通过肉眼和病理组织切片观察,只有肾脏形成了脓肿,而△SrtA没有出现肾脏脓肿的现象。致死性感染的结果显示,相对Newman D2C而言,SrtA缺失使老鼠的存活率显著增加(100%)。以上这些结果表明,在金葡菌通过血液感染小鼠的模型中,SrtA是小鼠死亡和肾脓肿形成的决定性因素。因此可以说,我们建立了一种方便有效的以SrtA为靶标的抑制剂筛选的体外及体内小鼠模型,为金葡菌感染治疗开拓新的途径。

关键词：金黄色葡萄球菌,Sortase A 小鼠血液感染肾脓肿

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对乙酰氨基酚联合乙酰半胱氨酸对免疫应激仔猪NLRP3炎性小体信号通路的影响

对乙酰氨基酚联合乙酰半胱氨酸对免疫应激仔猪NLRP3炎性小体信号...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：徐俊姚文旭曹芳元李洒丽杨胜杨海兰刘宇邱银生武汉轻工大学动物科学与营养工程学院

【目的】在研究发现对乙酰氨基酚(AAP)和乙酰半胱氨酸(NAC)单用或联合使用都能抑制TLR4-NF-κB信号通路从而缓解仔猪的免疫应激性炎症的基础上,进一步研究了AAP和NAC对LPS诱导的仔猪外周血单核细胞NLRP3炎性小体信号通路的作用及机制。... 详细信息

【目的】在研究发现对乙酰氨基酚(AAP)和乙酰半胱氨酸(NAC)单用或联合使用都能抑制TLR4-NF-κB信号通路从而缓解仔猪的免疫应激性炎症的基础上,进一步研究了AAP和NAC对LPS诱导的仔猪外周血单核细胞NLRP3炎性小体信号通路的作用及机制。【方法】将分离后培养的仔猪外周血单核细胞分别设空白对照组、脂多糖(LPS)造模组、对乙酰氨基酚组(浓度为0.25、0.5和1 mM)、乙酰半胱氨酸组(浓度为0.25、0.5和1 mM)和用药联合组(浓度均为0.25、0.5和1mM组合),药物预处理1h后,再加入终浓度为1μg/mL的LPS,继续培养10、16和20h后,采用ELISA法测定细胞培养上清液中IL-1β、IL-18和TNF-α的含量;采用Western blot方法测定LPS刺激10h后的单核细胞中Cleaved Casapse-1的含量;采用RT-PCR方法测定LPS刺激3h后的单核细胞中IL-1β,IL-18,NLRP3及Cleaved Caspase-1的mRNA表达量。【结果】LPS刺激后,细胞培养液中IL-1β、IL-18和TNF-α水平均极显著上升(P<0.01),IL-1β,IL-18,NLRP3及Cleaved Caspase-1的mRNA表达量极显著增加(p<0.01)。LPS刺激不影响NLRP3炎性复合体组成部分ASC和Caspase-1的mRNA水平。AAP(0.5-1.0mM)和NAC(0.5-1.0mM)单独使用或联合使用均能下调IL-1β,IL-18,NLRP3及C1eaved Caspase-1的mRNA表达水平。NAC可显著增强AAP的上述抑制作用。AAP和NAC的联合使用对NLRP3炎性小体信号通路有较好的抑制作用。AAP和NAC的联合抗炎效应发生在NLRP3受体和Cleaved Caspase-1的mRNA表达上调。【结论】对乙酰氨基酚与乙酰半胱氨酸能通过抑制炎性小体信号通路的激活,减轻脂多糖诱导的仔猪单核细胞的炎症反应,且两药联用后的效果更佳,AAP和NAC的抗炎活性可能与LPS诱导下的NLRP3炎性小体信号通路的抑制有关。

关键词：对乙酰氨基酚乙酰半胱氨酸脂多糖炎性小体抗炎作用

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宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌的毒力基因检测及耐药性分析

宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌的毒力基因检测及耐药性分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：杨慧君李晓娜王艺晖王桂琴宁夏大学农学院

【目的】为了了解宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌毒力基因的分布情况以及耐药性情况。【方法】从宁夏不同地区规模化奶牛场采集临床型和隐性乳房炎乳样,用科码嘉金黄色葡萄球菌显色培养基进行初步的筛选,并结合16S rDNA、nuc基因的PCR测序... 详细信息

【目的】为了了解宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌毒力基因的分布情况以及耐药性情况。【方法】从宁夏不同地区规模化奶牛场采集临床型和隐性乳房炎乳样,用科码嘉金黄色葡萄球菌显色培养基进行初步的筛选,并结合16S rDNA、nuc基因的PCR测序结果鉴定金黄色葡萄球菌。采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,对分离鉴定出的金黄色葡萄球菌菌株进行了12种抗菌药物(红霉素、环丙沙星、林可霉素、万古霉素、多西环素、四环素、青霉素、替米考星、诺氟沙星、头孢唑林、氨苄西林、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧苄啶)的敏感性试验,测定其最小抑菌浓度(MIC);运用PCR.扩增技术对金黄色葡萄球菌的毒力基因(hla、hlb、Clfa)进行检测。【结果】从乳样中共分离鉴定出的154株金黄色葡萄球菌。药敏结果显示,154株金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类的抗生素氨苄西林和青霉素的耐药率都超过了80%;对磺胺类药物复方新诺明的耐药率为67%;对四环素类抗生素较敏感,多西环素的敏感率高达92%;对大环内酯类的红霉素和替米考星敏感率为68%和76%;氟喹诺酮类的敏感率在80%以上。毒力基因检测结果显示,154株金黄色葡萄球菌携带毒力基因hla、hlb和clfa的检出率分别为97.4%(150/154)、97.4%(150/154)、96.75%(149/154)。【结论】宁夏地区乳房炎乳样中分离出的金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类的抗生素和磺胺类药物的耐药率较高,而对四环素类和氟喹诺酮类药物则比较敏感,检出毒力基因hla、hlb、ClFa的频率很高。

关键词：金黄色葡萄球菌毒力基因耐药性

来源：评论

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前列腺素F2α受体激动剂Fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞合成分泌细胞因子TGF-α、TGF-β3、FGF-2、LIF和GM-CSF的mRNA表达影响的研究

前列腺素F2α受体激动剂Fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞合成分...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张莹内蒙古农业大学

输卵管作为两性配子的成熟与运送、精子活能、受精过程的场所,为早期胚胎的发育提供了最佳的微环境,这与输卵管所分泌的细胞因子（如TGF-α、TGF-β3、FGF-2、LIF和GM-CSF等）的作用是分不开的,但目前为止对这些重要的细胞因子在输卵管... 详细信息

输卵管作为两性配子的成熟与运送、精子活能、受精过程的场所,为早期胚胎的发育提供了最佳的微环境,这与输卵管所分泌的细胞因子（如TGF-α、TGF-β3、FGF-2、LIF和GM-CSF等）的作用是分不开的,但目前为止对这些重要的细胞因子在输卵管的调控机制尚未知晓。在输卵管受到精子刺激后分泌的大量前列腺素类化合物通过自分泌或旁分泌的形式调节自身的分泌功能。同时,有文献提示前列腺素类化合物调控多个生殖细胞的细胞因子和生理活性物质受体的表达。故我们推测前列腺素类化合物对输卵管分泌细胞因子有调控作用。本实验意在证实前列腺素F受体激动剂fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞合成分泌细胞因子TGF-α、TGF-β3、FGF-2、LIF和GM-CSF的调控机制。实验采用实时荧光定量PCR技术检测fluprostenol(10mol/L)、吲哚美辛(10mol/L)作用不同时间（2h、4h、8h、16h、24h、48h）对奶牛输卵管上皮细胞TGF-α、TGF-β3、FGF-2、LIF和GM-CSFmRNA表达的影响。实验中成功培养了奶牛输卵管上皮细胞;前列腺素F受体激动剂fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞中TGF-α和FGF-2 mRNA有正调控的作用,均在4 h时mRNA的表达量达到最大值;前列腺素F受体激动剂fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞中LIF和GM-CSFmRNA有双重调控作用,均是先短暂显著（P<0.05）促进其mRNA的表达,之后表达极显著P<0.01)抑制,均在2h时达到表达量最高;fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞中TGF-β3 mRNA起到正调控的作用,作用48 h时与空白组作用组相比极显著升高（P<0.01）,达到最大值。

关键词： fluprostenol 奶牛输卵管上皮细胞 TGF-α TGF-β3 FGF-2 LIF GM-CSF

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携带blaCTX-M-65Incl1质粒pEC012全序列分析

携带blaCTX-M-65Incl1质粒pEC012全序列分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：潘玉善黄慧钟杏好苑丽胡功政河南农业大学牧医工程学院

【目的】获得多重耐药禽源大肠杆菌InCI1质粒pEC012的全序列,并分析携带bla,rmtB,fosA3等多重耐药区的结构特征,为阐明E coli多重耐药的分子机制提供理论依据。【方法】经药物敏感性试验、多位点序列分型、耐药基因检测等方法对1株鸡源... 详细信息

【目的】获得多重耐药禽源大肠杆菌InCI1质粒pEC012的全序列,并分析携带bla,rmtB,fosA3等多重耐药区的结构特征,为阐明E coli多重耐药的分子机制提供理论依据。【方法】经药物敏感性试验、多位点序列分型、耐药基因检测等方法对1株鸡源大肠埃希菌EC012进行研究,利用接合和电转试验、质粒复制子分型,质粒多位点序列等方法对其携带的pEC012质粒进行研究,同时利用Illumina方法对该质粒进行全序列测定。【结果】药敏试验结果显示这株鸡源大肠埃希菌呈现多重耐药的表型;耐药基因检测结果显示,此株菌携带有blacrx-M-65,rmtB,fosA3基因;多位点序列分型和遗传进化分型表明属于D-ST117;质粒分型试验表明携带抗性基因的质粒属于Inci1 ST71;全序列测定表明,pEC012质粒全长为139,622 bp,携带有bla,bla,rmtB,fosA3,floR,aac（3）-Ⅳ,oqxAB等多个耐药基因,由IS26构成的多个复合型转座子组成一个复杂的多重耐药区（MRR）,特别是IS26-fosA3-orfl-orf2-Δorf3-IS26、IS26-fip-ΔISEcp1-bla-IS903D-iroN-IS26、IS26-tnpR-bla-rmtB-IS26的重组方式,进一步解释了携带bla,rmtB,fosA3多重耐药区的重组机制。首次发现了一个新的插入序列元件ISEc57（https://***//）。【结论】在IncI1ST71型质粒中发现了一个复杂的多重耐药区,其携带有bla;rmtB;fosA3;floR,oqxAB等多个耐药基因,由IS26构成的复合型转座子在多重耐药区的形成中发挥了重要作用。

关键词：多重耐药 blacTx-M-65 rmtB fosA3 floR ISEc57

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新型接合型转座子Tn6247的鉴定及分析

新型接合型转座子Tn6247的鉴定及分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王晓明王亚宾胡功政李新生张素梅潘玉善商艳红杜向党河南农业大学牧医工程学院

近年来,由于抗生素的频繁使用,多药耐药肠球菌的出现逐渐增多,肠球菌现已发展成为院内感染的主要病原菌之一。其中,转座子在多药耐药肠球菌的形成中发挥着重要作用。转座子是一种可移动的遗传元件,可携带耐药基因甚至毒力基因的移动,从... 详细信息

近年来,由于抗生素的频繁使用,多药耐药肠球菌的出现逐渐增多,肠球菌现已发展成为院内感染的主要病原菌之一。其中,转座子在多药耐药肠球菌的形成中发挥着重要作用。转座子是一种可移动的遗传元件,可携带耐药基因甚至毒力基因的移动,从而造成病原菌的耐药性、致病性的水平转移和快速传播,加速了病原菌的适应性进化。因此,研究肠球菌转座子介导的耐药基因水平转移具有重要的临床意义。本研究在已分离鉴定的34株猪源肠球菌的基础上,进行肠球菌四环素耐药基因tet（M）的检测、质粒接合、PFGE、Southern杂交、全基因组测序等,来探讨四环素耐药基因tet（M）与转座子的关系。结果显示:四环素耐药基因tet（M）在猪源肠球菌中的检测率为21%（12/57）。接合试验表明,tet（M）基因可发生接合转移,其在屎、粪肠球菌中的接合效率分别为3.5×10、5.0×10。tet（M）-tndX扩增获得一个比预期大5.2Kb的片段,进一步的全基因组测序获得一个23.9kb的新型接合型转座子,命名为Tn6247。该转座子与Tn5397相比,在耐药区插入了一个5.2kb的片段,含有tetL-pre/mob-repU-IS1216E,但在orf14处缺少了intronⅡ片段。Tn6247完全插入在肠球菌的fic基因上,其靶序列是GAAGGAAATG。野生菌株、受体菌株及接合菌株的Sma1-PFGE及Southem杂交试验显示,Tn6247发生了水平转移。进一步的野生菌株S1-PFGE及Southern杂交试验显示,Tn6247位于一个约194kb的"巨型"质粒上。综上所述,本研究鉴定了一个新型接合转座子,Tn6247,位于质粒上且可随质粒进行转移。

关键词：肠球菌 tet(M) 接合型转座子质粒

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