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767 篇 会议

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学科分类号

628 篇 农学
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- 1 篇 林学
68 篇 医学
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- 24 篇 药学(可授医学、理...
- 18 篇 中药学(可授医学、...
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- 12 篇 公共卫生与预防医...
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- 7 篇 医学技术（可授医学...
50 篇 工学
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- 11 篇 农业工程
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- 2 篇 生物工程
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- 1 篇 计算机科学与技术...
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- 20 篇 应用经济学
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2 篇 教育学
- 2 篇 教育学

主题

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37 篇 大肠杆菌
23 篇 氟苯尼考
20 篇 氧化应激
18 篇 耐药基因
18 篇 猪
17 篇 残留
15 篇 药代动力学
13 篇 药动学
12 篇 残留检测
11 篇 金黄色葡萄球菌
11 篇 黏菌素
11 篇 多重耐药
10 篇 mic
10 篇 生物被膜
9 篇 nf-κb
9 篇 副猪嗜血杆菌
9 篇 hplc
9 篇 肠球菌
9 篇 头孢喹肟

机构

108 篇 中国农业大学
97 篇 华南农业大学
57 篇 南京农业大学
43 篇 吉林大学
39 篇 扬州大学
36 篇 东北农业大学
29 篇 新疆农业大学
23 篇 四川农业大学
19 篇 青岛农业大学
19 篇 广西大学
17 篇 福建农林大学
17 篇 中国农业科学院兰...
14 篇 湖南农业大学
13 篇 沈阳农业大学
13 篇 华中农业大学
12 篇 内蒙古农业大学
10 篇 北京食品营养与人...
10 篇 西北农林科技大学
10 篇 河南农业大学
10 篇 中国农业科学院兰...

作者

49 篇 邓旭明
29 篇 刘雅红
29 篇 袁宗辉
28 篇 李剑勇
27 篇 杨亚军
27 篇 沈建忠
27 篇 江善祥
26 篇 廖晓萍
26 篇 孙坚
26 篇 卜仕金
25 篇 刘希望
23 篇 王丽平
22 篇 汤树生
22 篇 秦哲
22 篇 曾振灵
22 篇 李世宏
21 篇 汪洋
19 篇 季辉
18 篇 肖希龙
17 篇 郝智慧

语言

762 篇 中文
5 篇 英文

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排序：

比较细菌接种量和单点突变引起麻保沙星药效降低的区别

比较细菌接种量和单点突变引起麻保沙星药效降低的区别

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：卢燕李晓红曾庆林梅献曾振灵华南农业大学兽医学院

【目的】比较金黄色葡萄球菌接种量和喹诺酮类药物耐药决定区单点突变引起的麻保沙星药效降低的区别,探究清除较大接种量的细菌所需药物浓度是否大于MPC。【方法】构建金黄色葡萄球菌ATCC29213 grlA等位突变的突变体,采用琼脂二倍稀释... 详细信息

【目的】比较金黄色葡萄球菌接种量和喹诺酮类药物耐药决定区单点突变引起的麻保沙星药效降低的区别,探究清除较大接种量的细菌所需药物浓度是否大于MPC。【方法】构建金黄色葡萄球菌ATCC29213 grlA等位突变的突变体,采用琼脂二倍稀释法测定麻保沙星对不同接种量5×10～5,5×10～6,5×10～7,5×10～8 cfu/mL的金葡菌ATCC 29213的最小抑菌浓度(MIC);用体外静态杀菌曲线测定麻保沙星对四个接种量的金葡菌抗菌活性;模拟体内可以发生的突变比例,制备5×10～7,5×10～8 cfu/mL敏感菌混有少量5×10～3 cfu/mL突变体的混合菌群,测定麻保沙星对混合菌群的杀菌曲线。【结果】接种量对MIC没有影响(MIC变化大于四倍);麻保沙星对金黄色葡萄球菌有显著的抗菌活性,且体外杀菌曲线显示麻保沙星对金葡菌呈现时间依赖性杀菌特点;随着接种量增大,麻保沙星对金葡菌的抗菌活性显著降低,对于5×10～5,5×10～6,5×10～7,5×10～8 cfu/mL,完全清除细菌所需药物浓度分别为2×MIC,2×MIC,128×MIC,>256×MIC;对于5×10～7 cfu/mL混有5×10～3 cfu/mL突变体的杀菌曲线,显示药物浓度位于突变选择窗(MSW)内时,突变体被选择性富集,且突变体24小时后成为优势菌,当药物浓度大于MPC(2×MPC)时,突变菌和敏感菌均被清除;对于5×10～8 cfu/mL混有5×10～3cfu/mL突变体,药物浓度位于MSW中,突变体一直维持较小的比例,没有被选择性富集,当麻保沙星大于MPC(8×MPC)时,突变体没有被清除【结论】清除较大接种量的金黄色葡萄球菌所需麻保沙星的浓度大于MPC;对于兽医临床比较严重的感染,确定引起药效降低的原因很关键;对于接种量和单点突变引起的药效降低需要进一步的研究,尤其是体内研究更为重要。

关键词：麻保沙星金黄色葡萄球菌接种量

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3-氯-1,2-丙二醇二酯对C57BL/6J小鼠脂质代谢的影响

3-氯-1,2-丙二醇二酯对C57BL/6J小鼠脂质代谢的影响

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：卢静王振宁任梦柔冯广鑫叶贝宁王懿房宝晨邓旭明关爽动物医学学院吉林大学

【目的】氯丙醇酯是氯丙醇的脂肪酸酯,许多食品中都检测出含有氯丙醇酯,其中3-氯-1,2-丙二醇二酯(3-MCPD二酯)含量较高,是一种食品污染物。高脂血症是多种疾病的重要危险因素之一。本研究旨在未观察到损害作用的剂量(NOAEL)下研究四种3-... 详细信息

【目的】氯丙醇酯是氯丙醇的脂肪酸酯,许多食品中都检测出含有氯丙醇酯,其中3-氯-1,2-丙二醇二酯(3-MCPD二酯)含量较高,是一种食品污染物。高脂血症是多种疾病的重要危险因素之一。本研究旨在未观察到损害作用的剂量(NOAEL)下研究四种3-MCPD二酯(CDP,3-MCPD棕榈酸二酯;CDS,3-MCPD硬脂酸二酯;CDO,3-MCPD油酸二酯;CDL,3-MCPD亚油酸二酯)对C57BL/6J小鼠脂质代谢的影响。【方法】CDP,CDS,CDO,CDL分别均以0、4.125、8.25和16.5μmol/kg/day的剂量对C57BL/6J小鼠进行灌胃染毒4周,观察指标为动物体重,肝脏系数,血清中多种物质含量(包括:甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)),肝脏组织TG、TC含量以及脂肪组织的油红O染色。结果随着小鼠年龄的增大,各组体重均有所增加,但是相较对照组(玉米油组)均没有显著性。与对照组相比,各组肝脏系数均没有显著性。16.5μmol/kg/day CDP,CDS,CDL相较对照组显著增加了血清TC和LDL-C水平,但是对TG和HDL-C水平没有显著影响。16.5μmol/kg/day CDO相较对照组能够显著增加血清TC,TG和LDL-C含量,显著降低血清HDL-C水平。同时,8.25μmol/kg/day CDO相较对照组也能够显著增加血清TC水平。较对照组,8.25,16.5μmol/kg/day CDP CDO,CDL能够显著增加血清AST水平,各组对ALT水平没有显著影响。16.5μmol/kg/day CDP,CDS,CDO,CDL相较对照组均显著增加了肝脏TG和TC的含量,同时,4.125、8.25μmol/kg/day CDO均显著增加了肝脏TC水平。油红O染色结果显示,16.5μmol/kg/day的四种酯相较对照组均能显著增加脂滴聚积。【结论】16.5μmol/kg/day CDP,CDS,CDO,CDL能够引起脂质代谢紊乱。然而,有报道显示氯丙醇二酯可能在肠道内水解,所以是否是游离3-MCPD或者游离脂肪酸或者联合作用导致的影响,未来需要进一步考察。本研究将为1,3-DCP二酯进一步毒理学评价提供理论依据。

关键词：氯丙醇酯脂质代谢血脂肝组织

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美洛昔康在牛血浆中HPLC方法建立与确证

美洛昔康在牛血浆中HPLC方法建立与确证

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：孙菲菲王建中张素霞范瑞威龚晓会曹兴元中国农业大学动物医学院

【目的】美洛昔康是一种新型非甾体类抗炎药,具有良好的抗炎、镇痛、解热作用,且引起胃肠道和肾脏不良反应的发生率较其他同类药物显著降低。本实验旨在建立快速高效,节约成本,灵敏度高的检测方法为研究美洛昔康在牛体内的药代动力学特... 详细信息

【目的】美洛昔康是一种新型非甾体类抗炎药,具有良好的抗炎、镇痛、解热作用,且引起胃肠道和肾脏不良反应的发生率较其他同类药物显著降低。本实验旨在建立快速高效,节约成本,灵敏度高的检测方法为研究美洛昔康在牛体内的药代动力学特征以期制定合理的给药方案奠定基础。【方法】取1 mL奶样于10 mL离心管中,加入20μL5 MNaOH,涡动30s,在4℃,9000 rpm,离心3 min,取上清于新的10mL离心管中,加入200μL 1 M HC1,5 mL乙酸乙酯,涡动1 min,4℃,9000 rpm,离心3 min,离心取上清,再加入3 mL乙酸乙酯于沉淀中进二次提取,取上清,合并两次上清液;上清液于45℃氮吹至干,用200μL流动相复溶,涡动后过0.2μm滤膜,进行HPLC分析。色谱条件:C18色谱柱（2.1×250mm,5μm）,流动相为0.1%甲酸甲醇:0.1%甲酸水（75:25,v/v）,检测波长:355nm,流速:1.0mL·min。在10 ng·mL,15 ng·mL,30 ng·mL三个浓度进行添加回收实验。【结果】血浆中美洛昔康在10-2000ng·mL的浓度范围内,方法线性关系良好,相关系数r为0.9998。定量限（LOQ）和检测限（LOD）分别为10 ng·mL,8 ng·mL。三个添加浓度的回收率在80.1%-101.4%;日内和日间变异系数均小于13.6%。待测药物在冻融过程中的稳定性、室温条件下药物的稳定性、待测物在前处理后的稳定性、长期稳定性、储备液稳定性等5个稳定性试验的变异系数均低于13.2%。【结论】建立的HPLC-UV检测方法快捷灵敏,满足残留检测要求。采用酸碱萃取法进行前处理,整个过程需要大约1 h,实验过程中无需过SPE柱,节约成本。

关键词：美洛昔康牛 HPLC

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彗星实验(SCGE)检测洛克沙胂对蚯蚓和鲫鱼细胞DNA损伤的研究

彗星实验(SCGE)检测洛克沙胂对蚯蚓和鲫鱼细胞DNA损伤的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：梁雯霏孙永学华南农业大学兽医学院国家兽药安全评价(环境评估)实验室(华南农大)

(目的)本文以土壤蚯蚓和池塘鲫鱼为指示生物,探讨了洛克沙胂暴露胁迫对蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝脏细胞DNA损伤的影响情况,为洛克沙胂环境暴露的生态毒性效应评价与风险评估提供依据。（方法）1.以赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）为土壤指示生... 详细信息

(目的)本文以土壤蚯蚓和池塘鲫鱼为指示生物,探讨了洛克沙胂暴露胁迫对蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝脏细胞DNA损伤的影响情况,为洛克沙胂环境暴露的生态毒性效应评价与风险评估提供依据。（方法）1.以赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）为土壤指示生物,在室内土壤模拟环境中设洛克沙胂浓度组20mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg（以As计）和空白组;2.以鲫鱼为水体环境指示生物,设洛克沙胂50μg/L、150μg/L、300μg/L、500μg/L（以As计）浓度组和空白组,每组为15尾鲫鱼,蚯蚓和鲫鱼均分别于暴露第7、14、21 d采样,采用单细胞凝胶电泳技术（彗星实验）进行了洛克沙胂对蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝细胞DNA损伤的遗传毒性试验,应用CASP软件分析彗星尾部DNA百分含量、彗星尾部长度和Olive尾距等指标,导入统计分析软件SPSS17.0进行分析,对洛克沙胂与DNA损伤之间的时间与剂量依赖关系进行了探讨。（结果）结果表明:1.蚯蚓连续7 d、14 d和21 d暴露于20mg/kg00 mg/kg洛克沙胂中均能引起蚯蚓体腔细胞出现明显的DNA损伤,与空白对照组比较呈显著性差异（P<0.05）,在暴露第21d后,在20 mg/kg00 mg/kg浓度范围内出现明显的剂量-效应关系,并且随着暴露时间的延长,100mg/kg和200 mg/kg浓度的洛克沙胂对蚯蚓体腔细胞的损伤表现加重的趋势,呈现一定的时间-效应关系;2.在50μg/L00μg/L暴露浓度中,洛克沙胂对鲫鱼肝细胞DNA可造成明显的损伤,与空白对照组相比呈极显著差异（P<0.01）,在暴露第7天、14天后,50μg/L00μg/L浓度范围内表现一定的剂量-效应关系,且随着暴露时间的延长,50μg/L、150μg/L和500μg/L浓度组洛克沙胂对鲫鱼肝细胞的损伤呈现加重的趋势,呈现一定的时间-效应关系。（结论）本文初步探讨了洛克沙胂对蚯蚓和鲫鱼的分子毒性效应,洛克沙胂可致使蚯蚓体腔细胞和鲫鱼肝细胞的DNA损伤,预示着洛克沙胂的环境暴露存在着潜在的遗传毒性效应,单细胞凝胶电泳技术可作为有机胂DNA损伤的有效检测手段。

关键词：洛克沙胂蚯蚓鲫鱼彗星实验 DNA损伤

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阿司匹林丁香酚酯对角叉菜胶诱导的大鼠尾部血栓的预防作用

阿司匹林丁香酚酯对角叉菜胶诱导的大鼠尾部血栓的预防作用

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：马宁刘希望杨亚军孔晓军李世宏秦哲杜文斌李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新药工程重点实验室

【目的】通过角叉菜胶诱导的大鼠模型来探讨阿司匹林丁香酚酯(AEE)对血栓形成的预防作用。通过血常规、血凝参数、体外抗凝实验及血小板聚集率来说明药物的作用机制。【方法【采用0.5%的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)制备AEE悬浮液,大鼠按18... 详细信息

【目的】通过角叉菜胶诱导的大鼠模型来探讨阿司匹林丁香酚酯(AEE)对血栓形成的预防作用。通过血常规、血凝参数、体外抗凝实验及血小板聚集率来说明药物的作用机制。【方法【采用0.5%的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)制备AEE悬浮液,大鼠按18、36和72 mg/kg的剂量灌胃给药七天,腹腔注射20 mg/kg的角叉菜胶诱导尾部血栓。为明确AEE和其前体化合物之间的区别,阿司匹林(Asp,20 mg/kg)、丁香酚(Eug,18 mg/kg)及Asp和Eug结合给药(Asp:20 mg/kg;Eug:18 mg/kg)作为药物对照。CMC.-Na(30 mg/kg)作为溶剂对照。角叉菜胶注射后测量24 h和48 h大鼠尾部血栓的长度,最后一次测量后,麻醉采血,测定相关参数。血小板聚集率采用Born法测定,二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂对照组,以ADP(5μM)为诱导剂,最大聚集率为观测值记录血小板聚集率。体外抗凝实验将不同浓度的药物添加到新鲜大鼠血液中,37℃C孵育30 min,观察抗凝效果。【结果】实验结果表明,AEE能够显著降低大鼠尾部血栓的长度。相比于模型组和溶剂对照组,AEE组尾部血栓明显较短(P<0.01)。同时于Asp组、Eug组和Asp+Eug组也存在显著差别(P<0.01)。凝血参数实验结果表明AEE可引起凝血酶原时间和凝血酶时间的改变,降低纤维蛋白原的含量。血常规实验说明角叉菜胶诱导的血栓模型可引起白细胞、中性粒细胞的显著升高和血小板的降低。在给药组,相关指标并未明显改变。红细胞、红细胞比容及血小板在AEE给药组相比于溶剂组明显降低。体外血小板聚集率实验表明AEE可显著抑制血小板聚集,相比于等摩尔量的Asp,其抗血小板聚集的效果较差。体外抗凝实验结果表明AEE无抗凝效果。【结论】AEE能够显著抑制角叉菜胶诱导的大鼠尾部血栓的形成,同时其作用效果强于Asp、Eug和Asp+Eug。AEE可能通过抑制血小板聚集,降低纤维蛋白原含量,改变凝血参数等来抑制血栓的形成。

关键词：阿司匹林丁香酚酯血栓大鼠血小板

来源：评论

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苦豆草提取物的抗炎及抑菌作用研究

苦豆草提取物的抗炎及抑菌作用研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：叶文初袁富威班赟刘宇郭文柱杨珍李引乾西北农林科技大学动物医学院中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室

目的:探讨苦豆草提取物在小鼠体内的抗炎作用及其体外抑菌作用。方法:通过二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀模型、新鲜鸡蛋清致小鼠足趾肿胀模型及小鼠棉球所致肉芽肿模型观察苦豆草提取物的抗炎作用。分别采用牛津杯法和试管二倍稀释法测定停... 详细信息

目的:探讨苦豆草提取物在小鼠体内的抗炎作用及其体外抑菌作用。方法:通过二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀模型、新鲜鸡蛋清致小鼠足趾肿胀模型及小鼠棉球所致肉芽肿模型观察苦豆草提取物的抗炎作用。分别采用牛津杯法和试管二倍稀释法测定停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大肠杆菌4种细菌的抗菌活性。结果:二甲苯致小鼠耳廓肿胀1h后,地塞米松组和苦豆草提取物高、中、低剂量组的小鼠耳廓肿胀率明显降低,其中耳廓肿胀率分别为77.65%、82.61%、65.22%、42.83%。与空白对照组相比,苦豆草提取物组能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀(P<0.01,P<0.05);蛋清致小鼠足趾肿胀后,苦豆草提取物高、中、低剂量组和地塞米松组与生理盐水组比较,小鼠足趾肿胀均明显降低。苦豆草提取物对蛋清所致的炎症具有明显的抑制的作用;苦豆草提取物高、中、低剂量组和地塞米松组均可抑制棉球所致小鼠肉芽组织的增生,增生抑制率依次为49.86%、39.76%、35.45%及54.18%。与阴性对照组相比,苦豆草提取物组和地塞米松组对棉球所致的肉芽肿增生具有差异极显著性(P<0.01)。苦豆草提取物对棉球所致的肉芽肿具有明显的抑制作用。苦豆草提取物对4种致病菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为2.340、0.585、2.340、4.687mg/L;最低杀菌浓度(MBC)均为9.375 mg/L,表现为良好的抑菌或杀菌效果。苦豆草提取物药液浓度(37.5 mg/L)对表皮葡萄球菌、停乳链球菌、大肠杆菌的抑菌圈均大于15mm,而金黄色葡萄球菌为14.82接近于15 mm,各致病菌对苦豆草提取物具有高度敏感性。苦豆草提取物药液浓度在1 8.75 mg/kg时,苦豆草提取物对葡萄球菌、大肠杆菌抑菌圈在10～15 mm之间,为中度敏感;停乳链球菌的抑菌圈高于15mm,为高度敏感。结论:苦豆草提取物具有明显的抗炎作用并有明显的抑菌作用。

关键词：苦豆草提取物抗炎作用体外抑菌作用最小抑菌浓度最小杀菌浓度

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物源食品中氟喹诺酮类残留检测的生物发光微生物传感器技术研究

物源食品中氟喹诺酮类残留检测的生物发光微生物传感器技术研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王玉莲程古月黄明威董小冰袁宗辉国家兽药残留基准实验室(华中农业大学)

氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones,FQNs）在畜牧生产中应用广泛,然而大量使用会导致氟喹诺酮类药物在动物源食品中残留和细菌耐药性的产生,这不仅危害消费者健康,还影响我国动物源产品出口,制约我国养殖业可持续发展,是严重威胁食品安... 详细信息

氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones,FQNs）在畜牧生产中应用广泛,然而大量使用会导致氟喹诺酮类药物在动物源食品中残留和细菌耐药性的产生,这不仅危害消费者健康,还影响我国动物源产品出口,制约我国养殖业可持续发展,是严重威胁食品安全和社会稳定的重大问题。因此,加强动物源食品中氟喹诺酮类的残留监控十分必要。本研究利用氟喹诺酮类药物对大肠杆菌作用的分子机理,选择对氟喹诺酮类药物敏感和特异的启动子RecA,构建携带荧光素酶基因的质粒pRecAlux3,经转化、筛选获得一株敏感、特异和稳定的生物发光细菌E coli pK12,建立基于E coli pK12的氟喹诺酮类药物残留检测的生物发光微生物传感器方法,并对方法的灵敏度、准确度、精密度、交叉反应率等指标进行考察。该法能够识别恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、达氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、麻保沙星和奥比沙星等11种氟喹诺酮类药物,对猪、鸡、牛的肌肉、肝脏、肾脏、鱼肉和牛奶等11种动物可食性组织中11种氟喹诺酮类药物的最低检测限为12.5μg/kg00μg/kg,添加回收率在60～125%,批内和批间变异系数均小于25%;对β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、大环内酯类等药物的最低检测限均在3×MRL以上。经动物试验和仪器方法比对试验结果表明该法与仪器方法符合良好,适用于动物源食品中氟喹诺酮类残留的快速筛选。本方法是一种新型的快速检测氟喹诺酮类残留的微生物学筛选方法,较传统微生物学法灵敏度更高、特异性强,为兽药残留检测方法研究提供了新的思路。

关键词：氟喹诺酮类生物发光微生物传感器大肠杆菌残留动物源食品

来源：评论

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抑制自噬促进黏菌素诱导的神经元N2a细胞凋亡依赖于caspase激活

抑制自噬促进黏菌素诱导的神经元N2a细胞凋亡依赖于caspase激活

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：代重山汤树生李继昌周延李道稳肖希龙中国农业大学动物医学院东北农业大学动物医学院

【目的】多黏菌素已成为治疗临床多重耐药革兰氏阴性细菌感染的最后一线治疗希望,神经毒性是其主要副作用之一,但其机制尚不清楚。【方法】以小鼠神经元N2a细胞建立体外黏菌素毒性模型,不同剂量黏菌素(0-200μM)处理24h后,细胞活力(MTT... 详细信息

【目的】多黏菌素已成为治疗临床多重耐药革兰氏阴性细菌感染的最后一线治疗希望,神经毒性是其主要副作用之一,但其机制尚不清楚。【方法】以小鼠神经元N2a细胞建立体外黏菌素毒性模型,不同剂量黏菌素(0-200μM)处理24h后,细胞活力(MTT法)、细胞膜损伤程度(LDH活力)、细胞死亡方式(Hoccest33342及AV/PI法)、氧化应激标志物(ROS、SOD、GSH、CAI)、线粒体功能(线粒体膜电位、Bcl-2/Bax)、自噬标志物(LC3Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p62)及caspase-3、8及9活力被分别检测;并进一步通过自噬抑制剂(氯喹,CQ)及凋亡抑制剂(caspase泛抑制剂,Z-VAD-FMK)联合探究细胞自噬及凋亡的cross-talk机制。【结果】与对照组相比,黏菌素处理的N2a发生凋亡性细胞死亡并伴随明显的剂量依赖性(黏菌素200μM,细胞凋亡率达49%);进一步研究发现,黏菌素可显著增加细胞内ROS水平、同时抑制细胞内抗氧化酶SOD、CAT活力及抗氧化物质GSH活力(all p<0.05 or 0.01);此外,黏菌素处理可导致线粒体膜电位及Bcl/Bax比值显著降低,并伴随caspase-3、8及9活力的显著升高(all p<0.05 or 0.01);MDC法荧光观察及自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p62检测发现,黏菌素可剂量依赖性激活N2a细胞内自噬水平,进一步通过LC3及activated-caspase-3免疫荧光共染证实黏菌素诱导的自噬及凋亡发生于同一细胞。与黏菌素模型组相比,晚期自噬抑制剂CQ可明显激活黏菌素(200μM)诱导的细胞凋亡(凋亡率增至85%),caspase--3酶活力也被进一步激活。CQ+Z-VAD-FMK+colistin联合处理后可明显抑制CQ+colistin诱导的细胞凋亡及caspaSe-3活力及自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p62的激活。【结论】黏菌素介导神经元细胞凋亡涉及ROS介导的氧化应激及线粒体功能失调,从而导致caspase依赖性的凋亡和自噬;自噬可能扮演者保护性角色。

关键词：黏菌素神经毒性 N2a细胞凋亡自噬 caspase激活

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盐酸头孢噻呋在奶牛血浆中UPLC-MS/MS检测方法的建立与确证

盐酸头孢噻呋在奶牛血浆中UPLC-MS/MS检测方法的建立与确证

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：王建中孙菲菲张素霞龚晓会曹兴元中国农业大学动物医学院

【目的】头孢噻呋属于广谱半合成的第三代头孢菌素类抗生素,具有抗菌谱广、耐青霉素酶、临床疗效高、毒性低等优点,广泛应用于奶牛疾病的治疗。本实验通过将盐酸头孢噻呋在牛血浆中的主要代谢产物DFC衍生化为稳定DCA,并建立高效灵敏的UP... 详细信息

【目的】头孢噻呋属于广谱半合成的第三代头孢菌素类抗生素,具有抗菌谱广、耐青霉素酶、临床疗效高、毒性低等优点,广泛应用于奶牛疾病的治疗。本实验通过将盐酸头孢噻呋在牛血浆中的主要代谢产物DFC衍生化为稳定DCA,并建立高效灵敏的UPLC-MS/MS检测方法,为研究盐酸头孢噻呋在牛体内的药代动力学特征提供支持。【方法】提取与衍生化:取样品血浆500μL,加标50μL,涡动10s,加0.4%二硫赤藓糖醇溶液5.5mL,涡动2min,50℃水浴振荡15min,取出放置室温,加14%碘乙酰胺溶液1.5mL,避光室温下静置衍生30 min,用25%的磷酸溶液调节pH至2.5-2.6,离心15min（4℃,6000r/min）;净化:依次用10 mL甲醇、10 mL水活化HLB萃取柱,取上清液过柱,用3 mL水淋洗小柱之后,用2.5 mL90%乙腈溶液洗脱,洗脱液于氮吹仪吹干,残余物用500μL0.2%的甲酸溶液复溶,过0.22μm滤膜,取5μL进仪器分析。色谱条件:C色谱柱（50×2.1 mm,2.6μm）,流动相为0.1%甲酸水溶液:0.1%甲酸乙腈溶液（95:5,V/V）,流速:0.4mL·min,柱温30℃。质谱条件:ESI+,多反应监测,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,毛细管电压3kV,脱溶剂气流速800L/h。在200μg/L,1000μg/L,2000μg/L三个浓度进行添加回收实验。【结果】血浆中DCA在100-5000μg/L的浓度范围内,方法线性关系良好,相关系数r为0.9936。定量限（LOQ）和检测限（LOD）分别为10050μg/L和50μg/L。三个添加浓度的回收率在96.62%-106.06%;日内变异系数均小于6.45%,日间变异系数小于1.41%。待测物在冻融、室温、前处理后、在血浆中的稳定性试验检测的变异系数均低于15%。【结论】建立的UPLC-MS/MS方法满足分析检测要求。

关键词：盐酸头孢噻呋 DCA 奶牛 UPLC-MS/MS

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iTRAQ联合LC-MS/MS技术分析痢疾杆菌耐酸性研究

iTRAQ联合LC-MS/MS技术分析痢疾杆菌耐酸性研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：魏小娟张继瑜周绪正李冰程富胜牛建荣王娟娟中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所

【目的】应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术检测痢疾杆菌168株在不同处理条件下(普通培养与酸处理组)蛋白的差异情况,从而筛选出与痢疾杆菌耐酸性相关的潜在菌体蛋白。【方法】以痢疾杆菌301标准... 详细信息

【目的】应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术检测痢疾杆菌168株在不同处理条件下(普通培养与酸处理组)蛋白的差异情况,从而筛选出与痢疾杆菌耐酸性相关的潜在菌体蛋白。【方法】以痢疾杆菌301标准株为对照,通过模拟建立耐酸性菌株,采用iTRAQ技术和生物信息学鉴定并相对定量各菌株菌体蛋白。质谱数据经DataAnalysis4.0软件分析,用Mascot 2.3.02蛋白质鉴定软件对SwissProt下载的痢疾杆菌数据库进行搜索,软件依据同位素报告基团的相对含量进行蛋白质定量,以报告基团113为参照,选择差异性显著(P<0.05)的结果进行报告。当差异倍数大于2.0倍以上,且经统计检验其P<0.05时,视为差异蛋白。鉴定得到的蛋白进行基因功能聚类分析(GO)及基因路径分析。【结果】质谱共鉴定到1632个蛋白,其中差异表达蛋白有646种,其理论相对分子质量分布较为泛,相对分子质量的范围为5.26～345.82,其中分子质量在20～30 kDa的蛋白所占的比例最高为20.2%,分子质量在80～100 kDa之间的蛋白所占比例最少,为4%。酸处理组和正常组相比,上调的蛋白有212种,下调的蛋白434种。其生物进程主要参与中间代谢、细胞作用和生物调节,分子功能主要为催化活性功能、结合功能及转运活性功能。通过GO分析及pathway分析发现,这些差异蛋白分别参与了19个生物学过程,有21种分子功能,共涉及到109个生物代谢通路。排名前3位的生物学过程分别为新陈代谢过程(28.79%)、细胞代谢过程(26.66%)、有机物质的代谢过程(9.40%);分子功能分别为催化活性(81.9%)、离子结合功能(43.9%)、杂环化化合物的结合(42.8%);生物代谢通路为代谢通路(34.13%)、次级代谢产物的生物合成途径(19.57%)、不同环境中的微生物代谢途径(11.74%)。【结论】筛选出多种与耐酸性相关的差异蛋白,从而为进一步探讨痢疾杆菌致病机理奠定了基础。

关键词：分子功能耐酸性 iTRAQ 痢疾杆菌 LC-MS/MS 代谢通路

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